酶课件理工大

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1、第 三 章 酶 与 辅 酶 v 生 物 体 内 的 新 陈 代 谢 是 一 切 生 命 活 动 的 基 础 。 新 陈 代 谢是 由 无 数 的 复 杂 的 化 学 反 应 组 成 的 ， 这 些 化 学 反 应 几 乎都 是 在 特 异 的 生 物 催 化 剂 -酶 的 驱 动 下 进 行 的 。 没 有 酶就 没 有 生 命 。v 定 义 ： 酶 是 由 活 细 胞 产 生 的 ， 具 有 催 化 功 能 的 生 物 大 分子 物 质 ， 其 化 学 本 质 绝 大 部 分 为 蛋 白 质 ， 少 数 为 核 酸（ 核 酶 、 脱 氧 核 酶 ） 。 第 一 节 酶 生 物 催 化 剂 v

2、 公 元 前 两 千 多 年 ， 我 国 已 有 酿 酒 记 载 。v 一 百 余 年 前 ， Pasteur认 为 发 酵 是 酵 母 细 胞 生 命 活 动 的 结 果 。v 1878年 ， Kuhne首 次 提 出 Enzyme一 词 。v 1897年 ， Buchner兄 弟 用 不 含 细 胞 的 酵 母 提 取 液 ， 实 现 了 发 酵 。v 1926年 ， Sumner首 次 从 刀 豆 中 提 纯 出 脲 酶 结 晶 。 证 实 酶 的 蛋白 质 本 质 ， 获 1946年 诺 贝 尔 奖 。v 1982年 ， Cech首 次 发 现 RNA也 具 有 酶 的 催 化 活 性

3、 ， 提 出 核 酶(ribozyme)的 概 念 。 Cech等 获 得 1989年 诺 贝 尔 化 学 奖 。 v 1995年 ， Jack W.Szostak研 究 室 首 先 报 道 了 具 有 DNA连 接 酶 活性 DNA片 段 ， 称 为 脱 氧 核 酶 (deoxyribozyme)。 二 、 酶 的 催 化 特 点(一 ) 酶 与 一 般 催 化 剂 的 共 性 1 本 身 反 应 前 后 无 变 化 酶 与 一 般 催 化 剂 一 样 ， 在 化 学 反 应 前 后 都 没 有质 和 量 的 改 变 。 2 不 改 变 化 学 反 应 平 衡 常 数 酶 只 催 化 热 力

4、 学 允 许 的 化 学 反 应 ， 只 能 加 速 可逆 反 应 的 进 程 ， 而 不 改 变 反 应 的 平 衡 点 ， 作 用 是 缩短 反 应 达 到 平 衡 所 需 的 时 间 。 3 降 低 反 应 的 活 化 能 活 化 能 指 的 是 在 一 定 条 件 下 ， 能 使 l摩 尔 底 物全 部 进 入 活 化 态 所 需 要 的 自 由 能 (卡 摩 尔 )。 反 应 总 能 量 改 变 非 催 化 反 应 活 化 能 酶 促 反 应 活 化 能 一 般 催 化 剂 催化 反 应 的 活 化 能 能量 反 应 过 程 底 物 产 物 酶 促 反 应 活 化 能 的 改 变 活

5、 化 能 ： 底 物 分 子 从 初 态 转 变 到 活 化 态 所 需 的 能 量 。 （ 二 ） 酶 的 催 化 特 性 1.反 应 条 件 温 和 常 温 、 常 压 、 pH近 中 性 的 水 溶 液 酶 易 失 活2.高 度 的 催 化 效 率 酶 催 化 效 率 比 非 催 化 反 应 高 108 1020倍 ； 比一 般 催 化 剂 高 107 1013倍 。如 ： 碳 酸 酐 酶 ， 每 微 摩 尔 每 秒 钟 6 105微 摩 尔 底 物 。 3.高 度 专 一 性 作 为 一 种 生 物 催 化 剂 ， 酶 对 其 作 用 的 底 物 有 一 定 的 要 求 ，即 一 种

6、酶 只 作 用 于 一 种 或 一 类 特 定 的 底 物 。 酶 的 专 一 性 分 为两 大 类 ： 结 构 专 一 性 和 立 体 异 构 专 一 性 绝 对 专 一 性 (absolute specificity)： 只 能 作 用 于 一 种 特 定 结 构 的 底 物 ， 进 行 一 种 专 一 的 反 应 ， 生 成 一 种 特 定 结 构的 产 物 。 如 ： 脲 酶 ： 只 催 化 水 解 尿 素 相 对 专 一 性 (relative specificity)： 作 用 于 一 类 化 合 物 或一 种 化 学 键 。 它 可 分 为 键 专 一 性 和 基 团 专 一 性

7、 两 种 。 如 酯 酶 水 解 酯 键 。 如 -D-葡 萄 糖 苷 酶 ， ， 不 仅 要 求 水 解 -糖 苷 键 ，且 -糖 苷 键 的 一 端 必 须 是 葡 萄 糖 ， 所 以 可 水 解 蔗 糖 、 麦 芽 糖 。 立 体 结 构 特 异 性 (stereo specificity)： 作 用 于 立 体 异 构 体 中 的 一 种 。 v 乳 酸 脱 氢 酶 的 底 物 和 酶 的 三 点 附 着 （ tree-point attachment） 理 论 。 D(-)乳 酸 由 于 -OH、 -COOH的 位 置 正 好 相 反 ， 因 此 造 成 与 酶 的 的 三 个 基

8、团 不 能 完成 结 合 ， 故 而 不 能 受 酶 的 催 化 。 4 酶 的 催 化 活 性 的 可 调 节 性 酶 促 反 应 受 多 种 因 素 的 调 控 ， 以 适 应 机 体 对 不断 变 化 的 内 外 环 境 和 生 命 活 动 的 需 要 。 其 中 包 括 三方 面 的 调 节 。v 对 酶 生 成 与 降 解 量 的 调 节v 酶 催 化 效 力 的 调 节v 通 过 改 变 底 物 浓 度 对 酶 进 行 调 节 等 三 、 酶 的 分 类1.根 据 组 成 成 分 蛋 白 质 部 分 ： 酶 蛋 白 (apoenzyme) 辅 助 因 子 (cofactor) 金

9、属 离 子小 分 子 有 机 化 合 物结 合 酶 （ 全 酶 )(holoenzyme)v 结合酶 (conjugated en zyme) 决 定 反 应 的 特 异 性 及 其 催 化 机 制决 定 反 应 的 性质 和 反 应 类 型 辅 助 因 子 分 类（ 按 其 与 酶 蛋 白 结 合 的 紧 密 程 度 ） 辅 酶 (coenzyme):与 酶 蛋 白 结 合 疏 松 ， 可 用 透 析 或 超 滤 的方 法 除 去 。 辅 基 (prosthetic group):与 酶 蛋 白 结 合 紧 密 ， 不 能 用 透 析 或 超滤 的 方 法 除 去 。 金 属 离 子 的 作

10、 用稳 定 酶 的 构 象 ； 参 与 催 化 反 应 ， 传 递 电 子 ；在 酶 与 底 物 间 起 桥 梁 作 用 ；中 和 阴 离 子 ， 降 低 反 应 中 的 静 电 斥 力 等 。 小 分 子 有 机 化 合 物 的 作 用在 反 应 中 起 运 载 体 的 作 用 ， 传 递 电 子 、质 子 或 其 它 基 团 。 主 要 为 水 溶 性 的 B族 维 生 素参 与 组 成 。 小 分 子 有 机 化 合 物 在 催 化 中 的 作 用尼 克 酰 胺 （ 维 生 素 PP之 一 ）尼 克 酰 胺 （ 维 生 素 PP之 一 ）维 生 素 B2（ 核 黄 素 ）维 生 素 B2

11、（ 核 黄 素 ）维 生 素 B 1（ 硫 胺 素 ）泛 酸硫 辛 酸维 生 素 B12生 物 素吡 哆 醛 （ 维 生 素 B6之 一 ）叶 酸NAD+（ 尼 克 酰 胺 腺 嘌 呤 二 核苷 酸 ， 辅 酶 I）NADP+（ 尼 克 酰 胺 腺 嘌 呤 二 核苷 酸 磷 酸 ， 辅 酶 II）FMN （ 黄 素 单 核 苷 酸 ）FAD（ 黄 素 腺 嘌 呤 二 核 苷 酸 ）TPP（ 焦 磷 酸 硫 胺 素 ）辅 酶 A（ CoA）硫 辛 酸钴 胺 素 辅 酶 类生 物 素磷 酸 吡 哆 醛四 氢 叶 酸氢 原 子 （ 质 子 ）醛 基酰 基烷 基二 氧 化 碳氨 基甲 基 、 甲 烯

12、基 、甲 炔 基 、 甲 酰 基等 一 碳 单 位 所 含 的 维 生 素名 称小 分 子 有 机 化 合 物 (辅 酶 或 辅 基 )转 移 的 基 团 尼 克 酰 胺 （ 维 生 素 之 一 ）尼 克 酰 胺 （ 维 生 素 之 一 ）维 生 素 （ 核 黄 素 ）维 生 素 （ 核 黄 素 ）维 生 素 （ 硫 胺 素 ）泛 酸硫 辛 酸维 生 素生 物 素吡 哆 醛 （ 维 生 素 之 一 ）叶 酸（ 尼 克 酰 胺 腺 嘌 呤 二 核苷 酸 ， 辅 酶 ）（ 尼 克 酰 胺 腺 嘌 呤 二 核苷 酸 磷 酸 ， 辅 酶 ）（ 黄 素 单 核 苷 酸 ）（ 黄 素 腺 嘌 呤 二 核

13、苷 酸 ）（ 焦 磷 酸 硫 胺 素 ）辅 酶 （ ）硫 辛 酸钴 胺 素 辅 酶 类生 物 素磷 酸 吡 哆 醛四 氢 叶 酸氢 原 子 （ 质 子 ）醛 基酰 基烷 基二 氧 化 碳氨 基甲 基 、 甲 烯 基 、甲 炔 基 、 甲 酰 基等 一 碳 单 位 所 含 的 维 生 素名 称小 分 子 有 机 化 合 物 (辅 酶 或 辅 基转 移 的 基 团 结 合 酶 的 特 点 ： 1、 只 有 全 酶 才 有 活 性 。 2、 一 种 酶 只 能 有 一 种 辅 酶 或 辅 基 ;不 同 的 酶可 有 相 同 的 辅 酶 或 辅 基 ： 如 乳 酸 脱 氢 酶 、 苹 果 酸 脱 氢

14、酶 、 柠 檬 酸脱 氢 酶 均 以 NAD+ 作 为 辅 酶 。 3、 全 酶 中 的 辅 酶 决 定 了 酶 所 催 化 的 类 型 与性 质 （ 反 应 专 一 性 ） ， 而 酶 蛋 白 决 定 了 所 催化 的 底 物 类 型 （ 底 物 专 一 性 ） 。 酶 的 分 类2.根 据 的 分 子 结 构v 单 体 酶 (monomeric enzyme)： 仅 具 有 三 级 结 构 的 酶 。牛 胰 RNase 124a.a 单 链鸡 卵 清 溶 菌 酶 129a.a 单 链胰 凝 乳 蛋 白 酶 三 条 肽 链v 寡 聚 酶 (oligomeric enzyme)： 由 多 个

15、相 同 或 不 同 亚 基 以非 共 价 键 连 接 组 成 的 酶 。 含 相 同 亚 基 的 寡 聚 酶 ：苹 果 酸 脱 氢 酶 （ 鼠 肝 ） ， 2个 相 同 的 亚 基 含 不 同 亚 基 的 寡 聚 酶 ：琥 珀 酸 脱 氢 酶 （ 牛 心 ） ， 2个 亚 基绝 大 多 数 寡 聚 酶 都 含 有 偶 数 亚 基 ， 但 个 别 含 奇 数 个 亚 基 ， 如 荧 光 素 酶 含 3个 亚 基 。 亚 基 之 间 靠 次 级 键 结 合 。 酶 的 分 类 根 据 的 分 子 结 构v 多 酶 体 系 (multienzyme system)： 由 几 种 不 同 功 能 的

16、酶彼 此 聚 合 形 成 的 多 酶 复 合 物 。大 肠 杆 菌 丙 酮 酸 脱 氢 酶 复 合 体 由 三 种 酶 组 成 ： 丙 酮 酸 脱 氢 酶 （ E1） 以 二 聚 体 存 在 2 9600 二 氢 硫 辛 酸 转 乙 酰 基 酶 （ E2） 70000 二 氢 硫 辛 酸 脱 氢 酶 （ E3） 以 二 聚 体 存 在 2 56000 12个 E 1 二 聚 体 24 96000 24个 E2 单 体 24 70000 6个 E3 二 聚 体 12 56000 总 分 子 量 ： 560万 酶 的 分 类3.根 据 的 反 应 类 型v 氧 化 -还 原 酶 催 化 氧 化 -

17、还 原 反 应 。v 主 要 包 括 脱 氢 酶 (dehydrogenase)和 氧 化 酶(Oxidase)。v 如 ， 乳 酸 (Lactate)脱 氢 酶 催 化 乳 酸 的 脱 氢 反 应 。(1) 氧 化 -还 原 酶 CH3CHCOOHOH NAD+ H+CH3CCOOHO NADH 22 BHABAH v 转 移 酶 催 化 基 团 转 移 反 应 ， 即 将 一 个 底 物 分子 的 基 团 或 原 子 转 移 到 另 一 个 底 物 的 分 子 上 。(2) 转 移 酶 Transferase XBABXA v 常 见 的 有 氨 基 转 移 酶 、 甲 基 转 移 酶 、

18、 酰 基 转移 酶 、 醛 基 转 移 酶 及 磷 酸 化 酶 。 v 水 解 酶 催 化 底 物 的 加 水 分 解 反 应 。v 主 要 包 括 淀 粉 酶 、 蛋 白 酶 、 核 酸 酶 及 酯 酶 等 。v 例 如 ， 脂 肪 酶 (Lipase)催 化 的 脂 的 水 解 反 应 ：(3) 水 解 酶 hydrolaseH 2OCOOCH2CH3R RCOOH CH3CH2OH v裂 合 酶 催 化 从 底 物 分 子 中 移 去 一 个 基 团 或 原子 形 成 双 键 的 反 应 及 其 逆 反 应 。v主 要 包 括 醛 缩 酶 、 水 化 酶 及 脱 氨 酶 等 。v例 如

19、， 延 胡 索 酸 水 合 酶 催 化 的 反 应 。(4) 裂 解 酶 Lyase（ 裂 合 酶 ） HOOCCH=CHCOOH H2O HOOCCH2CHCOOHOH v 异 构 酶 催 化 各 种 同 分 异 构 体 的 相 互 转 化 ， 即 底 物分 子 内 基 团 或 原 子 的 重 排 过 程 。例 如 ， 6-磷 酸 葡 萄 糖 异 构 酶 催 化 生 成 6-磷 酸 果 糖 。(5) 异 构 酶 IsomeraseBA v 合 成 酶 ， 又 称 为 连 接 酶 ， 能 够 催 化 C-C、 C-O、 C-N 以 及 C-S 键 的 形 成 反 应 。 这 类 反 应 必 须

20、 与 ATP分 解反 应 相 互 偶 联 。v A + B + ATP + H-O-H =A B + ADP +Pi v 例 如 ， 丙 酮 酸 羧 化 酶 催 化 的 反 应 。 丙 酮 酸 + CO2 草 酰 乙 酸(6) 合 成 酶 Ligase or Synthetase 1,根 据 其 催 化 底 物 来 命 名 ； 如 淀 粉 酶 、 蛋 白 酶2,根 据 所 催 化 反 应 的 性 质 来 命 名 ； 水 解 酶 、 脱 氢 酶3,结 合 上 述 两 个 原 则 来 命 名 ， 如 琥 珀 酸 脱 氢 酶4,有 时 在 这 些 命 名 基 础 上 加 上 酶 的 来 源 或 其

21、它 特 点 。如 牛 胰 核 糖 核 酸 酶四 、 酶 的 命 名1.习 惯 命 名 法 v 系 统 名 称 包 括 底 物 名 称 、 构 型 、 反 应 性 质 ， 最 后 加 一个 酶 字 。v 习 惯 名 称 ： 己 糖 激 酶系 统 名 称 ： ATP :葡 萄 糖 磷 酸 转 运 酶v 习 惯 名 称 :谷 丙 转 氨 酶系 统 名 称 :丙 氨 酸 ： -酮 戊 二 酸 氨 基 转 移 酶酶 催 化 的 反 应 : 谷 氨 酸 + 丙 酮 酸 -酮 戊 二 酸 + 丙 氨 酸 酶 分 类 号 ： （ EC 2.7.1.1） 每 一 种 酶 用 一 个 系 统 名 称 和 一 个

22、酶 分 类 号 表 示 。2. 国 际 系 统 命 名 法 国 际 系 统 分 类 法 及 编 号 （ EC编 号 ）（ 1） 按 反 应 性 质 分 六 大 类 ， 用 1、 2、 3、 4、 5、 6表 示 。（ 2） 根 据 底 物 中 被 作 用 的 基 团 或 键 的 特 点 ， 将 每 一 大 类 分为 若 干 个 亚 类 ， 编 号 用 1、 2、 3 。（ 3） 每 个 亚 类 又 可 分 为 若 干 个 亚 一 亚 类 ， 用 编 号 1、 2、 3表示 。每 一 个 酶 的 编 号 由 4个 数 字 组 成 ， 中 间 以 “ ” 隔 开 。第 一 个 数 字 表 示 大

23、类 ， 第 二 个 数 字 表 示 亚 类 ， 第 三 个 表 示 亚-亚 类 ， 第 四 个 数 字 表 示 在 亚 -亚 中 的 编 号 。n 乙 醇 脱 氢 酶 EC1.1.1.1 ，n 乳 酸 脱 氢 酶 EC1.1.1.27 ， n 苹 果 酸 脱 氢 酶 EC1.1.1.37 第 一 个 数 字 表 示 大 类 ： 氧 化 还 原第 二 个 数 字 表 示 反 应 基 团 ： 醇 基第 三 个 数 字 表 示 电 子 受 体 ： NAD +或 NADP+第 四 个 数 字 表 示 此 酶 底 物 ： 乙 醇 ， 乳 酸 ， 苹 果 酸 。 第 二 节 酶 的 作 用 机 理 酶的活

24、性中心一 、 酶 的 活 性 中 心 酶 分 子 上 具 有 一 定 空 间 构 象 的 部 位 ， 该 部 位 直 接与 底 物 结 合 ， 并 参 与 将 底 物 转 变 为 产 物 的 反 应过 程 ， 这 一 部 位 就 称 为 酶 的 活 性 中 心 。 催 化 部 位 (Catalytic site): 酶 分 子 中 促 使 底 物 发 生 化学 变 化 的 部 位 称 为 催 化 部位 。l 通 常 将 酶 的 结 合 部 位 和 催化 部 位 总 称 为 酶 的 活 性 部位 或 活 性 中 心 。l 结 合 部 位 决 定 酶 的 专 一 性 ，l 催 化 部 位 决 定

25、酶 所 催 化 反应 的 性 质 。 u 酶 分 子 中 存 在 的 各 种 化 学 基 团 并 不 一 定 都 与酶 的 活 性 有 关 。 其 中 那 些 与 酶 的 活 性 密 切 相 关的 基 团 做 酶 的 必 需 基 团 (essential group)。 结 合 基 团活 性 中 心 内 必 需 基 团 催 化 基 团活 性 中 心 外 必 需 基 团 v主 要 包 括 ：亲 核 性 基 团 ： 丝 氨 酸 的羟 基 ， 半 胱 氨 酸 的 巯 基和 组 氨 酸 的 咪 唑 基 。 H2N CH CCH2 OHOOH OHH2N CH C CH2 OH O SH SH H2N

26、CH CCH 2 OHO N NH N NH 酶 活 性 中 心 的 必 需 基 团 v酸 碱 性 基 团 ： 门冬 氨 酸 和 谷 氨 酸的 羧 基 ， 赖 氨 酸的 氨 基 ， 酪 氨 酸的 酚 羟 基 等 。 H2N CH CCH2 OHOCH2 COH O H2N CH CCH 2 OHO COH O COOH H2N CH CCH 2 OHO CH2CH 2CH2 NH2 NH2H2N CH C CH2 OH O OH OH (4)活 性 中 心 具 有 柔 性 。 v 酶 促 反 应 ： E + S = ES E + Pv 反 应 速 度 快 慢 ,则 主 要 取 决 于 反 应

27、的 活 化 能 Ea。 v 催 化 剂 的 作 用 是 降 低 反 应 活 化 能 Ea,从 而 起 到 提 高 反 应 速 度的 作 用 二 、 酶 与 底 物 分 子 的 结 合 1.活 化 能 降 低 A + B A B C + D初态 过渡态 终态从 初 态 转 化 为 过 渡 态 需 要 能 量 ， 即 为 活 化 能 （ Energy of activation EACT） ， 活 化 能 越 大 ， 中 间 产 物 越 难 形 成 ， 反 应越 难 进 行 。 反 应 过 程 中 能 的 变 化 v 在 酶 催 化 的 反 应 中 ， 第 一 步 是 酶 与 底 物 形 成 酶

28、底物 中 间 复 合 物 。 当 底 物 分 子 在 酶 作 用 下 发 生 化 学 变化 后 ， 中 间 复 合 物 再 分 解 成 产 物 和 酶 。v E + S = E-S P + Ev 许 多 实 验 事 实 证 明 了 E S复 合 物 的 存 在 。 E S复 合物 形 成 的 速 率 与 酶 和 底 物 的 性 质 有 关 。2. 中 间 产 物 学 说 3.锁 钥 学 说 v认 为 整 个 酶 分 子 的 天 然 构 象 是 具 有 刚 性 结构 的 ， 酶 表 面 具 有 特 定 的 形 状 。 酶 与 底 物的 结 合 如 同 一 把 钥 匙 对 一 把 锁 一 样刚 性

29、 模 式 ： Emil Fisher提 出 4.诱 导 契 合 学 说v该 学 说 认 为 酶 表 面 并 没 有 一 种 与 底 物 互 补 的固 定 形 状 ， 而 只 是 由 于 底 物 的 诱 导 才 形 成 了互 补 形 状 .柔 性 学 说 ： Koshland提 出 1. 邻 近 效 应 和 定 向 效 应v 邻 近 效 应 ： 酶 与 底 物 结合 时 ， 底 物 的 敏 感 键 逐渐 靠 近 活 性 部 位 的 催 化基 团 。 提 高 了 反 应 基 团的 有 效 浓 度 。v 定 向 效 应 ： 由 于 酶 的 构象 作 用 ， 底 物 的 反 应 基团 之 间 、 酶

30、与 底 物 的 反应 基 团 之 间 正 确 取 向 的效 应三 、 影 响 酶 催 化 效 率 的 因 素 * 诱 导 契 合 假 说 (induced-fit hypothesis)酶 底 物 复 合 物 E + S E + P ES 酶 与 底 物 相 互 接 近 时 ， 其 结 构 相 互 诱 导 、相 互 变 形 和 相 互 适 应 ， 进 而 相 互 结 合 。 这 一 过程 称 为 酶 -底 物 结 合 的 诱 导 契 合 假 说三 、 影 响 酶 催 化 效 率 的 因 素2.底 物 的 形 变 目 录 l 广 义 酸 碱 催 化 是 指 通 过 质 子 酸 提 供 部 分 质

31、 子 ,或 是 通 过 质 子碱 接 受 部 分 质 子 的 作 用 ， 达 到 降 低 反 应 活 化 能 的 过 程 。l 酶 活 性 部 位 上 的 某 些 基 团 可 以 作 为 良 好 的 质 子 供 体 或 受 体 对底 物 进 行 酸 碱 催 化 。p His 残 基 的 咪 唑 基 是 酶 的 酸 碱 催 化 作 用 中 最 活 泼 的 一 个 催 化功 能 团 。 -COOH, -NH 3, -SH,+OH NHN H+ -COO , -NH 2, -S , - . -O- NHN: 3.酸 碱 催 化 4. 共 价 催 化 v A-X+E A+X-E X-E+B B-X+E

32、v 催 化 剂 通 过 与 底 物 形 成 反 应 活 性 很 高 的 共 价 过 渡 产 物 ， 使反 应 活 化 能 降 低 ， 从 而 提 高 反 应 速 度 的 过 程 ， 称 为 共 价 催化 。v 酶 中 参 与 共 价 催 化 的 基 团 主 要 包 括 His 的 咪 唑 基 ， Cys 的硫 基 ， Asp 的 羧 基 ， Ser 的 羟 基 等 。5.活 性 中 心 的 微 环 境 疏 水 环 境介 电 常 数 低 ， 加 强 极 性 基 团 间 的 作 用 。 酶 催 化 反 应 机 制 的 实 例胰 凝 乳 蛋 白 酶Chymotrypsin(EC 3.4.4.5)分

33、子 量 25 kDa。 由 三 个 多 肽 链 通 过 两 个 二 硫 键 连 接 。分 子 大 小 ： 514040 A.。有 多 个 反 平 行 -折 叠 区 域 ， -螺 旋 很 少 。 除 去 三 个 带电 荷 的 氨 基 酸 残 基 外 其 它 所 有 带 电 荷 的 氨 基 酸 均 位 于分 子 表 面 上 。催 化 中 心 ： Ser195， His57， Asp102 反 应 分 两 个 阶 段 ; 第 一 阶 段 ：快 速 酰 化 形 成 酰 基 酶 共 价 中 间 物 ； (共 价 催 化 ;酸 碱 催 化 ）Ser 195对 底 物 肽 键 的 羰 基碳 发 生 亲 核

34、攻 击 ， His57获 取 质 子 。 四 面 体 中 间 过 渡 态 形 成 (与 C连 接 的 四 个 原 子 成 四 面 体 ) Ser195-His57-Asp102形 成 催 化 三 联 体 （ catalytic triad）（ Asp102稳 定 过 渡 态 中 带 正 电 荷 的 His57 ）肽 键 断 裂 ， 带 氨 基 的 产 物 游 离 ； 酰 基 -酶 共 价 中 间 物 形 成 。 第 二 阶 段 开 始 ： 水 分 子上 的 氧 原 子 攻 击 羰 基 碳第 二 阶 段 ： 酰 基 酶 共 价 中 间 物 慢 速 脱 酰 化 。His57获 得 质 子 ， 四

35、面体 中 间 物 再 次 形 成 。 带 羧 基 的 产 物 游 离 下 来 ， 酶 恢 复 原 状 。 反 应 特 征活 性 中 心 ： Ser195， His57， Asp102反 应 分 两 步 ： 快 速 酰 化 和 慢 速 脱 酰 化 。快 速 酰 化 （ 共 价 催 化 ， 酸 碱 催 化 ， 通 过 四 面 体过 渡 态 和 Ser195-His57-Asp102催 化 三 联 体 完 成 ）慢 速 脱 酰 化 （ 共 价 催 化 ， 酸 碱 催 化 ） 1.关 于 酶 的 叙 述 哪 项 是 正 确 的 ？ -( ) A.所 有 的 酶 都 含 有 辅 酶 或 辅 基 B.大

36、部 分 酶 都 是 蛋 白 质C.都 能 增 大 化 学 反 应 的 平 衡 常 数 加 速 化 学 反 应 D.都 具 有 立 体 异 构 专 一 性2. 关 于 酶 的 活 性 中 心 的 叙 述 ， 哪 项 不 正 确 ？ -( ) A.酶 与 底 物 接 触 只 限 于 酶 分 子 上 与 酶 活 性 有 关 的 较 小 区 域 B.必 需 基 团 可 位 于 活 性 中 心 之 内 ， 也 可 位 于 活 性 中 心 之 外 C.酶 蛋 白 中 主 要 是 一 级 结 构 相 邻 的 几 个 氨 基 酸 的 残 基 构 成酶 的 活 性 中 心 D.当 底 物 分 子 与 酶 分 子

37、 接 触 时 ， 可 引 起 酶 活 性 中 心 的 构 象改 变3.结 合 酶 类 必 需 由 ( )和 ( ) 结 合 后 才 具 有 活 性 ， 前 者 的作 用 是 ( ),后 者 的 作 用 是 ( ) 。 B C 4.L-精 氨 酸 酶 只 能 催 化 L-精 氨 酸 的 水 解 反 应 ， 而 对 D-精 氨 酸不 起 作 用 ， 这 是 因 为 该 酶 具 有 ( )专 一 性 。5.常 见 的 酶 活 性 中 心 的 必 需 基 团 有 （ ） A 半 胱 氨 酸 和 胱 氨 酸 的 巯 基 B 组 氨 酸 的 咪 唑 基 C 谷 氨 酸 ， 天 冬 氨 酸 的 侧 链 羧

38、基 D 丝 氨 酸 的 羟 基6.酶 分 子 中 的 催 化 基 团 决 定 了 酶 的 专 一 性 。 ( )7.酶 的 绝 对 专 一 性 是 指 ： A.作 用 与 一 类 化 合 物 ， 催 化 一 种 反 应 B.作 用 于 一 种 化 学 键 ， 催 化 一 种 反 应 C.作 用 于 一 种 底 物 ， 催 化 一 种 反 应 D.作 用 于 一 种 立 体 构 型 ， 催 化 一 种 反 应 第 三 节酶 促 反 应 动 力 学Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction 一 、 酶 促 反 应 速 率 的 测 定（ 一 ） 测 定 酶 促 反 应

39、 速 度 的 初 速 度 （ initial velocity ）酶 促 反 应 产 物 浓 度 与 反 应 时 间 进 程 曲 线 ：1. 随 着 反 应 时 间 延 长 ， 产 物 增 加 ， 加 大 了 逆 反 应 的 进 行 ；2. 有 可 能 产 生 产 物 抑 制 （ 反 馈 抑 制 ） ；3. 酶 部 分 失 活 。只 有 初 速 度 才 代 表 酶 的 催 化 活 力 。(底 物 消 耗 5%） 。 （ 二 ） 在 最 适 条 件 下 进 行 测 定 （ pH， T， 离 子 强 度 ）（ 三 ） 反 应 体 系 中 底 物 浓 度 要 大 大 超 过 酶 量 q 概 念 研

40、究 各 种 因 素 对 酶 促 反 应 速 度 的 影 响 ， 并 加 以 定量 的 阐 述 。q 影 响 因 素 包 括 有酶 浓 度 、 底 物 浓 度 、 pH、 温 度 、抑 制 剂 、 激 活 剂 等 。 研 究 一 种 因 素 的 影 响 时 ， 其 余 各 因 素 均 恒 定 。 1、 底 物 浓 度 对 反 应 速 度 的 影 响 ： 酶 浓 度 、 pH、 温 度 恒 定 。（ 一 ） 底 物 浓 度 曲 线 ： V S关 系 呈 矩 形 双 曲 线 ， 分 三 段 ： 1、 当 S较 低 时 ， V 随 S 增加 而 急 剧 增 加 ， 成 正 比 关 系 ，为 一 级 反

41、 应 。 2、 随 着 S 进 一 步 增 高 ， V 不 再 成 正 比 加 速 ， V 增 加 的 幅 度逐 渐 下 降 。 3、 继 续 加 大 S, V 不 再 增 加 ，表 现 出 零 级 反 应 ， 酶 的 活 性 中心 被 底 物 饱 和 。 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20020 4060 80100 Concentration of Substrate(umol/L) Rate of Rea ction(v) 二 、 底 物 浓 度 对 反 应 速 度 的 影 响 v 在 其 他 因 素 不 变 的 情 况 下 ， 底 物 浓 度 对 反 应 速 度 的

42、影 响 呈 矩 形 双 曲 线 关 系 。 当 底 物 浓 度 较 低 时反 应 速 度 与 底 物 浓 度 成 正 比 ； 反应 为 一 级 反 应 。 目 录 随 着 底 物 浓 度 的 增 高反 应 速 度 不 再 成 正 比 例 加 速 ； 反 应为 混 合 级 反 应 。 目 录 当 底 物 浓 度 高 达 一 定 程 度反 应 速 度 不 再 增 加 ， 达 最 大 速 度 ；反 应 为 零 级 反 应 目 录 2.米 氏 方 程 式 （ 重 点 ）中 间 产 物酶 促 反 应 模 式 中 间 产 物 学 说E + S k1k2 k3ES E + P VmaxS Km + S S：

43、 底 物 浓 度V： 不 同 S时 的 反 应 速 度Vmax： 最 大 反 应 速 度 m： 米 氏 常 数 米 式 方 程 的 导 出 ：1、 早 年 的 米 式 方 程 基 于 快 速 平 衡 假 说 42 31 KK EPKESKSE 因 为 研 究 的 是 初 速 度 ， P的 量 很 小 ， 由 P+EES可 以 忽 略 不 记 。 2 31K EPKESKSE 游 离 的 酶 与 底 物 形 成 ES的 速 度 极 快 （ 快 速 平 衡 ） ， 而 ES形 成产 物 的 速 度 极 慢 ， （ 即 K1、 K2 K3 ） ES生 成 速 度 ： k1（ E0 - ES） SES

44、分 解 速 度 ： k2ES+k3ES以 上 两 个 速 度 相 等 ：k1（ E0 - ES） S = k2ES+k3ES )( )( 00 1 321 320 SKm SEESKmES SESE k kkKmk kkES SESE 则 令 2.用 稳 态 假 说 推 导 米 式 方 程 ：稳 态 ： 是 指 ES的 生 成 速 度 与 分 解 速 度 相 等 ， 即 ES恒 定 2 31K EPKESKSE max033 SK SVSKm SEKESKV m 1 32K KKKm Vmax=k3 ES=k3E0 （ 米 氏 常 数 ）当 Km及 Vmax已 知 时 ， 根 据 米 氏 方

45、程 可 确 定 酶 反 应 速 度与 底 物 浓 度 的 关 系 。 当 底 物 浓 度 很 高 ， 将 酶 的 活 性 中 心 全 部 饱 和 时 ， 即E0 ES， 反 应 达 最 大 速 度 米 氏 方 程 式 推 导 基 于 两 个 假 设 ： E与 S形 成 ES复 合 物 的 反 应 是 快 速 平 衡 反 应 ，而 ES分 解 为 E及 P的 反 应 为 慢 反 应 ， 反 应 速 度 取 决于 慢 反 应 即 V k3ES。 (1) S的 总 浓 度 远 远 大 于 E的 总 浓 度 ， 因 此 在 反 应的 初 始 阶 段 ， S的 浓 度 可 认 为 不 变 即 S St。

46、 v 当 S 很 低 时 ( S Km )： 即 酶 促 反 应 V 与 底 物 浓 度 S 成 线 性 关 系 ， 表 现 为 一 级 反 应 。v 当 S 很 高 时 （ S Km） ： 说 明 反 应 速 度 已 达 最 大 值 ， 此时 ， 酶 活 性 部 位 全 部 被 底 物 占 据 ，反 应 速 度 v与 底 物 浓 度 S无 关 ，表 现 为 零 级 反 应 。 VmaxS Km + S V max SkK Svv m maxvv Km S Km值 等 于 酶 促 反 应 速 度 为 最 大 反 应 速 度 一 半时 的 底 物 浓 度 ， 单 位 是 mol/L。2 Km +

47、 S Vmax VmaxS (1) 当 =Vmax/2时 ， Km=S。 因 此 ， Km等 于 酶促 反 应 速 度 达 最 大 值 一 半 时 的 底 物 浓 度 。3.Km和 Vmax的 意 义 (2)Km是 酶 的 特 征 性 常 数 ： 只 与 酶 的 性 质 有 关 ， 与 酶 的 浓 度 无 关 。 在 一 定 条 件 下 ， 某 种 酶 的 Km值 是 恒 定 的 ， 但 是 当pH、 温 度 、 离 子 强 度 等 条 件 改 变 时 ， Km也 会 改 变 。 (3) Km可 用 来 判 断 酶 的 最 适 底 物 ： 当 酶 有 几 种 不 同 的 底 物 存 在 时 ，

48、 通 过 测 定 酶 在 不同 底 物 存 在 时 的 Km值 ， Km值 最 小 者 ， 即 为 该 酶的 最 适 底 物 。 (5) 可 根 据 Km计 算 某 一 底 物 浓 度 下 反 应 速 度 相当 于 Vmax的 百 分 率 。如 当 S=3Km时 代 入 米 氏 方 程 max SK Svv m maxmax 75.033 vKK Kvv mm m (6) Km可 帮 助 推 断 某 一 代 谢 反 应 的 方 向 和 途径 。v 生 物 体 的 代 谢 作 用 往 往 是 在 多 酶 体 系 下 进 行 的 ， 同 一 种 底物 可 以 被 几 种 不 同 的 酶 催 化 如

49、 丙 酮 酸 乳 酸 脱 氢 酶 乳 酸 Km=1.7 10-5 丙 酮 酸 脱 氢 酶 乙 酰 CoA Km=1.3 10-3 丙 酮 酸 脱 羧 酶 乙 醛 Km=1.0 10-3 当 丙 酮 酸 浓 度 较 低 时 ， 不 能 同 时 被 几 种 酶 作 用 ， Km较 小的 酶 促 反 应 占 优 势 ， 所 以 可 以 推 断 容 易 走 乳 酸 脱 氢 酶 催 化丙 酮 酸 形 成 乳 酸 的 途 径 。 Vmax定 义 ： Vm是 酶 完 全 被 底 物 饱 和 时 的 反 应 速 度 ， 与 酶 浓 度 成 正 比 。 Vmax也 是 一 个 常 数 ， 与 Km相 似 ， 同

50、 一 种 酶 对 不 同 底 物 的Vmax也 不 同 ， pH、 温 度 和 离 子 强 度 等 因 素 也 影 响 其大 小 。意 义 ： 当 S很 大 时 ， Vmax= k3 Ek3为 一 个 一 级 反 应 速 率 常 数 ， 表 示 当 酶 被 底 物 饱和 时 每 秒 钟 每 分 子 酶 转 换 的 底 物 分 子 数 ， 即 转 换 数 。k3越 大 ， 表 示 酶 的 催 化 效 率 越 高 。 4. m值 与 max值 的 测 定1. 双 倒 数 作 图 法 (double reciprocal plot)-1/K m maxmax 111 vSvKv m -4 -2 0

51、2 4 6 8 100.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1/S(1/mmol.L-1) 1/v 双 倒 数 作 图 法斜 率 =Km/Vmax-1/Km 1/Vmax 例 题 ： 1/v对 1/S的 双 倒 数 作 图 得 到 的 直 线斜 率 为 1.2 10-3min， 在 1/v轴 上 的 截 距 为2.0 10-2ml.min/nmol， 计 算 vmax和 Km LnmolkvKvKk mm /10650102.1 23maxmax 斜 率 min)./(501100.21 max2max mlnmolvvv 纵 截 距 底 物 浓 度S/(mol/L) 反 应 速 度v

52、/nmol/(L.min)6 10-5 147 10-5 589 10-4 622 10-3 7110 -2 71.5 作 业 ： 由 过 氧 化 氢 酶 催 化 地 反 应 得 到 如 下 的 数 据（ 1） 计 算 vmax和 Km（ 2） 当 S=2.5 10-4nmol/(L.min)时 ， 酶 促 反应 的 速 度 是 多 少 ？ 练 习 1.向 酶 促 反 应 体 系 中 增 加 酶 的 浓 度 时 ， 可 出 现 下 列 哪 一 种 效 应（ ）A 不 增 加 反 应 速 度 B 1/S对 1/V作 图 所 得 直 线 的 斜 率 减 少C Vmax保 持 不 变 D V达 到

53、1/2Vmax时 的 底 物 浓 度 增 大2.下 列 哪 个 不 是 推 导 米 氏 方 程 的 假 设 条 件 （ ）A 测 定 速 度 为 反 应 初 速 度 ， 即 S消 耗 EC ES解 离 生 成 E+S的 速 度 显 著 快 于 ES形 成 P+E的 速 度 ， 或称 之 为 快 速 平 衡 学 说D 当 反 应 达 到 恒 稳 状 态 时 ， 中 间 产 物 ES的 形 成 速 度 不 等 于其 解 离 速 度 3 下 列 酶 促 反 应 的 叙 述 哪 些 是 正 确 的 （ ） 不 定 项 选 择A 底 物 浓 度 过 量 和 不 受 限 制 时 ， 反 应 速 度 与 酶

54、 浓 度 成 正 比B 底 物 浓 度 过 量 时 ， 反 应 呈 零 级 反 应C 底 物 浓 度 低 时 ， 反 应 速 度 与 底 物 浓 度 成 正 比D 底 物 浓 度 与 酶 浓 度 相 等 时 可 达 最 大 反 应 速 度4.已 知 某 种 酶 的 Km值 为 0.05mol/l， 试 问 要 使 此 酶 所 催 化 的反 应 速 度 达 最 大 反 应 速 度 的 80%时 底 物 浓 度 应 是 多 少 ？（ ）A 0.04mol/l B 0.8mol/l C 0.2mol/l D 0.05mol/l5.本 质 是 Pr的 酶 活 性 中 心 常 出 现 的 残 基 有 A

55、sp、 Thr、 Ser、 Glu等 。 （ ）6. 辅 酶 与 辅 基 的 区 别 只 在 于 它 们 与 蛋 白 质 结 合 牢 固 程 度 不 同 ，并 无 严 格 的 界 限 。 （ ） 三 、 酶 浓 度 对 反 应 速 度 的 影 响当 S E， 酶 可 被底 物 饱 和 的 情 况 下 ， 反应 速 度 与 酶 浓 度 成 正 比 。关 系 式 为 ： V = K3 E 0 V E 当 SE时 ， V max = k3 E 酶 浓 度 对 反 应 速 度 的 影 响 1 最 适 温 度 及 影 响 因 素 温 度 对 酶 促 反 应 速 度 的 影 响 有 两 个 方 面 ： 提

56、 高 温 度 ， 加 快 反 应 速 度 。 提 高 温 度 ， 酶 变 性 失 活 。显 示 最 大 酶 活 力 的 温 度 ，叫 作 最 适 温 度 。 大 多 数 酶 都 有 一 个 最 适 温 度 。 温 度 系 数 Q10： 温 度 升 高 10 ， 反 应 速 度 与 原 来 的 反 应 速 度之 比 ， 大 多 数 酶 的 Q10一 般 为 1-2。温 血 动 物 的 酶 ， 最 适 温 度 35 40 ， 植 物 酶 最 适 温 度40 50 ， 细 菌 Taq DNA聚 合 酶 70 。最 适 温 度 不 是 酶 的 特 征 常 数 ， 它 与 底 物 种 类 、 作 用 时

57、 间 、pH、 离 子 强 度 等 因 素 有 关 。 10 20 30 40 50 60 70 80 90020 4060 80100 Temperature OC Relative Activi ty (%) 五 、 pH对 反 应 速 度 的 影 响q 最 适 pH (optimum pH)：使 酶 促 反 应 速度 达 到 最 大 时的 介 质 pH。 0酶活性 pH pH对 某 些 酶 活 性 的 影 响 2 4 6 8 10 pH影 响 酶 活 力 的 因 素 影 响 酶 蛋 白 构 象 ， 过 酸 或 过 碱 会 使 酶 变 性 。 影 响 酶 和 底 物 分 子 解 离 状 态

58、 ， 尤 其 是 酶 活 性 中 心 的解 离 状 态 ， 最 终 影 响 ES形 成 。 影 响 酶 和 底 物 分 子 中 另 外 一 些 基 团 解 离 ， 这 些 基 团的 离 子 化 状 态 影 响 酶 的 专 一 性 及 活 性 中 心 构 象 。 六 、 激 活 剂 对 反 应 速 度 的 影 响v 能 够 促 使 酶 促 反 应 速 度 加 快 的 物 质 称为 酶 的 激 活 剂 。v 酶 的 激 活 剂 大 多 数 是 无 机 离 子 ， 如 K+、Mg2+、 Mn2+、 Cl-等 。 1、 无 机 离 子 的 激 活 作 用（ 1） 金 属 离 子 ： K+ 、 Na+、

59、 Mg2+ 、 Zn2+、 Fe 2+ 、 Ca2+（ 2） 阴 离 子 ： Cl-、 Br -、 PO43-（ 3） 氢 离 子 不 同 的 离 子 激 活 不 同 的 酶 。 不 同 离 子 之 间 有 拮 抗 作 用 和 可 替 代 作 用 ， 如 Na+与 K+、 Mg2+与 Ca2+之 间 常 常 拮 抗 ， 但 Mg2+与 Zn2+常 可 替 代 。 激 活 剂 的 浓 度 不 同 ， 作 用 不 同 对 于 NADP+合 成 酶 ，Mg 2+ (510) 10-3mol/L 激 活 作 用Mg2+ 30 10-3mol/L 酶 活 性 下 降 2、 简 单 有 机 分 子 的 激

60、 活 作 用 还 原 剂 （ 如 Cys、 还 原 型 谷 胱 甘 肽 ） 能 激 活 某些 活 性 中 心 含 有 SH的 酶 。 金 属 螯 合 剂 （ EDTA） 能 去 除 酶 中 重 金 属 离 子 ，解 除 抑 制 作 用 。3、 蛋 白 酶 对 酶 原 的 激 活 酶 原 激 活 的 机 理 酶 原分 子 构 象 发 生 改 变形 成 或 暴 露 出 酶 的 活 性 中 心 一 个 或 几 个 特 定 的 肽 键 断 裂 ， 水 解掉 一 个 或 几 个 短 肽在 特 定 条 件 下 赖缬 天天天天 甘异赖缬 天天天天 缬 组 丝甘异缬 组丝 胰 蛋 白 酶 对 胰 脏 蛋 白

61、酶 原 的 激 活 酶 原 激 活 的 生 理 意 义避 免 细 胞 产 生 的 酶 对 细 胞 进 行 自 身 消 化 ， 并 使 酶 在 特定 的 部 位 和 环 境 中 发 挥 作 用 ， 保 证 体 内 代 谢 正 常 进 行 。如 出 血 性 胰 腺 炎 是 由 于 蛋 白 酶 在 未 进 入 小 肠 时 就 被 激活 ， 造 成 蛋 白 酶 水 解 自 身 胰 腺 细 胞 。有 的 酶 原 可 以 视 为 酶 的 储 存 形 式 。 在 需 要 时 ， 酶 原 适时 地 转 变 成 有 活 性 的 酶 ， 发 挥 其 催 化 作 用 。 七 、 抑 制 剂 对 反 应 速 度 的

62、影 响 ： 抑 制 剂 （ inhibitor I ） ： 凡 能 使 酶 的 催 化 活 性 下 降 而 不 引 起 酶 蛋 白 变 性 的 物 质 。 抑 制 剂 多 与 活 性 中 心 内 、 外 必 需 基 团 相 结 合 ， 从 而 抑 制 酶 的 活 性 。 根 据 抑 制 剂 与 酶 结 合 的 紧 密 程 度 不 同 ， 酶 的 抑 制 作 用 可 分 为 ： 不 可 逆 性 抑 制 可 逆 性 抑 制 ： 竞 争 性 抑 制 、 非 竞 争 性 抑 制 、 反 竞 争 性 抑 制 。 （ 一 ） 不 可 逆 性 抑 制 作 用 1、 定 义 ： 抑 制 剂 与 酶 的 必 需

63、 基 团 以 共 价 键 相 结 合 而 引 起 酶 失 活 ， 不 能 用 透 析 、 超 滤 等 方 法 予 以 去 除 。 二 者 结 合 ， 可 以 是 局 限 于 活 性 中 心 上 的 必 需 基 团 专 一 性 抑 制 剂 也 可 以 不 局 限 于 活 性 中 心 上 的 必 需 基 团 非 专 一 性 抑 制 剂 2、 举 例 ： 有 机 磷 中 毒 ： 作 用 于 羟 基 酶 ， 专 一 性 抑 制 剂 有 机 磷 化 合 物 （ 农 药 敌 百 虫 、 敌 敌 畏 、 1059等 ） 特 异 地 与 胆 碱 酯 酶 活 性 中 心 丝 氨 酸 残 基 的 羟 基 结 合

64、， 使 酶 失 活 。 解 磷 定 (PAM) 可 解 除 有 机 磷 化 合 物 对 羟 基 酶 的 抑 制 作 用 。 v 有 机 磷 胆 碱 酯 酶 磷 酰 化 酶 乙 酰 胆 碱 （ 活 性 ） （ 失 活 ） 磷 酰 化 解 磷 定 解 磷 定 神 经 兴 奋 胆 碱 酯 酶 中 毒 症 状 （ 活 性 ）有 机 磷 化 合 物 羟 基 酶 失 活 的 酶 酸R OR O P OX + HO E R OR O P OO E + HX 有 机 砷 、 有 机 汞 化 合 物 ： 作 用 于 巯 基 酶 , 非 专 一 性 抑 制 剂 化 学 毒 气 路 易 士 气 （ 芥 子 气 ）

65、是 砷 化 物 ， 可 与 酶 分 子 的 巯 基 结 合 ， 抑 制 巯 基 酶 的 活 性 。 二 巯 基 丙 醇 (BAL) 又 称 抗 路 易 士 气 ， 含 有 两 个 巯 基 ， 可 与 毒 剂 结 合 ， 解 除 重 金 属 盐 引 起 的 巯 基 酶 中 毒 。 v 路 易 士 气 巯 基 酶 失 活 的 酶 人 畜 中 毒 （ 活 性 ） BAL与 砷 剂 结 合 物 二 巯 基 丙 醇 巯 基 酶 （ 活 性 ） 路 易 士 气 巯 基 酶 失 活 的 酶 酸Cl AsCl CH CHCl+ E SHSH E S AsS CH CHCl+ 2HCl失 活 的 酶 BAL 巯

66、 基 酶 BAL与 砷 剂 结 合 物E SS As CH CHCl + CH2 SHCH SHCH2 OH E SHSH + CH2 SCH SCH2 OH As CH CHCl (3)烷 化 物 含 卤 素 的 烷 化 物 （ 碘 乙 酸 、 碘 乙 酰 胺 、 卤 乙 酰苯 等 ） 常 用 于 鉴 定 酶 中 巯 基 。 (4)氰 化 物 、 硫 化 物 、 CO 与 含 铁 卟 啉 的 酶 中 的 Fe2+结 合 ， 阻 抑 细 胞 呼 吸(5)青 霉 素 不 可 逆 抑 制 糖 肽 转 肽 酶 (与 转 肽 酶 活 性 部 位 Ser的 OH结 合 ， 使 酶 失 活 ) * 概 念 抑 制 剂 通 常 以 非 共 价 键 与 酶 或 酶 -底 物 复 合 物 可逆 性 结 合 ， 使 酶 的 活 性 降 低 或 丧 失 ； 抑 制 剂 可 用 透 析 、超 滤 等 方 法 除 去 。竞 争 性 抑 制非 竞 争 性 抑 制反 竞 争 性 抑 制 . 竞 争 性 抑 制 作 用反 应 模 式定 义 抑 制 剂 与 底 物 的 结 构 相 似 ， 能 与 底 物 竞 争 酶 的