微生物学检验志贺菌属教学课件

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1、微生物学检验志贺菌属微生物学检验志贺菌属第1页，共52页。课件制作 陆曙梅志贺菌属志贺菌属是引起人类细菌性痢疾的病原菌是引起人类细菌性痢疾的病原菌包括四群包括四群,共共44个血清型个血清型 A群群-痢疾志贺菌痢疾志贺菌 B群群-福氏志贺菌福氏志贺菌 C群群-鲍氏志贺菌鲍氏志贺菌 D群群-宋内志贺菌宋内志贺菌第2页，共52页。课件制作 陆曙梅形态染色形态染色革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜、无鞭毛，革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜、无鞭毛，多数菌株有菌毛多数菌株有菌毛第3页，共52页。课件制作 陆曙梅志贺菌志贺菌第4页，共52页。课件制作 陆曙梅培养特性培养特性兼性厌氧、营养要求不高兼性厌氧、营养要求不

2、高在肠道选择培养基上呈无色半透明在肠道选择培养基上呈无色半透明S型菌型菌落菌落落菌落 SS平板无色菌落平板无色菌落Mac平板无色菌落平板无色菌落EMB平板无色菌落平板无色菌落宋内志贺菌多呈扁平、宋内志贺菌多呈扁平、R型菌落，个别菌型菌落，个别菌株可迟分解乳糖株可迟分解乳糖 第5页，共52页。课件制作 陆曙梅生化反应生化反应氧化酶试验（）氧化酶试验（）分解葡萄糖、不分解乳糖，（个别菌株分解葡萄糖、不分解乳糖，（个别菌株迟分解乳糖或不分解乳糖）迟分解乳糖或不分解乳糖）KIA：KAMIU：/IMViC：/除除A群外，均能发酵甘露醇群外，均能发酵甘露醇第6页，共52页。课件制作 陆曙梅抗原结构抗原结构

3、只有只有O、K抗原，无抗原，无H抗原抗原K抗原可阻断抗原可阻断O抗原与相应抗体的凝集抗原与相应抗体的凝集根据根据O抗原分抗原分4群和群和44型型第7页，共52页。课件制作 陆曙梅志贺菌抗原分类志贺菌抗原分类 菌种群型亚型痢疾志贺菌A1108a、8b、8c福氏志贺菌B16x、y变种1a、1b、2a、2b、3a、3b、3c、4a、4b鲍氏志贺菌C118宋内志贺菌D1第8页，共52页。课件制作 陆曙梅抵抗力抵抗力对理化因素抵抗力弱对理化因素抵抗力弱尤其对酸敏感尤其对酸敏感对消毒剂敏感对消毒剂敏感易产生耐药性易产生耐药性第9页，共52页。课件制作 陆曙梅变异性变异性S-R变异变异耐药性变异耐药性变异毒

4、力变异毒力变异第10页，共52页。课件制作 陆曙梅临床意义临床意义致病物质：致病物质：菌毛菌毛 内毒素内毒素 志贺毒素：属外毒素，由志贺毒素：属外毒素，由A群志贺菌产生，具有肠毒、群志贺菌产生，具有肠毒、细胞毒、神经毒作用细胞毒、神经毒作用所致疾病：经肠道传染，引起细菌性痢疾，有所致疾病：经肠道传染，引起细菌性痢疾，有3种临床类种临床类型，即急性菌痢、慢性菌痢、中毒性菌痢型，即急性菌痢、慢性菌痢、中毒性菌痢免疫性：免疫性：主要依赖局部主要依赖局部SIgA，病后免疫力不迟久病后免疫力不迟久第11页，共52页。课件制作 陆曙梅微生物学检验微生物学检验标本采集标本采集 粪便或肛拭粪便或肛拭 新鲜脓血

5、便新鲜脓血便 立即送检或床边接种立即送检或床边接种 保存于保存于30甘油盐水或卡甘油盐水或卡-布培养基布培养基第12页，共52页。课件制作 陆曙梅检验程序检验程序粪便或肛拭粪便或肛拭肠道选择平板肠道选择平板可疑菌落可疑菌落KIA MIU、IMViC报告结果报告结果增菌增菌菌落涂片染色菌落涂片染色多价血清玻片凝集多价血清玻片凝集初步鉴定初步鉴定最终鉴定最终鉴定系统生化反应系统生化反应因子血清凝集因子血清凝集第13页，共52页。课件制作 陆曙梅检验方法检验方法将待检标本接种肠道选择平板，将待检标本接种肠道选择平板，35培养培养1824小时。小时。若标本含菌量少，可先增菌（若标本含菌量少，可先增菌（

6、GN增菌液）增菌液）46小时再小时再分离培养。分离培养。挑取无色半透明菌落，进行初步生化反应鉴定。挑取无色半透明菌落，进行初步生化反应鉴定。符合志贺菌生化反应特征可进行血清学鉴定符合志贺菌生化反应特征可进行血清学鉴定血清学鉴定先用志贺氏多价诊断血清作玻片凝集试验，血清学鉴定先用志贺氏多价诊断血清作玻片凝集试验，若凝集再用若凝集再用A、B、C、D群诊断血清鉴定到种、型。群诊断血清鉴定到种、型。血清学鉴定需注意血清学鉴定需注意K抗原的阻断作用，并应考虑是否抗原的阻断作用，并应考虑是否为为EIEC。第14页，共52页。课件制作 陆曙梅志贺菌鉴定志贺菌鉴定初步鉴定 挑取可疑菌落接种挑取可疑菌落接种KI

7、A、MIU培养基培养基 若符合若符合KIA：KA；MIU：/，再作志贺菌多价诊断血清玻片凝集试验再作志贺菌多价诊断血清玻片凝集试验最后鉴定：全面生化反应和单价血清玻片凝集试：全面生化反应和单价血清玻片凝集试验验若出现生化反应符合，血清学不凝集现象，应考若出现生化反应符合，血清学不凝集现象，应考虑虑K抗原的阻断作用，可将菌液加热抗原的阻断作用，可将菌液加热1001530min后，重复凝集试验，仍不凝集可考虑后，重复凝集试验，仍不凝集可考虑EIEC，需进行鉴别。，需进行鉴别。第15页，共52页。课件制作 陆曙梅志贺菌鉴别志贺菌鉴别与与EIEC的鉴别的鉴别与与类志贺菌的鉴别的鉴别与动力不明显、不产与

8、动力不明显、不产H2S的的沙门菌的鉴别的鉴别第16页，共52页。课件制作 陆曙梅志贺菌血清学鉴定志贺菌血清学鉴定先用志贺菌多价诊断血清鉴定群，再用先用志贺菌多价诊断血清鉴定群，再用A、B、C、D群单价血清鉴定血清型。群单价血清鉴定血清型。A群以群以1、2型为主，多有型为主，多有K抗原抗原C群型别多群型别多D群只有群只有1个血清型个血清型B群型别多，抗原结构复杂，多无群型别多，抗原结构复杂，多无K抗原。抗原。我国以B群为主第17页，共52页。课件制作 陆曙梅不典型菌株的鉴定不典型菌株的鉴定在鉴定中如遇生化反应符合，血清学不在鉴定中如遇生化反应符合，血清学不凝集；血清学凝集，生化反应不符合，凝集；

9、血清学凝集，生化反应不符合，可考虑不典型菌株。可考虑不典型菌株。将不典型菌株在肉汤中反复传代，促其将不典型菌株在肉汤中反复传代，促其恢复典型性状恢复典型性状第18页，共52页。课件制作 陆曙梅志贺菌快速鉴定试验志贺菌快速鉴定试验直接凝集试验直接凝集试验免疫荧光菌球法免疫荧光菌球法协同凝集试验协同凝集试验乳胶凝集试验乳胶凝集试验分子生物学方法分子生物学方法第19页，共52页。课件制作 陆曙梅志贺菌鉴定依据志贺菌鉴定依据肠道选择平板上无色半透明菌落肠道选择平板上无色半透明菌落KIA：KAMIU：/与志贺菌多价诊断血清和各群血清凝集与志贺菌多价诊断血清和各群血清凝集注意与注意与EIEC、类志贺邻单胞

10、菌、动力不、类志贺邻单胞菌、动力不明显的沙门菌鉴别明显的沙门菌鉴别第20页，共52页。课件制作 陆曙梅与与EIEC的鉴别的鉴别生化反应鉴别试验EIEC志贺菌粘质酸盐产酸醋酸盐利用赖氨酸脱羧第21页，共52页。课件制作 陆曙梅与类志贺邻单胞菌的鉴别与类志贺邻单胞菌的鉴别鉴别试验类志贺菌志贺菌氧化酶动力半乳糖苷渗透酶（ONPG）第22页，共52页。课件制作 陆曙梅与动力不明显、与动力不明显、H2S阴性沙门菌的鉴别阴性沙门菌的鉴别鉴别试验沙门菌志贺菌沙门菌诊断血清玻片凝集试验第23页，共52页。课件制作 陆曙梅大肠埃希菌生化反应结果大肠埃希菌生化反应结果KIAMIUIMViC氧化酶斜面底层气体H2S

11、动力吲哚尿酶IMViCAA/-/-KAKAKA/-第24页，共52页。肠道杆菌肠道杆菌沙门菌属沙门菌属第25页，共52页。课件制作 陆曙梅沙门菌属沙门菌属是寄生于人类和动物肠道中，生物学性是寄生于人类和动物肠道中，生物学性状相似的革兰阴性杆菌状相似的革兰阴性杆菌沙门菌属肠道沙门菌邦戈沙门菌肠道亚种萨拉姆亚种双亚利桑那亚种亚利桑那亚种豪顿亚种英迪加亚种致病沙门菌多为 肠道亚种第26页，共52页。课件制作 陆曙梅形态染色形态染色革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜、有周鞭革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜、有周鞭毛，多数菌株有菌毛毛，多数菌株有菌毛第27页，共52页。课件制作 陆曙梅沙门菌沙门菌第28页，共52

12、页。课件制作 陆曙梅培养特性培养特性兼性厌氧、营养要求不高兼性厌氧、营养要求不高在肠道选择培养基上呈无色半透明在肠道选择培养基上呈无色半透明S型菌落型菌落菌落，与志贺菌菌落相似。菌落，与志贺菌菌落相似。SS平板无色菌落，产平板无色菌落，产H2S菌株，菌落中菌株，菌落中心呈黑色心呈黑色Mac平板无色菌落平板无色菌落EMB平板无色菌落平板无色菌落 第29页，共52页。课件制作 陆曙梅生化反应生化反应氧化酶试验（）氧化酶试验（）分解葡萄糖、不分解乳糖分解葡萄糖、不分解乳糖KIA：KA（伤寒沙门菌产酸不产气（伤寒沙门菌产酸不产气KA）MIU：IMViC：赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧：赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧：

13、第30页，共52页。课件制作 陆曙梅抗原结构抗原结构O抗原：化学成分为脂多糖；耐热；与相应：化学成分为脂多糖；耐热；与相应抗体结合出现颗粒状凝集；沙门菌分群依据。抗体结合出现颗粒状凝集；沙门菌分群依据。H抗原：化学成分为蛋白质；不耐热；与相：化学成分为蛋白质；不耐热；与相应抗体结合出现絮状凝集；沙门菌分型依据。应抗体结合出现絮状凝集；沙门菌分型依据。Vi抗原：位于菌体外层；抗原性强，相应抗：位于菌体外层；抗原性强，相应抗体可作为筛选带菌者指标；不耐热；能阻止体可作为筛选带菌者指标；不耐热；能阻止O抗原与相应抗体结合；伤寒沙门菌和丙型抗原与相应抗体结合；伤寒沙门菌和丙型副伤寒沙门菌有副伤寒沙门菌

14、有Vi抗原，有抗原，有VW变异。变异。第31页，共52页。课件制作 陆曙梅几种沙门菌的抗原组分几种沙门菌的抗原组分组（群）型O抗原H抗原第1相第2相A组PA1，2，12a-B组PB1，4，5，12b1，2S.typhimuriun1，4，5，12i1，2C组 PC6，7，Vic1，5S.cholerae6，7，c1，5D组S.typhi9，12，Vid-S.enteritidis1，9，12g.m-第32页，共52页。课件制作 陆曙梅变异性变异性 S-R变异：变异：H-O变异：变异：V-W变异：变异：相位变异：相位变异：耐药性变异：耐药性变异：第33页，共52页。课件制作 陆曙梅抵抗力抵抗力对

15、理化因素抵抗力弱对理化因素抵抗力弱尤其对酸敏感尤其对酸敏感对消毒剂敏感对消毒剂敏感易产生耐药性易产生耐药性第34页，共52页。课件制作 陆曙梅临床意义临床意义致病物质：菌毛、内毒素、致病物质：菌毛、内毒素、Vi抗原抗原所致疾病：所致疾病：肠热症肠热症 食物中毒食物中毒 败血症败血症 慢性肠炎慢性肠炎免疫性：病后免疫力牢固，以细胞免疫为免疫性：病后免疫力牢固，以细胞免疫为主主第35页，共52页。课件制作 陆曙梅肠热症发病过程肠热症发病过程伤寒杆菌和副伤寒杆菌小肠黏膜经口肠壁淋巴组织被吞噬细胞吞噬进入血液菌血症骨髓脾肝胆囊肾小肠随尿液排出随粪便 排出再次侵入肠壁，引起并发症潜伏在胆囊中随粪便排出带

16、菌者第36页，共52页。课件制作 陆曙梅沙门菌感染的预防沙门菌感染的预防加强饮食卫生，切断加强饮食卫生，切断传播途径传播途径发现并及时隔离病人发现并及时隔离病人接种伤寒和副伤寒沙接种伤寒和副伤寒沙门菌疫苗进行特异性门菌疫苗进行特异性预防预防第37页，共52页。课件制作 陆曙梅微生物学检验微生物学检验标本采集：根据不同疾病采集不同标本标本采集：根据不同疾病采集不同标本肠热症的标本采集肠热症的标本采集发病第发病第12周：血液周：血液发病第发病第23周：粪便、尿液周：粪便、尿液肠热症全程：骨髓肠热症全程：骨髓第38页，共52页。课件制作 陆曙梅检验程序检验程序粪便、尿、残余食物粪便、尿、残余食物SS

17、、Mac、血平板、血平板可疑菌落可疑菌落KIA MIU、IMViC报告结果报告结果增菌增菌（GN、SF）菌落涂片染色菌落涂片染色A-F多价血清多价血清玻片凝集玻片凝集初步鉴定初步鉴定最终鉴定最终鉴定系统生化反应系统生化反应因子血清凝集因子血清凝集血液、骨髓血液、骨髓增菌增菌（胆盐葡萄糖肉汤）（胆盐葡萄糖肉汤）第39页，共52页。课件制作 陆曙梅检验方法培养检验方法培养血液、骨髓：将待检标本接种胆盐葡萄血液、骨髓：将待检标本接种胆盐葡萄糖肉汤增菌培养，每日观察，出现浑浊糖肉汤增菌培养，每日观察，出现浑浊等现象，及时转种等现象，及时转种 血平板和肠道选择平血平板和肠道选择平板。板。粪便：接种粪便：

18、接种SS、Mac或或EMB分离培养，分离培养，若标本含菌量少，可先增菌。若标本含菌量少，可先增菌。尿液：尿液离心后，取沉淀物接种血平尿液：尿液离心后，取沉淀物接种血平板和肠道选择平板。板和肠道选择平板。第40页，共52页。课件制作 陆曙梅检验方法检验方法生化反应初步鉴定生化反应初步鉴定触酶、氧化酶、硝酸盐还原触酶、氧化酶、硝酸盐还原苯丙氨酸、葡萄糖酸盐苯丙氨酸、葡萄糖酸盐KIA：K A +/-+/-MIU：赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧第41页，共52页。课件制作 陆曙梅检验方法血清学鉴定检验方法血清学鉴定首先用首先用A-F多价多价O诊断血清进行初步鉴定；诊断血清进行初步鉴定；再

19、用再用O因子血清鉴定到群（因子血清鉴定到群（A、B、C、D、E、F群）；群）；再用再用H因子第因子第2相血清辅助鉴定型；相血清辅助鉴定型；若生化反应符合沙门菌，若生化反应符合沙门菌，A-F诊断血清不凝集，应考诊断血清不凝集，应考虑是否有虑是否有Vi抗原，将待检菌液加热后，再进行抗原，将待检菌液加热后，再进行A-F多多价价O血清凝集试验。血清凝集试验。A-F多价多价O诊断血清诊断血清 凝集试验凝集试验凝集凝集O因子诊断血清因子诊断血清 凝集试验凝集试验H因子诊断血清因子诊断血清 凝集试验凝集试验凝集凝集初步鉴定初步鉴定鉴定血清群鉴定血清群鉴定血清型鉴定血清型第42页，共52页。课件制作 陆曙梅沙

20、门菌鉴定需注意的问题沙门菌鉴定需注意的问题玻片凝集试验需注意菌液浓度、反应温玻片凝集试验需注意菌液浓度、反应温度度生化反应符合，玻片凝集试验阴性，应生化反应符合，玻片凝集试验阴性，应考虑是否有考虑是否有Vi抗原的存在抗原的存在抗原结构相同，生化反应不同，应加做抗原结构相同，生化反应不同，应加做生化反应生化反应生化反应符合，玻片凝集试验阴性，无生化反应符合，玻片凝集试验阴性，无Vi抗原，应：重新观察生化反应；传代抗原，应：重新观察生化反应；传代以恢复原有抗原性。以恢复原有抗原性。第43页，共52页。课件制作 陆曙梅肠热症不同标本细菌培养情况肠热症不同标本细菌培养情况阳性检除率发病周数100908

21、0706050403020101 2 3 4 5 6 7 8 血标本血标本粪便标本尿标本第44页，共52页。课件制作 陆曙梅血清学诊断肥达反应血清学诊断肥达反应原理：用已知伤寒沙门菌原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原和甲型副抗原和甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌沙门菌H抗原与病人血清作半定量凝集试验，抗原与病人血清作半定量凝集试验，以测定受检血清中有无相应抗体及其效价。以测定受检血清中有无相应抗体及其效价。意义：协助诊断肠热症（伤寒与副伤寒）意义：协助诊断肠热症（伤寒与副伤寒）第45页，共52页。课件制作 陆曙梅肠热症病人血清抗体出现情

22、况肠热症病人血清抗体出现情况1009080706050403020101 2 3 4 5 6 7 8阳性检除率发病周数第46页，共52页。课件制作 陆曙梅肥达反应结果判定肥达反应结果判定：O效价效价11：8080H H效价效价11：160160副伤寒副伤寒H H效价效价11：8080OO与与H H抗体的诊断意义：抗体的诊断意义：OO、H H效价均升高：已感染伤寒效价均升高：已感染伤寒OO、H H效价均低于正常值：未感染沙门菌或免疫力低下效价均低于正常值：未感染沙门菌或免疫力低下OO升高、升高、H H正常：某型沙门菌感染早期正常：某型沙门菌感染早期H H升高、升高、OO正常：以往接种过疫苗或非特

23、异性回忆反应正常：以往接种过疫苗或非特异性回忆反应双份血清的肥达反应：双份血清的肥达反应：后一次较前一次抗体效价增高四倍以上，有诊断价值后一次较前一次抗体效价增高四倍以上，有诊断价值血清学诊断肥达反应血清学诊断肥达反应第47页，共52页。课件制作 陆曙梅生理盐水生理盐水 待检血清待检血清诊断抗原诊断抗原伤寒O伤寒H甲型副伤寒H肖沙门菌H反应反应6小时小时4545观察结果观察结果1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640伤寒伤寒O效价效价 1:160伤寒伤寒H效价效价 1:320甲型副伤寒甲型副伤寒H效价效价 1:20肖沙门菌肖沙门菌H效价效价 1:20诊断意义：感染伤寒沙

24、门菌诊断意义：感染伤寒沙门菌伤寒伤寒O效价效价 1:80伤寒伤寒H效价效价 1:20甲型副伤寒甲型副伤寒H效价效价 1:160肖沙门菌肖沙门菌H效价效价 1:20诊断意义：感染甲型副伤寒沙门菌诊断意义：感染甲型副伤寒沙门菌第48页，共52页。课件制作 陆曙梅沙门菌鉴定依据沙门菌鉴定依据沙门菌鉴定主要依靠生化反应和血清学沙门菌鉴定主要依靠生化反应和血清学诊断诊断肠道选择平板上无色半透明菌落肠道选择平板上无色半透明菌落KIA：KA +/-MIU：/与与A-F多价多价O诊断血清和相应诊断血清和相应O因子血清、因子血清、H因子血清凝集因子血清凝集注意注意Vi抗原的存在；注意抗原结构相同抗原的存在；注意

25、抗原结构相同的菌株，应加做生化反应进行鉴别的菌株，应加做生化反应进行鉴别第49页，共52页。课件制作 陆曙梅伤寒带菌者的检测伤寒带菌者的检测从标本中分离出病原菌从标本中分离出病原菌血清中检出血清中检出Vi抗体，效价抗体，效价1：10第50页，共52页。课件制作 陆曙梅几种沙门菌的主要生化反应几种沙门菌的主要生化反应菌种KIAMIU甲基红伏普枸櫞酸盐苯丙氨酸赖氨酸鸟氨酸斜面底层气体H2S动力吲哚尿酶PAKA+-/+-+-+PBKA+-+-/+-+S.typhimuriunKA+-+-+-+PCKA+-+-+S.choleraeKA+/-+-+-+-+S.typhiKA-+/-+-+-/+-+-S.enteritidisKA+-+-+-+第51页，共52页。课件制作 陆曙梅沙门菌菌落沙门菌菌落第52页，共52页。