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1、实 验 一 细 菌 检 验 基 本 技 术 (三 ) 目 的v 掌 握 观 察 菌 落 的 方 法 ， 了 解 细 菌 在液 体 、 半 固 体 培 养 基 的 生 长 表 现 及意 义 。v 掌 握 革 兰 染 色 法 和 熟 悉 细 菌 涂 片 的制 备 。v 掌 握 细 菌 和 基 本 形 态 和 特 殊 结 构 。 【 器 材 】v显 微 镜 、 载 玻 片 、 察 镜 纸 、 小 镊 子 、 接 种 环 、酒 精 灯 等 细 菌 染 色 标 本 的 制 作 程 序涂 片 干 燥 固 定染 色 染 色 方 法v革 兰 染 色 法 （ Gram stain）v芽 胞 染 色 法 （ sp
2、ore stain） 革 兰 染 色 法 （ Gram stain） 方 法 （ 改 良 快 速 法 ） 初 染 ： 结 晶 紫 等 量 NaH CO3 3 5s， 水 洗 媒 染 ： 碱 性 碘 液 3 5s， 水 洗 脱 色 ： 丙 酮 酒 精 3 5s， 水 洗 复 染 ： 碱 性 稀 释 复 红 3 5s， 水 洗 结 果 紫 色 ： 革 兰 阳 性 菌 红 色 ： 革 兰 阴 性 菌 芽 胞 染 色 法 （ spore stain） 方 法 ：涂 片 干 燥 固 定 5%孔 雀 绿 加 温 染 3 5min 水 洗 0.5%沙 黄 1min 水 洗 、 晾 干 、 油 镜 检 结 果
3、 ： 菌 体 呈 红 色 ， 芽 胞 呈 绿 色 。 影 响 因 素 染 色 关 键 ： 脱 色 时 间 的 长 短 其 他 影 响 因 素 ： 菌 龄 、 涂 片 厚 薄 、 染 液质 量 控 制p 革 兰 阳 性 菌 金 黄 色 葡 萄 球 菌ATCC25923革 兰 阴 性 菌 大 肠 埃 希 菌 ATCC25922 三 、 拉 丝 试 验 原 理 ： 革 兰 阴 性 菌 的 细 胞 壁 在 稀 碱 溶 液 中 容 易 破裂 ， 释 放 出 未 断 裂 的 DNA螺 旋 ， 使 菌 液 呈 粘 性 。 方 法 ： 结 果 ： 有 丝 出 现 （ 拉 丝 试 验 ） 革 兰 阴 性 菌 无
4、 丝 出 现 （ 拉 丝 试 验 ） 革 兰 阳 性 菌 用 途 ： 用 于 快 速 鉴 别 革 兰 阳 性 菌 和 革 兰 阴 性 菌 【 注 意 事 项 】v 1. 每 次 取 菌 前 后 注 意 将 接 种 环 灭 菌 。v 2. 涂 片 薄 而 均 匀 ， 干 燥 时 注 意 勿 将 标 本 烤 枯 ， 不要 忘 记 标 本 的 固 定 。v 3. 革 兰 氏 染 色 成 败 的 关 键 是 脱 色 时 间 ， 如 脱 色 过度 ， 革 兰 阳 性 菌 也 可 被 脱 色 而 被 误 认 为 是 革 兰 氏阴 性 菌 ； 如 脱 色 时 间 过 短 ， 革 兰 氏 阴 性 菌 也 会 被误 认 为 是 革 兰 氏 阳 性 菌 。 因 此 必 须 严 格 把 握 脱 色时 间 。 v 4. 选 用 培 养 1824小 时 菌 龄 的 细 菌 为 宜 ， 若 细 菌太 老 ， 由 于 菌 体 死 亡 或 自 溶 常 使 革 兰 阳 性 菌 转 呈阴 性 反 应 。
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