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1、 l稀释法p试管稀释法（肉汤稀释法）p平板稀释法（琼脂稀释法）p微量肉汤稀释法l扩散法（纸片法）p Kirby-bauer（K-B）法l E-testl自动化仪器 l原理：将浸有抗菌药物的纸片贴在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，因此敏感细菌在纸片周围一定距离内的生长受到抑制。 透 射 光 反 射 光不 要 用 反 射 光要 使 用 透 射 光 阿 米 卡 星厄 他 培 南 J. Exp. Med., Jul 1948; 88: 99 - 131 l指抗菌药物在高浓度的时候反而降低杀菌活性l这种现象第一次由Eagle和Musselman两位科学家发现并报道。l青霉素类抗菌药物在
2、作用于葡萄球菌、溶血性链球菌以及肠球菌时出现药物低浓度（仍超过MIC值）时抗菌活性好于高浓度。J. Exp. Med., Jul 1948; 88: 99 - 131 l erm基因编码改变的核糖体结构(23S rRNA甲基化)，导致对大环内酯类和林可霉素类耐药。l erm 基因需诱导，红霉素具诱导作用。l若出现红霉素R而克林霉素S，但D试验阳性。若未进行D试验，克林霉素很可能会被报告敏感而误导临床用药。表型结果克林霉素报告红霉素耐药( R)阴性敏感(S) 评论或解释：该菌不表现为体外诱导型克林霉素耐药。 红霉素耐药( R)阳性耐药(R) 评论或解释：该菌表现为体外诱导型克林霉素耐药，用克林霉
3、素治疗可能无效。 l万古霉素依赖的粪肠球菌l长期使用包括糖肽类、氨基糖肽类等l抗生素压力下，必须依赖万古霉素才能生长The change at the ninth codon resulted in the inactivation of the ddl gene andvancomycin-dependent growth. l肺炎克雷伯菌对氨苄西林天然耐药是天然产SHV型酶n 1 6 0 株 肺 杆 中 2 0 株 对 氨 苄 西 林 敏 感l 1 9 株 细 菌 SHV基 因 出 现 “ 点 突 变 ” ， mRNA 逆 转 录 失 败 ，无 法 翻 译 出 由 SHV基 因 正 确 编
4、 码 的 -内 酰 胺 酶 。 头孢呋辛酶可水解头孢呋辛但不能水解头孢唑啉 2005 年，Ling Ma发现一株大肠埃希菌具有特殊的耐药表型，该菌对氨苄西林和头孢他啶耐药，但对头孢西丁、头孢曲松、头孢噻肟、亚胺培南和头孢唑啉敏感。分子生物学试验研究结果证实，该菌产SHV-57 型ESBL 可能的机制：1、膜孔蛋白缺失：导致亚胺培南耐药2、AmpC酶：对头孢西丁耐药3、ESBL：对头孢他啶和头孢吡肟耐药 含酶抑制剂复合制剂与相应单药抑菌圈直径相差5 mm，即判断该菌为产ESBLs菌株 头 孢 他 啶 /克 拉 维 酸 ： 0.19g/mL头 孢 他 啶 ： 0.5g/mL = 2.63头 孢 他
5、 啶 /克 拉 维 酸 ： 0.19g/mL头 孢 他 啶 ： 32g/mL = 168 MIC比 值假 阳 性 结 果 l耐药p阿莫西林、哌拉西林、头孢噻吩、头孢呋辛、头孢哌酮p阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦l敏感p头孢噻肟、头孢他啶 l ESBL确证试验阴性l本株细菌产生TEM-1型内酰胺酶、膜孔蛋白缺失。l头孢西丁的耐药性可能是由膜孔蛋白缺失所致，而非-内酰胺酶l Pa/Pb调控TEM-1b高表达所致，强启动子Pa/Pb是由弱启动子P3经32CT突变而成 l肠杆菌科细菌对头孢西丁耐药只能表示该菌是产AmpC 的可疑菌株。l某些类型的ESBL 也能水解头孢西丁1
6、2341 2341 234 抗菌药物耐药率抗菌药物耐药率产ESBL(4515株)非产ESBL(3477株)产ESBL(4515株)非产ESBL(3477株)阿米卡星10.1 4.3头孢吡肟36.9 6.5庆大霉素61.8 40.3头孢哌酮/舒巴坦7.4 2.4哌拉西林97.8 49.5头孢西丁13.2 7.2哌拉西林/他唑巴坦5.0 4.1亚胺培南0.2 0.6头孢唑林98.4 26.4美罗培南0.3 0.5头孢呋辛98.0 16.5厄他培南0.5 1.1 头孢噻肟85.8 10.4环丙沙星71.0 42.4头孢他啶31.2 6.4复方磺胺甲噁唑74.0 56.1 Figure 1. Phen
7、otypic carbapenemase detection by MHT 1、K. pneumoniae ATCC BAA-1705, positive result2、K. pneumoniae ATCC BAA-1706, negative result3、CTX-M-producing K. pneumoniae clinical isolate4、KPC-producing K. pneumoniae clinical isolateETP MEM l 1 . 厄他培南：p 1 3 mml 2 . 厄他培南+APBp 1 4 mml 3 . 厄他培南+EDTAp 1 4 mml 4
8、. 亚胺培南： p 3 0 mml 5 . 头孢吡肟：p 1 2 mm l 1. 厄他培南：p 13 mml 2. 厄他培南+APB+EDTAp 14 mml 3. 美罗培南：p 28 mml 4. 法罗培南：p 23 mm l 5. 法罗培南+APBp 23 mm l 1、头孢美唑：p 26 mml 2、头孢噻肟：p 11 mml 3、头孢噻肟/克拉维酸：p 30 mml 4、头孢他啶：p 22 mm l 5、头孢他啶/克拉维酸：p 30 mml 6、头孢噻肟/硼酸：p 13 mm l细菌耐药越来越严重，需加强检测p表型、基因型l做好细菌药敏试验不容易p且做且珍惜l常规和科研是兄弟p常规输送炮弹 p科研推进常规
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