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1、,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第十四章,生物药物质量控制分析方法验证,1,第十四章,生物药物质量控制分析方法验证,一、概述,二、生物学测定常用方法,三、方法的来源,四、分析方法,五、分析方法的验证,六、综合分析,2,中国,美国,英国,鉴别方法,化学反应显色法，红外吸收图谱比对法，硫酸盐的鉴别反应,化学反应显色法,硫酸盐的鉴别反应,薄层色谱法,化学反应显色法,硫酸盐特征反应,检测项目,酸度，,溶液澄清度与颜色,，硫酸盐，有关物质，,干燥失重,，可见异物，不溶性微粒，异常毒性，细菌内毒素，无菌。,PH,值（,4,5-7.0,）,干燥失重,
2、溶液检查：溶液,S,、,溶液外观,pH,溶液,S,的,pH,（,4.5-7.0,）,甲醇（气相色谱）,含量测定,照抗生素微生物检定法（通则,1201),测定。,色谱,法,色谱,法,链霉素,3,一、概述,保证药品,安全、有效、质量可控,是药品研发和评价应遵循的基本原则，其中，对药品进行,质量控制,是保证药品安全有效的基础和前提。,方法验证的目的,是判断采用的,分析方法,是否,科学、合理，,是否能有效控制,产品,的内在质量。,4,生物药品质控,生物药品质控中采用的方法包括,理化分析方法和生物学测定方法,。,一般要使用,动物、细胞或生物分子,，因此对于,生物学测定,的判断标准可适当灵活掌握,对于,定
3、量测定方法,应尽可能减少方法的变异，验证的结果仍应能证明该方法具有相当的,准确性和可靠性,，并应以能够有效控制产品质量为基本标准。,5,二、,生物学测定常用方法,生物学测定系指,采用生物学方法，以反映被测物的生物学特性为目的的测定方法。,6,（一）、酶反应试验,是指在体外能促进酶分子的活化或本身具备酶的活性，通过底物的变化检测酶活性。主要用于酶、辅酶、激酶、激活剂、抑制剂等的活性测定。这类方法的变异相对较小，结果比较准确。,7,（二）、结合试验,是基于产品与某种物质的结合特性而设计的试验，如,免疫结合试验,。目前主要用于生物制品的鉴别。由于在结合试验中测定的分子不一定都具有生物活性，所以一般不
4、用作制品的活性（或效力）测定。这类方法的变异也相对较小。,8,（三）、细胞测定试验,是指产品可以,诱导细胞产生可测定的应答,，如细胞增殖、聚集、分化、死亡、迁移或产生特定的化学物质等。细胞测定试验一般能较好地反映制品的生物学活性，常用于各种,生物制品的活性（效力）测定,。与上述两类方法相比，这类方法的变异较大。与使用传代细胞相比，使用原代细胞的方法变异更大。,9,（四）、动物试验,是指以整体动物为试验材料检测制品生物学活性（或效力）的试验方法，如动物保护力试验，一般用于,疫苗的效力,测定。由于动物实验的成本高、周期长和变异大，所以一般仅用于成品检定。对于某些治疗用的制品，由于其作用机理或本身化
5、学性质的原因，难以建立体外测活的方法，也可以采用动物试验方法测定，但由于这类方法的,变异一般相对较大,，在进一步的研究中应尽可能以体外法代替。,10,鉴于一种测定方法仅能反映制品某一方面的特性，且方法的变异一般较大，为更好控制产品质量，必要时需,同时采用多种方法,进行测定。,11,三、方法的来源（种类）,根据质控分析方法的来源，可将方法分为两大类，即,标准方法和非标准方法,。原则上，对于各类方法均需进行验证，但依方法来源的不同对于验证的要求有所不同。,12,（一）、标准方法（或正式方法、法定方法）,一般是指,已有国家标准的质控方法,，,WHO,推荐的质控方法也可作为重要参考。此类方法在被确定为
6、标准方法前已经过了适当的验证。,采用此类方法前，也应对该方法进行适当的验证,如进行专属性和精密度的验证，以便证明在实际的使用条件下该方法也是适用的。,13,（二）、非标准方法,1,、标准方法的替代方法,此类方法系指由申报者提出的可取代标准方法的替代方法。申报者在决定采用此类方法时应持慎重的态度，并需提供,表明新方法等同于或优于原方法的依据以及全面的验证资料,，包括两种方法的比较性资料。,14,2,、来自参考文献的方法,是指在专业杂志或著作上发表并介绍的方法，一般要认真对待此类方法，并需进行全面的验证。应说明参考文献的出处，附原文及译文。,15,3,、自己建立的方法,对于某些产品，尤其是创新性产
7、品来讲，由于缺少可参考的方法，通常需要自己建立一种新的分析方法，对于这类方法需进行全面而严格的验证。,16,四、分析方法,生物药品质控分析方法的准确性和可靠性与技术方法本身（包括方法的原理和方法的技术特点等）密切相关，一种系统的完整的分析方法应包括：,17,（一）、分析方法的原理,（二）、供试品,应说明如何取样，包括每次测定时取样的数量、如何取用（单支或多支混合）等。,（三）、测试用仪器及参数,（四）、测试用试剂,列出所有测试用的试剂和规格，并说明其来源。如果某些试剂为自制或对采购的试剂进行了加工处理，则应详述制备或处理过程。,18,（五）、标准品或参考品的配备,（六）、供试品的配备：,（七）
8、、测试过程,按实验步骤详述整个实验过程，说明关键步骤的实验条件。,（八）、计算,尽可能以表格的形式显示所获取的数据，说明数据的处理方法，提供计算公式，并说明计算方法的出处及采用依据。,（九）、结果报告：说明结果报告的形式,（十）、判定标准：提供判定标准，说明判定标准的制定依据。,19,五、分析方法的验证,质控分析方法的验证就是根据方法的需要测定该方法的,专属性、准确性、精密度、线性、范围、检测限度、定量限度、耐用性,等几个指标中的一个或几个，用于不同检测目的的试验方法需进行不同参数的测定，下表为各种检测方法通常需测定的参数。,20,21,（一）专属性,专属性,系指在其他成分（如杂质、降解物、辅
9、料等）可能存在下，采用的分析方法能够准确测定被分析物质的特性的能力。,通常,鉴别、杂质检查、含量测定,方法中均应考察其专属性。,如采用的方法不够专属，应采用多个方法予以补充。,22,1,、,鉴别反应,专属性,试验要求证明能与,可能共存的物质,或,结构相似化合物,区分，需确证含被分析物的样品,呈正反应,（可与已知对照物比较），而不含被测成分的样品呈,负反应,，以及,结构相似,或组分中的有关化合物，也应呈负反应。,23,2,、杂质检查,作为,纯度检查,，所采用的分析方法应确保,可检出被分析物中杂质的含量,，如有关物质、重金属、残留溶剂等。因此杂质检查要求分析方法有一定的专属性。,24,杂质可获得,
10、:,可向供试品中加入一定量的杂质，证明杂质与共存物质能得到分离和,检出,，并具适当的准确度与精密度。,杂质或降解产物不能获得,:,将供试品用强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化的方法进行破坏（制剂应考虑辅料的影响），比较破坏前后检出的杂质个数和量。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行色谱峰纯度检查,。,25,3,、含量测定,含量测定目的,是得到样品中被分析物的,含量,或,效价,的准确结果。,在杂质可获得的情况下,，对于主成分含量测定可,在供试品中加入杂质或辅料,，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质和辅料的试样比较测定结果。,26,在杂质或降解产物不能获得的情况下，,可采用,另一个经验
11、证,了的或,药典,方法进行比较，比对两种方法测定的结果。也可采用,破坏性试验（,强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化），得到含有杂质或降解产物的试样，,用两种方法进行含量测定比较测定结果,。必要时进行色谱峰纯度检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分。,27,（二）准确度,准确度系指,用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间接近的程度。有时也称真实度。一般以回收率（）表示。,一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定的检测项目均需要验证准确度，如含量测定、杂质定量试验等。,28,准确度应在规定的范围内建立。该指标的验证一般以,回收率,试验来进行，试验设计需考虑在规定范围内
12、，,制备,3,个不同浓度,的样品，各测定,3,次，即测定,9,次，报告已知加入量的回收率（）或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。,（二）准确度,29,回收率,回收试验可在几份相同试样中加入适量待测组分的纯品，以相同条件进行测定，按下式计算回收率：,回收率添加组分试样测定值原试样测定值,/,组分添加量,回收率越高则认为方法越可靠。,30,1,、含量测定,原料药,可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。,制剂,可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。,（二）准确度,31,2,、杂质定量试验,杂质的定量试验可向原料药或制剂中加入,已知量杂
13、质,进行测定。,如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。,当杂质的光谱与主成分的光谱相似，则可采用原料药的响应因子近似计算杂质含量（自身对照法）。并应明确单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（）或是面积比（）。,32,33,（三）精密度,精密度系指,在规定的测试条件下，同一均质样品，经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度）。,该指标目的是考察分析方法在不同的时间、操作人员、试验室下，所得结果的,重现性和重复性,。涉及,定量测定的项目,考察方法的精密度。,34,精密度一般用偏差、标准偏差或,相对标准偏差,表示。取样
14、测定次数应有统计学意义，至少用,6,次结果进行评价。,精密度可以从三个层次考察：,重复性、中间精密度、重现性。,（三）精密度,35,1,、重复性,重复性系指,在,同样的操作,条件下，在,较短时间,间隔内，由,一个分析人员,测定所得结果的精密度。,重复性测定,可在规定范围内，至少用,9,次测定结果进行评价，如制备,3,个不同浓度的样品，各测定,3,次，或采用同,一批样品,（把被测物浓度当作,100,），用至少测定,6,次的结果进行评价。,36,2,、中间精密度,中间精密度系指,在同一试验室，由于试验室内部条件改变，如时间、分析人员、仪器设备、测定结果的精密度。,验证设计方案中的变动因素一般为,日
15、期、分析人员、设备,。,37,天数,操作者,仪器（或色谱柱）,第一天,A,A,B,B,第二天,A,B,B,A,第三天,A,B(,或,A),B,B(,或,A),38,3,、重现性,指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度。,当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。,39,（四）线性,线性系指,在设计的范围内，检测结果与试样中被分析物的浓度（量）直接呈线性比例关系的能力。,线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量试验和含量测定均需要验证线性。,做法,:,可用一,贮备液,经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列被测物质浓度系列进行测定，,至少制备,5,个浓度。以测得的响应信号作
16、为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性,.,40,（五）范围,范围系指,能够达到一定的准确度、精密度和线性，测试方法适用的试样中被分析物的高低限浓度或量的区间。,范围通常用与分析方法的测试结果相同的单位（如百分浓度）表达。,涉及到定量测定的检测项目均需要对范围进行验证，如含量测定、含量均匀度、溶出度或释放度、杂质定量试验等。,41,1,、,含量测定,范围应为测试浓度的,80,100,或更宽。,2,、杂质,杂质测定时，范围应根据初步实测，拟订出规定限度的,20,。如果含量测定与杂质检查同时测定，用面积归一化法，则线性范围应为杂质规定限度的,-20,至含量限度（或上限）的,+20,。,（五）范围,42,（六）检测限,检测限系指,试样中的被分析物能够被检测到的最低量，但不一定要准确定量。,该验证指标的意义,在于考察方法是否,具备灵敏,的检测能力。因此对杂质限度试验，需证明方法具有足够低的检测限，以保证需要控制的杂质被测出。,43,1,、直观法,直观评价可以用于,非仪器分析,方法，也可用于仪器分析方法。,检测限的测定是通过对一,系列已知浓度,被分析物的样品进行分析，并以能,准确（或被可靠）地检
药物质量控制分析方法验证技术指导原则课件
