细菌的常用生化试验.ppt

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1、细 菌 的 常 用 生 化 试 验细 菌 室 23种 细 菌 鉴 定 常 用 生 化 试 验 1.碳 水 化 合 物 的 代 谢 试 验 （ 1） 糖 （ 醇 、 苷 ） 类 发 酵 试 验 （ 2） 氧 化 一 发 酵 试 验 （ O F试 验 ） （ 3） -半 乳 糖 苷 酶 试 验 （ ONPG试 验 ） （ 4） 七 叶 苷 水 解 试 验 （ 5） 甲 基 红 试 验 （ 6） V-P试 验 2.蛋 白 质 和 氨 基 酸 的 代 谢 试 验 （ 1） 明 胶 液 化 试 验 （ 2） 吲 哚 （ 靛 基 质 ） 试 验 （ 3） 硫 化 氢 试 验 ） 尿 素 分 解 试 验 （

2、 5） 苯 丙 氨 酸 脱 氨 酶 试 验 （ 6） 氨 基 酸 脱 羧 酶 试 验 3.碳 源 和 氮 源 利 用 试 验 （ 1） 枸 橼 酸 盐 利 用 试 验 （ 2） 丙 二 酸 盐 利 用 试 验 4.各 种 酶 类 试 验 （ 1） 氧 化 酶 试 验 （ 2） 过 氧 化 氢 酶 试 验 （ 触 酶 试 验 ） （ 3） 硝 酸 盐 还 原试 验 （ 4） 脂 酶 试 验 （ 5） 卵 磷 脂 酶 试 验 （ 6） DNA酶 试 验 （ 7） 凝 固 酶 试 验 （ 8） CAMP试 验 一 、 碳 水 化 合 物 的 代 谢 试 验原 理由 于 细 菌 各 自 具 有 不 同

3、 的 酶 系 统 ， 对 糖 的 分 解 能力 不 同 ， 有 的 能 分 解 某 些 糖 产 生 酸 和 气 体 ， 有 的虽 能 分 解 糖 产 生 酸 ， 但 不 产 生 气 体 ， 有 的 则 不 分解 糖 。 据 此 可 对 分 解 产 物 进 行 检 测 从 而 鉴 别 细 菌 。具 体 试 验 有 ： 糖 类 发 酵 试 验 ； 葡 萄 糖 代 谢 类型 鉴 别 试 验 ； 七 叶 苷 水 解 试 验 ； 淀 粉 水 解 试验 ； 甲 基 红 试 验 ； V-P试 验 ； -半 乳 糖 苷酶 试 验 （ ONPG试 验 ） 。 1.糖 （ 醇 、 苷 ） 类 发 酵 试 验 原

4、理 ： 由 于 各 种 细 菌 含 有 发 酵 不 同 糖 （ 醇 、 苷 ） 类 的 酶 ， 故 分 解 糖 类 的 能 力各 不 相 同 ， 细 菌 分 解 糖 类 后 的 终 末 产 物 亦 不 一 致 ， 有 的 产 酸 、 产 气 ， 有 的 仅产 酸 ， 故 可 利 用 此 特 点 以 鉴 别 细 菌 。 方 法 ： 将 分 离 的 纯 种 细 菌 ， 以 无 菌 操 作 接 种 到 糖 （ 醇 、 苷 ） 类 发 酵 培 养 基 中 ，置 培 养 箱 中 培 养 数 小 时 至 两 周 后 ， 观 察 结 果 。 结 果 ： 若 能 分 解 培 养 基 中 的 糖 （ 醇 、 苷

5、 ） 类 产 酸 时 ， 培 养 基 中 的 指 示 剂 呈 酸性 反 应 。 若 产 气 可 使 液 体 培 养 基 中 倒 管 内 或 半 固 体 培 养 基 内 出 现 气 泡 ， 固 体培 养 基 内 有 裂 隙 等 现 象 。 若 不 分 解 ， 培 养 基 中 除 有 细 菌 生 长 外 ， 无 任 何 其 他变 化 。 应 用 ： 是 鉴 定 细 菌 最 主 要 和 最 基 本 的 试 验 ， 特 别 对 肠 杆 菌 科 细 菌 的 鉴 定 尤 为 重 要 。 2.氧 化 -发 酵 试 验 （ 0/F试 验 ） 原 理 ： 不 同 细 菌 对 不 同 的 糖 分 解 能 力 及

6、代 谢 产 物 不 同 ， 这 种 能 力 因是 否 有 氧 气 的 存 在 而 异 ， 有 氧 条 件 下 称 为 氧 化 ， 无 氧 条 件 下 称 为 发酵 。 方 法 ： 将 待 检 菌 同 时 穿 刺 接 种 两 支 HL培 养 基 ， 其 中 一 支 培 养 基 滴 加无 菌 的 液 体 石 蜡 （ 或 其 他 矿 物 油 ） ， 高 度 不 少 于 lcm。 将 培 养 基 于35 培 养 48h或 更 长 。 结 果 ： 应 用 ： 主 要 用 于 肠 杆 菌 科 细 菌 与 非 发 酵 菌 的 鉴 别 ， 前 者 均 为 发 酵 型 ，而 后 者 通 常 为 氧 化 型 或

7、产 碱 型 。 也 可 用 于 葡 萄 球 菌 与 微 球 菌 间 的 鉴别 ， 前 者 是 发 酵 型 ， 后 者 是 氧 化 型 。发酵型（产酸）氧化型产碱型 3.-半 乳 糖 苷 酶 试 验 （ ONPG试 验 ） 原 理 细 菌 分 解 乳 糖 依 靠 两 种 酶 的 作 用 ， 一 种 是 半 乳 糖 苷 透 性 酶 ，它 位 于 细 胞 膜 上 ， 可 运 送 乳 糖 分 子 渗 入 细 胞 。 另 一 种 为 -半 乳 糖 苷酶 ， 亦 称 乳 糖 酶 ， 位 于 细 胞 内 ， 能 使 乳 糖 水 解 成 半 乳 糖 和 葡 萄 糖 。具 有 上 述 两 种 酶 的 细 菌 ，

8、 能 在 2448h发 酵 乳 糖 ， 而 缺 乏 这 两 种 酶的 细 菌 ， 不 能 分 解 乳 糖 。 方 法 ： 从 克 氏 双 糖 铁 培 养 基 上 取 菌 ， 于 0.25ml无 菌 生 理 盐 水 中 制 成菌 悬 液 ， 加 入 一 滴 甲 苯 并 充 分 振 摇 ， 使 酶 释 放 。 将 试 管 置 37 水 浴5min， 加 入 0.25ml ONPG试 剂 ， 水 浴 20min 3h观 察 结 果 。 结 果 ： 菌 悬 液 呈 现 黄 色 为 阳 性 反 应 ， 一 般 在 20 30min内 显 色 。 应 用 ： 迅 速 及 迟 缓 分 解 乳 糖 的 细 菌

9、 ONPG 试 验 为 阳 性 ， 而 不 发 酵 乳 糖 的 细 菌 为 阴 性 。 本 实 验 主 要 用 于 迟 缓 发 酵 乳 糖 菌 株 的 快 速 鉴 定 。 4.七 叶 苷 水 解 试 验 原 理 方 法 ： 将 待 检 菌 接 种 于 七 叶 苷 培 养 基 中 ， 培 养 后 观 察 结果 。 结 果 ： 培 养 基 变 为 黑 色 为 阳 性 ， 不 变 色 者 为 阴 性 。 应 用 ： 主 要 用 于 D群 链 球 菌 与 其 他 链 球 菌 的 鉴 别 ， 前 者 阳 性 ， 后 者 阴 性 。 5.甲 基 红 试 验 原 理 ： 肠 杆 菌 科 各 菌 属 都 能

10、发 酵 葡 萄 糖 ， 在 分 解 葡 萄 糖 过 程 中 产 生丙 酮 酸 ， 进 一 步 分 解 中 ， 由 于 糖 代 谢 的 途 径 不 同 ， 可 产 生 乳 酸 ， 琥珀 酸 、 醋 酸 和 甲 酸 等 大 量 酸 性 产 物 ， 可 使 培 养 基 PH值 下 降 至 pH4.5以 下 ， 使 甲 基 红 指 示 剂 变 红 。 方 法 ： 将 待 检 菌 接 种 于 葡 萄 糖 蛋 白 胨 水 培 养 基 中 ， 培 养 2 4d， 于 培养 基 内 加 入 甲 基 红 试 剂 ， 立 即 观 察 结 果 。 结 果 ： 呈 现 红 色 为 阳 性 ； 橘 红 色 为 弱 阳

11、性 ； 黄 色 为 阴 性 。 应 用 ： 主 要 用 于 鉴 别 大 肠 埃 希 菌 与 产 气 肠 杆 菌 ， 前 者 为 阳 性 ， 后 者为 阴 性 。 肠 杆 菌 科 中 沙 门 菌 属 、 志 贺 菌 属 、 枸 橼 酸 杆 菌 属 、 变 形 杆菌 属 等 为 阳 性 ， 而 肠 杆 菌 属 、 哈 夫 尼 亚 菌 属 则 为 阴 性 。 6.V-P试 验 原 理 方 法 ： 将 待 检 菌 接 种 于 葡 萄 糖 蛋 白 胨 水 培 养 基 中 ， 于35 培 养 48h后 加 入 甲 液 （ 6%-萘 酚 酒 精 溶 液 ） 和 乙 液（ 40%KOH溶 液 ） ， 振 摇

12、。 结 果 ： 在 数 分 钟 内 出 现 红 色 为 阳 性 ； 如 无 红 色 出 现 且 于35 4h后 仍 如 故 者 即 为 阴 性 。 应 用 ： 本 试 验 常 与 甲 基 红 试 验 一 起 使 用 ， 因 为 前 者 阳 性 的 细 菌 ， 后 者 通 常 为 阴 性 。 二 、 蛋 白 质 和 氨 基 酸 的 代 谢 试 验 原 理 ： 不 同 种 类 的 细 菌 分 解 蛋 白 质 的 能 力 不 同 。 细 菌 对蛋 白 质 的 分 解 ， 一 般 先 由 胞 外 酶 将 复 杂 的 蛋 白 质 分 解 为短 肽 （ 或 氨 基 酸 ） ， 渗 入 菌 体 内 ， 然

13、后 再 由 胞 内 酶 将 肽类 分 解 为 氨 基 酸 。 具 体 试 验 有 ： 明 胶 液 化 试 验 ； 吲 哚 试 验 （ 靛 基 质 试验 ） ； 硫 化 氢 试 验 ； 尿 素 酶 试 验 ； 苯 丙 氨 酸 脱 氨酶 试 验 ； 氨 基 酸 脱 羧 酶 试 验 。 1.明 胶 液 化 试 验 原 理 方 法 ： 将 被 检 菌 穿 刺 接 种 于 明 胶 培 养 基 ， 于 22 培 养 7d，逐 日 观 察 结 果 。 结 果 ： 培 养 基 呈 液 化 状 态 为 阳 性 。 应 用 ： 肠 杆 菌 科 细 菌 的 鉴 别 ， 如 沙 雷 菌 、 普 通 变 形 杆 菌 、

14、 奇 异 变 形 杆 菌 、 阴 沟 杆 菌 等 可 液 化 明 胶 ， 而 其 他 细 菌 很 少 液 化 明 胶 。 有 些 厌 氧 菌 如 产 气 荚 膜 梭 菌 、 脆 弱 类 杆 菌 等 也 能 液 化 明 胶 。 另 外 多 数 假 单 胞 菌 也 能 液 化 明 胶 。 2.吲 哚 （ 靛 基 质 ） 试 验 原 理 方 法 ： 将 待 检 菌 接 种 于 蛋 白 胨 水 培 养 基 中 ， 于 35 培 养24 48h， 沿 试 管 壁 慢 慢 加 入 吲 哚 试 剂 。 结 果 ： 于 两 者 液 面 接 触 处 出 现 红 色 为 阳 性 ， 无 色 为 阴 性 。 应 用

15、 ： 主 要 用 于 肠 杆 菌 科 细 菌 的 鉴 定 。 3.硫 化 氢 试 验 原 理 方 法 ： 将 待 检 菌 穿 刺 接 种 于 醋 酸 铅 培 养 基 ， 于 35 培 养24 48h观 察 结 果 。 结 果 ： 培 养 基 变 黑 为 阳 性 ， 不 变 为 阴 性 。 应 用 ： 主 要 用 于 肠 杆 菌 科 中 属 及 种 的 鉴 别 。 如 沙 门 菌 属 、 爱 德 华 菌 属 、 亚 利 桑 那 菌 属 、 枸 橼 酸 杆 菌 属 、 变 形 杆 菌 属 细 菌 ， 绝 大 多 数 硫 化 氢 阳 性 ， 其 他 菌 属 阴 性 。 沙 门 菌 属 中 也 有 硫

16、 化 氢 阴 性 菌 种 。 4.尿 素 分 解 试 验 原 理 方 法 ： 将 待 检 菌 接 种 于 尿 素 培 养 基 ， 于 35 培 养 l8 24h观 察 结 果 。 结 果 ： 培 养 基 呈 碱 性 ， 使 酚 红 指 示 剂 变 红 为 阳 性 ， 不 变为 阴 性 。 应 用 ： 主 要 用 于 肠 杆 菌 科 中 变 形 杆 菌 属 细 菌 的 鉴 定 。 奇 异 变 形 杆 菌 和 普 通 变 形 杆 菌 脲 酶 阳 性 。 另 外 雷 氏 普 罗 威 登 菌 和 摩 根 菌 为 阳 性 ， 而 斯 氏 和 产 碱 普 罗 威 登 菌 阴 性 5.苯 丙 氨 酸 脱 氨

17、 酶 试 验 原 理 方 法 ： 将 被 检 菌 浓 厚 接 种 于 苯 丙 氨 酸 琼 脂 培 养 基 斜 面 上 ，于 35 培 养 l8 24h， 滴 加 10%三 氯 化 铁 试 剂 3 4滴 ， 自斜 面 上 方 流 下 。 结 果 ： 出 现 绿 色 为 阳 性 。 应 立 即 观 察 结 果 ， 延 长 反 应 时问 会 引 起 褪 色 。 应 用 ： 主 要 用 于 肠 杆 菌 科 细 菌 的 鉴 定 。 变 形 杆 菌 属 、 普 罗 威 登 斯 菌 属 和 摩 根 菌 属 细 菌 均 为 阳 性 ， 肠 杆 菌 种 中 其 他 细 菌 均 为 阴 性 。 6.氨 基 酸 脱

18、 羧 酶 试 验 原 理 方 法 ： 将 被 检 菌 分 别 接 种 于 赖 氨 酸 （ 或 鸟 氨 酸 或 精 氨 酸 ）培 养 基 和 氨 基 酸 对 照 培 养 基 中 ， 并 加 入 无 菌 液 体 石 蜡 或矿 物 油 ， 于 35 培 养 l 4d， 每 日 观 察 结 果 。 结 果 ： 对 照 管 应 呈 黄 色 ， 测 定 管 呈 紫 色 （ 指 示 剂 为 溴 甲酚 紫 ） 为 阳 性 ， 若 测 定 管 呈 黄 色 为 阴 性 。 若 对 照 管 呈 现紫 色 则 试 验 无 意 义 ， 不 能 作 出 判 断 。 应 用 ： 主 要 用 于 肠 杆 菌 科 细 菌 的

19、鉴 定 。 如 沙 门 菌 属 中 除伤 寒 和 鸡 沙 门 菌 外 ， 其 余 沙 门 菌 的 赖 氨 酸 和 鸟 氨 酸 脱 羧酶 均 为 阳 性 。 志 贺 菌 属 除 宋 内 和 鲍 氏 志 贺 菌 外 ， 其 他 志贺 菌 均 为 阴 性 。 三 、 碳 源 和 氮 源 利 用 试 验 1.枸 橼 酸 盐 利 用 试 验 原 理 ： 某 些 细 菌 能 以 铵 盐 为 唯 一 氮 源 ， 并 且 利 用 枸 橼 酸 盐 作 为 唯 一碳 源 ， 可 在 枸 橼 酸 盐 培 养 基 上 生 长 ， 分 解 枸 橼 酸 盐 ， 使 培 养 基 变 碱性 。 方 法 ： 将 被 检 菌 接

20、 种 于 枸 橼 酸 盐 培 养 基 ， 于 35 培 养 l 4d， 每 日 观察 结 果 。 结 果 ： 培 养 基 中 的 溴 麝 香 草 酚 兰 指 示 剂 由 淡 绿 色 变 为 深 蓝 色 为 阳 性 ； 应 用 ： 用 于 肠 杆 菌 科 中 菌 属 间 的 鉴 定 。 在 肠 杆 菌 科 中 埃 希 菌 属 、 志 贺 菌 属 、 爱 德 华 菌 属 和 耶 尔 森 菌 属 均 为 阴 性 ， 沙 门 菌 属 、 克 雷 伯 菌 属 通 常 为 阳 性 。 2.丙 二 酸 盐 利 用 试 验 原 理 ： 有 的 细 菌 可 利 用 丙 二 酸 盐 作 为 唯 一 碳 源 ， 将

21、 丙 二 酸 盐 分 解 生成 碳 酸 钠 ， 使 培 养 基 变 碱 。 方 法 ： 将 被 检 菌 接 种 于 丙 二 酸 盐 培 养 基 培 养 基 ， 35 培 养 24 48h后 观 察 结 果 。 结 果 ： 培 养 基 由 淡 绿 色 变 为 深 蓝 色 为 阳 性 ， 颜 色 无 变 化 为 阴 性 。 应 用 ： 肠 杆 菌 科 中 属 间 及 种 的 鉴 别 。 克 雷 伯 菌 属 为 阳 性 ， 枸 橼 酸 杆 菌 属 、 肠 杆 菌 属 和 哈 夫 尼 亚 菌 属 中 有 些 菌 种 也 呈 阳 性 ， 其 他 菌 属 均 为 阴 性 。 四 、 酶 类 试 验 1.氧

22、 化 酶 试 验 原 理 ： 氧 化 酶 （ 细 胞 色 素 氧 化 酶 ） 是 细 胞 色 素 呼 吸 酶 系统 的 最 终 呼 吸 酶 。 方 法 ： 常 用 方 法 有 三 种 ； 菌 落 法 ： 直 接 滴 加 试 剂 于 被 检 菌 菌 落 上 。 滤 纸 法 ： 取 洁 净 滤 纸 一 小 块 ， 沾 取 菌 少 许 ， 然 后 加 试 剂 。 试 剂 纸 片 法 ： 将 滤 纸 片 浸 泡 于 试 剂 中 制 成 试 剂 纸 片 ， 取 菌 涂 于 试 剂 纸 上 。 结 果 ： 细 菌 在 与 试 剂 接 触 10秒 内 呈 深 紫 色 ， 为 阳 性 。 为 保 证 结 果

23、的准 确 性 ， 分 别 以 铜 绿 假 单 胞 菌 和 大 肠 埃 希 菌 作 为 阳 性 和 阴 性 对 照 。 应 用 ： 主 要 用 于 肠 杆 菌 科 细 菌 与 假 单 胞 菌 的 鉴 别 ， 前 者 为 阴 性 ， 后者 为 阳 性 。 奈 瑟 菌 属 、 莫 拉 菌 属 细 菌 也 呈 阳 性 反 应 。 2.过 氧 化 氢 酶 试 验 （ 触 酶 试 验 ） 原 理 方 法 ： 取 槽 置 于 洁 净 的 试 管 内 或 玻 片 上 ， 然 后 加 3%过 氧 化 氢 数 滴 ；或 直 接 滴 加 3%过 氧 化 氢 于 不 含 血 液 的 细 菌 培 养 物 中 ， 立 即

24、 观 察 结 果 。 结 果 ： 有 大 量 气 泡 产 生 者 为 阳 性 。 不 产 生 气 泡 者 为 阴 性 。 应 用 ： 革 兰 阳 性 球 菌 中 ， 葡 萄 球 菌 和 微 球 菌 均 产 生 过 氧 化 氢 酶 ， 而链 球 菌 属 为 阴 性 ， 故 此 试 验 常 用 于 革 兰 阳 性 球 菌 的 初 步 分 群 。 注 意 事 项 3%H2O2溶 液 要 新 鲜 配 制 。 不 宜 用 血 琼 脂 平 板 上 生 长 的 菌 落 ， 因 红 细 胞 含 有 触 酶 ， 可 致 假 阳性 反 应 。 取 对 数 生 长 期 的 细 菌 。 3.硝 酸 盐 还 原 试 验

25、 原 理 ： 在 合 成 过 程 中 ， 硝 酸 盐 还 原 为 亚 硝 酸 盐 和 氨 ， 再 由 氨 转 化 为氨 基 酸 和 细 胞 内 其 他 含 氮 化 合 物 ； 在 分 解 代 谢 过 程 中 ， 硝 酸 盐 或 亚硝 酸 盐 代 替 氧 作 为 呼 吸 酶 系 统 中 的 终 末 受 氢 体 。 能 使 硝 酸 盐 还 原 的细 菌 从 硝 酸 盐 中 获 得 氧 而 形 成 亚 硝 酸 盐 和 其 他 还 原 性 产 物 。 方 法 ： 被 检 菌 接 种 于 硝 酸 盐 培 养 基 中 ， 于 35 培 养 l 4d。 将 甲 （ 对氨 基 苯 磺 酸 0.8g+5mol

26、L醋 酸 lOOml） 、 乙 液 （ -奈 胺 0.5g + 5mol/L醋 酸 lOOml） 等 量 混 合 后 （ 约 0.1ml） 加 入 培 养 基 内 ， 立 即 观察 结 果 。 结 果 ： 出 现 红 色 为 阳 性 。 应 用 ： 本 试 验 在 细 菌 鉴 定 中 广 泛 应 用 。 肠 杆 菌 科 细 菌 均 能 还 原 硝 酸 盐 为 亚 硝 酸 盐 ； 铜 绿 假 单 胞 菌 、 嗜 麦 芽 窄 食 单 胞 菌 等 假 单 胞 菌 可 产 生 氮 气 。 4.脂 酶 试 验 原 理 ： 有 的 细 菌 产 生 脂 酶 ， 可 分 解 脂 肪 成 游 离 的 脂 肪 酸

27、 。从 而 使 培 养 基 中 与 脂 肪 结 合 形 成 无 色 化 合 物 的 维 多 利 亚蓝 释 放 出 来 ， 呈 现 深 蓝 色 。 方 法 ： 将 被 检 菌 接 种 于 脂 酶 培 养 基 （ 含 维 多 利 亚 蓝 ） 中 ，于 37 培 养 24h 结 果 ： 培 养 基 变 为 蓝 色 为 阳 性 ， 阴 性 为 粉 红 色 或 无 色 。 应 用 ： 主 要 用 于 厌 氧 菌 的 鉴 别 。 类 杆 菌 属 中 的 中 间 类 杆菌 产 生 脂 酶 ， 其 他 类 杆 菌 则 阴 性 ； 芽 胞 梭 菌 属 中 产 芽 胞梭 菌 、 肉 毒 梭 菌 和 诺 维 梭 菌

28、 也 有 此 酶 ， 而 其 他 梭 菌 阴 性 。 5.卵 磷 脂 酶 试 验 原 理 ： 有 的 细 菌 产 生 卵 磷 脂 酶 （ -毒 素 ） ， 在 钙 离 子 存在 时 ， 此 酶 可 迅 速 分 解 卵 磷 脂 ， 生 成 浑 浊 沉 淀 状 的 甘 油酯 和 水 溶 性 磷 酸 胆 碱 。 方 法 ： 将 被 检 菌 划 线 接 种 或 点 种 于 卵 黄 琼 脂 平 板 上 ， 于35 培 养 3 6h。 结 果 ： 若 3h后 在 菌 落 周 围 形 成 乳 白 色 混 浊 环 ， 即 为 阳 性 ，6h后 混 浊 环 可 扩 展 至 5 6mm。 应 用 ： 主 要 用

29、于 厌 氧 菌 的 鉴 定 。 产 气 荚 膜 梭 菌 、 诺 维 梭菌 产 生 此 酶 ， 其 他 梭 菌 为 阴 性 。 6.DNA酶 试 验 原 理 ： 某 些 细 菌 产 生 DNA酶 ， 可 使 长 链 DNA水 解 成 寡 核苷 酸 链 。 因 为 长 链 DNA可 被 酸 沉 淀 ， 寡 核 苷 酸 链 则 溶 于酸 ， 所 以 当 在 菌 落 平 板 上 加 入 酸 后 ， 会 在 菌 落 周 围 出 现透 明 环 。 方 法 ： 将 被 检 菌 点 种 于 0.2%DNA琼 脂 平 板 上 ， 于 35 培养 l8 24h， 然 后 用 lmol/L盐 酸 覆 盖 平 板 ，

30、 观 察 结 果 。 结 果 ： 在 菌 落 周 围 出 现 透 明 环 为 阳 性 ， 无 透 明 环 为 阴 性 。 应 用 ： 在 革 兰 阳 性 球 菌 中 只 有 金 黄 色 葡 萄 球 菌 产 生 DNA酶 ， 在 肠 杆 菌 科 中 沙 雷 菌 和 变 形 杆 菌 产 生 此 酶 ， 故 本 试 验 可 用 于 细 菌 的 鉴 别 。 7.凝 固 酶 试 验 原 理 方 法 ： 1） 玻 片 法 ： 取 兔 血 浆 和 盐 水 各 一 滴 ， 分 别 置 于 洁 净 的 玻片 上 ， 挑 取 被 检 菌 分 别 与 血 浆 和 盐 水 混 合 。 2） 试 管 法 ： 取 试 管

31、 2支 ， 各 加 0.5ml人 或 兔 血 浆 ， 挑 取 被检 菌 和 阳 性 对 照 菌 分 别 加 入 血 浆 中 并 混 匀 ， 于 37 水 浴3 4h。 结 果 ： 玻 片 法 以 血 浆 中 有 明 显 的 颗 粒 出 现 而 盐 水 中 无 自凝 现 象 判 为 阳 性 ； 试 管 法 以 血 浆 凝 固 判 为 阳 性 。 应 用 ： 作 为 鉴 定 葡 萄 球 菌 致 病 性 的 重 要 指 标 ， 也 是 葡 萄球 菌 鉴 别 时 常 用 的 一 个 试 验 。 8.CAMP试 验 原 理 ： B群 链 球 菌 能 产 生 CAMP因 子 ， 可 促 进 葡 萄 球 菌

32、 的 B-溶 血 素 溶 解 红 细胞 的 活 性 ， 因 此 在 两 菌 （ B群 链 球 菌 和 葡 萄 球 菌 ） 的 交 界 处 溶 血 力 增 加 ， 出现 矢 形 （ 半 月 形 ） 的 溶 血 区 。 方 法 ： 先 以 产 B-溶 血 素 的 金 黄 色 葡 萄 球 菌 划 一 横 线 接 种 于 血 琼 脂 平 板 上 ， 再将 被 检 菌 与 前 一 划 线 作 垂 直 划 线 接 种 ， 两 线 不 能 相 交 ， 相 距 0.5 lcm， 于37 培 养 18 24h， 观 察 结 果 。 每 次 试 验 都 应 设 阴 性 和 阳 性 对 照 。 结 果 ： 在 两 划 线 交 界 处 出 现 箭 头 样 的 溶 血 区 为 阳 性 。 。 应 用 ： 在 链 球 菌 中 ， 只 有 B群 链 球 菌 CAMP试 验 阳 性 ， 故 可 作 为 特 异 性 鉴 定