生化测量系统的校准,南京121216

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1、生化测量系统的校准生化测量系统的校准南通大学附属医院南通大学附属医院王惠民王惠民一、与校准相关的一些基本问题一、与校准相关的一些基本问题校准（校准（Calibration）重要吗？）重要吗？实验室中测量不合格约实验室中测量不合格约15%15%由校准误差所致由校准误差所致临床医生往往认为检验结果的临床医生往往认为检验结果的“不准不准”是由不正确的是由不正确的校准造成的校准造成的陈文祥主任认为，检验结果互认的前提是：陈文祥主任认为，检验结果互认的前提是：测量结果是否具有可比性测量结果是否具有可比性（溯源，方法性能评价：（溯源，方法性能评价：校准）校准）可比性的标准可比性的标准 参考测量区间参考测量

2、区间（一致化问题）（一致化问题）校准受到重视了吗？校准受到重视了吗？一般由组长进行校准一般由组长进行校准一般无一般无SOP，或，或SOP不够详细不够详细CLSI或去其他的国际组织尚未有相应的标准或指或去其他的国际组织尚未有相应的标准或指南南一般的实验室无校准的记录一般的实验室无校准的记录科主任一般不过问校准的正确与否科主任一般不过问校准的正确与否校准什么？校准什么？测量仪器？测量系统（测量仪器？测量系统（“调标调标”或或“定标定标”）？）？测量仪器：单独或与辅助设备组合，用于测量的装置。测量仪器：单独或与辅助设备组合，用于测量的装置。测量系统：由一台或多台测量仪器所组成的用于测量系统：由一台或

3、多台测量仪器所组成的用于特定特定测量的成套系统，包括试剂和电源等。测量的成套系统，包括试剂和电源等。校准实际上就是将测量系统与校准实际上就是将测量系统与“参考系统参考系统”进行比较，进行比较，并将测量系统调整至参考系统相一致水平的过程。并将测量系统调整至参考系统相一致水平的过程。实际上，有些情况下不需要对测量系统进行校准实际上，有些情况下不需要对测量系统进行校准临床化学测量常根据系数进行计算临床化学测量常根据系数进行计算 例：酶催化活性浓度的测量例：酶催化活性浓度的测量F F值又称为值又称为K K值值项目项目理论理论K K值值校准校准K K值值校准校准K K值与理论值与理论K K值之间的误差值

4、之间的误差RANDOXRANDOX试剂试剂国产试剂国产试剂RANDOXRANDOX试剂试剂国产试剂国产试剂ALT-3633-4201-5079-15.63%-39.80%AST-3633-4211-5020-15.91%-38.18%ALP326239664090-21.58%-25.38%GGT496450595286-1.91%-6.49%CK 71066236573412.24%19.31%LDH71061025413785-44.30%-93.99%校准校准K K值与理论值与理论K K值的比较值的比较 DiaSys Randox为什么用校准品后得到的为什么用校准品后得到的K K值与理论

5、值与理论K K值不值不一致？一致？校准品是如何定值的？校准品是如何定值的？方法不一样方法不一样（参考方法）（参考方法）仪器不一样仪器不一样（最好的仪器，每次定值前都必须（最好的仪器，每次定值前都必须对仪器进行校准）对仪器进行校准）试剂不一样试剂不一样（最好的试剂）（最好的试剂）参考方法与常规方法测量仪器的差异参考方法与常规方法测量仪器的差异参考方法参考方法（Agilent Cary 4000）常规方法常规方法（JJG464-2005 要求）要求）波长准确度波长准确度 0.1nm5nm波长精密度波长精密度 0.025nm2.5nm吸光度准确度吸光度准确度0.00025A0.07A温度准确度温度准

6、确度370.137.00.1半波宽半波宽0.05nm15nm二、校准前的准备二、校准前的准备 1.生化分析仪的准备生化分析仪的准备生化分析仪的校准或检定生化分析仪的校准或检定生化分析仪的性能验证生化分析仪的性能验证 2.试剂的准备试剂的准备试剂是否获准入试剂是否获准入试剂的性能验证试剂的性能验证 3.水的准备水的准备 1.生化分析仪的准备生化分析仪的准备生化分析仪的校准或检定生化分析仪的校准或检定 由厂家根据其标准对生化分析仪进行校准由厂家根据其标准对生化分析仪进行校准 由有关计量部门根据国家标准（由有关计量部门根据国家标准（JJG494-2005）对仪器进行检定对仪器进行检定生化分析仪的性能

7、验证（根据中华人民共和国生化分析仪生化分析仪的性能验证（根据中华人民共和国生化分析仪检定规程检定规程JJG 494-2005进行）进行）零点漂移零点漂移波长准正确度及重复性波长准正确度及重复性杂散光杂散光吸光度正确度吸光度正确度吸光度重复性吸光度重复性吸光度线性误差吸光度线性误差交叉污染率交叉污染率温度正确度温度正确度比色杯间差距比色杯间差距生化分析仪检定用标准物质生化分析仪检定用标准物质用于吸光度用于吸光度正正确度与重复性检定的标准确度与重复性检定的标准物质物质杂散光检定的标准物质杂散光检定的标准物质吸光度线性检定的标准物质吸光度线性检定的标准物质交叉污染检定的标准物质交叉污染检定的标准物质

8、中国计量科学研究院，北京市北三环东路中国计量科学研究院，北京市北三环东路1818号，号，电话：电话：010-64524710010-64524710，6427883864278838零点漂移零点漂移开机开机30min,30min,用蒸馏水调吸光度至用蒸馏水调吸光度至0.0000.000处，处，10min10min内吸光度的最大变化值应符合下表规定：内吸光度的最大变化值应符合下表规定：类类 级级 飘移值飘移值一一（棱镜式或（棱镜式或光栅式光栅式）A A0.0020.002B B0.0040.004C C0.0060.006 二二（干涉滤光片或（干涉滤光片或吸收滤光片）吸收滤光片）A A0.002

9、0.002B B0.0040.004C C0.0060.006单波长单波长(nm)(nm)飘移（飘移（A A）双波长双波长(nm)(nm)飘移（飘移（A A）3400.0148340/4050.00154050.0093405/5700.0009450-0.0060450/6000.00045050.0088505/6600.00066600.0036660/750-0.0004复兴仪器的零点飘移复兴仪器的零点飘移复兴仪器复兴仪器340nm340nm零点漂移零点漂移复兴仪器复兴仪器340nm340nm零点漂移零点漂移复兴仪器复兴仪器405nm405nm零点漂移零点漂移复兴仪器复兴仪器405nm

10、405nm零点漂移零点漂移复兴仪器复兴仪器340/405nm340/405nm零点漂移零点漂移复兴仪器复兴仪器340/405nm340/405nm零点漂移零点漂移复兴仪器复兴仪器405/505nm405/505nm零点漂移零点漂移出现零点飘移可能原因出现零点飘移可能原因电压不稳电压不稳光电倍增管或光接收元件老化光电倍增管或光接收元件老化仪器灵敏度过高仪器灵敏度过高仪器设计与制造的缺陷仪器设计与制造的缺陷波长的正确度波长的正确度波长正确度的测定方法根据分光原理不同而异波长正确度的测定方法根据分光原理不同而异分光式仪器（光栅由于不需传动调节波长，一般不分光式仪器（光栅由于不需传动调节波长，一般不需

11、校准）需校准）低压汞灯、氘灯、干涉滤光片低压汞灯、氘灯、干涉滤光片 镨钕滤光片、氧化钬滤光片镨钕滤光片、氧化钬滤光片滤光式仪器滤光式仪器 将滤光片拆下在已校准的分光光度计将滤光片拆下在已校准的分光光度计上进行波长扫描，测定波长和半波宽上进行波长扫描，测定波长和半波宽 一般仪器不容易拆卸一般仪器不容易拆卸 特征谱线特征谱线低压汞灯低压汞灯:253.7nm:253.7nm氘灯氘灯:486nm:486nm、656.1nm656.1nm镨钕滤光片镨钕滤光片:529nm:529nm、808nm808nm（400nm400nm900nm900nm内至少有内至少有1010个吸收峰）个吸收峰）氧化钬滤光片氧化

12、钬滤光片:200:200700nm700nm共共1212条谱线条谱线干涉滤光片干涉滤光片:长波通滤光片长波通滤光片:200:2001100nm1100nm，光学分辨率为，光学分辨率为1nm1nm 短波通滤光片短波通滤光片:400:400700nm700nm，光学分辨率为，光学分辨率为1nm1nm波长的重复性波长的重复性 指多次波长测试数据的离散性，或者多指多次波长测试数据的离散性，或者多次波长测试数据的符合程度。次波长测试数据的符合程度。一般取波长正确度的一般取波长正确度的3 3次测试结果中最大次测试结果中最大值与最小值之差作为波长重复性。值与最小值之差作为波长重复性。波长正确度及重复性的要求

13、波长正确度及重复性的要求（nm）类类级级波长范围波长范围正确度正确度重复性重复性一（分光一（分光类仪器）类仪器）A A340340700700110.50.5B B340340700700331.51.5C C340340700700552.52.5类类级级波长范围波长范围正确度正确度半波宽半波宽二（滤光二（滤光类仪器）类仪器）A A340340700700221010B B340340700700441212C C340340700700661515杂散光杂散光 杂杂散散光光与与波波长长的的半半波波宽宽有有关关，半半波波宽宽越越大大，杂杂散散光光越越多。多。测测定定50g/L50g/L亚亚硝

14、硝酸酸钠钠（NaNONaNO2 2）标标准准溶溶液液相相对对于于蒸蒸馏馏水水在在340nm340nm处的吸光度，了解杂散光的多少。处的吸光度，了解杂散光的多少。亚硝酸钠溶液的配制方法亚硝酸钠溶液的配制方法 将分析纯亚硝酸钠固体试剂放入称量瓶置于烘箱中，在箱温为将分析纯亚硝酸钠固体试剂放入称量瓶置于烘箱中，在箱温为1055下烘下烘2h，取出置于干燥器中冷却至室温，在分析天平上（精，取出置于干燥器中冷却至室温，在分析天平上（精度为度为0.1mg）精确称取）精确称取10g，置于，置于200mL烧杯中，用小半杯蒸馏水溶烧杯中，用小半杯蒸馏水溶解后移入解后移入200mL容量瓶中，以少量蒸馏水冲洗烧杯三次

15、，均倒入容量容量瓶中，以少量蒸馏水冲洗烧杯三次，均倒入容量瓶中，然后用蒸馏水稀释至刻度线反复摇匀，置于阴凉干燥处备用。瓶中，然后用蒸馏水稀释至刻度线反复摇匀，置于阴凉干燥处备用。340nm340nm340nm345nm345nm杂散光杂散光1 1）在在波波长长340nm340nm，第第一一个个试试剂剂位位放放入入蒸蒸馏馏水水，以以蒸蒸馏馏水水为为样样本本，重重复复测测定定5 5次次吸吸光光度度值值；第第二二个个试试剂剂位位放放入入NaNONaNO2 2溶溶液液，以以NaNONaNO2 2溶溶液液为为样样本本，重重复复测测定定5 5次次吸吸光光度度值值；或或将将蒸蒸馏馏水水和和NaNONaNO2

16、 2溶溶液液分分别别加加入入同同一一比比色色杯杯读读取取吸吸光光度度（可可消消除除比比色色杯杯误误差差），重重复复测测定定5 5次次，共共得得5 5个个蒸蒸馏馏水水和和5 5个个NaNONaNO2 2溶溶液液的的吸光度。吸光度。2 2）最小）最小NaNONaNO2 2溶液吸光度溶液吸光度-最大蒸馏水吸光度最大蒸馏水吸光度2.32.3。复兴仪器的杂散光测定复兴仪器的杂散光测定复兴仪器的杂散光测定复兴仪器的杂散光测定复兴仪器的杂散光测定（空白）复兴仪器的杂散光测定（空白）吸光度正确度吸光度正确度 指指吸吸光光度度实实际际测测定定值值与与理理论论值值之之差差，该该偏偏差差越越小小吸吸光光度度正正确确

17、度度越越高高，间间接接说说明明波波长长的的正确度与杂散光的多少。正确度与杂散光的多少。1 1）国家标准物质法）国家标准物质法 2 2）己糖激酶法）己糖激酶法吸光度正确度吸光度正确度1 1）国家标准物质法：）国家标准物质法：使使用用国国家家标标准准物物质质研研究究中中心心制制备备的的标标准准物物质质溶溶液，其吸光度分别为液，其吸光度分别为0.50.5和和1.01.0。在在340nm340nm波波长长、比比色色杯杯光光径径1cm1cm时时，以以标标准准物物质质标示的参比液作参比，测吸光度值，重复测量标示的参比液作参比，测吸光度值，重复测量3 3次。次。计计算算3 3次次测测量量值值的的算算术术平平

18、均均值值与与标标准准值值之之差差，0.50.5的的标标准准液液允允许许误误差差为为0.0250.025，1.0 1.0 的的标标准准液，允许误差为液，允许误差为0.070.07。测定结果测定结果标准物质的吸光度：标准物质的吸光度：A A1-11-1=0.489 A=0.489 A1-21-2=0.980=0.980（不（不确定度：确定度：0.0050.005）检测结果：检测结果：A A1-11-1=0.4916=0.4916；0.48360.4836；0.48120.4812，均值为，均值为0.48550.4855 A A1-21-2=0.9703=0.9703；0.97140.9714；0.

19、97220.9722，均值为，均值为0.97130.9713结果判定：结果判定：A A1-11-1误差误差0.0250.025；A A1-21-2误差误差0.070.07。即。即 0.464A0.464A1-11-10.5140.514；0.910A0.910A1-21-21.0501.050吸光度正确度吸光度正确度2 2）己糖激酶法）己糖激酶法 用用己己糖糖激激酶酶（HKHK）法法测测定定葡葡萄萄糖糖浓浓度度时时，反反应应产产生生NADHNADH，在在340nm 340nm 测测定定吸吸光光度度，间间接接测测NADHNADH的的（理理论论值值为为62206220），以此为标准校正），以此为标

20、准校正。以以HKHK测葡萄糖为例，试剂反应过程如下：测葡萄糖为例，试剂反应过程如下：HKHK 葡萄糖葡萄糖+ATP-6-P-+ATP-6-P-葡萄糖葡萄糖+ADP,+ADP,G6PDH G6PDH 6-P-6-P-葡萄糖葡萄糖+NAD+NAD+-葡萄糖酸葡萄糖酸+NADH,+NADH,影响吸光度准确度的主要因素影响吸光度准确度的主要因素杂散光多杂散光多波长不正确波长不正确标准液不正确标准液不正确仪器的灵敏度或其他原因仪器的灵敏度或其他原因吸光度重复性吸光度重复性1 1）以以重重铬铬酸酸钾钾标标准准溶溶液液为为样样本本，在在波波长长340nm340nm，吸吸光光度度为为0.30.30.5,0.5

21、,以以蒸蒸馏馏水水为为空空白白,试试剂剂量量为为全全自自动动生生化化分分析析仪仪标标称称的的最最小小试试剂剂量量、测测定定时时间间为为10min10min；每每3030秒秒读读取取吸吸光光度度,连连续续2020次次，得得到到2020个个吸吸光光度度值值。计计算算CVCV，应，应1.0%1.0%2 2）采采用用吸吸光光度度约约为为0.50.5生生化化分分析析仪仪用用吸吸光光度度标标准准物物质质，在在340nm340nm处处连连续续测测定定5 5次次，然然后后计计算算其其中中最最大大值值与与最最小值之差。吸光度的重复性均应不大于小值之差。吸光度的重复性均应不大于0.0050.005检测结果：检测结

22、果：A1-1=0.4828A1-1=0.4828；0.48310.4831；0.48360.4836；0.48120.4812；0.4820.4820.4836-0.4812=0.00240.0050.4836-0.4812=0.00240.005吸光度线性误差吸光度线性误差 分分 别别 用用 浓浓 度度 为为 2.02.0、4.04.0、6.06.0、8.08.0、10.0g/L10.0g/L的的氯氯化化钴钴标标准准溶溶液液，以以蒸蒸馏馏水水为为对对照照，在在510nm510nm（500-520nm500-520nm）测测定定各各溶溶液液吸吸光光度度，连连续续测测量量3 3次次，然然后后将将

23、所所得得数数据据求求相相关关系系数数，r r0.9950.995。或或按按下下列列公公式式计计算算，线线性性误误差差符符合合规定要求。规定要求。分光装置分光装置吸光度范围吸光度范围线性误差线性误差（%）棱镜或光栅棱镜或光栅0.1-0.30.1-0.35 50.3-0.60.3-0.64 40.6-0.90.6-0.95 5结论：符合吸光度线性要求结论：符合吸光度线性要求交叉污染率交叉污染率概概念念：由由测测量量系系统统将将一一个个检检测测样样品品反反应应携携带带到到另另一一个个检检测测样样品品反反应应的的分分析析物物不不连连续续量量，由由此此错错误误地地影影响响了了另另一个检测样品的表现量。一

24、个检测样品的表现量。1 1、氯化钴方法、氯化钴方法 2 2、桔红、桔红G G方法方法 3 3、临临床床标标本本的的检检测测：50U/L50U/L与与250U/L250U/L的的ASTAST或或ALTALT测定测定测定方法：测定方法：将将氯氯化化钴钴标标准准溶溶液液按按仪仪器器规规定定的的最最小小样样品品量量，先先用用质质量量浓浓度度为为2.0g/L2.0g/L的的氯氯化化钴钴标标准准溶溶液液将将比比色色杯杯冲冲洗洗三三次次，接接着着对对该该溶溶液液连连续续测测量量四四次次。按按上上述述方方法法依依次次循循环环对对2.02.0和和10.0g/L10.0g/L氯氯化化钴钴标标准准溶溶液液重重复复测

25、测得得七七组组在在510nm510nm处处的的测测量量值值（四四组组低低浓浓度度值值和和三三组组高高浓浓度度值值），然然后后按按以以下下公公式式将将每每相相邻邻两两组组值值进进行行计计算算，得得到到三三个个低低浓浓度度到到高高浓浓度度的的计计算算值值和和三三个个高高浓浓度度到到低低浓浓度度的的计计算算值值，即即为为交交叉叉污污染染率率，均均应应1.5%1.5%。L L1 1=0.1634=0.1634；L L2 2=0.1691=0.1691；L L3 3=0.1639=0.1639；L L4 4=0.1668=0.1668H H1 1=0.8316=0.8316；H H2 2=0.8331=

26、0.8331；H H3 3=0.8305=0.8305CoCoLHLH=(0.8317-0.8316)/(0.8317-0.1666)100%=0%=(0.8317-0.8316)/(0.8317-0.1666)100%=0%CoCoHLHL=(0.1634-0.1666)/(0.8317-0.1666)100%=-0.4%=(0.1634-0.1666)/(0.8317-0.1666)100%=-0.4%结论：交叉污染率符合要求结论：交叉污染率符合要求 温度正确度温度正确度用分度值小于用分度值小于0.10.1专用测温装置，测定比色杯专用测温装置，测定比色杯的设定温度，当仪器升到设定温度范围内

27、，每的设定温度，当仪器升到设定温度范围内，每隔隔30s30s记录一次温度，连续测记录一次温度，连续测1010次，计算平均值。次，计算平均值。Fluke 1521Fluke 1521点温度计（点温度计（0 0.001C001C）。）。类类级级温度准确度温度准确度一、二一、二A 0.1B0.3C0.51 137.1837.182 2 0.182 0.182 9 937.0737.079 9 0.079 0.079 212137.0637.069 9 0.069 0.069 292937.1137.112 2 0.112 0.112 414137.0637.069 9 0.069 0.069 494

28、937.0337.035 5 0.035 0.035 616136.9936.993 3-0.007 0.007 696937.0237.028 8 0.028 0.028 818137.0237.020 0 0.020 0.020 898937.069 37.069 0.069 0.069 10110137.088 37.088 0.088 0.088 11911937.053 37.053 0.053 0.053 12112137.095 37.095 0.095 0.095 12912937.125 37.125 0.125 0.125 14114136.977 36.977-0.023

29、-0.023 14914937.062 37.062 0.062 0.062 15115136.811 36.811-0.089-0.089 15915937.045 37.045 0.045 0.045 杯号杯号温度温度温度差温度差杯号杯号 温度温度温度差温度差极差极差0.205 0.205 比色杯间差距比色杯间差距 以以重重铬铬酸酸钾钾标标准准溶溶液液为为样样本本，在在波波长长340nm340nm，吸吸光光度度为为0.30.30.5,0.5,以以蒸蒸馏馏水水为为空空白白,每每比比色色杯杯重重复复测测定定3 3次次，平平均均吸吸光度值应小于光度值应小于0.050.05（Olympus)Oly

30、mpus)。杯号杯号A A杯号杯号A A杯号杯号A A杯号杯号A A1 10.4030.40311110.40110.401121210.40160.401631310.40430.40432 20.40180.401812120.40470.404722220.40930.409332320.40310.40313 30.40330.403313130.41050.410523230.40430.404333330.41120.41124 40.40470.404714140.4050.40524240.40760.407634340.40430.40435 50.40880.4088151

31、50.40540.405425250.41110.411135350.41540.41546 60.40890.408916160.40490.404926260.39640.396436360.4070.4077 70.41260.412617170.40580.405827270.40410.404137370.40930.40938 80.40230.402318180.40230.402328280.40530.405338380.40810.40819 90.40520.405219190.41120.411229290.40730.407339390.4080.40810100.4

32、0230.402320200.40910.409130300.4020.40240400.41460.4146杯号杯号A A杯号杯号A A杯号杯号A A杯号杯号A A41410.41730.417351510.41840.418461610.40030.400371710.40520.405242420.41420.414252520.42010.420162620.40370.403772720.40530.405343430.41470.414753530.41880.418863630.40620.406273730.39890.398944440.41340.413454540.409

33、20.409264640.40380.403874740.40430.404345450.42130.421355550.40340.403465650.40450.404575750.39890.398946460.40660.406656560.40250.402566660.4030.40376760.40110.401147470.40250.402557570.41360.413667670.39810.398177770.40420.404248480.41150.411558580.40830.408368680.40190.401978780.40520.405249490.4

34、1920.419259590.41160.411669690.40370.403779790.40310.403150500.41320.413260600.40310.403170700.40460.404680800.39790.3979杯号杯号A A杯号杯号A A杯号杯号A A杯号杯号A A81810.40140.401491910.40430.40431011010.40270.40271111110.40770.407782820.40780.407892920.40270.40271021020.40490.40491121120.40290.402983830.40220.402

35、293930.40380.40381031030.40140.40141131130.4030.40384840.40770.407794940.40250.40251041040.40410.40411141140.39960.399685850.40410.404195950.40430.40431051050.39920.39921151150.40230.402386860.40140.401496960.40330.40331061060.40230.40231161160.40260.402687870.40930.409397970.39980.39981071070.40620

36、.40621171170.40250.402588880.40490.404998980.40230.40231081080.40390.40391181180.40080.400889890.40160.401699990.40410.40411091090.4050.4051191190.40270.402790900.40720.40721001000.4020.4021101100.4050.4051201200.39580.3958杯号杯号A A杯号杯号A A杯号杯号A A杯号杯号A A1211210.40970.40971311310.40030.40031411410.40230

37、.40231511510.4030.4031221220.40120.40121321320.40430.40431421420.40580.40581521520.40350.40351231230.40330.40331331330.40640.40641431430.40540.40541531530.40450.40451241240.40640.40641341340.4030.4031441440.40310.40311541540.40470.40471251250.4030.4031351350.40180.40181451450.40120.40121551550.41010

38、.41011261260.40390.40391361360.40390.40391461460.39790.39791561560.4030.4031271270.39950.39951371370.40030.40031471470.39940.39941571570.40310.40311281280.41660.41661381380.40060.40061481480.41540.41541581580.40140.40141291290.4020.4021391390.40260.40261491490.41240.41241591590.40490.40491301300.400

39、40.40041401400.40410.40411501500.40120.40121601600.41160.4116极差极差=0.4213-0.3958=0.0255=0.4213-0.3958=0.0255 2.试剂的准备试剂的准备试剂是否获准入试剂是否获准入 是否有是否有SFDA证书证书试剂的性能验证试剂的性能验证 精密度精密度 线性线性 延迟时间（如果有）延迟时间（如果有）空白对照空白对照 3.水的准备：用一级水水的准备：用一级水三、校准过程中需注意的问题三、校准过程中需注意的问题l校准品校准品：是否可溯源？配套？互换性？是否可溯源？配套？互换性？l处理处理：低温冷冻、冻干品？（复

40、溶条件？瓶间差问题低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题？）？）l测几个水平校准品：不同水平校准品测几个水平校准品：不同水平校准品K K值是否一致？值是否一致？l校准品测量次数：对校准校准品测量次数：对校准K K值的影响？取平均值的影响？取平均K K值？值？l空白测量：对校准空白测量：对校准K K值的影响？值的影响？l校准周期：对校准校准周期：对校准K K值的影响？值的影响？l校准的核查：是否有核查程序？校准的核查：是否有核查程序？英国英国RANDOXRANDOX公司公司“人基质复合校准血清人基质复合校准血清”以人血清为基质以人血清为基质根据德国临床化学协会的规定赋值根据德国临床化学协会的规

41、定赋值由全球由全球30003000多家参考实验室赋值，每种仪器至少多家参考实验室赋值，每种仪器至少由由1010家实验室赋值家实验室赋值复溶条件复溶条件:20:202525,30,30分钟分钟对对COCO2 2、ACPACP与与ALPALP有特殊要求有特殊要求未提供不确定度未提供不确定度所有测量系统的值均一样所有测量系统的值均一样 德国德国DiaSysDiaSys公司公司“人基质复合校准血清人基质复合校准血清”TruLabTruLab N N、TruLabTruLab P P和和TruCalTruCal U U以人血清为基质以人血清为基质根据德国临床化学协会的规定赋值根据德国临床化学协会的规定赋

42、值复溶条件复溶条件:25 25,30,30分钟（分钟（ALP 2ALP 2小时）小时）美国美国RocheRoche公司公司 C.f.a.sC.f.a.s(Calibrator for (Calibrator for automated systems)automated systems)适用于适用于RocheRoche系统的系统的RocheRoche方法方法在人基质血清中加入了人及各种动物来源的组份在人基质血清中加入了人及各种动物来源的组份加入稳定剂加入稳定剂在在RocheRoche规定的严格的条件下，由规定的严格的条件下，由RocheRoche的主校准的主校准品赋值品赋值复溶条件复溶条件:2

43、0:202525,30,30分钟分钟美国美国BeckmanBeckman公司公司(SynchonSynchon Multi Multi Calibrator)Calibrator)适用于适用于SynchonSynchon试剂试剂加入稳定剂加入稳定剂溯源至溯源至NISTNIST液态，不需复溶液态，不需复溶美国美国Bio-RadBio-Rad公司控制品公司控制品以人血清基质以人血清基质可任选液体可任选液体/干粉、定值干粉、定值/不定值产品不定值产品液体不含甘油和乙二醇液体不含甘油和乙二醇提供任何仪器提供任何仪器/试剂的定值试剂的定值多个品种、包装、浓度可供选择多个品种、包装、浓度可供选择美国美国F

44、DAFDA认证认证某国产检测系统（某国产检测系统（X X）分别与罗氏）分别与罗氏C.fasC.fas 校准品校准品(Y1)(Y1)、与朗、与朗道道Level2Level2校准品校准品(Y2)(Y2)、与朗道、与朗道Level3Level3校准品校准品(Y3)(Y3)比较比较三、校准过程中需注意的问题三、校准过程中需注意的问题l校准品校准品：是否可溯源？配套？互换性？是否可溯源？配套？互换性？l处理处理：低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题？加溶剂的准确性）？加溶剂的准确性）l测几个水平校准品：不同水平校准品测几个水平校准品：不同水平校准品K K值是否

45、一致？值是否一致？l校准品测量次数：对校准校准品测量次数：对校准K K值的影响？取平均值的影响？取平均K K值？值？l空白测量：对校准空白测量：对校准K K值的影响？值的影响？l校准周期：对校准校准周期：对校准K K值的影响？值的影响？l校准的核查：是否有核查程序？校准的核查：是否有核查程序？CKCK校准校准测定测定天数天数s1ABss1ABsK KK K*1 13 35685856858 5713257132575065750657282572822 23 35816358163 5969459694596435964359387593873 33 35377453774 540575405

46、7539165391653632536324 44 45415754157 5517855178546085460854371543715636756367s s235423544.2%4.2%室温复溶条件下校准室温复溶条件下校准CKCKCKCK校准校准测定测定天数天数s1ABss1ABsK KK K*1 14 455474554745571755717559615596156107561072 24 455474554745574255742552555525555255552553 33 355746557465679756797565775657756015560154 43 35547

47、4554745559655596551825518255060550605577255772s s5505501.0%1.0%标准化复溶条件下校准标准化复溶条件下校准CKCK （置于（置于18182020水温下复溶水温下复溶305min305min）校准品处理的注意点校准品处理的注意点必须将复溶条件标准化。虽不会对所有被测物必须将复溶条件标准化。虽不会对所有被测物产生影响，但对产生影响，但对CKCK、脂蛋白会产生较大影响。、脂蛋白会产生较大影响。应有严格应有严格SOPSOP。加样的重复性加样的重复性（0.4%0.4%）是否有瓶间差，值得研究是否有瓶间差，值得研究（0.5%0.5%）注意排除离群

48、值。注意排除离群值。严格控制校准条件，将严格控制校准条件，将K K值值CVCV控制在控制在1%1%内内。（制定（制定校准的标准）校准的标准）LDHLDH校准校准测定测定天数天数s1Abss1AbsK KK*K*1 12 289035890359008890088907469074690482904822 21 188646886468886488864889958899589126891263 32 289035890359030790307900889008889956899564 42 288646886468816688166863318633188078880788953689536s

49、 s9309301.0%1.0%标准化复溶条件下校准标准化复溶条件下校准LDHLDH差差.6%.6%三、校准过程中需注意的问题三、校准过程中需注意的问题l校准品校准品：是否可溯源？配套？互换性？是否可溯源？配套？互换性？l处理处理：低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题？）？）l测几个水平校准品：不同水平校准品测几个水平校准品：不同水平校准品K K值是否一致？值是否一致？l校准品测量次数：对校准校准品测量次数：对校准K K值的影响？取平均值的影响？取平均K K值？值？l空白测量：对校准空白测量：对校准K K值的影响？值的影响？l校准周期：对校准校准周期

50、：对校准K K值的影响？值的影响？l校准的核查：是否有核查程序？校准的核查：是否有核查程序？在在ISO 11095:1996 ISO 11095:1996 基于标准样品的线性校准基于标准样品的线性校准（GB/T 22554-2010 GB/T 22554-2010）中确定，对于基本校准方）中确定，对于基本校准方法的最少校准点法的最少校准点/水平是水平是3 3个。个。EURACHEM“EURACHEM“分析方法的目标适用性分析方法的目标适用性”指南规定：指南规定：对于校准，包括空白至少对于校准，包括空白至少6 6个浓度水平。个浓度水平。Commission Decision 2002/657/E

51、CCommission Decision 2002/657/EC规定：建立一规定：建立一个校准曲线，包括零浓度至少需要个校准曲线，包括零浓度至少需要5 5个浓度水平。个浓度水平。ISO 11095:1996ISO 11095:1996 认为校准系统的有效性检查，至认为校准系统的有效性检查，至少有少有2 2个、最好是个、最好是3 3个校准水平通过控制图监控校个校准水平通过控制图监控校准的有效性。准的有效性。三、校准过程中需注意的问题三、校准过程中需注意的问题l校准品校准品：是否可溯源？配套？互换性？是否可溯源？配套？互换性？l处理处理：低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题低温冷冻、冻干品？（

52、复溶条件？瓶间差问题？）？）l测几个水平校准品：不同水平校准品测几个水平校准品：不同水平校准品K K值是否一致？值是否一致？l校准品测量次数：对校准校准品测量次数：对校准K K值的影响？取平均值的影响？取平均K K值？值？l空白测量：对校准空白测量：对校准K K值的影响？值的影响？l校准周期：对校准校准周期：对校准K K值的影响？值的影响？l校准的核查：是否有核查程序？校准的核查：是否有核查程序？LDHLDH校准校准测定测定天数天数s1Abss1AbsK KK*K*1 12 289035890359008890088907469074690482904822 21 18864688646888

53、6488864889958899589126891263 32 289035890359030790307900889008889956899564 42 288646886468816688166863318633188078880788953689536s s9309301.0%1.0%标准化复溶条件下校准标准化复溶条件下校准LDHLDH差差.6%.6%ISO 11095:1996ISO 11095:1996要求每个校准水平至少重复要求每个校准水平至少重复2 2次，次，并建议尽可能多次。并建议尽可能多次。和校准水平的数量一样，随着重复分析次数的增和校准水平的数量一样，随着重复分析次数的增加

54、，收益可能递减。因此，每个校准水平重复分加，收益可能递减。因此，每个校准水平重复分析超过析超过5 5次不能提供大的额外好处。次不能提供大的额外好处。三、校准过程中需注意的问题三、校准过程中需注意的问题l校准品校准品：是否可溯源？配套？互换性？是否可溯源？配套？互换性？l处理处理：低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题？）？）l测几个水平校准品：不同水平校准品测几个水平校准品：不同水平校准品K K值是否一致？值是否一致？l校准品测量次数：对校准校准品测量次数：对校准K K值的影响？取平均值的影响？取平均K K值？值？l空白测量：对校准空白测量：对校准K

55、K值的影响？值的影响？l校准周期：对校准校准周期：对校准K K值的影响？值的影响？l校准的核查：是否有核查程序？校准的核查：是否有核查程序？三、校准过程中常遇到的问题三、校准过程中常遇到的问题l校准品校准品：是否可溯源？配套？互换性？是否可溯源？配套？互换性？l处理处理：低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题？）？）l测几个水平校准品：不同水平校准品测几个水平校准品：不同水平校准品K K值是否一致？值是否一致？l校准品测量次数：对校准校准品测量次数：对校准K K值的影响？取平均值的影响？取平均K K值？值？l空白测量：对校准空白测量：对校准K K值的影

56、响？值的影响？l校准周期：对校准校准周期：对校准K K值的影响？值的影响？l校准的核查：是否有核查程序？校准的核查：是否有核查程序？相对偏倚小于相对偏倚小于1/3 CL IA88三、校准过程中需注意的问题三、校准过程中需注意的问题l校准品校准品：是否可溯源？配套？互换性？是否可溯源？配套？互换性？l处理处理：低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题低温冷冻、冻干品？（复溶条件？瓶间差问题？）？）l测几个水平校准品：不同水平校准品测几个水平校准品：不同水平校准品K K值是否一致？值是否一致？l校准品测量次数：对校准校准品测量次数：对校准K K值的影响？取平均值的影响？取平均K K值？值？l空白测

57、量：对校准空白测量：对校准K K值的影响？值的影响？l校准周期：对校准校准周期：对校准K K值的影响？值的影响？l校准的核查：是否有核查程序？校准的核查：是否有核查程序？1 1、用另一校准品或另一水平的校准品进行验证、用另一校准品或另一水平的校准品进行验证2 2、正确度验证、正确度验证l卫生部临检中心正确度验证计划（小分子代谢物、卫生部临检中心正确度验证计划（小分子代谢物、脂类、酶、脂类、酶、GHBGHB、血细胞）、血细胞）l与参考测量程序比较、与公认的方法比较与参考测量程序比较、与公认的方法比较l与参考物质比较与参考物质比较l与与EQAEQA靶值比较靶值比较l回收实验回收实验四、校准过程需注

58、意的其他问题四、校准过程需注意的其他问题人员因素人员因素科领导是否对校准重视科领导是否对校准重视有无制定校准有无制定校准SOPSOP制定的校准制定的校准SOPSOP太简单，甚至有错误；太简单，甚至有错误；只有校准只有校准SOPSOP，无记录或审核要求；，无记录或审核要求；无校准出问题的纠正措施文件和记录，以及评审与改正的无校准出问题的纠正措施文件和记录，以及评审与改正的措施；措施；能否严格要求技术人员执行能否严格要求技术人员执行SOPSOP。制定制定“校准校准”的的SOPSOP卫生部标委会将制定临床实验室用于校准的标准卫生部标委会将制定临床实验室用于校准的标准 （目前尚未见用于临床化学的校准的标准，如（目前尚未见用于临床化学的校准的标准，如CLSICLSI）实验室主任应保证校准工作按规范进行实验室主任应保证校准工作按规范进行所有的校准工作都必须有记录和分析所有的校准工作都必须有记录和分析