7第七章-植物快速繁殖和脱毒课件

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1、第七章第七章 植物快速繁殖和脱毒植物快速繁殖和脱毒n n第一节第一节 植物快速繁殖的途径和方法植物快速繁殖的途径和方法n n第二节第二节 快速繁殖中茎尖培养及脱毒快速繁殖中茎尖培养及脱毒n n第三节第三节 其他途径脱毒其他途径脱毒n n第四节第四节 脱毒苗的鉴定脱毒苗的鉴定n n第五节第五节 脱毒后防病毒再感染脱毒后防病毒再感染第一节第一节 植物快速繁殖的途径和方法植物快速繁殖的途径和方法植物离体快速繁殖技术的概念植物离体快速繁殖技术的概念:n n将来自优良植株的将来自优良植株的将来自优良植株的将来自优良植株的茎尖、腋芽、鳞片、叶片茎尖、腋芽、鳞片、叶片茎尖、腋芽、鳞片、叶片茎尖、腋芽、鳞片、

2、叶片等器等器等器等器官、组织或细胞进行官、组织或细胞进行官、组织或细胞进行官、组织或细胞进行离体培养离体培养离体培养离体培养，以期在，以期在，以期在，以期在短期短期短期短期内以内以内以内以快速快速快速快速获得遗传上稳定一致的大量个体。获得遗传上稳定一致的大量个体。获得遗传上稳定一致的大量个体。获得遗传上稳定一致的大量个体。n n与传统无性繁殖方式的与传统无性繁殖方式的与传统无性繁殖方式的与传统无性繁殖方式的区别区别区别区别:n n繁殖速度快，不受自然的干扰，使育苗工厂化。繁殖速度快，不受自然的干扰，使育苗工厂化。繁殖速度快，不受自然的干扰，使育苗工厂化。繁殖速度快，不受自然的干扰，使育苗工厂化

3、。n n植物快繁的类型与器官形成方式：植物快繁的类型与器官形成方式：1 不定芽型不定芽型2 器官型器官型3 器官发生型器官发生型4 胚状体发生型胚状体发生型5 原球茎发生型原球茎发生型比较比较1 不定芽型不定芽型n n诱诱诱诱导导导导顶顶顶顶端端端端分分分分生生生生组组组组织织织织产产产产生生生生不不不不定定定定芽芽芽芽，再再再再生生生生成成成成植植植植株株株株的的的的方式。方式。方式。方式。n n方方方方法法法法：选选选选取取取取已已已已经经经经发发发发育育育育成成成成熟熟熟熟的的的的顶顶顶顶芽芽芽芽和和和和腋腋腋腋芽芽芽芽，连连连连同同同同短短短短枝枝枝枝经经经经表表表表面面面面灭灭灭灭菌

4、菌菌菌后后后后，在在在在无无无无菌菌菌菌条条条条件件件件下下下下培培培培养养养养，诱诱诱诱导导导导不定芽并使其生根形成植株的方式不定芽并使其生根形成植株的方式不定芽并使其生根形成植株的方式不定芽并使其生根形成植株的方式。n n取取取取材材材材：只只只只要要要要有有有有明明明明显显显显的的的的顶顶顶顶端端端端分分分分生生生生组组组组织织织织和和和和次次次次生生生生组组组组织织织织的植物均适用。的植物均适用。的植物均适用。的植物均适用。n n原理：原理：n n不少植物具有大量的不少植物具有大量的腋芽分生组织腋芽分生组织，但在，但在整体植物上由于整体植物上由于顶端优势顶端优势效应，多数腋芽效应，多数

5、腋芽受到内源激素的制约而抑制生长。受到内源激素的制约而抑制生长。n n 若将腋芽从整体植物上分离下来，给以若将腋芽从整体植物上分离下来，给以相应的培养条件，即可形成相应的培养条件，即可形成大量不定芽大量不定芽。腋腋芽芽增增殖殖n 不定芽发生型的特点：n n繁殖率高；n n利用外植体原有的芽，包括隐芽在内繁殖数量大；n n同时能保持该植物种的遗传稳定性。n n从从器器官官外外植植体体诱诱导导不不定定芽芽，再再生生成成植植株株的的方方式式。是是直直接接从从外外植植体体细细胞胞上上形形成成器器官原基后发育成器官官原基后发育成器官(器官型器官型)n n方方法法：选选取取充充分分发发育育的的器器官官诸诸

6、如如茎茎、叶叶、花花器器、鳞鳞片片等等，经经离离体体培培养养而而产产生生植植株株的的方式。方式。2 器官型器官型n n通过脱分化形成愈伤组织，再分化出苗。通过脱分化形成愈伤组织，再分化出苗。n n特特点点：可可获获得得与与母母株株相相同同的的小小植植株株，繁繁殖殖系系数数较较低低，可可用用于于细细胞胞分分化化的的研研究究。由由于于经愈伤组织而再生成植株，遗传性不稳定。经愈伤组织而再生成植株，遗传性不稳定。3 器官发生型器官发生型无菌母株制备无菌母株制备增殖、分化增殖、分化植株再生及鉴定植株再生及鉴定炼苗和移植炼苗和移植基基本本程程序序与与技技术术培养基中激素配比培养基中激素配比激素种类及浓度激

7、素种类及浓度基本培养基组成基本培养基组成渗透压渗透压逐步过渡逐步过渡培养基筛选培养基筛选材料灭菌材料灭菌n n由由植植物物器器官官、组组织织和和细细胞胞培培养养直直接接发发生生胚胚状状体体或或经经培培养养愈愈伤伤组组织织产产生生胚胚状状体体，最最后后以以胚胚状体状体成苗的方式。成苗的方式。n n据据不不完完全全资资料料统统计计，在在被被子子植植物物中中有有胚胚状状体体发生的植物已达发生的植物已达100余种，分属近余种，分属近40个科。个科。4 胚状体发生型胚状体发生型可可心形胚和球形胚香蕉心形体细胞胚 玫瑰心形体细胞胚 n n胚状体发生型的特点：胚状体发生型的特点：n n 遗传性一致；遗传性一

8、致；n n有些植物体细胞发生数量亦相当大。有些植物体细胞发生数量亦相当大。5 原球茎型原球茎型n n大部分兰花属于这一类型。大部分兰花属于这一类型。大部分兰花属于这一类型。大部分兰花属于这一类型。n n原原原原球球球球茎茎茎茎是是是是兰兰兰兰花花花花茎茎茎茎尖尖尖尖、腋腋腋腋芽芽芽芽或或或或种种种种子子子子萌萌萌萌发发发发时时时时产产产产生生生生的的的的呈呈呈呈珠珠珠珠粒粒粒粒状、缩短的、类似嫩茎的器官。状、缩短的、类似嫩茎的器官。状、缩短的、类似嫩茎的器官。状、缩短的、类似嫩茎的器官。n n 方方方方法法法法：种种种种子子子子消消消消毒毒毒毒后后后后，在在在在培培培培养养养养基基基基上上上上

9、播播播播种种种种，经经经经一一一一段段段段时时时时间间间间培培培培养养养养而而而而发发发发生生生生原原原原球球球球茎茎茎茎（带带带带芽芽芽芽），然然然然后后后后由由由由原原原原球球球球茎茎茎茎直直直直接接接接长长长长成成成成植植植植株。株。株。株。原球茎原球茎原球茎发育成兰苗原球茎发育成兰苗1 1）不不不不定定定定芽芽芽芽型型型型：容容容容易易易易成成成成苗苗苗苗，对对对对培培培培养养养养基基基基要要要要求求求求不不不不高高高高，后后后后代代代代遗传性较为稳定，遗传性较为稳定，遗传性较为稳定，遗传性较为稳定，缺缺缺缺点点点点：但但但但取取取取材材材材受受受受到到到到一一一一定定定定限限限限制制

10、制制，仅仅仅仅限限限限于于于于具具具具有有有有明明明明显显显显顶顶顶顶端端端端分分分分生组织和次生分生组织的物种。生组织和次生分生组织的物种。生组织和次生分生组织的物种。生组织和次生分生组织的物种。2 2）器官型和胚状体发生型器官型和胚状体发生型器官型和胚状体发生型器官型和胚状体发生型：遗传性稳定。：遗传性稳定。：遗传性稳定。：遗传性稳定。缺缺缺缺点点点点：对对对对培培培培养养养养基基基基要要要要求求求求高高高高，器器器器官官官官发发发发生生生生条条条条件件件件苛苛苛苛刻刻刻刻。繁繁繁繁殖殖殖殖数数数数量不如不定芽型和器官发生型多；量不如不定芽型和器官发生型多；量不如不定芽型和器官发生型多；量

11、不如不定芽型和器官发生型多；五种器官发生方式优点、缺点比较：五种器官发生方式优点、缺点比较：3 3）器官发生型器官发生型器官发生型器官发生型（由愈伤组织再生植株）（由愈伤组织再生植株）（由愈伤组织再生植株）（由愈伤组织再生植株）n n优点：优点：优点：优点：成苗数量大，对培养基要求不算高，容易调成苗数量大，对培养基要求不算高，容易调成苗数量大，对培养基要求不算高，容易调成苗数量大，对培养基要求不算高，容易调配。配。配。配。n n缺点：缺点：缺点：缺点：通过愈伤组织成苗，细胞的染色体容易发生通过愈伤组织成苗，细胞的染色体容易发生通过愈伤组织成苗，细胞的染色体容易发生通过愈伤组织成苗，细胞的染色体

12、容易发生数量和结构变异，很难使再生植株群体保持稳定的数量和结构变异，很难使再生植株群体保持稳定的数量和结构变异，很难使再生植株群体保持稳定的数量和结构变异，很难使再生植株群体保持稳定的遗传性。遗传性。遗传性。遗传性。第七章第七章 植物快速繁殖和脱毒植物快速繁殖和脱毒n n第一节第一节 植物快速繁殖的途径和方法植物快速繁殖的途径和方法n n第二节第二节 快速繁殖中茎尖培养及脱毒快速繁殖中茎尖培养及脱毒n n第三节第三节 其他途径脱毒其他途径脱毒n n第四节第四节 脱毒苗的鉴定脱毒苗的鉴定n n第五节第五节 脱毒后防病毒再感染脱毒后防病毒再感染第二节第二节 快速繁殖中茎尖培养及脱快速繁殖中茎尖培养

13、及脱毒毒一一 快速繁殖中茎尖培养快速繁殖中茎尖培养二二 快速繁殖中茎尖培养脱毒快速繁殖中茎尖培养脱毒一一快速繁殖中茎尖培养快速繁殖中茎尖培养1、概念、概念茎尖培养是指切取茎的先端部分或茎尖培养是指切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行无菌培养，茎尖分生组织部分，进行无菌培养，使其发育成完整植株的过程。使其发育成完整植株的过程。2、培养步骤、培养步骤3、应用、应用茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养微茎尖培养和普通茎尖培养普通茎尖培养。微茎尖指带有12个叶原基的生长锥，其长度不超过0.5mm。普通茎尖指较大的茎尖（如几mm到几十mm）、芽尖及侧芽。这里主要讲普通茎尖培养。茎尖培养是组

14、织培养中用得最多的一个取材部位。因为这种培养技术简单，操作方便，培养技术简单，操作方便，茎尖容易成活，成苗所需时间短。茎尖容易成活，成苗所需时间短。2、培养的步骤n2.1 2.1 取材取材n2.2 2.2 消毒消毒n2.3 2.3 接种接种n2.4 2.4 培养基培养基n2.5 2.5 培养条件培养条件培养基：培养基：多数茎尖培养采用多数茎尖培养采用MS作作为基本培基本培养基或略加修改，或养基或略加修改，或补加其它物加其它物质。常用。常用的其它培养基有的其它培养基有White，Heller等，培养基等，培养基中生中生长素是必素是必须的。的。培养条件：培养条件：接种到培养基上的茎尖，置于接种到培

15、养基上的茎尖，置于培养室中培养，每天照光培养室中培养，每天照光16小小时，照度，照度15003000Lx即可，温度通常在即可，温度通常在252。茎尖在培养茎尖在培养过程中会出程中会出现生生长太慢、太慢、生生长太快和生太快和生长正正常等三种常等三种类型：型：生生长太慢型，太慢型，即接种后茎尖不增大，只是茎尖逐即接种后茎尖不增大，只是茎尖逐渐变绿，出，出现绿色小点，色小点，细胞逐胞逐渐老化而老化而进入休眠状入休眠状态，或或者逐者逐渐变褐死亡。褐死亡。引起原因的是生引起原因的是生长素素浓度太低，或是度太低，或是温度温度过低或低或过高。高。生生长太快型，太快型，是接种后茎尖迅速增大，在茎尖基部是接种后

16、茎尖迅速增大，在茎尖基部产生愈生愈伤组织，并迅速增殖，而茎尖不伸并迅速增殖，而茎尖不伸长，久之茎尖也，久之茎尖也形成愈形成愈伤组织，从而，从而丧失失发育成苗的能力。育成苗的能力。引起原因一引起原因一是生是生长素素浓度度过高，引起高，引起细胞胞疯狂分裂而狂分裂而导致愈致愈伤组织的形成。的形成。二是光照太弱或温度太高。二是光照太弱或温度太高。生生长正常型，正常型，是接种后茎尖基部稍增大并形成少量愈是接种后茎尖基部稍增大并形成少量愈伤组织，茎尖茎尖颜色逐色逐渐变绿，并逐，并逐渐伸伸长，叶原基，叶原基发育育成可成可见的小叶，的小叶，进而形成小苗。而形成小苗。3、茎尖培养的应用n3.13.1形态建成研究

17、形态建成研究茎尖分生组织培养取材便利茎尖分生组织培养取材便利,培养条件能严培养条件能严格控制，十分有利于形态建成的研究。格控制，十分有利于形态建成的研究。n3.2 无病株的生产无病株的生产迄今为止迄今为止,人们发现的植物病毒已超过人们发现的植物病毒已超过600种，无病毒苗的培养在农业生产中作用越来种，无病毒苗的培养在农业生产中作用越来越大，取得了良好的经济效益和社会效益。越大，取得了良好的经济效益和社会效益。n3.3 营养繁殖营养繁殖茎尖组织培养可以严格控制和调茎尖组织培养可以严格控制和调节适宜的营养、激素浓度、温度、节适宜的营养、激素浓度、温度、光照等外部条件，使许多在常规条光照等外部条件，

18、使许多在常规条件下无法生长和繁殖的植物材料成件下无法生长和繁殖的植物材料成功快速繁殖。功快速繁殖。n3.4 应用于育种应用于育种 因茎尖遗传性稳定，茎尖组织培因茎尖遗传性稳定，茎尖组织培养技术已经成熟，因此该技术多养技术已经成熟，因此该技术多用于常规方法繁殖困难的物种，用于常规方法繁殖困难的物种，有性不亲和基因与不育基因型的有性不亲和基因与不育基因型的繁殖，新杂交种的快速繁殖，繁繁殖，新杂交种的快速繁殖，繁殖大批遗传形状一致的亲本供大殖大批遗传形状一致的亲本供大规模杂交制种。规模杂交制种。第二节第二节 快速繁殖中茎尖培养及脱快速繁殖中茎尖培养及脱毒毒一一 快速繁殖中茎尖培养快速繁殖中茎尖培养二

19、二 快速繁殖中茎尖培养脱毒快速繁殖中茎尖培养脱毒n n全世界已发现植物病毒有近全世界已发现植物病毒有近全世界已发现植物病毒有近全世界已发现植物病毒有近700700种，植物病毒病严种，植物病毒病严种，植物病毒病严种，植物病毒病严重地影响果树、蔬菜、花卉、林木等植物的生长，重地影响果树、蔬菜、花卉、林木等植物的生长，重地影响果树、蔬菜、花卉、林木等植物的生长，重地影响果树、蔬菜、花卉、林木等植物的生长，造成产量降低，品质变劣，其危害仅次于真菌病造成产量降低，品质变劣，其危害仅次于真菌病造成产量降低，品质变劣，其危害仅次于真菌病造成产量降低，品质变劣，其危害仅次于真菌病害。受病毒浸染的植物终身带毒，

20、目前尚无药物害。受病毒浸染的植物终身带毒，目前尚无药物害。受病毒浸染的植物终身带毒，目前尚无药物害。受病毒浸染的植物终身带毒，目前尚无药物可以治愈。可以治愈。可以治愈。可以治愈。n n由病毒引起作物产量和品质退化的事例甚多。由病毒引起作物产量和品质退化的事例甚多。由病毒引起作物产量和品质退化的事例甚多。由病毒引起作物产量和品质退化的事例甚多。n n粮食作物粮食作物粮食作物粮食作物方面，最典型的是马铃薯退化，叶片卷方面，最典型的是马铃薯退化，叶片卷方面，最典型的是马铃薯退化，叶片卷方面，最典型的是马铃薯退化，叶片卷缩或叶花白，产量一年不如一年。缩或叶花白，产量一年不如一年。缩或叶花白，产量一年不

21、如一年。缩或叶花白，产量一年不如一年。n n果树果树果树果树方面方面方面方面 香蕉束顶病、柑桔黄龙病、苹果花叶病香蕉束顶病、柑桔黄龙病、苹果花叶病香蕉束顶病、柑桔黄龙病、苹果花叶病香蕉束顶病、柑桔黄龙病、苹果花叶病毒等多种病毒病。毒等多种病毒病。毒等多种病毒病。毒等多种病毒病。n n在在在在蔬菜蔬菜蔬菜蔬菜方面，有白菜病毒病、番茄病毒病等。方面，有白菜病毒病、番茄病毒病等。方面，有白菜病毒病、番茄病毒病等。方面，有白菜病毒病、番茄病毒病等。n n在在在在花卉花卉花卉花卉方面，有国兰花叶病、香石竹驳斑病、菊方面，有国兰花叶病、香石竹驳斑病、菊方面，有国兰花叶病、香石竹驳斑病、菊方面，有国兰花叶病

22、、香石竹驳斑病、菊花斑萎病等。花斑萎病等。花斑萎病等。花斑萎病等。香蕉束顶病（俗称香蕉束顶病（俗称香蕉束顶病（俗称香蕉束顶病（俗称“蕉公蕉公蕉公蕉公”、“虾蕉虾蕉虾蕉虾蕉”）苹果锈果病苹果锈果病 薄荷病毒薄荷病毒郁金香杂色花郁金香杂色花郁金香正常花郁金香正常花郑州果树研究所草莓脱毒脱毒苗 病毒的特性及其对植物的危害病毒的特性及其对植物的危害大多数植物病毒不经种子传播；大多数植物病毒不经种子传播；无性繁殖的植物，都易受到一种或多种病无性繁殖的植物，都易受到一种或多种病毒的侵染。毒的侵染。植物种类植物种类染病毒种类染病毒种类植物种类植物种类染病毒种类染病毒种类菊花菊花康乃馨康乃馨水仙水仙月季月季葡

23、萄葡萄无花果无花果1911410265矮牵牛矮牵牛马铃薯马铃薯大蒜大蒜苹果苹果草莓草莓桃桃51724362423第二节第二节 快速繁殖中茎尖培养及脱快速繁殖中茎尖培养及脱毒毒一一 快速繁殖中茎尖培养快速繁殖中茎尖培养二二 快速繁殖中茎尖培养脱毒快速繁殖中茎尖培养脱毒1 病毒在植物体内的分布病毒在植物体内的分布2 无病毒苗的获得无病毒苗的获得1 病毒在植物体内的分布病毒在植物体内的分布病毒在植物体内的分布具有不均匀性，随病毒在植物体内的分布具有不均匀性，随植株不同部位和年龄而异。植株不同部位和年龄而异。老叶和成熟组织及器官中病毒含量较高老叶和成熟组织及器官中病毒含量较高根尖、茎尖生长点约根尖、茎

24、尖生长点约0.11mm1mm区域内，区域内，几乎不含病毒。几乎不含病毒。（原因？）（原因？）（原因：分生组织细胞分裂和生长速度（原因：分生组织细胞分裂和生长速度快，而病毒在植物体细胞内繁殖速度相快，而病毒在植物体细胞内繁殖速度相对较慢；另外，病毒是通过筛管组织或对较慢；另外，病毒是通过筛管组织或胞间联丝传播至其他组织细胞的，而茎胞间联丝传播至其他组织细胞的，而茎尖分生组织无分化，没有维管组织。）尖分生组织无分化，没有维管组织。）病毒在植物体内的分布具有不均匀性的理论病毒在植物体内的分布具有不均匀性的理论假说假说(1)(1)能量竞争能量竞争 病毒核酸和植物细胞分裂时病毒核酸和植物细胞分裂时DNA

25、DNA合合成均需要消耗大量的能量，而分生组织细胞本成均需要消耗大量的能量，而分生组织细胞本身很活跃，其身很活跃，其DNADNA合成是自我提供能量自我复制，合成是自我提供能量自我复制，而病毒核酸的合成要靠植物提供能量来自我复而病毒核酸的合成要靠植物提供能量来自我复制，因而就得不到足够的能量，从而就抑制了制，因而就得不到足够的能量，从而就抑制了病毒核酸的复制。病毒核酸的复制。(2)(2)传导抑制传导抑制 病毒在植物体内的传播主要是通过病毒在植物体内的传播主要是通过维管束实现的，但在分生组织中，维管组织还维管束实现的，但在分生组织中，维管组织还不健全，从而抑制了病毒向分生组织的传导。不健全，从而抑制

26、了病毒向分生组织的传导。(3)(3)激素抑制激素抑制 在分生组织中，生长素和在分生组织中，生长素和细胞分裂素水平均很高，因而阻滞了病细胞分裂素水平均很高，因而阻滞了病毒的侵入或者抑制病毒的合成。毒的侵入或者抑制病毒的合成。(4)(4)酶缺乏酶缺乏 19691969年，年，StaceStace-Smith-Smith提出，提出，可能病毒的合成需要的酶系统在分生组可能病毒的合成需要的酶系统在分生组织中缺乏或还没建立，因而病毒无法在织中缺乏或还没建立，因而病毒无法在分生组织中复制。分生组织中复制。(5)(5)抑制因子抑制因子 19761976年，年，Martin-TanguyMartin-Tangu

27、y等等提出了抑制因子假说，认为在分生组织提出了抑制因子假说，认为在分生组织中存在有某种抑制因子。中存在有某种抑制因子。n n病毒侵染到感染植株的叶片后，经过一段时间，病毒侵染到感染植株的叶片后，经过一段时间，病毒侵染到感染植株的叶片后，经过一段时间，病毒侵染到感染植株的叶片后，经过一段时间，即即即即向附近细胞增殖转移向附近细胞增殖转移向附近细胞增殖转移向附近细胞增殖转移。n n转移速度很慢，每小时只有几微米。转移速度很慢，每小时只有几微米。转移速度很慢，每小时只有几微米。转移速度很慢，每小时只有几微米。n n当叶片内病毒数量到一定程度时，就转移到韧皮当叶片内病毒数量到一定程度时，就转移到韧皮当

28、叶片内病毒数量到一定程度时，就转移到韧皮当叶片内病毒数量到一定程度时，就转移到韧皮部，随后通过维管束转移到其他部分。部，随后通过维管束转移到其他部分。部，随后通过维管束转移到其他部分。部，随后通过维管束转移到其他部分。病毒侵染的过程病毒侵染的过程病毒侵染的过程病毒侵染的过程为什么茎尖培养能够除去病毒？为什么茎尖培养能够除去病毒？n n病毒运转速度慢，加上病毒运转速度慢，加上病毒运转速度慢，加上病毒运转速度慢，加上茎尖分生组织没有维管束茎尖分生组织没有维管束茎尖分生组织没有维管束茎尖分生组织没有维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和病毒只能通

29、过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的速度，所以生长的速度，所以生长的速度，所以生长的速度，所以茎尖生长点的病毒数量极少或茎尖生长点的病毒数量极少或茎尖生长点的病毒数量极少或茎尖生长点的病毒数量极少或无无无无，几乎检测不出。，几乎检测不出。，几乎检测不出。，几乎检测不出。n n进行茎尖培养时，切取茎尖越小，带有病毒的可进行茎尖培养时，切取茎尖越小，带有病毒的可进行茎尖培养时，切取茎尖越小，带有病毒的可进行茎尖培养时，切取茎尖越小，带有病毒的可能性就越小，但太小不易成活。能性就越小，但太小不易成活。能性就越小，但太小不易成活。能性就越小，但太小不易成活。

30、n n不同种类的植物和不同病毒而言，切取茎尖的大不同种类的植物和不同病毒而言，切取茎尖的大不同种类的植物和不同病毒而言，切取茎尖的大不同种类的植物和不同病毒而言，切取茎尖的大小也不相同（表小也不相同（表小也不相同（表小也不相同（表7-17-1）。）。）。）。普通茎尖普通茎尖 几毫米到几几毫米到几十毫米的芽尖及侧芽。十毫米的芽尖及侧芽。微茎尖微茎尖为为0.3-0.5mm0.3-0.5mm表表7-1 离体茎尖长度对马铃薯脱除病毒的影响离体茎尖长度对马铃薯脱除病毒的影响茎尖茎尖长度度/mm 叶原基数叶原基数 发育成小植株数育成小植株数无病毒再生植株数无病毒再生植株数0.120.270.6012450

31、426424180表表7-2 带病毒植物脱除病毒时宜采用的茎尖大小带病毒植物脱除病毒时宜采用的茎尖大小植物种植物种类病毒种病毒种类茎尖茎尖长度度/mm品种数品种数马铃薯薯甘甘 薯薯甘甘 蔗蔗大大丽花花马铃薯薯Y病毒病毒马铃薯薯X病毒病毒马铃薯卷叶病毒薯卷叶病毒马铃薯薯C病毒病毒马铃薯薯S病毒病毒斑叶花叶病毒斑叶花叶病毒缩叶花叶病毒叶花叶病毒羽毛状花叶病毒羽毛状花叶病毒花叶病毒花叶病毒花叶病毒花叶病毒1.0-3.00.2-0.51.0-3.00.2-0.30.2以下以下1.0-2.01.0-2.00.3-1.00.7-0.80.6-1.01731561211n n茎尖培养除可除去病毒外，还可除去

32、其他病原体，茎尖培养除可除去病毒外，还可除去其他病原体，茎尖培养除可除去病毒外，还可除去其他病原体，茎尖培养除可除去病毒外，还可除去其他病原体，如细菌、真菌等。如细菌、真菌等。如细菌、真菌等。如细菌、真菌等。n n无病毒苗只是相对而言无病毒苗只是相对而言无病毒苗只是相对而言无病毒苗只是相对而言：n n因为茎尖还有已知及未知的其他病毒，除去的病因为茎尖还有已知及未知的其他病毒，除去的病因为茎尖还有已知及未知的其他病毒，除去的病因为茎尖还有已知及未知的其他病毒，除去的病毒是指主要危害的几种病毒，严格来说，是毒是指主要危害的几种病毒，严格来说，是毒是指主要危害的几种病毒，严格来说，是毒是指主要危害的

33、几种病毒，严格来说，是“无无无无特定病毒的苗特定病毒的苗特定病毒的苗特定病毒的苗”。第三节 快速繁殖中茎尖培养脱毒1 1 1 1 病毒在植物体内的分布病毒在植物体内的分布病毒在植物体内的分布病毒在植物体内的分布2 2 2 2 无病毒苗的获得无病毒苗的获得无病毒苗的获得无病毒苗的获得2.1 2.1 2.1 2.1 茎尖培养脱毒的理论依据及培养途径茎尖培养脱毒的理论依据及培养途径茎尖培养脱毒的理论依据及培养途径茎尖培养脱毒的理论依据及培养途径2.2 2.2 2.2 2.2 材料的培养和灭菌材料的培养和灭菌材料的培养和灭菌材料的培养和灭菌2.3 2.3 2.3 2.3 茎尖剥离茎尖剥离茎尖剥离茎尖剥

34、离2.4 2.4 2.4 2.4 茎尖培养茎尖培养茎尖培养茎尖培养2.5 2.5 2.5 2.5 继代培养生根和快速繁殖继代培养生根和快速繁殖继代培养生根和快速繁殖继代培养生根和快速繁殖2.6 2.6 2.6 2.6 影响茎尖培养法脱除植物病毒的因素影响茎尖培养法脱除植物病毒的因素影响茎尖培养法脱除植物病毒的因素影响茎尖培养法脱除植物病毒的因素2.7 2.7 2.7 2.7 提高脱毒效果提高脱毒效果提高脱毒效果提高脱毒效果2.1 2.1 茎尖培养脱毒理论依据：茎尖培养脱毒理论依据：n植物细胞的全能性学说，任何细胞都植物细胞的全能性学说，任何细胞都含有全套的遗传信息，具有形成完整植含有全套的遗传

35、信息，具有形成完整植株的能力；株的能力；n植物病毒在寄主体内分布不均匀，茎植物病毒在寄主体内分布不均匀，茎尖部位病毒含量极低或不含病毒。尖部位病毒含量极低或不含病毒。茎尖培养途径：茎尖培养途径：茎尖茎尖丛生芽丛生芽生根生根再生株再生株（无毒）（无毒）（无毒）（无毒）茎尖取材茎尖取材：叶原基叶原基顶端分生组织顶端分生组织2.2 材料的培养和灭菌材料的培养和灭菌n n 供试植株要种在无菌土中，温室种植。供试植株要种在无菌土中，温室种植。n n也可去插条在室内溶液培养。也可去插条在室内溶液培养。n n定期喷施杀菌剂（如链霉素）也有效。定期喷施杀菌剂（如链霉素）也有效。2.3 茎尖剥离取幼苗茎尖取幼苗

36、茎尖取幼苗茎尖取幼苗茎尖2 23cm3cm小段，剥去可见的大叶，自来水冲洗小段，剥去可见的大叶，自来水冲洗小段，剥去可见的大叶，自来水冲洗小段，剥去可见的大叶，自来水冲洗1h1h左右后进入无菌室。左右后进入无菌室。左右后进入无菌室。左右后进入无菌室。先用先用先用先用95%95%酒精快速浸泡一下，再放入酒精快速浸泡一下，再放入酒精快速浸泡一下，再放入酒精快速浸泡一下，再放入5%5%漂白粉消毒漂白粉消毒漂白粉消毒漂白粉消毒7 710min10min（或（或（或（或5%5%次氯酸钠溶液），然后无菌水冲洗次氯酸钠溶液），然后无菌水冲洗次氯酸钠溶液），然后无菌水冲洗次氯酸钠溶液），然后无菌水冲洗3 34

37、 4次，次，次，次，在在在在双筒解剖双筒解剖双筒解剖双筒解剖下剥去幼叶，露出圆滑的生长点，用解剖针切下剥去幼叶，露出圆滑的生长点，用解剖针切下剥去幼叶，露出圆滑的生长点，用解剖针切下剥去幼叶，露出圆滑的生长点，用解剖针切取带取带取带取带1 12 2个叶原基的生长点，接种到培养基上进行培养。个叶原基的生长点，接种到培养基上进行培养。个叶原基的生长点，接种到培养基上进行培养。个叶原基的生长点，接种到培养基上进行培养。这种外植体（生长锥带这种外植体（生长锥带这种外植体（生长锥带这种外植体（生长锥带1 12 2个原叶基）的培养，严格来说，个原叶基）的培养，严格来说，个原叶基）的培养，严格来说，个原叶基

38、）的培养，严格来说，应称为应称为应称为应称为分生组织培养分生组织培养分生组织培养分生组织培养。取2-3顶梢2.4 茎尖培养茎尖培养n n常用常用常用常用MSMS（双子叶）、（双子叶）、（双子叶）、（双子叶）、B5B5和和和和N6N6（单子叶）和单子叶）和单子叶）和单子叶）和WhiteWhite（生根）培养基，较高浓度的无机盐（生根）培养基，较高浓度的无机盐（生根）培养基，较高浓度的无机盐（生根）培养基，较高浓度的无机盐，对，对，对，对促进组织分化和愈伤组织生长是有利的。促进组织分化和愈伤组织生长是有利的。促进组织分化和愈伤组织生长是有利的。促进组织分化和愈伤组织生长是有利的。n n可添加可添加

39、可添加可添加5%5%10%10%椰乳，椰乳，椰乳，椰乳，0.10.11.0mg/L1.0mg/L的吲哚乙酸、的吲哚乙酸、的吲哚乙酸、的吲哚乙酸、萘乙酸、苄基腺嘌呤等，有的还需添加活性炭。萘乙酸、苄基腺嘌呤等，有的还需添加活性炭。萘乙酸、苄基腺嘌呤等，有的还需添加活性炭。萘乙酸、苄基腺嘌呤等，有的还需添加活性炭。n n根据培养种类不同，添加的生长调节剂可适当调根据培养种类不同，添加的生长调节剂可适当调根据培养种类不同，添加的生长调节剂可适当调根据培养种类不同，添加的生长调节剂可适当调整。整。整。整。2.5 继代培养生根和快速繁殖继代培养生根和快速繁殖n n将接种外植体置于将接种外植体置于25度左

40、右、光照度度左右、光照度3000lx的实验室中，光周期的实验室中，光周期13-16h/d，培，培养养2-3周成苗。苗高周成苗。苗高1-2cm高时，转入生根高时，转入生根培养基，培养基，7-10天后生根，再继代成壮苗后天后生根，再继代成壮苗后移栽。移栽。图图图图7-1 7-1 葡萄茎尖脱毒培养过程示意图葡萄茎尖脱毒培养过程示意图葡萄茎尖脱毒培养过程示意图葡萄茎尖脱毒培养过程示意图葡萄茎尖脱毒经过葡萄茎尖脱毒经过葡萄茎尖脱毒经过葡萄茎尖脱毒经过7 7个时期：个时期：个时期：个时期：AA接种后变绿增大期；接种后变绿增大期；接种后变绿增大期；接种后变绿增大期；BB形成畸形叶期；形成畸形叶期；形成畸形叶

41、期；形成畸形叶期；CC形成多芽和芽伸长期；形成多芽和芽伸长期；形成多芽和芽伸长期；形成多芽和芽伸长期；DD多芽展开小叶和小叶伸长期；多芽展开小叶和小叶伸长期；多芽展开小叶和小叶伸长期；多芽展开小叶和小叶伸长期；EE发根发根发根发根期；期；期；期；FF根和茎伸长期；根和茎伸长期；根和茎伸长期；根和茎伸长期；GG移栽入盆期移栽入盆期移栽入盆期移栽入盆期2.6 2.6 影响茎尖培养法脱除植物病毒的因素影响茎尖培养法脱除植物病毒的因素母体材料病毒侵染的程度母体材料病毒侵染的程度外植体的生理状态外植体的生理状态起始培养的茎尖大小起始培养的茎尖大小培养基及培养条件培养基及培养条件n茎尖培养脱毒效果的好坏与

42、茎尖大小呈负相茎尖培养脱毒效果的好坏与茎尖大小呈负相关，切取的茎尖越小，脱毒效果越好；关，切取的茎尖越小，脱毒效果越好；而培养茎尖成活率的高低则与茎尖大小呈正而培养茎尖成活率的高低则与茎尖大小呈正相关，切取茎尖越小，成活率越低。相关，切取茎尖越小，成活率越低。一般剥离带一般剥离带1-21-2个叶原基的茎尖即可获得较好个叶原基的茎尖即可获得较好的脱毒效果。的脱毒效果。n茎尖越小对培养基的要求越高，成功率越低。茎尖越小对培养基的要求越高，成功率越低。一般生长素一般生长素/细胞分裂素的比值大于细胞分裂素的比值大于1 1时有利时有利于根的形成，否则有利于芽的分化。于根的形成，否则有利于芽的分化。康乃馨

43、不同大小茎尖与康乃馨斑驳病康乃馨不同大小茎尖与康乃馨斑驳病毒的脱毒效果毒的脱毒效果茎尖茎尖大小大小(mm)培培养养数数荆芥鉴定之病斑荆芥鉴定之病斑总病斑总病斑 接种叶数接种叶数 平均病斑数平均病斑数/叶叶无病毒茎尖无病毒茎尖 数目数目%0.1 0.25 0.5 0.75 1.01.0 3 20 30 9 4 5 3 13 0.2 137 61 2.2 1198 70 17.1 429 12 35.3 432 11 39.2 1972 20 98.6 2 66 8 40 4 13 1 11 0 0 0 02.7 提高脱毒效果提高脱毒效果2.7.1 物理处理物理处理1）高温处理）高温处理2）低温处

44、理）低温处理2.7.2 化学处理化学处理1 1）高温处理又称温热疗法）高温处理又称温热疗法n n某些病毒受热以后不稳定，失去活性。某些病毒受热以后不稳定，失去活性。n n把植物放在高于正常温度的环境中，组织把植物放在高于正常温度的环境中，组织内部的病毒受热后部分或全部钝化，使病内部的病毒受热后部分或全部钝化，使病毒在植物体内增殖减缓或停止，而失去侵毒在植物体内增殖减缓或停止，而失去侵染能力；但寄主植物的组织很少或不会受染能力；但寄主植物的组织很少或不会受到伤害。到伤害。n作为一种物理效应可以加速植物细胞的分作为一种物理效应可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取裂，使植物细胞在

45、与病毒繁殖的竞争中取胜。胜。热处理时间因植物而异热处理时间因植物而异（1）温汤浸渍处理）温汤浸渍处理 适用于休眠器官、适用于休眠器官、剪剪下的接穗或种植的材料，在下的接穗或种植的材料，在50左右的左右的温水中浸渍材料数分钟至数小时，方法温水中浸渍材料数分钟至数小时，方法简便易行但易致材料受伤。简便易行但易致材料受伤。（2 2）热风处理）热风处理）热风处理）热风处理 将试验母株在高温室内或生长箱中生将试验母株在高温室内或生长箱中生将试验母株在高温室内或生长箱中生将试验母株在高温室内或生长箱中生长一个阶段，使其顶端分生组织和次生分生组织迅长一个阶段，使其顶端分生组织和次生分生组织迅长一个阶段，使其

46、顶端分生组织和次生分生组织迅长一个阶段，使其顶端分生组织和次生分生组织迅速生长，然后切取其茎尖分生组织进行离体培养。速生长，然后切取其茎尖分生组织进行离体培养。速生长，然后切取其茎尖分生组织进行离体培养。速生长，然后切取其茎尖分生组织进行离体培养。对活跃生长的茎尖效果较好。对活跃生长的茎尖效果较好。对活跃生长的茎尖效果较好。对活跃生长的茎尖效果较好。处理温度和时间因植物种类和器官生理状况而异。处理温度和时间因植物种类和器官生理状况而异。处理温度和时间因植物种类和器官生理状况而异。处理温度和时间因植物种类和器官生理状况而异。n n培养温度（培养温度（培养温度（培养温度（3535 40 40）n

47、n光照强度（光照强度（光照强度（光照强度（300010000Lx)300010000Lx)n n培养时间培养时间培养时间培养时间短则几十分钟，长可达数月短则几十分钟，长可达数月短则几十分钟，长可达数月短则几十分钟，长可达数月n n例如康乃馨置于例如康乃馨置于例如康乃馨置于例如康乃馨置于3838两个月，草莓两个月，草莓两个月，草莓两个月，草莓3636 6 6周，即可周，即可周，即可周，即可清除茎尖的病毒。清除茎尖的病毒。清除茎尖的病毒。清除茎尖的病毒。n n如马铃薯未脱毒小苗在生长箱中如马铃薯未脱毒小苗在生长箱中如马铃薯未脱毒小苗在生长箱中如马铃薯未脱毒小苗在生长箱中变温处理变温处理变温处理变温

48、处理，35354h4h，31314h4h，交替，交替，交替，交替1 1个月，其脱毒效果可达个月，其脱毒效果可达个月，其脱毒效果可达个月，其脱毒效果可达80%80%以上。以上。以上。以上。n n变温处理变温处理变温处理变温处理的优点：的优点：的优点：的优点：3535使病毒钝化，使病毒钝化，使病毒钝化，使病毒钝化，3131可提高小可提高小可提高小可提高小苗生活力，这样既提高脱毒率，又能提高成苗率。苗生活力，这样既提高脱毒率，又能提高成苗率。苗生活力，这样既提高脱毒率，又能提高成苗率。苗生活力，这样既提高脱毒率，又能提高成苗率。热处理的局限性热处理的局限性（1）并非所有的病毒都对热处理敏感并非所有的

49、病毒都对热处理敏感。热。热处理只对圆周形（苹果花叶病毒）、线状处理只对圆周形（苹果花叶病毒）、线状（马铃薯卷叶病毒）的病毒和类菌质体起作（马铃薯卷叶病毒）的病毒和类菌质体起作用。而对杆状病毒（千日红病毒）无效。用。而对杆状病毒（千日红病毒）无效。（2）延长热处理时间，病毒钝化效果好，）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会同时也可能会钝化钝化植物组织中的植物组织中的抗性因子抗性因子而而降低处理效果。降低处理效果。（3）热处理极易使植物材料受热枯死，处）热处理极易使植物材料受热枯死，处理后只有一小部分植株能够理后只有一小部分植株能够存活存活，造成损失。，造成损失。香石竹（康乃馨）在香石竹（

50、康乃馨）在3840下经两个下经两个月处理可除去全部病毒。月处理可除去全部病毒。马铃薯在马铃薯在37下处理下处理1020天能除去卷天能除去卷叶病毒。叶病毒。2.7 提高脱毒效果提高脱毒效果2.7.1 物理处理物理处理1）高温处理）高温处理2）低温处理）低温处理2.7.2 化学处理化学处理2）低温处理，亦称冷疗法。）低温处理，亦称冷疗法。n n菊花植株在菊花植株在菊花植株在菊花植株在5 5条条条条件下分别处理件下分别处理件下分别处理件下分别处理4 4个月个月个月个月或或或或7.57.5个个个个月，月，月，月，n n没有菊花矮化病毒（没有菊花矮化病毒（没有菊花矮化病毒（没有菊花矮化病毒（CSVCSV

51、）的无病毒苗分别是）的无病毒苗分别是）的无病毒苗分别是）的无病毒苗分别是67%67%和和和和73%73%，n n没有菊花褪绿斑驳病毒（没有菊花褪绿斑驳病毒（没有菊花褪绿斑驳病毒（没有菊花褪绿斑驳病毒（CCMVCCMV）的无病毒苗分）的无病毒苗分）的无病毒苗分）的无病毒苗分别是别是别是别是22%22%和和和和49%49%，n n未经处理的茎尖则无脱毒效果。未经处理的茎尖则无脱毒效果。未经处理的茎尖则无脱毒效果。未经处理的茎尖则无脱毒效果。2.7.2 化学处理，又称化学疗法。化学处理，又称化学疗法。n n一些化学药品如一些化学药品如一些化学药品如一些化学药品如嘌呤和嘧啶类似物、氨基酸、抗嘌呤和嘧啶

52、类似物、氨基酸、抗嘌呤和嘧啶类似物、氨基酸、抗嘌呤和嘧啶类似物、氨基酸、抗生素生素生素生素处理，可在某种程度上抑制植物体内或离体处理，可在某种程度上抑制植物体内或离体处理，可在某种程度上抑制植物体内或离体处理，可在某种程度上抑制植物体内或离体叶片内病毒的合成，但仍不能使病毒失活。叶片内病毒的合成，但仍不能使病毒失活。叶片内病毒的合成，但仍不能使病毒失活。叶片内病毒的合成，但仍不能使病毒失活。n n三氮唑核苷三氮唑核苷三氮唑核苷三氮唑核苷用于防治一系列动物用于防治一系列动物用于防治一系列动物用于防治一系列动物DNADNA和和和和RNARNA病毒，病毒，病毒，病毒，对植物也有效。对植物也有效。对植

53、物也有效。对植物也有效。表表7-4 烟草外植体在三氮唑核苷条件下培养烟草外植体在三氮唑核苷条件下培养脱毒情况脱毒情况供体中的病供体中的病毒毒三氮三氮唑核苷核苷浓度度(mol/L)子代植株数子代植株数无病毒植株无病毒植株/%PVY马铃薯马铃薯Y病病CMV黄瓜花叶病毒黄瓜花叶病毒 TMV烟草花叶病毒烟草花叶病毒020.541.0205.0020.541.0205.0041.0205.0675248265869543719271201.912.5100.0021.725.9100.007.483.3第七章第七章 植物快速繁殖和脱毒植物快速繁殖和脱毒n n第一节第一节 植物快速繁殖的途径和方法植物快速

54、繁殖的途径和方法n n第二节第二节 快速繁殖中茎尖培养及脱毒快速繁殖中茎尖培养及脱毒n n第三节第三节 其他途径脱毒其他途径脱毒n n第四节第四节 脱毒苗的鉴定脱毒苗的鉴定n n第五节第五节 脱毒后防病毒再感染脱毒后防病毒再感染植物脱病毒方法植物脱病毒方法物理方法物理方法化学方法化学方法生物方法生物方法高温处理高温处理茎尖培养茎尖培养微体嫁接微体嫁接珠心培养珠心培养愈伤脱毒愈伤脱毒热处理脱毒热处理脱毒第三节 其他途径脱毒n n1 愈伤组织脱毒愈伤组织脱毒n n2 珠心胚培养脱毒珠心胚培养脱毒n n3 茎尖微体嫁接脱毒茎尖微体嫁接脱毒n n4 培育抗病毒栽培种培育抗病毒栽培种第三节第三节 其他途

55、径脱毒其他途径脱毒1 愈伤组织脱毒愈伤组织脱毒 通过植物器官或组织诱导产生愈伤组织，然后通过植物器官或组织诱导产生愈伤组织，然后从愈伤组织再诱导分化芽，长成植株，可以获从愈伤组织再诱导分化芽，长成植株，可以获得脱毒苗，这在得脱毒苗，这在天竺葵、马铃薯、大蒜、草莓、天竺葵、马铃薯、大蒜、草莓、枸杞枸杞等植物上已先后获得成功。等植物上已先后获得成功。n n理论依据：理论依据：理论依据：理论依据：感染病毒的愈伤组织细胞并非全部含感染病毒的愈伤组织细胞并非全部含感染病毒的愈伤组织细胞并非全部含感染病毒的愈伤组织细胞并非全部含有病毒。有病毒。有病毒。有病毒。n n原因：原因：原因：原因：可能因为细胞增殖

56、速度快过病毒复制速度；可能因为细胞增殖速度快过病毒复制速度；可能因为细胞增殖速度快过病毒复制速度；可能因为细胞增殖速度快过病毒复制速度；或者病毒复制能力衰退或丢失；或者细胞产生变或者病毒复制能力衰退或丢失；或者细胞产生变或者病毒复制能力衰退或丢失；或者细胞产生变或者病毒复制能力衰退或丢失；或者细胞产生变异，获得对病毒感染的抗性，最终表现出脱毒现异，获得对病毒感染的抗性，最终表现出脱毒现异，获得对病毒感染的抗性，最终表现出脱毒现异，获得对病毒感染的抗性，最终表现出脱毒现象。象。象。象。n n缺陷：缺陷：缺陷：缺陷：后代变异的几率大；有的愈伤组织不能分后代变异的几率大；有的愈伤组织不能分后代变异的

57、几率大；有的愈伤组织不能分后代变异的几率大；有的愈伤组织不能分化成苗。化成苗。化成苗。化成苗。愈伤组织热处理法愈伤组织热处理法从患病植株上取叶片（茎片、鳞片、花从患病植株上取叶片（茎片、鳞片、花器等）进行离体培养，诱导形成愈伤组器等）进行离体培养，诱导形成愈伤组织，然后将愈伤组织反复继代培养同时织，然后将愈伤组织反复继代培养同时兼用热处理。兼用热处理。常用的温度及处理时间常用的温度及处理时间v 37 38（2、4或或8周）周）v 50（315min)愈伤组织继代兼热处理钝化愈伤组织继代兼热处理钝化TMVTMV和和CMVCMV获获得烟草无病毒植株的效果得烟草无病毒植株的效果继代继代 无烟草花叶病

58、毒无烟草花叶病毒(TMV)无黄瓜花叶病毒无黄瓜花叶病毒(CMV)次数次数 25 30 37 25 30 37 0 0/20 8/21 -1 0/20 0/20 0/20 5/18 4/19 10/21 2 0/20 0/20 0/20 8/20 10/20 11/20 3 0/20 0/20 8/20 10/20 8/20 11/20 4 0/20 0/20 5/20 5 4/20 1/20 5/20结论结论:病毒种类不同病毒种类不同,愈伤组织反复继代兼热处理的效果愈伤组织反复继代兼热处理的效果不同；不同；TMV、CMV均经均经37热处理，脱毒效果最好。热处理，脱毒效果最好。2 珠心胚培养脱毒

59、珠心胚培养脱毒n n柑橘类多胚品种中除一个受精胚以外，尚有多个柑橘类多胚品种中除一个受精胚以外，尚有多个柑橘类多胚品种中除一个受精胚以外，尚有多个柑橘类多胚品种中除一个受精胚以外，尚有多个由珠心细胞形成的无性胚，称为由珠心细胞形成的无性胚，称为由珠心细胞形成的无性胚，称为由珠心细胞形成的无性胚，称为珠心胚珠心胚珠心胚珠心胚。n n病毒通过维管组织传播，病毒通过维管组织传播，病毒通过维管组织传播，病毒通过维管组织传播，珠心胚与维管束系统无珠心胚与维管束系统无珠心胚与维管束系统无珠心胚与维管束系统无联系联系联系联系，因此由珠心胚产生的植株全部均无病毒。，因此由珠心胚产生的植株全部均无病毒。，因此由

60、珠心胚产生的植株全部均无病毒。，因此由珠心胚产生的植株全部均无病毒。n n珠心胚大多是不育的，必须珠心胚大多是不育的，必须珠心胚大多是不育的，必须珠心胚大多是不育的，必须分离培养分离培养分离培养分离培养才能发育成才能发育成才能发育成才能发育成正常的幼苗。正常的幼苗。正常的幼苗。正常的幼苗。n n珠心胚培养技术对除去珠心胚培养技术对除去珠心胚培养技术对除去珠心胚培养技术对除去柑橘主要病毒柑橘主要病毒柑橘主要病毒柑橘主要病毒，如柑橘银，如柑橘银，如柑橘银，如柑橘银屑病、叶脉突出病、柑橘裂皮病、柑橘速衰病等屑病、叶脉突出病、柑橘裂皮病、柑橘速衰病等屑病、叶脉突出病、柑橘裂皮病、柑橘速衰病等屑病、叶脉

61、突出病、柑橘裂皮病、柑橘速衰病等的病毒，都十分有效。的病毒，都十分有效。的病毒，都十分有效。的病毒，都十分有效。该方法的缺点：该方法的缺点：存在存在20%30%左右的变异率，无病毒苗左右的变异率，无病毒苗苗期较长。苗期较长。柑橘柑橘要要68年才能结果。年才能结果。胚珠胚珠3 茎尖微体嫁接脱毒茎尖微体嫁接脱毒n n木本植物茎尖培养难以生根形成植株木本植物茎尖培养难以生根形成植株木本植物茎尖培养难以生根形成植株木本植物茎尖培养难以生根形成植株。n n将不带病毒的种子实生苗砧木培育在培养基上，再将不带病毒的种子实生苗砧木培育在培养基上，再将不带病毒的种子实生苗砧木培育在培养基上，再将不带病毒的种子实

62、生苗砧木培育在培养基上，再从成年无病毒树枝上切取茎尖（从成年无病毒树枝上切取茎尖（从成年无病毒树枝上切取茎尖（从成年无病毒树枝上切取茎尖（0.140.141.0mm1.0mm），），），），在砧木切断面上进行在砧木切断面上进行在砧木切断面上进行在砧木切断面上进行试管微体嫁接试管微体嫁接试管微体嫁接试管微体嫁接，就可获得无病，就可获得无病，就可获得无病，就可获得无病毒的幼苗。毒的幼苗。毒的幼苗。毒的幼苗。n n优点：优点：优点：优点：接穗在砧木上易成活，故可用很小的茎尖来培养，接穗在砧木上易成活，故可用很小的茎尖来培养，接穗在砧木上易成活，故可用很小的茎尖来培养，接穗在砧木上易成活，故可用很小的

63、茎尖来培养，去除病毒几率大，获得无病毒苗的可能性大。去除病毒几率大，获得无病毒苗的可能性大。去除病毒几率大，获得无病毒苗的可能性大。去除病毒几率大，获得无病毒苗的可能性大。苹果茎陷病毒的茎尖培养脱毒苹果茎陷病毒的茎尖培养脱毒接穗：接穗：0.2mm0.2mm茎尖茎尖砧木：无菌实生苗的胚轴（带两片子砧木：无菌实生苗的胚轴（带两片子叶）叶）方法：劈接法将接穗插入两片子叶之方法：劈接法将接穗插入两片子叶之间的组织中间的组织中微体嫁接法微体嫁接法(micrograftingmicrografting)脱除病毒的关键：脱除病毒的关键：要求剥离技术很要求剥离技术很高高 需要考虑砧木和需要考虑砧木和接穗对营养

64、组成的接穗对营养组成的不同要求；不同要求；与接穗的取材季与接穗的取材季节有密切关系（苹节有密切关系（苹果果46月取材嫁接月取材嫁接成活率较高。）成活率较高。）4 培育抗病毒栽培种培育抗病毒栽培种n n烟草和黄花烟草的杂交种具有TMV（烟草花叶病毒）抗性；n n马铃薯栽培种和野生种的杂种后代可抗PVY（马铃薯Y病）。第七章第七章 植物快速繁殖和脱毒植物快速繁殖和脱毒n n第一节第一节 植物快速繁殖的途径和方法植物快速繁殖的途径和方法n n第二节第二节 快速繁殖中茎尖培养及脱毒快速繁殖中茎尖培养及脱毒n n第三节第三节 其他途径脱毒其他途径脱毒n n第四节第四节 脱毒苗的鉴定脱毒苗的鉴定n n第五

65、节第五节 脱毒后防病毒再感染脱毒后防病毒再感染第五节第五节 脱毒苗的鉴定脱毒苗的鉴定n n鉴定原因：鉴定原因：鉴定原因：鉴定原因：n n利用生长点培养无毒苗的利用生长点培养无毒苗的利用生长点培养无毒苗的利用生长点培养无毒苗的成苗率成苗率成苗率成苗率和和和和脱毒率非常低脱毒率非常低脱毒率非常低脱毒率非常低，有时无毒株只占千分之几。有时无毒株只占千分之几。有时无毒株只占千分之几。有时无毒株只占千分之几。n n许多病毒具有许多病毒具有许多病毒具有许多病毒具有延迟的恢复期延迟的恢复期延迟的恢复期延迟的恢复期，所以在最初，所以在最初，所以在最初，所以在最初1818个月个月个月个月中每隔一定时间仍需进行鉴

66、定。中每隔一定时间仍需进行鉴定。中每隔一定时间仍需进行鉴定。中每隔一定时间仍需进行鉴定。n n无病毒植株容易无病毒植株容易无病毒植株容易无病毒植株容易再被感染再被感染再被感染再被感染，因此在繁殖的不同时，因此在繁殖的不同时，因此在繁殖的不同时，因此在繁殖的不同时期仍需重复进行鉴定。期仍需重复进行鉴定。期仍需重复进行鉴定。期仍需重复进行鉴定。鉴定方法鉴定方法血清鉴定法血清鉴定法生物鉴定法生物鉴定法分子检测法分子检测法电镜鉴定法电镜鉴定法直接观察直接观察指示植物法指示植物法1 直接观察法直接观察法n n直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状。直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状。直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状。直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状。n n缺点：缺点：缺点：缺点：寄主植物感染病毒后需要寄主植物感染病毒后需要寄主植物感染病毒后需要寄主植物感染病毒后需要较长的时间较长的时间较长的时间较长的时间才出才出才出才出现症状，有的并不能使寄主植物出现可见症状，现症状，有的并不能使寄主植物出现可见症状，现症状，有的并不能使寄主植物出现可见症状，现症状，有的并不能使