杀菌剂生物测定技术

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1、第 三 章 杀 菌 剂 生 物 测 定 技 术 u供 试 菌 种u杀 菌 剂 生 测 的 应 用u杀 菌 剂 生 测 方 法u杀 线 虫 生 测 方 法u杀 菌 剂 盆 栽 试 验u杀 菌 剂 田 间 药 效 试 验 杀 菌 剂 室 内 生 物 测 定 的 主 要 内 容是 将 杀 菌 物 质 作 用 于 细 菌 、 真 菌 或其 他 病 原 微 生 物 ， 根 据 其 作 用 的 大小 来 判 定 药 剂 的 毒 力 。 或 将 杀 菌 物质 施 于 植 物 ， 对 病 害 发 生 的 有 无 或轻 重 观 察 比 较 来 判 定 药 剂 的 效 果 。 供 试 病 原 菌 要 求在 分 类

2、 上 有 一 定 代 表 性 ， 最 好 是 重 要 的 农业 植 物 病 害 的 病 原 菌 ，而 且 容 易 培 养 ，多 代 繁 殖 不 易 产 生 变 异 。一 、 供 试 菌 种 番 茄 灰 霉 病 菌 （ Botrytis cintrea）番 茄 早 疫 病 菌 （ Alternaria solani）辣 椒 炭 疽 病 菌 （ Colletotrichum capsici）苹 果 轮 纹 病 菌 （ Physalospora berengeriana）苹 果 炭 疽 病 菌 （ Glomerella cingulata）苹 果 腐 烂 病 菌 （ Valsa mali）葡 萄 黑

3、 痘 病 菌 （ Elsinoe ampelina）葡 萄 白 腐 病 菌 （ Coniothyrium diplodiella）常 用 的 供 试 菌 种 水 稻 稻 瘟 病 菌 （ Piricularia oxyzae）小 麦 赤 霉 病 菌 (Gibberella zeae)小 麦 全 蚀 病 菌 （ Gaeumannomyces graminis）玉 米 大 斑 病 菌 （ Exserohilum turcicum）玉 米 弯 孢 病 菌 （ Curvularia lunocto）棉 花 枯 萎 病 菌 （ Fusarium oxysporium）枯 草 杆 菌 （ Bacillus

4、subtilis）白 菜 软 腐 病 菌 （ Erwinia carotovora sub sp.carotovora）水 稻 白 叶 枯 病 菌 （ Xanthomonas campestrispv.oryzae）等。 1 从 大 量 合 成 化 合 物 中 筛 选 出 有 可 能 作 为杀 菌 剂 的 化 合 物 2 为 特 定 的 植 物 病 害 寻 找 有 效 的 药 剂 ， 为此 需 要 进 行 筛 选 杀 菌 剂 毒 力 的 比 较 3 杀 菌 剂 作 用 方 式 及 作 用 机 制 的 研 究 二 、 杀 菌 剂 生 物 测 定 的 应 用 4 杀 菌 剂 抗 性 的 研 究 5

5、 杀 菌 剂 混 用 及 剂 型 研 究 6 杀 菌 剂 抗 雨 水 冲 刷 能 力 及 残 效 作 用 的 研 究 7 某 些 杀 菌 剂 （ 特 别 是 农 用 抗 菌 素 ） 的 微 量 分 析 孢 子 萌 发 法 管 碟 法含 毒 介 质 培 养 法 滤 纸 片 法 抑 菌 圈 法 孔 碟 法 生 长 速 率 法 最 小 浓 度 法 叶 碟 法 三 、 杀 菌 剂 室 内 主 要 生 测 方 法 孢 子 萌 发 法 是 历 史 最 悠 久 而 广 泛 被 采 用的 杀 菌 剂 毒 力 测 定 方 法 。 早 在 1807年 。Prevost 就 采 用 此 法 ， 后 经 不 少 学

6、者 改 进 ，使 之 日 趋 规 范 、 合 理 。1.孢 子 萌 发 法 原 理 ： 都 是 将 供 试 药 剂 附 着 在 载 玻 片 上 或 其他 平 面 上 ， 然 后 将 供 试 病 菌 孢 子 悬 浮 液 滴 在上 面 （ 或 将 施 于 悬 浮 液 和 药 液 混 合 后 滴 在 玻片 上 ） ， 在 保 温 ， 保 温 条 件 下 培 养 一 定 时 间后 镜 检 ， 以 孢 子 萌 发 率 判 断 杀 菌 剂 毒 力 。 孢子 萌 发 法 的 突 出 优 点 是 快 速 ， 试 验 当 天 即 可获 得 结 果 ， 尤 其 适 合 于 保 护 剂 的 筛 选 。 以 病 菌

7、孢 子 作 为 指 示 物 进 行 杀 菌 剂 毒 力 测 定 。用 孢 子 液 和 不 同 浓 度 的 药 液 混 合 ， 恒 温 保 湿 培 养 ，培 养 一 定 时 间 后 即 可 检 查 孢 子 萌 发 率 。 一 般 在 低倍 镜 下 ， 每 处 理 随 机 检 查 200个 孢 子 。孢 子 萌 发 的 标 准 孢 子 萌 发 率 （ %） 萌 发 孢 子 数 /检 查 孢 子 数 X100若 对 照 组 有 20%以 上 孢 子 不 萌 发 ， 则 应 重 做 。 对 照 萌 发 率 处 理 萌 发 率抑 制 孢 子 萌 发 率 （ %） X100 对 照 萌 发 率抑 制 率

8、计 算 将 抑 制 孢 子 萌 发 率 换 算 成 机 率 值 ， 作 为 Y；药 剂 的 浓 度 以 对 数 值 来 表 示 作 为 X， 直 线 回 归 ，求 得 回 归 方 程 Y a+bx， 可 得 LC50和 LC95.。LC50 和 LC95的 计 算 孢 子 萌 发 法 只 适 用 于 产 生 孢 子 的 真 菌 。一 般 的 供 试 病 菌 有 ：马 铃 薯 晚 疫 病 菌 （ Phytophthora infestans） 水 稻 稻 瘟 病 菌 （ Piricularia oryzae）小 麦 赤 霉 病 菌 （ Gibberella zeae）玉 米 大 斑 病 菌 （

9、Exserohilum turcicum）孢 子 萌 发 法 的 适 用 范 围 2.含 毒 介 质 培 养 法 有 3种 ：（ 1） 抑 菌 圈 法（ 2） 生 长 速 率 法 （ 3） 最 小 浓 度 法 基 本 原 理 是 在 已 经 接 种 供 试 菌 的 洋 菜 培 养基 （ 通 常 在 培 养 皿 内 ） 表 面 ， 利 用 各 种 方 法（ 管 碟 法 ， 滤 纸 片 法 ， 孔 碟 法 ） 使 药 液 和 培 养基 接 触 ， 恒 温 培 养 一 定 时 间 后 ， 由 于 药 剂 的 渗透 扩 散 作 用 ， 施 药 部 位 周 围 的 病 菌 被 杀 死 或 生长 受 到

10、抑 制 ， 从 而 产 生 了 抑 制 圏 。 根 据 抑 菌 圈的 大 小 来 比 较 不 同 杀 菌 剂 的 毒 力 大 小 。 （ 1） 抑 菌 圈 法 的 原 理 u抑 菌 圏 法 的 优 点 精 确 度 高 操 作 简 单u抑 菌 圏 法 的 缺 点 溶 解 性 扩 散 性抑 菌 圏 法 的 优 缺 点 抑 菌 圈 法 示 意 图含有孢子的培养基不同浓度的药液 根 据 施 加 药 剂 在 洋 菜 培 养 基 表面 的 方 式 ， 抑 菌 圈 法 又 分 为 管 碟 法（ 牛 津 杯 法 ） 、 滤 纸 片 法 、 孔 碟 法 。 （ 1） 用 灭 菌 蒸 馏 水 将 供 试 药 剂

11、配 制 成 一 系 列梯 度 浓 度 ， 一 般 57个 浓 度 。（ 2 ） 制 备 一 定 “ 浓 度 ” 的 供 试 菌 悬 浮 液 （ 如真 菌 ， 则 宜 用 孢 子 悬 浮 液 ） ， 浓 度 以 在 低 倍 镜（ 15X10倍 ） 下 每 视 野 80一 100个 左 右 孢 子 为 宜 。 管 碟 法 又 称 牛 津 杯 法 （ 3） 待 培 养 基 冷 至 50 左 右 （ 凭 经 验 估 计 ） ，迅 速 吸 取 10ml菌 液 加 入 培 养 基 内 ， 充 分 混 合 后 ，倒 入 灭 菌 的 培 养 皿 中 ， 制 成 含 菌 培 养 基 平 板 。 （ 4） 在 每

12、 皿 培 养 基 上 按 合 适 的 间 隔 放 置 6个不 锈 钢 小 管 （ 即 牛 津 杯 ， 外 径 8.0士 0.lmm。内 径 6.0士 0.1mm， 高 10.0士 0.lmm） ， 其 中 1个 管 为 对 照 ， 其 余 5管 为 5个 不 同 浓 度 的 药 液 ，在 适 合 的 温 度 下 培 养 一 段 时 间 ， 取 出 用 十 字交 叉 法 测 是 抑 菌 圈 的 直 径 。 抑 菌 圈 法 示 意 图 l上 述 操 作 应 尽 量 在 无 菌 条 件 下 进 行 ， 以 防 污 染l操 作 室 的 温 度 最 好 在 26 28 左 右 ， 如 室 温 太 低 ，

13、 则 50 左 右 的 培 养 基 在 操 作过 程 中 迅 速 冷 凝 ， 无 法 制 作 平 板l十 字 交 叉 法 测 量 抑 菌 圈 的 直 径 ， 消 除 误差 注 意 事 项 （1）配 制 不 同 浓 度 的 药 液（ 2） 配 孢 子 悬 浮 液 （ 3） 制 含 孢 子 的 平 板滤 纸 片 法 前 三 步 完 全 和 上 述 管 碟 法 相 同 （4）用 消 毒 镊 子 夹 取 灭 菌 的 圆 形 滤 纸 片（ 直 径 为 0.6或 0.8cm） 投 入 不 同 浓 度 药 液中 ， 1分 钟 后 取 出 ， 放 入 含 真 菌 孢 子 的 培 养 基 上 ， 每 皿 放 6

14、片 （ 5个 浓 度 各 1片 ，另 1片 为 对 照 片 ） ， 恒 温 培 养 一 定 时 间 ，测 抑 菌 圏 直 径 。 l各 滤 纸 片 间 距 要 适 合 ， 以 防 形 成 的 抑 菌 圈不 园l放 滤 纸 片 时 要 平 放 、 更 迅 速 、 准 确 、 放 下后 不 能 再 移 动l用 十 字 交 叉 法 测 量 抑 菌 圈 的 直 径注 意 事 项 用 灭 菌 后 的 打 孔 器 直 接 在 凝 固 好 的含 孢 培 养 基 上 打 成 圆 孔 ， 将 定 量 的 药液 滴 入 圆 孔 中 ， 恒 温 培 后 测 量 抑 菌 圏的 大 小 ， 进 行 杀 菌 剂 毒 力

15、比 较 。孔 碟 法 主 要 有 以 下 几 个 方 面 的1 对 供 试 菌 的 要 求 在 较 粗 放 的 比 较杀 菌 剂 毒 力 的 测 定 中 ， 对 菌 种 的 要 求 不必 过 严 ， 只 要 在 培 养 基 中 容 易 培 养 而 且抑 菌 圈 清 楚 的 均 可 采 用 。影响抑菌圈法测定结果的因素 特 别 是 为 某 一 特 定 病 害 寻 求 有 效 的 防 治 药 剂 时 ，实 际 上 不 可 能 对 供 试 菌 进 行 选 择 ， 但 以 水 平 扩 散法 作 生 物 定 量 测 定 ， 如 抗 菌 素 效 价 测 定 ， 则 必 须对 供 试 菌 有 如 下 的 要

16、 求 ： 对 被 测 定 的 药 剂 有 适 当 的 敏 感 性 ， 抑 菌 圈 界限 明 显 培 养 容 易 ， 生 长 迅 速 不 易 为 杂 菌 污 染 不 易发 生 变 异 容 易 作 成 接 种 菌 液 （ 菌 丝 体 或 孢 子 悬 浮 液 ） 菌 种 有 较 强 的 耐 热 能 力 2 对 药 剂 的 要 求 用 抑 菌 圈 法 测 定 一 种 药 剂 的 抑 菌 作 用 的 大 小 ， 有 一 定的 局 限 性 。 如 与 该 药 剂 的 理 化 性 质 有 密 切 的 关 系 。 如 是 否容 易 扩 散 。 若 有 很 好 的 扩 散 性 能 ， 就 能 真 实 反 映 该

17、 药 剂 的杀 菌 毒 力 。 如 由 于 大 多 数 抗 生 素 都 有 一 定 的 水 溶 性 ， 因 此 ，抑 菌 圈 法 为 抗 生 素 的 科 研 和 生 产 广 泛 采 用 。 而 有 相 当 一 部分 杀 菌 剂 的 原 药 是 不 易 溶 解 于 水 ， 故 扩 散 性 不 好 ， 要 用 该法 ， 就 要 用 适 量 的 乙 醇 或 丙 酮 溶 解 后 ， 再 用 水 稀 释 至 所 需的 浓 度 。 有 效 好 的 水 溶 性 将 不 同 浓 度 的 药 液 和 热 的 培 养 基混 合 ， 用 这 种 含 毒 培 养 基 培 育 病 ，以 病 原 菌 的 生 长 进 度

18、的 快 慢 来 判 定药 剂 的 毒 力 大 小 。 （ 2） 生 长 速 率 法 原 理 有 2种 ： 菌 落 达 到 一 定 的 大 小 所 需 时 间 ， 一 定 时 间 内 菌 落 的 直 径 大 小 。病 原 菌 生 长 的 表 示 方 法 优 点 ： 操 作 比 较 简 单 适 用 范 围 广 ， 适 用 于 乳 油 、 水 剂 、 可 湿 性粉 剂 等 重 复 性 好 。 只 要 操 作 认 真 ， 均 可 得 到 可 靠的 结 果生 长 速 率 法 的 优 缺 点 缺 点 ： 对 供 试 菌 种 要 求 严 格 ， 病 菌 要 易 于 培 养 ，生 长 较 快 且 边 缘 整

19、齐 、 产 孢 子 缓 慢 ， 而 且是 农 业 生 产 上 重 要 的 的 病 原 菌 。 对 供 试 药 剂 要 求 ， 有 一 定 的 耐 热 性 ， 遇热 不 易 分 解 。 苹 果 腐 烂 病 菌 （ Valsa mali）小 麦 纹 枯 病 菌 （ Rhzoctonia solani ）棉 花 枯 萎 病 菌 （ Fusarium oxysporium）葡 萄 白 腐 病 菌 （ Coniothyrium diplodiella）小 麦 全 蚀 病 菌 （ Gaeumannomyces graminis）辣 椒 疫 霉 病 菌 （ Phytophthora capsici）生 长

20、速 率 法 常 用 的 菌 种 （ 1） 制 备 菌 饼 ： 用 无 菌 的 打 孔 器 在 供 试 菌 种 边 缘打 下 菌 块 即 菌 饼 （ 在 无 菌 条 件 下 进 行 ）（ 2） 含 毒 培 养 基 的 制 备 ： 奖 供 试 药 剂 稀 释 成 一 系列 梯 度 浓 度 后 ， 准 确 取 一 定 量 的 药 液 加 入 到 热 的 培养 基 中 ， 混 匀 ， 倒 入 灭 菌 的 小 培 养 皿 中 （ 直 径 为6cm） ， 待 冷 凝 后 即 为 含 毒 培 养 基生长速率法 （ 3） 移 植 菌 饼 用 接 种 针 或 消 毒 的 摄 子 将 菌 饼反 面 （ 有 菌 丝

21、 的 一 面 向 下 和 培 养 基 贴 合 ） 移 植到 带 毒 培 养 基 平 板 上 ， 一 个 培 养 皿 最 好 接 一 个菌 饼 。（ 4） 测 定 菌 落 直 径 恒 温 培 养 到 预 定 时 间 后 ，取 出 培 养 皿 测 量 菌 落 直 径 。 每 个 菌 落 十 字 交 叉测 两 次 直 径 。 生 长 速 率 法 示 意 图菌饼含药剂的培养基 菌饼含毒培养基 纯 生 长 量 菌 落 直 径 菌 饼 直 径 对 照 的 纯 生 长 量 处 理 的 生 长 量抑 制 率 X100 对 照 的 纯 生 长 量 计 算 公 式 将 算 出 的 各 处 理 （ 浓 度 ） 的

22、抑 制 率 换 成 机率 值 ， 以 对 数 表 示 浓 度 ， 用 作 图 法 或 最 小 二乘 法 求 出 EC50或 EC95， 并 以 此 比 较 毒 力 。毒 力 方 程 的 计 算 在 比 较 粗 放 的 进 行 几 种 杀 菌 剂 的 毒力 比 较 时 ， 可 以 采 用 最 低 抑 制 浓 度 法 。 （ 3） 最 低 抑 制 浓 度 法 最 小 浓 度 法 基 本 原 理 是 药 剂 按 等 比 或 等 差 级 数 系 列 浓 度 和 培 养基 混 合 后 接 入 供 试 菌 ， 定 温 培 养 一 定 时 间 后 ，找 出 “ 终 点 ” （ 明 显 地 抑 制 供 试 菌

23、 生 长 发 育 的最 高 稀 释 倍 数 ， 即 最 低 浓 度 ） 的 那 个 浓 度 ， 即为 最 低 抑 制 浓 度 。 通 过 比 较 几 种 不 同 药 剂 的 最抵 抑 制 浓 度 即 可 比 较 其 毒 力 。 显 然 ， 最 低 抑 制浓 度 最 小 的 ， 其 毒 力 最 大 。 根 据 培 养 基 是 固 态 还 是 液 态 又 将 最 低 抑 制 浓 度 法分 为u液 体 培 养 基 稀 释 法u固 体 培 养 基 稀 释 法 取 若 干 只 灭 菌 试 管 ， 顺 序 编 号 ， 在 每 只 试 管中 加 入 适 合 供 试 菌 生 长 的 液 体 培 养 基 Nml

24、， 然 后在 第 一 号 试 管 中 加 入 一 定 浓 度 的 供 试 药 液 Xml，充 分 混 合 后 自 第 一 管 中 取 Nml放 入 第 二 管 ， 充 分混 合 后 取 Xml加 入 第 3管 ， 直 到 最 后 一 管 不 加 药液 作 为 对 照 。 自 倒 数 第 二 管 中 取 出 Xml弃 去 不 用 ，如 此 所 得 的 一 系 列 浓 度 顺 序 相 差 一 倍 。 液 体 培 养 基 稀 释 法 在 各 管 中 加 入 供 试 菌 悬 浮 液 一 滴 ， 在 该 供试 菌 最 适 温 度 下 培 养 一 定 时 间 ， 取 出 观 察“ 终 点 ” ， 一 般

25、以 混 浊 度 为 准 ， 即 以 某 编 号试 管 以 下 不 再 发 生 明 显 混 浊 现 象 ， 这 一 试 管的 浓 度 就 是 最 低 抑 制 浓 度 。 12345CK 用 灭 菌 蒸 馏 水 将 供 试 药 制 按 等 比 或等 差 级 数 稀 释 一 系 列 药 液 浓 度 。 分 别 取每 种 浓 度 的 药 液 Xml分 放 50ml灭 菌 三 角瓶 ， 加 入 灭 菌 并 冷 至 60左 右 的 培 养 基Yml， 立 即 摇 匀 倒 入 培 养 皿 内 凝 固 。 用接 种 环 沾 取 供 试 菌 液 进 行 划 线 培 养 ， 至一 定 时 间 后 观 察 抑 制

26、病 菌 生 长 的 最 高 稀释 倍 数 即 最 低 抑 制 浓 度 。固 体 培 养 基 稀 释 法 接 菌 饼 ，若 不 能 生长 ， 此 浓度 是 最 低抑 制 浓 度 划 线 接 细 菌 ，不 能 生 长 ，此 浓 度 为 最低 抑 制 浓 度 叶 碟 法 比 较 简 易 ， 能 在 室 内 进 行 ， 比 孢 子 萌发 法 和 含 毒 介 质 培 养 法 接 近 生 产 实 际 ， 可 看 作是 盆 栽 试 验 的 过 渡 阶 段 。3.叶 碟 法 叶 碟 法 的 基 本 原 理 是 将 容 易 感 染 供 试菌 的 植 物 叶 片 （ 如 蚕 豆 叶 片 ） 经 不 同 浓 度的

27、药 剂 处 理 后 平 放 在 培 养 皿 内 ， 再 将 一 块培 养 好 的 供 试 菌 菌 丝 体 （ 如 纹 枯 病 菌 ） 放在 叶 片 上 ， 经 保 湿 培 养 一 定 时 间 ， 检 查 其病 斑 面 积 ， 并 以 此 衡 量 供 试 药 剂 的 毒 力 。 还 有 一 种 叶 碟 漂 浮 法 ， 其 原 理 是将 容 易 感 染 供 试 菌 的 植 物 叶 片 （ 如 黄瓜 叶 片 ） 制 成 直 径 1.5cm叶 碟 ， 漂 浮在 不 同 浓 度 的 药 液 中 ， 将 供 试 菌 （ 如黄 瓜 霜 霉 病 菌 ） 孢 子 悬 浮 液 定 量 滴 加在 叶 碟 上 ， 在

28、 光 照 下 培 养 一 定 时 间 ，调 查 病 斑 面 积 。叶 碟 漂 浮 法 四 、 杀 线 虫 剂 的 生 物 测 定 技 术供 试 线 虫 ： 番 茄 根 结 线 虫 Meloidogyne incognita马 铃 薯 茎 线 虫 Ditylenchus destructor Thorne 但 如 果 是 针 对 某 种 线 虫 筛 选 合 适 的 杀 线 虫剂 ， 则 只 能 以 此 种 线 虫 为 指 示 生 物 。 杀线虫剂的生物测定方法依药剂性质分为两类：（一）非熏蒸剂测定方法（二）熏蒸剂测定方法 v将 供 试 药 剂 蒸 馏 水 稀 释 成 57个 梯 度 浓 度v取

29、上 面 药 液 1.5ml加 入 一 个 小 玻 皿 （ 高 1cm直 径 2 cm） 中v每 种 浓 度 重 复 3皿v对 照 则 加 入 1.5ml蒸 馏 水v将 分 离 的 供 试 线 虫 经 清 水 漂 洗 后 挑 入 小 皿 中 ， 皿 1520条 /皿v将 盛 有 药 液 和 线 虫 的 小 皿 置 于 衬 有 湿 滤 纸 保 温 的 大 培 养 皿 中 ， 在 2425 恒 温 箱 中 保 持 24h或 48h后 取 出 ， 在 双 目 解 剖 镜 下 检 查 线 虫 的 存 活 情 况 。（）非熏蒸剂的生物测定 通常将不能活动的，伸长的线虫或是虫体有着凸凹不平的弯曲部分，内含物

30、为黑色颗粒者，都定为死线虫。1、触动法2、染色法线 虫 死 亡 的 判 断 标 准 12345CK 死 亡 线 虫 数死 亡 率 X100 供 试 线 虫 总 数 将 浓 度 取 对 数 值 ， 线 虫 死 亡 率 转 换 成 机 率 值 ，用 杀 虫 剂 毒 力 测 定 中 的 方 法 求 出 LC50或 LC95，并 以 此 来 比 较 毒 力 大 小 。计 算 公 式 以 熏 蒸 作 用 为 主 的 杀 线 虫 剂 的 毒 力 测 定 和 杀 虫剂 的 情 形 相 似 。 在 0.33L熏 蒸 瓶 壁 上 贴 一 滤 纸 ， 瓶 底 放 一 小 玻皿 （ 高 1cm， 直 径 2 cm）

31、 ， 皿 中 注 入 蒸 馏 水 ， 使 水位 高 2mm左 右 ， 放 入 1520条 供 试 线 虫 ， 同 时 在 瓶底 放 一 滤 纸 片 （ 1X 3mm） ， 用 微 量 注 射 器 将 供 试药 剂 病 加 在 滤 纸 上 。 测 定 要 求 设 5个 浓 度 ， 加 二 溴氯 丙 烷 ， 可 设 置 100、 50、 25、 12、 6mg L和 不 给药 对 照 ， 重 复 3次 。 2425 下 熏 蒸 24h， 检 查 线 虫死 亡 率 。（ 二 ） 熏 蒸 剂 的 毒 力 测 定 线 虫滤 纸 片 五 、 杀 菌 剂 盆 栽 试 验 药剂（杀菌剂）病原菌室内生测示意图

32、寄主植物杀菌剂病原菌 杀菌剂盆栽药效试验利用盆、钵培育幼嫩植物进行生物测定，是研究杀菌剂的有效方法之一。盆栽试验法克服了在离体条件下对病菌无效而在活体条件下有效的化合物的漏筛。同时，盆栽试验法更接近于大田实际情况，所得资料对指导生产实际有较高的参考价值。此外，盆栽试验所用材料易得，条件易于控制，在当前的杀菌剂研究中，越来越重视盆栽试验法，有些公司在进行活性筛选时甚至只用盆栽试验法，而淘汰了离体试验法。 1和大田药效试验相比，供试菌的培养不受自然条件限制，可较快得出结果，可用作大量化合物的活性筛选2多种条件易于控制，测定结果比较稳定可靠 3接近大田实际情况，其结果对生产实践有较大的参考价值。 其

33、不足之处是：和室内生测方法相比，由于有寄主植物参与，测定工作比较麻烦而且测定周期比较长。室内盆栽毒力测定的优点 对供试植物的要求：容易栽培生长迅速是主要农作物如水稻、小麦、黄瓜、棉花、番茄等等。供试植物 供试病菌基本上是由供试植物决定的。如供试植物是水稻，就用水稻主要病害（如水稻稻瘟病，水稻纹枯病）的病原菌；若供试植物是小麦，就用小麦主要病害（全蚀、赤霉、锈病、白粉、病毒病）；供试植物是玉米，就用玉米主要病（大小斑病）。 供试病菌 影响杀菌剂盆栽的因素v植物的抗病性v病原菌的致病力v环境条件（主要是温湿度） 植物的抗病性供试植物应选感病品种或者中抗品种，不能选种抗病性品种或免疫品种。 供试菌种

34、的致病力，是盆栽试验成功与失败的主要因素。病原菌的致病力不是固定不变的性状。在同一病原菌中，有致病力强弱不同的菌系和小种。病原菌的致病性与其生理、生化及其他生物学特性有密切关系，在适应新的环境的同时，病原菌可以改变其致病性。如用高粱粒培养的水稻稻瘟病菌孢子和采自田间的感病稻茎节经保湿后产生的孢子，其致病力相差较大，一般情况下，后者的致病力较强。即使同是人工培养基产生的孢子，因培养基配方不同，培养条件不同，其孢子的致病能力也不同，这些都应加以注意。病原菌的致病力 环境条件温度湿度光照 病害的传播方式不同，接菌方法也不同。必须首先了解要接种的病原菌的主要传播方式和侵染途径。气流及雨水传播的病害可用

35、喷雾法或喷粉法接菌。如病菌主要由气孔侵入，接菌时应注意在叶背面接菌。喷雾法接菌一般是将孢子悬浮液喷在植物表面，为了使孢子在悬浮液中均匀分散，可适当加入湿润剂，这不但有利于孢子分散，而且也有利于悬浮液在植株上附着。如果孢子在悬浮液中分散不匀，植株发病后有些叶片可能病斑连成一片，有些叶片则没有或很少有病班，给病情调查带来困难和误差，孢子悬浮液中孢子的密度以及是否加入粘着剂对发病影响很大。以稻瘟病菌的接菌为例，稻瘟病菌孢子以在低倍镜下（10 X 15）每视野100个孢子为宜，在孢子悬浮液中加入0.25的明胶作粘着剂也会收到良好效果。 主要的接种方法 喷雾接菌最好用特制的喷雾装置。粗放一点的工作也可用

36、家庭卫生用小型手持喷雾器。接种锈菌和白粉菌时，可先在小麦植株上喷水，以造成在叶片上有水膜，然后用滑石粉将孢子粉稀释，采用喷粉装置接菌。水稻纹枯病菌可在栽种水稻的盆水中接种菌核，但更多的是用其菌丝块夹在稻茎基部叶鞘上。水稻白叶枯病菌常采用针刺接菌，或剪去部分稻叶，造成人工伤口，再喷白叶枯病菌细菌）悬浮液接菌。接种方法 由 种 子 传 染 的 病 害 可 用 病 菌 孢 子拌 种 或 孢 子 悬 浮 液 浸 种 法 进 行 接 菌 ；而 土 壤 传 染 病 害 则 可 将 病 原 菌 拌 入土 壤 中 接 种 或 将 植 物 根 部 浸 入 孢 子悬 浮 液 中 进 行 接 种 。接种方法 环 境

37、 条 件 不 但 影 响 供 试 植 物 的 正 常 生 长 ，更 重 要 的 是 影 响 接 菌 的 成 败 。 为 创 造 有 利于 病 菌 入 侵 的 条 件 ， 应 十 分 注 意 对 环 境 因子 如 光 照 、 温 度 、 湿 度 等 的 控 制 。发病的环境因子 在 设 备 良 好 的 研 究 所 或 公 司 ， 拥 有 现 代 化温 室 ， 或 人 工 气 候 室 ， 光 照 及 温 、 湿 度 可 随 意调 节 ； 但 在 基 层 研 究 单 位 ， 条 件 较 差 ， 环 境 因子 的 控 制 就 不 那 么 容 易 。 如 果 没 有 专 门 的 温 室 ，试 验 应 安

38、 排 在 自 然 条 件 下 供 试 病 菌 发 生 的 季 节进 行 ， 以 满 足 对 温 度 的 要 求 。 湿 度 的 控 制 比 温度 更 重 要 ， 只 有 满 足 病 菌 对 湿 度 的 要 求 ， 病 菌才 能 萌 发 生 长 。环境条件 光 照 一 般 对 孢 子 萌 发 入 侵 不 利 ， 但寄 主 植 物 却 要 在 光 照 下 才 能 正 常 生 长 。如 利 用 自 然 光 ， 最 好 在 下 午 太 阳 落 山 后接 菌 ， 这 样 ， 经 过 一 个 晚 上 ， 大 多 数 病菌 孢 子 可 以 萌 发 入 侵光照 盆 栽 试 验 应 采 用 比 较 精 密 的

39、喷 雾 或 喷 粉 装 置 ，定 量 喷 洒 供 试 药 剂 。 施 药 时 间 则 依 试 验 目 的 而有 所 不 同 。 1 测 定 药 剂 的 保 护 效 果 先 喷 药 ， 然 后接 种 病 原 菌 ， 2 测 定 药 剂 的 治 疗 效 果 先 接 种 病 原 菌 ，待 病 菌 入 侵 后 （ l 2天 ） 再 施 药 ； 施 药 3 测 定 药 剂 的 内 吸 作 用 如 果 将 药 剂 喷 在 植株 上 ， 一 般 先 喷 药 ， 随 即 接 菌 ， 亦 可 喷 药 后 1天接 菌 。 如 果 将 药 剂 施 于 根 际 土 壤 中 ， 则 在 施 药 后1 2天 再 接 菌

40、， 以 保 证 有 足 够 的 药 剂 内 吸 传 导 至上 部 叶 片 。 4 测 定 药 剂 的 持 效 期 一 次 施 药 后 ， 间 隔1天 、 2天 、 4天 、 6天 、 8天 或 更 长 时 间 分 期 接 种病 原 菌 ， 5 测 定 抗 雨 淋 作 用 先 喷 药 ， 用 喷 雾 装 置 降水 淋 洗 一 定 时 间 以 模 拟 降 一 次 小 雨 、 中 雨 或 大 雨 ，然 后 接 种 病 原 菌 。 盆 栽 试 验 常 用 计 数 法 和 分 级 计 数 法 调 查 植 株 的 发病 情 况 。 1 计 数 法 方 法 简 单 易 行 适 合 于 叶斑 病 类 病 害

41、。 调 查 每 一 叶 （ 或 取 样 调 查 ， 如 只 调查 每 个 植 株 上 部 二 个 叶 片 ） 上 的 病 班 数 ， 求 得 平均 每 叶 病 斑 数 ， 并 以 此 比 较 发 病 情 况 ， 计 算 防 治效 果 。 但 如 果 病 斑 数 目 太 多 ， 互 相 重 叠 ， 或 病 斑面 积 相 差 悬 殊 ， 这 种 方 法 就 不 太 适 合 。 效 果 调 查 2 分 级 计 数 法 分 级 计 数 法 也 比 较 简单 ， 也 有 一 定 的 准 确 性 ， 许 多 病 害 都 可采 用 这 一 方 法 来 调 查 。 将 病 害 分 级 调 查后 计 算 病 情

42、 指 数 及 防 治 效 果 。 六 、 杀 菌 剂 田 间 药 效 试 验 2. 杀 菌 剂 (Fungicides) 药 效 表 示 方 法 100）数检查总苗（株、叶、秆病苗（株、叶、秆）数发病率（）100值检查总叶数最高病级）（病级叶数该病级值病性指数（） 1001对照区相对防效照区的相对防效处理区的相对防效对更正相对防效（）100数）喷药前发病率（病性指病性指数）数）喷药后发病率（喷药前发病率（病性指相对防治效果（） 一 、 填 空 ：1.杀 菌 剂 的 室 内 生 测 方 法 有 孢 子 萌 发 法 、 生长 速 率 法 、 抑 菌 圈 法 和 最 小 抑 制 浓 度 法 等 。2

43、.在 线 虫 的 生 测 中 ， 判 断 线 虫 死 亡 的 方 法 有触 动 法 和 染 色 法 。3.在 杀 菌 剂 温 室 植 株 测 定 中 ， 对 供 试 植 物 要求 容 易 栽 培 、 生 长 迅 速 、 是 主 要 农 作 物如 水 稻 、 小 麦 、 黄 瓜 、 棉 花 、 番 茄 等 。 4.温 室 盆 栽 测 定 的 接 种 方 法 有 多 种 ， 气 流 和 雨 水传 播 的 病 害 ， 可 以 采 用 喷 洒 法 、 喷 粉 法 及 涂 抹 法等 接 种 方 法 。 种 传 病 害 可 以 采 用 拌 种 的 方 法 和 浸种 法 等 进 行 。 土 传 病 害 可 以 采 用 土 壤 接 种 法 ， 也可 以 采 用 浸 根 接 种 法 。 二 、 简 答 题1.生 长 速 率 法 有 哪 些 优 缺 点 ？2.抑 菌 圈 法 有 哪 些 优 缺 点 ？3.杀 菌 剂 盆 栽 毒 力 测 定 的 优 点 有 哪 些 ？4.影 响 杀 菌 剂 盆 栽 的 因 素 有 哪 些 ？