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1、艾滋病抗体实验室检测方法艾滋病抗体实验室检测方法主要内容HIV检测一般情况：窗口期、检测样本及流程关于样本实验室操作：采集、处理、检测、转运常用筛查方法艾滋病检测意义艾滋病：影响人类健康的全球性灾难我国艾滋病的流行形势也日趋严峻据估算，我国大约只有10%艾滋病病毒感染者被发现，其余90%处于未知状态，这对相关的预防、治疗和关怀工作带来极大挑战要找到尚未发现的感染者，实验室检测工作必不可少感染HIV后的血清学变化HIV RNA浓度浓度抗体抗体抗体抗体感染感染感染感染1 1 1 1周周周周 2 2 2 2周周周周 6 6 6 6周周周周 12121212周周周周 -年年年年窗口期窗口期：机体感染H
2、IV到能检出抗体之间的时期 第三代HIV抗体检测试剂盒能使大部分感染者在4-8周后检测出HIV抗体如果到如果到1212周（即周（即3 3个月）仍个月）仍检测不出抗体，基本可不出抗体，基本可以排除以排除HIVHIV感染，感染，对抗体抗体检测呈不确定反呈不确定反应或高危或高危行行为后高度后高度怀疑有感染危疑有感染危险者，可再随者，可再随访3 3个月后个月后复复检。必要。必要时可做可做HIV-1 p24HIV-1 p24抗原或抗原或HIVHIV核酸核酸检测作作为辅助助诊断断检测样品：血液、组织液、排泄物、组织、器官、精液以及有关血液制品、生物组织或其它物品等 进行艾滋病病毒HIV或其相应标志物的实验
3、室测定，包括HIV分离、抗原检测、核酸检测和抗体抗体检测等目前用于HIV诊断的常规方法为血液中HIV抗体检测，我国目前检测血液中HIV抗体的常规检测程序分为筛查试验（包括初筛和复检）和确确认试验 HIV抗体筛查实验流程图样本样本阳性反应阳性反应一阴一阳一阴一阳阴性反应阴性反应筛查检测筛查检测均阳性反应均阳性反应重复检测重复检测均阴性反应均阴性反应送确认实验室进行确认送确认实验室进行确认阴性报告阴性报告筛查试剂筛查试剂原有试剂加另外一种筛查试剂原有试剂加另外一种筛查试剂设备要求要求主要仪器设备包括 生物安全柜、离心机、酶标读数仪、洗板机、移液器、温箱/水浴箱、冰箱、高压蒸汽灭菌器所用的仪器应该校
4、准，每次使用后应做记录为保证人员安全，实验室内的耗材最好使用塑料制品标本要求本要求1种类：血清或血浆(肝素、枸橼酸钠或EDTA抗凝)。2量：静脉血2ml，常规分离血清或血浆。3.3000转分离心10分钟。4保存：分离后7d之内测定的血清或血浆标本可放置于 28C保存，超过7d在-20C保存。试剂要求要求我国规定HIV抗体筛查试剂必须是：HIV-1/2混合型经国家食品药品监督管理局注册批准批批检合格在有效期内推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂 （chinaids.org）常用筛查方法目前，国内常用的HIV抗体筛查试验方法有：酶联免疫吸附试验（ELISA）颗粒凝集试验（PA）快速试验双抗原
5、夹心法原理固相包被抗原待测抗体（IgG、IgM）酶标记抗原底物试剂盒组成（双抗原夹心法ELISA）1.HIV酶标板2.HIV-1型阳性对照 3.HIV-2型阳性对照 4.HIV阴性对照 5.HIV酶标试剂 6.浓缩洗涤液 7.显色剂A液 8.显色剂B液 9.终止液操作程序-1 阅读标准操作程序，严格按照格按照试剂说明明书操作操作将试剂盒及样品放置在室温半小时以上1）准备酶标板，小心撕去酶标板条上的封条2）配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。3）编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔、阳性对照1型,2型各1孔、空白1孔。4）加样：分别在相应孔中加
6、入加入100 l待检样品及阴、阳性对照、外部质控对照。操作程序-25）温育：用封板膜封板后置371温育601分钟。6）洗涤：小心将封板膜揭掉，使用洗板机吸干孔内液体，用洗涤液洗涤5遍，拍干。7）加酶：每孔加入酶标试剂100l，空白孔除外。8）温育：用封板膜封板后置371温育301分钟。9)洗涤：小心将封板膜揭掉，使用洗板机吸干孔内液体，用洗涤液充分洗涤5遍，最后一次尽量拍干。操作程序-310）显色：每孔加入显色剂A、B液各50l，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置371避光显色301分钟。12）测定：每孔加终止液50l，轻轻振荡混匀，设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长检测，可不设空白），在
7、15分钟内测定各孔OD值。13）用酶标仪测定OD值，打印结果实验结果判断（1）检查阴性对照和阳性对照的OD值是否符合要求，判断本次实验是否成立，并计算cut off值结果判定:1.阴性对照的正常范围：正常情况下，阴性对照孔OD值0.10。2.阳性对照的正常范围：正常情况下，阳性对照孔OD值0.80。3.临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔OD均值Nc+0.12。实验结果判断（2）4.阳性判定：样品OD值临界值（CUTOFF）者为HIV 抗体阳性（注意：初试阳性标本应重新取样进行双孔复检，复试阳性者应按“全国HIV检测管理规范”送HIV确证实验室进行确证实验）。5.阴性判定：样品OD值
8、临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阴性。质控要求控要求 一.室内质控：1.在每次HIV实验中必须包含内部对照质控血清（试剂盒配套质控）:HIVI抗体、HIV2抗体阳性质控、HIV阴性质控及外部对照质控血清（自制或购买）。2.所有质控品与标本同时加入HIV试剂的微孔板内，最终质控结果符合实验要求，则实验结果可报告；否则应重新检测标本。检测过程中的程中的问题及及对策策ELISA实验所有的孔均无色漏加阳性漏加阳性对照照酶标记物失效物失效底物失效：底物失效：应避光保存避光保存酶联板抗原失效板抗原失效ELISA实验所有的孔均显色洗板不洗板不彻底，孔内残留未底，孔内残留未结合的合的酶标记物。物。容器不清容器不清洁，有残留物，有残留物质：酶受受污染。染。底物失效，在加入之前就已底物失效，在加入之前就已经显色。色。HIVHIV抗体筛查检测及报告程序抗体筛查检测及报告程序1.筛查（-）出具“HIVHIV抗体阴性抗体阴性”报告2.筛查（+）复检：原有试剂另外一种不同原理（或厂家）试剂或另外两种不同原理（或厂家）试剂 1）两种试剂均阴性：报告“HIVHIV抗体阴性抗体阴性”2）一阴一阳或两种均阳性：出具“HIVHIV抗体抗体待复检待复检”报告，不能出阳性报告不能出阳性报告，应送确证实验室。谢谢大家！
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