微生物细菌鉴定试验汇总

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1、常用细菌生化反应n触酶试验n凝固酶试验n胆汁溶菌试验n氧化/发酵试验n氧化酶试验n苯丙氨酸脱氨酶试验 n硝酸盐还原试验n糖发酵试验n吲哚试验（靛基质试验）n甲基红试验 n V-P（Voges-Proskauer）试验 n枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验n克氏双糖铁（KIA）复合试验 n动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验 u原理： 有触酶的细菌能催化过氧化氢生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。触酶试验 u方法：用接种环取备检菌少许，置于洁净的玻片上，滴加3%的过氧化氢12滴，观察结果。试管法：用洁净的玻棒蘸取待检菌少许，置于装有3%过氧化氢的试管内，观察结果。触酶试验方法 触酶试验结果应 用

2、 ： 用 于 革 兰 阳 性 球 菌 初 步 分 属 。注 意 事 项 ： 血浆凝固酶试验u原理： 有些细菌能产生血浆凝固酶，可以使人和动物血浆中的纤维蛋白原转化成纤维蛋白，从而使血浆凝固。 u方法：玻片法：取洁净玻片一张，加生理盐水两小滴于玻片两端，用接种环挑取待检菌落和对照菌均匀涂于盐水中，制成浓菌液，加兔或人血浆一滴于菌液中，观察结果。试管法：于3支试管中分别加入1:4稀释的血浆0.5ml，1支管加入待检菌肉汤培养物0.5ml,另两支分别加阴阳性对照菌肉汤培养物0.5ml，35培养34h后观察结果。 u应用：主要用于金葡菌的鉴定。血浆凝固酶试验方法 (-)凝 固 酶 (+) 1） 凝 固

3、 酶 试 验 玻 片 法 测 定 结 合 型 凝 固 酶 ； 试 管 法 测 定 分 泌 型 凝 固 酶 。 金 黄 色 葡 萄 球 菌 、中 间 型 葡 萄 球 菌 呈 现 阳 性 反 应 。 路 邓 葡 萄 球 菌 产 生 结 合 型 凝 固 酶 而 不 分 泌 游离 型 凝 固 酶 , 因 而 玻 片 凝 固 酶 试 验 阳 性 、 试 管 凝 固 酶 试 验 阴 性 。玻 片 法少 许 菌 落 + 兔 血 浆 10 s 内 出 现 凝 集 为 阳 性 阳 性 ： 金 葡 、 中 间 葡阴 性 ： 其 它 葡 萄 球 菌 试 管 法 :试 管 2支 ， 各 加 0.5 ml兔 血 浆 ，

4、 取 被 检菌 和 阳 性 对 照 菌 分 别 加 血 浆 混 匀 ， 37 水 浴 34 h （ 3） 种 的 鉴 定 (-)商 品 化 的 胶 乳 凝 集 试 验 (+) u原理： 胆盐、去氧胆酸钠和硫磺胆酸钠能选择性地溶解肺炎链球菌，胆汁降低细胞膜的张力-膜破损或裂解胆汁溶菌试验 u方法：平板法：取胆酸钠溶液一环，放在平板的菌落上，35 30min观察结果。试管法：于0.9ml培养了1824小时的菌液中，加入取氧胆酸钠试剂0.1ml或牛胆盐0.2ml混匀，37水浴1030min，观察结果。u应用： 主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌。胆 汁 溶 菌 试 验 方 法 CAMP试验u原理： B群

5、链球菌能产生一种胞外因子CAMP,它能增强金黄色葡萄球菌 -溶血毒素的活性，因此，在两菌交界处出现箭头样的溶血增强区。 u方法： 取血平板一块，用产生 -溶血毒素的金葡菌在中央划一道线，将待检菌据此线0.5cm处垂直划线。35 1824小时培养，观察结果。u应用： 用于鉴定B群链球菌。CAMP试验方法 3） CAMP试 验 无 乳 链 球 菌 能 产 生 CAMP因 子 ， 它 可 促 进 金 黄 色 葡 萄球 菌 溶 血 能 力 ， 使 其 产 生 显 著 的 协 同 溶 血 作 用 。 本法 可 作 为 无 乳 链 球 菌 的 初 步 鉴 定 试 验 13 涂 片 ： G+C触 酶 试 验

6、 链 球 菌肠 球 菌+ 葡 萄 球 菌 、 微 球 菌 标 本 氧 化 酶 (双 糖 ) (O) + (F)微 球 菌葡 萄 球 菌凝 固 酶 试 验鉴定流程 + 金 葡 表 葡 、 腐 生 新生霉素 表 葡腐 生SR 14 触酶试验：阴性链 球 菌 属 鉴 定 流 程 观 察 血 平 板 上 溶 血 环 -溶 血 环 非 -溶 血 环Optochin、 杆 菌 肽 、胆 七 、 高 盐 杆 菌 肽 、 CAMP、胆 七 、 高 盐 非 溶 血 链 球 菌 鉴 定菌 种 Optochin敏 感 试 验 胆 汁 溶 菌 试 验 胆 汁 七 叶 苷 试 验肺 炎 链 球 菌 S + 草 绿 色

7、链 球 菌 R 牛 链 球 菌 R + 氧化-发酵试验又称O/F试验或Hugh-Ldifson（HL）试验 u原理： 细菌分解葡萄糖对O2需求不同， 氧化型：细菌只在有氧环境中分解葡萄糖; 发酵型：细菌可在有氧、无氧环境中分解G; 产碱型：细菌在有氧、无氧环境中都不 分解葡萄糖;葡萄糖氧化/发酵试验 硝酸盐还原试验n某些细菌能还原培养基中的硝酸盐-亚硝酸盐、氨和氮。原 理 ： u原理： 使硝酸盐还原的细菌能从硝酸盐中获得氧，使其成为亚硝酸盐或其它还原物。培养基中的亚硝酸基能与 -萘氨和苯磺酸形成红色的N- -萘氨偶氮苯磺酸。若出现红色现象则说明该菌还原硝酸盐。 硝 酸 盐 还 原 试 验 u方

8、法： 取一环待检菌接种到硝酸盐琼脂斜面上，35培养1824小时，然后依次加入含 -萘氨和对氨基苯磺酸的试剂各1mL，30s后观察结果。硝 酸 盐 还 原 试 验 方 法 u应用： 有助于鉴别肠杆菌科、奈瑟菌属、布兰汉菌属、假单胞菌属等 氧化酶试验u原理： 某些细菌具有细胞色素氧化酶，能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺试剂氧化成紫红色醌类化合物 u方法： 滤纸法：用洁净滤纸蘸取菌落，加一滴试剂，观察结果菌落法：直接在菌落上加试剂，观察结果纸片法：使用试剂浸泡制成的试剂纸片，取足够的菌落，观察结果。 u应用：用于科别鉴定试验。氧化酶试验方法 苯丙氨酸脱氨酶试验u原理： 有苯丙氨酸脱氨酶的细菌，可以

9、使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯丙铜酸与三氯化铁作用形成绿色化合物。 u方法：琼脂斜面法：将待检细菌接种到苯丙氨酸琼脂斜面上， 35培养2448h，取出，将三氯化铁试剂45滴滴于斜面上，观察结果。快速纸片法：将待检菌涂于苯丙氨酸纸片上，孵育15min，取出，滴加三氯化铁试剂，立即观察结果。苯丙氨酸脱氨酶试验方法 n应用：多用于肠杆菌科的鉴定。 变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属为阳性。 1.糖发酵试验【原理】：n 各 种 细 菌 含 有 不 同 的 分 解 糖 （ 苷 、 醇 ） 的 酶 ， 对 糖（ 苷 、 醇 ） 分 解 能 力 也 各 不 相 同 ， 有 的 不 分 解 ， 有的 分 解

10、 后 仅 产 酸 ， 有 的 分 解 后 产 酸 产 气 ， 故 可 用 来鉴 别 细 菌 。【方法】： n 将 大 肠 埃 希 菌 和 伤 寒 沙 门 菌 分 别 接 种 葡 萄 糖 、 乳 糖发 酵 管 ， 35C培 养 18-24h 观 察 结 果 。 1.糖发酵试验【结果】：n 首 先 确 定 细 菌 是 否 生 长 ， 细 菌 生 长 者 培 养 基 呈 混 浊 状 ：1） 不 分 解 糖 ， 培 养 基 顔 色 与 接 种 前 无 变 化 ， 以 “ -”表 示 ；2） 分 解 糖 产 酸 不 产 气 ， 培 养 基 由 紫 色 变 为 黄 色 ， 以 “ +”表 示 ；3） 分

11、解 糖 产 酸 产 气 ， 除 培 养 基 顔 色 变 化 外 ， 倒 管 中 还 有气 泡 ， 以 “ ”表 示 。 2.吲哚试验（靛基质试验）【原理】：有 些 细 菌 具 有 色 氨 酸 酶 ， 能 分 解 蛋 白 胨 中的 色 氨 酸 产 生 吲 哚 ， 与 吲 哚 试 剂 形 成 红 色 化 合 物 。【方法】：大 肠 埃 希 菌 和 伤 寒 沙 门 菌 分 别 接 种 于 蛋 白胨 水 培 养 基 中 ， 35C18-24h后 ， 加 入 吲 哚 试 剂 数 滴 ，静 置 分 层 ， 观 察 结 果 。【结果】：在 培 养 物 液 面 上 层 呈 玫 瑰 红 色 为 阳 性 ， 不变

12、 色 者 为 阴 性 。 3.甲基红试验【原理】：某 些 细 菌 分 解 葡 萄 糖 产 生 丙 酮 酸 ， 丙 酮 酸 可 进 一步 分 解 为 甲 酸 、 乙 酸 等 酸 性 物 质 ， 故 培 养 基 pH 在 4.5以 下 ，加 入 甲 基 红 指 示 剂 后 呈 红 色 （ 阳 性 ） ； 有 些 细 菌 分 解 葡 萄糖 产 生 的 酸 进 一 步 化 为 醇 、 酮 等 非 酸 性 物 质 ， 使 培 养 基 pH在 6.2以 上 ， 加 入 甲 基 红 指 示 剂 后 呈 黄 色 （ 阴 性 ） 。【方法】：大 肠 埃 希 菌 和 产 气 肠 杆 菌 分 别 接 种 葡 萄 糖

13、 蛋 白 胨水 培 养 基 中 ， 35C18-24h， 加 入 甲 基 红 指 示 剂 2-3滴 观 察结 果 。【结果】：红 色 为 阳 性 ， 黄 色 为 阴 性 。 4.V-P（Voges-Proskauer）试验【原理】：某 些 细 菌 分 解 葡 萄 糖 生 成 丙 酮 酸 ， 进 一 步 脱 羧 生 成 乙酰 甲 基 甲 醇 ， 在 碱 性 环 境 下 被 氧 化 成 二 乙 酰 ， 后 者 与 蛋 白 胨 中的 精 氨 酸 所 含 的 胍 基 起 作 用 ， 生 成 红 色 胍 缩 二 乙 酰 ， 为 VP试 验阳 性 。 若 培 养 基 中 胍 基 含 量 少 ， 加 入 少

14、 量 含 胍 基 的 化 合 物 如 肌酐 ， 以 加 速 其 反 应 。【方法】：大 肠 埃 希 菌 和 产 气 肠 杆 菌 分 别 接 种 于 葡 萄 糖 蛋 白 胨 水中 ， 35C， 24-48h， 加 入 VP试 剂 甲 液 和 乙 液 各 1滴 ， 充 分 摇 动 ，观 察 。【结果】：红 色 为 阳 性 ， 若 为 阴 性 应 再 培 养 4h观 察 ， 仍 无 红 色 者为 阴 性 。 5.枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验【原理】：当 细 菌 可 以 利 用 铵 盐 作 为 唯 一 氮 源 ， 同 时 柠 檬 酸盐 为 惟 一 碳 源 时 ， 可 在 柠 檬 酸 盐 培 养 基

15、上 生 长 ， 分 解 柠 檬酸 盐 为 碳 酸 盐 ， 使 培 养 基 变 碱 ， 指 示 剂 溴 麝 香 草 酚 蓝 由 绿色 变 为 深 蓝 色 为 阳 性 ， 培 养 基 不 变 色 （ 绿 色 ） 为 阴 性 。【方法】：大 肠 埃 希 菌 和 产 气 肠 杆 菌 分 别 接 种 于 柠 檬 酸 盐 培养 基 中 ， 35C， 24-48h， 观 察 。【结果】：菌 苔 出 现 ， 培 养 基 变 为 深 蓝 色 为 阳 性 。 细 菌 不 能生 长 ， 培 养 基 不 变 色 （ 绿 色 ） 为 阴 性 。 6.克氏双糖铁（KIA）复合试验【原理】：该 培 养 基 用 酚 红 指

16、示 剂 ， 在 酸 性 时 呈 黄 色 ， 碱 性时 呈 红 色 。 细 菌 如 能 发 酵 乳 糖 和 葡 萄 糖 而 产 酸 产 气 ， 则 斜面 与 底 层 均 呈 黄 色 ， 且 有 气 泡 。 如 只 发 酵 葡 萄 糖 不 发 酵 乳糖 ， 因 葡 萄 糖 含 量 少 ， 斜 面 所 生 的 少 量 酸 可 因 接 触 空 气 而氧 化 挥 发 ， 从 而 使 斜 面 部 分 保 持 原 来 的 红 色 ； 底 层 由 于 是在 相 对 缺 氧 状 态 下 ， 细 菌 发 酵 葡 萄 糖 所 生 成 的 酸 类 物 质 不被 氧 化 挥 发 而 保 持 黄 色 。 如 细 菌 分

17、解 蛋 白 产 生 硫 化 氢 ， 则与 硫 化 亚 铁 作 用 生 成 黑 色 的 硫 化 铁 ， 使 培 养 基 变 黑 。 6.克氏双糖铁（KIA）复合试验【方法】：将 待 检 菌 接 种 于 克 氏 双 糖 铁 培 养 基 （ 底层 穿 刺 ， 上 层 斜 面 划 线 ） ， 35C， 24h， 观 察 。【结果】：发 酵 乳 糖 和 葡 萄 糖 产 酸 产 气 ， 则 上 层 和底 层 均 呈 黄 色 且 有 气 泡 产 生 ； 只 发 酵 葡 萄 糖 而 不发 酵 乳 糖 ， 则 底 层 变 黄 ， 上 层 仍 为 红 色 。 如 底 层变 黑 ， 说 明 该 菌 产 生 硫 化

18、氢 ， 生 成 黑 色 的 硫 化 铁沉 淀 。 7.动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验【原理】：培 养 基 为 含 尿 素 、 蛋 白 胨 的 半 固 体 培 养 基 ， 指 示剂 为 酚 红 。 具 色 氨 酸 酶 的 细 菌 能 分 解 色 氨 酸 产 生 吲 哚 ， 加入 吲 哚 试 剂 后 ， 培 养 基 上 层 的 吲 哚 会 变 红 ； 具 脲 酶 的 细 菌能 分 解 尿 素 产 氨 ， 使 整 个 培 养 基 变 碱 呈 红 色 ； 有 动 力 的 细菌 沿 穿 刺 线 扩 散 生 长 。【方法】：将 大 肠 埃 希 菌 和 普 通 变 形 杆 菌 穿 刺 线 接 种 于 M

19、IU培 养 基 ， 35C， 18-24h， 观 察 动 力 和 脲 酶 反 应 后 ， 再 滴 加吲 哚 试 剂 。 【结果】：扩 散 生 长 为 动 力 阳 性 ； 滴 加 吲 哚 试 剂 后 呈 玫 瑰红 色 为 阳 性 ； 培 养 基 变 红 脲 酶 阳 性 。 伊红美蓝培养基（EMB）EMB平板基质 肉汤基础培养基抑制物 伊红、美蓝底物 乳糖 指示剂 伊红、美蓝 碱性 无色半透明菌落 酸性紫黑色或紫红色，且有金属光泽菌落持点为紫黑色或紫红色菌落为无色半透明菌落 抑制作用抑制G菌用途分离沙门菌和志贺菌属的弱选择培养基 原理：（EMB平板)非致病菌：致 病 菌 ：美 蓝 分 解乳 糖伊

20、红 结 合紫 黑 色 或 紫 红 色 化 合 物 不 分 解 乳 糖 ， 菌 落 呈无 色 、 半 透 明 。其 它 类 似 培 养 基 ？ SS培 养 基（ Salmonella Shigella Agar Medium）SS平板基质肉汤基础培养基抑制物胆盐、煌绿、枸橼酸钠、硫代硫酸钠底物乳糖指示剂中性红 pH（6.88.0） 碱性黄色 酸性红色菌落持点为粉红色菌落 为无色半透明菌落 抑制作用抑制大肠杆菌及G菌用途分离沙门菌和志贺菌属的强选择培养基 原理：（ SS平板）非致病菌：致 病 菌 ：胆 盐 分 解乳 糖乳 酸 胆 酸中 心 浑 浊 的 粉 红 色 菌 落 不 分 解 乳 糖 ， 菌 落 呈透 明 无 色 ；枸 橼 酸 铁 能 指 示 硫 化氢 的 产 生 ， 使 菌 落 中心 呈 黑 色