ELSD操作及维护用户版课件

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1、说明明书编者如是者如是说！1ELSD操作及维护用户版4/24/2024第一部分第一部分 概述概述雾化化样品分离品分离雾化室化室 漂移管漂移管脱除溶脱除溶剂检测LED2ELSD操作及维护用户版4/24/2024蒸蒸发光散射光散射检测器是一种通用型器是一种通用型检测器，能器，能够检测任何不任何不挥发性分析性分析物。物。其其检测不依不依赖于目于目标化合物或流化合物或流动相相对光的吸收性。光的吸收性。通通过前面板控制前面板控制仪器。器。检测到的信号通到的信号通过1 VFS模模拟信号信号输出。出。该仪器包器包一个含一个含雾化器化器(专利利产品品)、一个漂移管以及一个、一个漂移管以及一个检测室室。漂。漂移

2、管置于可加移管置于可加热模模块内，用于流内，用于流动相蒸相蒸发。流流动相流速相流速应设定在定在200 L/min 2.5 mL/min之之间。第一部分第一部分 概述概述3ELSD操作及维护用户版4/24/2024 ELSD 检测器具有如下特点：器具有如下特点：质量型通用量型通用检测器器,但灵敏度但灵敏度优于示差于示差检测器器(RID)。能能够测量无紫外吸收或可量无紫外吸收或可产生生荧光的化合物。光的化合物。可用于梯度洗脱。可用于梯度洗脱。对于非于非挥发性的化合物均有几乎相等的响性的化合物均有几乎相等的响应，与，与质量大小有关而与量大小有关而与结构无关。沸点与流构无关。沸点与流动相接近的化合物不

3、能被相接近的化合物不能被检测。第一部分第一部分 概述概述4ELSD操作及维护用户版4/24/2024第二部分第二部分 原理原理雾化化阶段，部分流段，部分流动相相变成成细小小雾滴滴细小小雾滴通滴通过漂移管的漂移管的时候被蒸候被蒸发检测阶段，目段，目标物的光散射度被物的光散射度被测定定光散射度随目光散射度随目标物物浓度的度的变化而化而变化化5ELSD操作及维护用户版4/24/20242.1 雾化化雾化气入口化气入口流流动相入口相入口Color sealRing玻璃管玻璃管6ELSD操作及维护用户版4/24/2024来自色来自色谱仪的流的流动相被入口气相被入口气(比如氮气、空气比如氮气、空气)雾化，

4、然后被后者化，然后被后者带到玻璃管。到玻璃管。入口气中不能含有入口气中不能含有颗粒，因粒，因为后者会干后者会干扰样品品检测。(空气空气压缩机、氮机、氮气瓶可以作气瓶可以作为气源气源)。应当着重指出的是当着重指出的是ELSD对气源中气源中杂质气体含量、气体含量、含水量要求不高，但含水量要求不高，但务必不能含有必不能含有颗粒，某些空气粒，某些空气压缩机中含有干燥机中含有干燥剂和活性炭，假如不能和活性炭，假如不能较好地好地过滤后者的后者的颗粒，会引起粒，会引起较高的噪声，高的噪声，ELSD LT II的噪声的噪声应低于低于3 MV(gain=12，不通流，不通流动相相)。ELSD LT II耗气量耗

5、气量较大，一瓶气体在大，一瓶气体在7080 h内就会消耗完。内就会消耗完。流流动相相雾化化时，大的流，大的流动相液滴相液滴 沿玻璃管壁流下，然后沿玻璃管壁流下，然后经虹吸管流出。虹吸管流出。只有只有细小的小的雾滴被滴被雾化气化气带入漂移管中。入漂移管中。7ELSD操作及维护用户版4/24/2024为了使流了使流动相蒸相蒸发，一个温控的漂移管被使用。漂移管出口直接与，一个温控的漂移管被使用。漂移管出口直接与检测室室连接。接。在在LC中，低沸点溶中，低沸点溶剂比如水和有机溶比如水和有机溶剂(比如甲醇、比如甲醇、氯仿、乙仿、乙腈)是常是常用的流用的流动相。相。如果使用了流如果使用了流动相添加物相添加

6、物(你如酸、碱、你如酸、碱、盐)，添加物可能会在流，添加物可能会在流动相相蒸蒸发后后结晶，晶，这会会导致致雾化器堵塞、化器堵塞、污染漂移管并染漂移管并进一步造成基一步造成基线噪噪声增大。声增大。请不要使用含有高沸点添加物的流不要使用含有高沸点添加物的流动相。相。2.2 流流动相的蒸相的蒸发8ELSD操作及维护用户版4/24/2024 如果分离如果分离过程必程必须使用流使用流动相添加物，下列物相添加物，下列物质可以被添加：可以被添加：NH4OH(氢氧化氧化铵)(C2H5)3N(三乙胺三乙胺)CH3COONH4(乙酸乙酸铵)HCOOH(甲酸甲酸)CH3COOH(乙酸乙酸)CF3COOH(三氟乙酸三

7、氟乙酸)*所有可在所有可在LC/MS中使用的中使用的挥发性溶性溶剂均可在均可在ELSD中作中作为添加物使用。添加物使用。9ELSD操作及维护用户版4/24/20242.3检测检测室室10ELSD操作及维护用户版4/24/2024散射光散射光强度与散射度与散射颗粒的粒的质量量间存在指数比例。存在指数比例。I=k mb (power function)I 散射光散射光强度度;m 散色散色颗粒的粒的质量量;k、b 常数常数.Log I对Log m作作图可以得到可以得到线性响性响应。常数。常数k和和b随随测试条件条件(比如比如温度和流温度和流动相特性相特性)的改的改变而而变化。化。11ELSD操作及维

8、护用户版4/24/2024ELSD LT II测试咖啡因咖啡因12ELSD操作及维护用户版4/24/2024f(x)=x(1.59947)EXP(8.98178)r2=0.9997023LC SolutionCurve fit type:ExponentialExcelPower functionI=k mb Ln I=ln k+b*ln m 13ELSD操作及维护用户版4/24/2024要点要点想要得到想要得到幂函数的工作曲函数的工作曲线，至少需要两个不同的，至少需要两个不同的浓度点；想要得到度点；想要得到方程的相关系数，至少需要方程的相关系数，至少需要3个不同的个不同的浓度点。目前度点。目

9、前中国中国药典典方方法采用的是两点法。法采用的是两点法。不同的不同的浓度点不度点不应过于接近，否于接近，否则拟合出来的方程偏差合出来的方程偏差过大；大；选点可点可遵循遵循这样的例子：的例子：1,2,4,8,1614ELSD操作及维护用户版4/24/2024第三部分第三部分 仪器部件及功能器部件及功能15ELSD操作及维护用户版4/24/2024Rear16ELSD操作及维护用户版4/24/2024Life of LED=5000 h17ELSD操作及维护用户版4/24/2024每按一下，所每按一下，所设定的参数增加一个定的参数增加一个单位。按住改建，参数以位。按住改建，参数以更快的速率增大。更

10、快的速率增大。每按一下，所每按一下，所设定的参数减小一个定的参数减小一个单位。按住改建，参数以位。按住改建，参数以更快的速率减小。更快的速率减小。让仪器接受所器接受所设定的参数定的参数值。将当前的将当前的检测器信号器信号变为0.打开或关打开或关闭光源。状光源。状态灯灯显示光源是亮或示光源是亮或灭：当：当LED状状态灯亮，灯亮，则表明光源是亮的；反之光源是表明光源是亮的；反之光源是灭的。的。移移动光光标到下一副或上一副屏幕。到下一副或上一副屏幕。移移动光光标到下一个或上一个区域。到下一个或上一个区域。18ELSD操作及维护用户版4/24/2024第四部分第四部分 操作前的准操作前的准备Paraf

11、ilmTM is used to cover various openings inside the compartment and on the nebulizer cell to prevent dust particles from entering the system during shipment.19ELSD操作及维护用户版4/24/2024组装配件装配件A.移除流路和移除流路和雾化器上的封口膜。化器上的封口膜。B.将将30 mm螺帽螺帽拧到玻璃管上，先不要到玻璃管上，先不要拧紧；将；将雾化器插入螺帽中，插到底，然后化器插入螺帽中，插到底，然后拧紧螺帽。螺帽。C.接下来，将接下来

12、，将13 mm螺母螺母拧到玻璃管的另一个口到玻璃管的另一个口上，不要上，不要拧紧。将漂移管入口通。将漂移管入口通过13 mm螺母插螺母插到玻璃管中，然后到玻璃管中，然后拧紧13 mm螺母。螺母。20ELSD操作及维护用户版4/24/2024D.将将雾化器入口管安装到化器入口管安装到仪器左器左侧的流路入口。的流路入口。连接接时，内部的，内部的PTFE管管应比外面的比外面的绿色套管色套管长出出2 mm。E.用流用流动相充相充满虹吸管。虹吸管。21ELSD操作及维护用户版4/24/2024F.将提供的将提供的废液管液管连接到虹吸管的出口接到虹吸管的出口处。G.将将雾化气管化气管连接到接到雾化器。化器

13、。22ELSD操作及维护用户版4/24/2024 关关键点点一般使用流一般使用流动相充相充满玻璃管的虹吸管玻璃管的虹吸管处。如果流。如果流动相相挥发性性较强(比如比如正己正己烷、二、二氯甲甲烷)，可以用水或异丙醇充，可以用水或异丙醇充满虹吸管。虹吸管。流流动相相应位于虹吸管的弯曲位于虹吸管的弯曲处，但不能，但不能积存或淹没玻璃管与漂移管的存或淹没玻璃管与漂移管的连接接处。虹吸管出口虹吸管出口处连接的接的废液管的排布液管的排布应注意：使用注意：使用夹持工具将靠近虹吸持工具将靠近虹吸管管处的部分固定，以防止的部分固定，以防止废液管移液管移动时损伤虹吸管；虹吸管；废液管自入口至液管自入口至出口出口应

14、一路向下，中一路向下，中间不能有高低起伏，以便不能有高低起伏，以便废液液顺利排出。利排出。确保确保废液管的出口未浸没在液管的出口未浸没在废液桶的液面以下，不液桶的液面以下，不论您用什么方式。您用什么方式。从从检测室出来的室出来的废气气应一路向下，中一路向下，中间不能有高低起伏，以便不能有高低起伏，以便废气冷气冷凝得到的液体不会倒流到凝得到的液体不会倒流到检测室。室。23ELSD操作及维护用户版4/24/2024第五部分第五部分 基本操作基本操作5.1 显示屏示屏状状态屏幕：屏幕：显示四项参数的实时值。当温度未达到预定值时，Temp闪烁；当气压小于300 kPa或未达到预定值时，Press闪烁；

15、仪器仅能指示气压，气压设定应通过气源。信号信号补偿*：应设定为正数或更高值，否则可能观察不到信号；当基线稳定后，offset数值相当于初始值，与基线高度一致。漂移管温度漂移管温度*：依据流动相性质、样品性质设定。(20-80 C,100 C，比室温高5 C，设置才有效)增益增益*：用于放大或缩小信号，对于分析灵敏度基本无益。一般高浓度样品，增益值应较小，对于低浓度样品，增益值应设定大一些。Gain增加1，信号值乘2.24ELSD操作及维护用户版4/24/2024噪声噪声过滤*：设定一个时间常数(噪声释放的时间间隔)以滤除噪声。默认值为1 s，改变此值峰形和响应值会略微变化。时间常数变大，峰形更

16、平滑，但可能会把某些较窄的峰滤除。目标峰与相邻峰分离较差时，推荐调整filter。气气压单位位：kPa、psi。LED(光源光源)：开/关。“#H”为LED实际使用时间。LED的寿命为5000 h，当实际使用时间超过5000 h，开机后就会显示“the maximum usage of the lamp has exceeded”。重置重置LED使用使用时间*：当光标处于该区域时，点击ENTER就会将“#H”重置为0。重置的前提是更换了新的光源。气气阀：开/关。程序程序时间*：在此设定时间，然后将气阀设定为on。从设定时刻开始计时，经历设定时间后，气阀自动关闭。25ELSD操作及维护用户版4/

17、24/20245.2 操作打开打开仪器后部的器后部的电源开关源开关打开打开喷雾气气阀门，将，将压力力调节到到350 kPa。压力力值显示在状示在状态屏幕上。屏幕上。打开打开pump，使虹吸管，使虹吸管处充充满液体。液体。设定参数：漂移管温度、定参数：漂移管温度、gain(有有时甚至需要甚至需要设置置filter constant time)平衡流平衡流动相、等待参数达到相、等待参数达到预定定值，然后自，然后自动调零。零。26ELSD操作及维护用户版4/24/2024注意注意如果如果仪器置于密封器置于密封较好的通好的通风橱或其他低橱或其他低压环境下，虹吸管中的液体境下，虹吸管中的液体可能会流出来

18、影响可能会流出来影响结果，果，务必采取手段确保虹吸管中的液面与漂移管必采取手段确保虹吸管中的液面与漂移管入口管的下切面一致；入口管的下切面一致；雾化气化气压力不能超力不能超过450 kPa；确保流确保流动相不会腐相不会腐蚀仪器：不器：不锈钢(雾化室、漂移管化室、漂移管)、玻璃、玻璃(雾化室化室)、PTFE(入口管入口管)；流流动相相进入入ELSD前，前，应先通先通雾化气；化气；不不挥发或或难挥发添加物不添加物不应出出现在流在流动相中。相中。27ELSD操作及维护用户版4/24/2024漂移管蒸漂移管蒸发温度如何温度如何设定定?漂移管温度漂移管温度设定依据流定依据流动相的沸点。一般而言，流相的沸

19、点。一般而言，流动相相为纯有机溶有机溶剂时设为35C，流，流动相相为有机相水溶液有机相水溶液时设为40C，含水，含水较高的流高的流动相相设定定为50C。流。流动相中添加物的沸点高于溶相中添加物的沸点高于溶剂时，可适当提高漂移，可适当提高漂移管温度；管温度；如果目如果目标化合物化合物对热不不稳定，定，则可尽可能的降低蒸可尽可能的降低蒸发温度以避免化合温度以避免化合物物热分解；分解；流速流速较高高时，适当提高漂移管温度可降低噪声。，适当提高漂移管温度可降低噪声。两条指两条指导方方针：A.升高温度有利于流升高温度有利于流动相及添加物气化；相及添加物气化；B.降低温度可降低目降低温度可降低目标物的分解

20、物的分解衡量衡量标准：信噪比。准：信噪比。5.3 优化分析条件化分析条件28ELSD操作及维护用户版4/24/202429ELSD操作及维护用户版4/24/2024优化流化流动相相溶溶剂中的蒸中的蒸发残渣是引起噪声的主要原因。残渣是引起噪声的主要原因。对溶溶剂的要求：使用蒸的要求：使用蒸馏水和水和HPLC级试剂；蒸；蒸发残渣残渣应低于低于1 ppm。添加物在离子型化合物分离中具有改善峰形、添加物在离子型化合物分离中具有改善峰形、优化分离等重要作用。化分离等重要作用。然而在然而在ELSD中中应慎用：不慎用：不挥发性添加物不能使用；三氟乙酸、乙酸、性添加物不能使用；三氟乙酸、乙酸、三乙胺等三乙胺等

21、挥发性性试剂可以使用，但可能会引起噪声增高的可以使用，但可能会引起噪声增高的现象，所以象，所以在添加物在添加物类型、添加型、添加浓度方面需要度方面需要优化。化。此外，所用此外，所用试剂中不中不应含有抗氧化含有抗氧化剂(比如比如THF中含有中含有BHT)。所用所用试剂不不应腐腐蚀PTFE、不、不锈钢、玻璃等材料。、玻璃等材料。30ELSD操作及维护用户版4/24/2024样品品处理理进样前用微孔前用微孔滤膜膜(0.45 m、0.22 m)过滤样品。品。色色谱柱柱处理理对于新柱，于新柱，应在不接在不接检测器的情况下冲洗一定体器的情况下冲洗一定体积(比如比如20倍柱体倍柱体积)，这样可以将小于可以将

22、小于筛板孔径的微小板孔径的微小颗粒冲洗出来。冲洗后，在某种特粒冲洗出来。冲洗后，在某种特定流定流动相条件下相条件下测试基基线并并记录，以，以备参考。参考。定期冲洗色定期冲洗色谱柱，冲洗柱，冲洗时不接不接检测器。器。极端极端pH值的流的流动相会腐相会腐蚀填料，填料，产生一些小于生一些小于筛板孔径的板孔径的颗粒，故不粒，故不应在允在允许的的pH范范围外使用色外使用色谱柱。柱。31ELSD操作及维护用户版4/24/20245.4 关机关机用流用流动相冲洗不少于相冲洗不少于15 ml(通通雾化气化气)(如果流如果流动相中含有添加物，相中含有添加物，则应用甲醇水溶液冲洗用甲醇水溶液冲洗15ml)停止送液

23、停止送液通通雾化气化气30 min停止送气，然后关停止送气，然后关闭仪器器电源源32ELSD操作及维护用户版4/24/2024故障故障噪声过高：雾化气含有过多的颗粒；流动相中含有高沸点添加物。检不到峰：排气管堵塞；虹吸管中无液封导致漏气；雾化器堵塞。33ELSD操作及维护用户版4/24/2024 灵敏度下降或噪声尖峰的出现很有可能是漂移管污染引起的。可以遵循下面的方法冲洗检测器整个流路：取下分析柱并设置雾化气压力为 350 kPa。设置漂移管温度为40C，以水作为流动相，流速2 mL/min 冲洗10 min。然后流动相换为乙醇，同样条件下冲洗30 min。冲洗结束后，检查是否还有噪声尖峰出现

24、。如果没有解决噪声尖峰的问题，那么遵循下面的方法再次进行清洗。流动相由乙醇换为水，冲洗10 min。流动相换为 5 mmol/L 三氟醋酸水溶液，漂移管温度40C 条件下冲洗10 min。将漂移管温度设为80C，再冲洗10 min。流动相换为水，漂移管温度40C 条件下冲洗20 min。34ELSD操作及维护用户版4/24/202435ELSD操作及维护用户版4/24/2024 To remove the nebulizer from the instrument:Disconnect the nebulizer liquid inlet from the column.Disconnect

25、the gas inlet from the nebulizer.Unscrew the nebulizers 30 mm nut,and remove the nebulizer from the glass chamber.Remove the 30 mm nut and the seal from the nebulizer.36ELSD操作及维护用户版4/24/2024To clean the nebulizer:1 Fill a 20 mL or 50 mL beaker with approximately 2 cm of cleaning solvent.2 Remove the

26、 nebulizer gas inlet fitting to avoid damaging it with the cleaning solvent.3 Place the nebulizer vertically in the beaker.The nebulizer outlet should be placed at the bottom of the beaker and the nebulizer inlet should be pointing up.NOTEThe cleaning solvent is dependent on the nature of the material that is present in the nebulizer.In most cases,ethanol 2-propanol is a satisfactory solvent.37ELSD操作及维护用户版4/24/2024