动物细胞融合和单克隆抗体用课件.ppt

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1、 复 习 巩 固 ： 1.植 物 体 细 胞 杂 交 2.植 物 组 织 培 养 2010-3-26 3 植 物 体 细 胞 杂 交 植 物 细 胞 A 植 物 细 胞 B原 生 质 体 A 原 生 质 体 B原 生 质体 融 合杂 种 细 胞组 织 培 养杂 种 植 株 去 细 胞 壁纤 维 素 酶 、果 胶 酶 化 学 法物 理 法 诱 导 2010-3-26 4 1.概 念 ： 动 物 细 胞 融 合 （ cell fusion)， 又称 体 细 胞 杂 交 （ somatic hybridiazation） ，是 指 两 个 或 更 多 个 相 同 或 不 同 细 胞 结 合 形 成一

2、 个 细 胞 的 过 程 。一 、 动 物 细 胞 融 合融 合 后 形 成 的 具 有 原 来 两 个 或 多 个 细 胞 遗 传 信 息的 单 核 细 胞 ， 称 为 杂 交 细 胞 。 2010-3-26 5 2、 动 物 细 胞 融 合 基 本 原 理 ：与 植 物 原 生 质 体 融 合 的 基 本 原 理 相 同 ，即 细 胞 膜 的 流 动 性3、 诱 导 方 式物 理 法 ：化 学 法 ：生 物 法 ： 灭 活 的 病 毒 例 如 ： 仙 台 病 毒 2010-3-26 6 灭 活 的 病 毒 颗 粒 黏 附 于 细 胞 表 面细 胞 膜 被 病 毒 颗 粒 穿 通细 胞 膜

3、连 接细 胞 融 合 ， 形 成 杂 种 细 胞（ 细 胞 膜 具 有 一 定 的 流 动 性 ）生 物 法 ： 灭 活 的 病 毒 （ 丧 失 感 染 性 、 保 留 抗 原 结 构 ） 2010-3-26 7 病 毒 促 使 细 胞 融 合 的 主 要 步 骤 如 下 ：1.两 个 原 生 质 体 或 细 胞 在 病 毒 黏 结 作 用 下 彼 此 靠 近 ；2.通 过 病 毒 与 原 生 质 体 或 细 胞 膜 的 作 用 使 两 个 细 胞 膜 间 互 相 渗 透 ， 胞 质 互 相 渗 透 ；3.两 个 原 生 质 体 的 细 胞 核 互 相 融 合 ， 两 个 细 胞 融 为 一

4、体 ；4.进 入 正 常 的 细 胞 分 裂 途 径 ， 分 裂 成 含 有 两 种 染 色 体 的 杂 种 细 胞 。 2010-3-26 8 4、 过 程 ：动 物 细 胞 A 动 物 细 胞 B诱 导 ， 融 合2个 完 整 的 杂 交 细 胞 AB有 丝 分 裂（ 膜 融 合 、 诱 导 方 法质 融 合 、 核 融 合 ）单 核 细 胞 2010-3-26 9 5、 动 物 细 胞 融 合 技 术 的 发 展 简 史 告 诉 我们 ： 科 学 技 术 是 不 断 发 展 的 。 那 么 ， 实现 动 物 细 胞 融 合 有 什 么 意 义 呢 ？打 破 生 殖 隔 离 ， 使 远 缘

5、 杂 交 成 为 可 能 ；广 泛 应 用 多 个 学 科 领 域 ；重 要 用 途 ： 2010-3-26 10 6、 植 物 体 细 胞 杂 交 和 动 物 细 胞 融 合 的 比 较比 较 项 目 植 物 体 细 胞 杂 交 动 物 细 胞 融 合细 胞 融 合 原 理细 胞 融 合 的 方 法诱 导 方 法用 途 制 备 单 克 隆 抗 体获 得 杂 种 植 株 细 胞 膜 的 流 动 性细 胞 膜 的 流 动 性细 胞 的 全 能 性去 除 细 胞 壁 后 诱 导原 生 质 体 融 合 使 细 胞 分 散 后 诱 导细 胞 融 合物 理 （ 离 心 、 振 荡 、电 刺 激 ）化 学

6、 （ 聚 乙 二 醇 ） 物 理 、 化 学 方 法（ 同 左 ）灭 活 的 病 毒 2010-3-26 11 二 、 单 克 隆 抗 体 回 顾抗 体 是 机 体 受 抗 原 刺 激 后 产 生 的 、 并 能 与 该 抗 原发 生 特 异 性 结 合 的 具 有 免 疫 功 能 的 球 蛋 白 。主 要 分 布 在 血 清 中 。“ 克 隆 ” 从 英 文 “ clone” 音 译 而 来 ， 是 指 从 一 个 共同 祖 先 ， 通 过 无 性 繁 殖 的 方 法 产 生 出 来 的 一 群 遗 传 特性 相 同 的 DNA分 子 ， 细 胞 或 个 体 。 在 细 胞 水 平 指 动物

7、 细 胞 培 养 . 2010-3-26 12 由 单 个 B淋 巴 细 胞 经 过 无 性 繁 殖 （ 克 隆 ） 形成 基 因 型 相 同 的 细 胞 群 ， 这 一 细 胞 群 所 产 生的 化 学 性 质 单 一 、 特 异 性 强 的 抗 体 。 1、 单 克 隆 抗 体 概 念 : 2010-3-26 13 自 主 阅 读 P52： 抗 体 的 传 统 生 产 方 法及 缺 陷 是 什 么 ？ 2010-3-26 14 B淋 巴 细 胞 特 点 ： .每 一 个 B淋 巴 细 胞 只 能 产 生 一 种 抗 体 。 .B淋 巴 细 胞 受 抗 原 刺 激 后 ， 可 以 产 生 抗

8、 体 。 .动 物 体 内 的 B淋 巴 细 胞 可 以 产 生 百 万 种 以 上的 抗 体 ， 每 种 抗 体 对 特 定 的 抗 原 具 有 特 异 性 免疫 作 用 。 2010-3-26 15 怎 样 才 能 大 量 生 产 单 克 隆 抗 体 ？提 示 1： 仅 用 细 胞 培 养 技 术 可 行 吗 ？提 示 2： 我 们 所 学 的 哪 种 细 胞 是 可 以 无 限 增 殖 的 ？提 示 3： 有 什 么 方 法 能 使 B细 胞 产 生 抗 体 的 能 力 和 肿 瘤 细 胞 无 限 增 殖 能 力 同 时 具 备 呢 ？ 2010-3-26 16 2、 单 克 隆 抗 体

9、 的 制 备 过 程 2010-3-26 17 B淋 巴 细 胞注 射 特 定抗 原 蛋 白 骨 髓 瘤 细 胞 培 养 骨 髓 瘤 细 胞融 合 （ 只 考 虑 两 两 融 合 ）培 养 液 中 细 胞 有 几种 类 型 ？ 融 合 细 胞几 种 类 型 ？骨 髓 瘤 细 胞 -骨 髓 瘤 细 胞B淋 巴 细 胞 - B淋 巴 细 胞B淋 巴 细 胞 -骨 髓 瘤 细 胞多 种 杂 交 细 胞 在 具 有 筛 选 作 用 的 培 养 基 上 培 养专 一 抗 体 检 验 阳 性克 隆 上 述 杂 交 细 胞 分 开 不 同 杂 交 细 胞 ， 克 隆 专 一 抗 体 ，检 验 阳 性 细 胞

10、 单 克 隆 抗 体注 射 到 小 鼠 体 内 体 外 培 养 该 细 胞 继 承 双 亲 细 胞的 遗 传 特 性 ， 既 能 产 生 专一 抗 体 又 能 无 限 增 殖 。杂 交 瘤 细 胞 有 何 特 点 ？特 异 性 强 ， 灵 敏 度 高 2010-3-26 18 比 较 项 目 第 一 次 筛 选 第 二 次 筛 选原 理 在 选 择 性 培 养 基 中 添加 某 种 药 物 ， 未 融 合的 亲 本 细 胞 和 融 合 的具 有 同 种 核 的 细 胞 都会 死 亡 ， 只 有 融 合 的杂 种 细 胞 才 能 生 长 抗 原 抗 体 的特 异 性 结 合目 标 杂 交 瘤 细

11、 胞 既 能 无 限 增 殖 ，又 能 产 生 特 异性 抗 体 的 杂 交瘤 细 胞 2010-3-26 19 3.单 克 隆 抗 体 的 应 用 ： 作 为 诊 断 试 剂 ： 准 确 识 别 各 种 抗 原 物 质 ， 并 与 一 定 抗 原 特 异 性 结 合 。 优 点 ： 准 确 、 高 效 、 简 易 、 快 速 用 于 运 载 药 物 ： 制 成 “ 生 物 导 弹 ”治 疗 疾 病 ： 主 要 用 于 癌 症 治 疗 2010-3-26 20 2010-3-26 21 两 个 过 程 动 物 细 胞 融 合 过 程单 克 隆 抗 体 制 备 过 程三 个 “ 一 ” 一 个

12、诱 导 细 胞 融 合 的 新 方 法一 个 新 细 胞一 个 优 势课 堂 小 结 灭 活 的 病 毒 杂 交 瘤 细 胞 单 克 隆 抗 体 特 异 性 强 、 灵 敏 度 高 的 优 势 2010-3-26 22形 成 杂 种 细 胞获 得 杂 种 植 株结 果 物 理 、 化 学 方 法（ 同 左 ）灭 活 的 病 毒物 理 （ 离 心 、 振荡 、 电 刺 激 ）化 学 （ 聚 乙 二 醇 ）诱 导 方 法 细 胞 膜 的 流 动 性细 胞 膜 的 流 动 性 、植 物 细 胞 全 能 性原 理 动 物 细 胞 融 合植 物 体 细 胞 杂 交比 较 项 目1、 植 物 、 动 物

13、细 胞 融 合 的 比 较课 堂 小 结融 合 前 处 理 用 纤 维 素 酶 、果 胶 酶 去 壁 用 胰 蛋 白 酶使 细 胞 分 散 2010-3-26 23 2、 单 克 隆 抗 体 制 备 过 程B淋 巴 细 胞骨 髓 瘤 细 胞 诱 导融 合 B-B细 胞B-瘤 细 胞瘤 -瘤 细 胞 选 择 培 养 杂 交 瘤 细 胞（ B-瘤 细 胞 ）克 隆 化 培 养抗 体 检 测 产 生 所 需抗 体 的 杂交 瘤 细 胞 体 外 培 养小 鼠 腹 腔 内 增 殖 单 克 隆 抗 体 2010-3-26 24 B体 外 培 养 骨 髓 瘤 细 胞杂 交 瘤 细 胞足 够 数 量 的 细

14、胞 群注 射 到小 鼠 腹 腔A C 1.右 图 为 某 同 学 根 据 杂 交 瘤 技 术 的方 法 ， 设 计 的 生 产 破 伤 风 杆 菌 抗 体的 实 验 方 案制 备 单 克 隆 抗 体不 能 ， 没 有 将 抗 原 注 入 小 鼠 体 内 ， 无法 获 得 产 生 单 一 抗 体 的 B淋 巴 细 胞 。(1).该 实 验 方 案 的 目 的 是 ： _(2).该 方 案 能 达 到 预 期 效 果吗 ？ 为 什 么 ？ 2010-3-26 25 B体 外 培 养 骨 髓 瘤 细 胞杂 交 瘤 细 胞足 够 数 量 的 细 胞 群注 射 到小 鼠 腹 腔A C (3)A是 从 小

15、 鼠 的 脾 脏 中 取得 _ 该 细 胞 能够 产 生 _ 。(4)图 中 B为_过 程 ，常 用 _作 为 诱 导 剂 ， 该 细 胞 继 承_的 遗 传 特 性 ，既 能 _ ,又 能_。B淋 巴 细 胞抗 体细 胞 融 合灭 活 的 病 毒双 亲 细 胞 产 生 专 一 抗 体无 限 增 殖 2010-3-26 26 B体 外 培 养 骨 髓 瘤 细 胞杂 交 瘤 细 胞足 够 数 量 的 细 胞 群注 射 到小 鼠 腹 腔A C （ 5） _ 技 术 是 单 克 隆 抗 体 的 技 术支 持 。 动 物 细 胞 培 养（ 6） 单 克 隆 抗 体 的 特 点 _， 并可 大 量 制 备 。特 异 性 强 ， 灵 敏 度 高