酶免疫技术课件

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1、第八章酶免疫技术第1页，共87页。教学目的要求：1.掌握酶和酶作用的底物、酶标记的抗体或抗原；熟练掌握固相载体。2.熟练掌握酶免疫技术的分类3.熟练掌握酶联免疫吸附试验的方法类型及原理4.掌握酶免疫测定的应用第2页，共87页。放放射射免免疫疫技技术术荧荧光光免免疫疫技技术术酶酶免免疫疫技技术术三大经典标记技术三大经典标记技术三大经典标记技术第3页，共87页。第4页，共87页。基本原理基本原理抗原抗体抗原抗体反应的特反应的特异性异性+酶高效催化酶高效催化反应的专一反应的专一性性酶标抗体（抗原）与抗原（抗体）的特异性反应酶对底物的显色反应对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析 第一节第一节 酶

2、免疫技术的特点酶免疫技术的特点第5页，共87页。基本原理基本原理酶标抗体（抗原）与抗原（抗体）的特异性反应酶对底物的显色反应对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析 第一节第一节 酶免疫技术的特点酶免疫技术的特点底物底物 E酶标抗体酶标抗体EE抗原抗原第6页，共87页。一、酶和酶作用底物一、酶和酶作用底物 （一）标记酶的要求：（一）标记酶的要求：活性高，纯度高活性高，纯度高作用专一性强作用专一性强性质稳定，易与抗原或抗体偶联性质稳定，易与抗原或抗体偶联测定方法简便易行、敏感、精确测定方法简便易行、敏感、精确酶和底物对人体无害酶和底物对人体无害酶和底物价廉易得酶和底物价廉易得第7页，共87页。

3、辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶（HRPHRP）糖蛋白（主酶）糖蛋白（主酶）亚铁血红素（辅基）亚铁血红素（辅基）主酶与酶活性无关主酶与酶活性无关 辅基是酶的活性中心辅基是酶的活性中心RZRZ值：值：403nm 403nm（辅基）（辅基）与与275nm275nm（主酶）（主酶）ODOD值之比值之比 纯度数（纯度数（RZRZ）值与酶）值与酶活性无关，酶活性单活性无关，酶活性单位（位（U U）比）比RZRZ值更为重值更为重要要 酶的纯度并不代表酶的酶的纯度并不代表酶的活力活力 国内以辣根过氧化酶最为常用国内以辣根过氧化酶最为常用1 1、辣根过氧化物酶、辣根过氧化物酶 （horseradish perox

4、idase,HRP）（一）常用的酶（一）常用的酶第8页，共87页。DHDH2 2+H+H2 2O O2 2 D+2HD+2H2 2O O 供氢体供氢体DHDH2 2习惯上被称为底物，底习惯上被称为底物，底物有多种物有多种 H H2 2O O2 2为受氢体，为受氢体，HRPHRP对受氢体的专一对受氢体的专一性很高性很高 HRPHRP催化的反应式为：催化的反应式为：HRPHRP第9页，共87页。邻苯二胺邻苯二胺 OPD反应后显反应后显橙黄色橙黄色，加酸终止反应后呈，加酸终止反应后呈棕黄色棕黄色，测定波长，测定波长492492nm。不稳定，有致癌性。不稳定，有致癌性。四甲基联苯胺四甲基联苯胺 TMB

5、反应后显反应后显蓝色蓝色 ，加酸终止反应后，加酸终止反应后变为变为黄色黄色黄色黄色,测定波长测定波长450450nm，稳定，无致癌性，稳定，无致癌性，ELISA中应用最广泛的底物。中应用最广泛的底物。HRP常用底物常用底物第10页，共87页。（二）碱性磷酸酶（二）碱性磷酸酶 （alkaline phosphatase，AP)是一种磷酸酯水解酶，从大肠杆菌提取是一种磷酸酯水解酶，从大肠杆菌提取 AP的的 底底物物 对对-硝基苯磷酸酯硝基苯磷酸酯（pNPP）经经APAP作用后的产物为黄色对硝基酚，作用后的产物为黄色对硝基酚，最大吸收峰波长为最大吸收峰波长为405 405 nm。敏感性高于HRP,但

6、不易获得高纯度的制品、稳定性差，价格贵第11页，共87页。（三）（三）-半乳糖苷酶半乳糖苷酶（-galactosidase，-Gal）源于大肠埃希菌源于大肠埃希菌 ，常用于均相酶免疫测定。，常用于均相酶免疫测定。-Gal的底的底物物 4-4-甲基伞酮基甲基伞酮基-D半乳糖苷（半乳糖苷（4MUG）酶作用后，生成高强度荧光物酶作用后，生成高强度荧光物 ，用荧光计测量。，用荧光计测量。第12页，共87页。二、酶标记抗体或抗原二、酶标记抗体或抗原酶免疫技术的核心组酶免疫技术的核心组成部分成部分 酶结合物酶结合物酶标记物酶标记物 通过化学反应或免通过化学反应或免疫学反应，让酶与疫学反应，让酶与抗体或抗原

7、形成的抗体或抗原形成的结合物结合物 第13页，共87页。（一）酶标记抗体或抗原的制备（一）酶标记抗体或抗原的制备标记方法要标记方法要求求技术方法简单、产率高，重复性好技术方法简单、产率高，重复性好标记反应不影响酶和抗原或抗体的活标记反应不影响酶和抗原或抗体的活性性酶标记物稳定酶标记物稳定 ，不易发生解离，不易发生解离第14页，共87页。制备方法制备方法2.2.过碘酸钠氧化法过碘酸钠氧化法常用于常用于HRPHRP标记抗体或抗原标记抗体或抗原 1.1.戊二醛交联法戊二醛交联法适合各种酶蛋白的标记。适合各种酶蛋白的标记。第15页，共87页。（二）酶标记物的纯化与鉴定（二）酶标记物的纯化与鉴定 1 1

8、酶标记物的纯化酶标记物的纯化 标记完成后应除去反应溶液中的游离酶、游离抗体标记完成后应除去反应溶液中的游离酶、游离抗体(抗原抗原)、酶聚合物及抗体、酶聚合物及抗体(抗原抗原)聚合物，聚合物，避免避免游离酶增游离酶增加非特异显色以及游离抗体加非特异显色以及游离抗体(抗原抗原)的竞争作用。的竞争作用。常用的纯化方法有葡聚糖凝胶层析法和饱和硫酸常用的纯化方法有葡聚糖凝胶层析法和饱和硫酸铵沉淀法等。铵沉淀法等。第16页，共87页。2.2.酶标记物的鉴定酶标记物的鉴定（1 1）免疫活性鉴定：免疫活性鉴定：常用免疫电泳或双向免疫扩散法，常用免疫电泳或双向免疫扩散法，出现沉淀线表示结合物中的抗体出现沉淀线表

9、示结合物中的抗体(抗原抗原)具有免疫活性。具有免疫活性。（2 2）酶标记率测定：酶标记率测定：用分光光度法分别测定结合物中用分光光度法分别测定结合物中酶和抗体酶和抗体(抗原抗原)蛋白的含量，然后按公式计算其标记蛋白的含量，然后按公式计算其标记率。率。第17页，共87页。三、固相载体三、固相载体 固相抗体或抗原是非均相酶免技术中将游离固相抗体或抗原是非均相酶免技术中将游离和结合的酶标记物迅速分离的最常用方法和结合的酶标记物迅速分离的最常用方法 固相抗体或抗原固相抗体或抗原:就是把抗体或抗原结合到固就是把抗体或抗原结合到固相载体的表面相载体的表面 第18页，共87页。（一）固相载体的要求（一）固相

10、载体的要求结合抗体或抗原的容量大结合抗体或抗原的容量大 抗体或抗原牢固地固定在其表面抗体或抗原牢固地固定在其表面 不影响免疫反应性不影响免疫反应性 利于反应充分进行利于反应充分进行 固相方法简便易行，快速经济固相方法简便易行，快速经济第19页，共87页。（二）固相载体的种类（二）固相载体的种类1 1塑料制品塑料制品 由聚苯乙由聚苯乙烯、聚氯乙烯制成。形状。烯、聚氯乙烯制成。形状。主要有微量反应板、小试主要有微量反应板、小试管和小珠三种。管和小珠三种。2 2微颗粒微颗粒 微颗粒是由高分微颗粒是由高分子单体聚合成的微球或颗粒。子单体聚合成的微球或颗粒。3.3.微孔虑膜微孔虑膜 是一种多孔薄膜过滤材

11、料，包括硝酸纤维是一种多孔薄膜过滤材料，包括硝酸纤维素膜（素膜（NC）、尼龙膜和玻璃纤维素膜等。）、尼龙膜和玻璃纤维素膜等。微量反应板微量反应板第20页，共87页。第21页，共87页。（三）包被与封闭（三）包被与封闭将抗原或抗体固相化结合在固相载体上的将抗原或抗体固相化结合在固相载体上的过程称为过程称为包被包被（coating)coating)。第22页，共87页。以聚笨乙烯固相载体（如制以聚笨乙烯固相载体（如制ELISAELISA板）板）为例说为例说明免疫吸附的过程：明免疫吸附的过程：抗原（抗体）抗原（抗体）用用PH9.6PH9.6的碳酸盐溶液的碳酸盐溶液稀释稀释 4 4C C过夜过夜用用1

12、0%10%的小牛血的小牛血清再包被一次，以消除固相载体表面未吸清再包被一次，以消除固相载体表面未吸附的位点，此过程叫做附的位点，此过程叫做封闭封闭。第23页，共87页。第二节第二节 酶免疫技术的分类酶免疫技术的分类克隆酶供体免疫测定克隆酶供体免疫测定酶免疫分析技术酶免疫分析技术酶免疫组织化学技术酶免疫组织化学技术酶免疫测定技术酶免疫测定技术均相酶免疫测定均相酶免疫测定异相酶免疫测定异相酶免疫测定酶放大免疫测定技术酶放大免疫测定技术液相酶免疫测定液相酶免疫测定固相酶免疫测定：固相酶免疫测定：酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(ELISA)组织切片或其它标本中抗原的定位分析组织切片或其它标本中抗原的

13、定位分析 液体标本中抗原或液体标本中抗原或抗体的定性和定量抗体的定性和定量24第24页，共87页。一、均相酶免疫测定法一、均相酶免疫测定法 酶蛋白与抗原或抗体结合形成酶蛋白与抗原或抗体结合形成酶标记物酶标记物。未未与抗原（抗体）结合的标记抗体（抗原），称为与抗原（抗体）结合的标记抗体（抗原），称为游离游离标记物。标记物。与抗原（抗体）结合的标记抗体（抗原），称为与抗原（抗体）结合的标记抗体（抗原），称为结合结合标记物。标记物。Ag+Ab-E AgAb-E+Ab-E（以标记Ab检测Ag为例）第25页，共87页。一、均相酶免疫测定法一、均相酶免疫测定法 基本原理基本原理 酶标记物与相应的抗原或抗体

14、结合后，酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，其中的酶活性将发生改变。其中的酶活性将发生改变。因此，不需对反应液中因此，不需对反应液中结合和游离结合和游离的酶标记物进的酶标记物进行分离，行分离，直接测定直接测定反应系统中反应系统中总酶活性的变化总酶活性的变化即可推即可推算出被测样品中抗原的含量。算出被测样品中抗原的含量。Ag+Ab-E AgAb-E+Ab-E（以标记Ab检测Ag为例）第26页，共87页。二、异相液相酶免疫测定法二、异相液相酶免疫测定法基本原理基本原理：抗原抗体反应平衡后，需采用适当的方：抗原抗体反应平衡后，需采用适当的方法分离法分离游离的游离的和和结合的酶标记物结合的酶标记物，然后

15、对经酶催化的底，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算待测样品中抗原（或抗体）物显色程度进行测定，再推算待测样品中抗原（或抗体）的含量。依据测定方法又可分为的含量。依据测定方法又可分为液相液相和和固相酶免疫测定固相酶免疫测定。目前临床上多用固相酶免疫测定法。目前临床上多用固相酶免疫测定法。Ag+Ab-E AgAb-E+Ab-E（以标记Ab检测Ag为例）第27页，共87页。第三节第三节 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验（ELISA）一、基本原理一、基本原理底物显色底物显色定性或定量的分析定性或定量的分析包被包被将已知抗原将已知抗原或抗体吸附或抗体吸附在固相载体在固相载体表面表面反应反应加入

16、待测抗加入待测抗体或体或抗原和酶标抗原和酶标抗原抗原或抗体或抗体洗涤洗涤使结合在固使结合在固相上相上的抗原抗体的抗原抗体复合物复合物与未结合的与未结合的分离分离1234第28页，共87页。二、方法类型及反应原理二、方法类型及反应原理（一）检测抗原的方法（一）检测抗原的方法 将将己知抗体己知抗体包被固相载体，待检标本中的相应包被固相载体，待检标本中的相应抗抗原原与固相表面的抗体结合，洗涤去除未结合成分。然后再与固相表面的抗体结合，洗涤去除未结合成分。然后再与抗原特异的酶标抗体结合，形成固相抗体与抗原特异的酶标抗体结合，形成固相抗体-抗原抗原-酶标抗酶标抗体复合物，根据加底物后的显色程度确定待检抗

17、原的含量。体复合物，根据加底物后的显色程度确定待检抗原的含量。1.双抗体夹心法双抗体夹心法第29页，共87页。E固相抗体固相抗体标本（含抗原）标本（含抗原）酶标抗体酶标抗体EE底物底物双抗体夹心法检测抗原双抗体夹心法检测抗原适用于检测含有至少两个抗原决定簇的多价抗原第30页，共87页。（1 1）将已知抗体包被于固相反应板上，洗涤。）将已知抗体包被于固相反应板上，洗涤。（2 2）加待检标本）加待检标本,温育，洗涤。温育，洗涤。（3 3）加酶标抗体，洗涤。）加酶标抗体，洗涤。（4 4）加底物，根据颜色反应的程度进行该抗原的）加底物，根据颜色反应的程度进行该抗原的 定性或定量。定性或定量。2 2技术

18、要点技术要点 E固相抗体固相抗体标本（含抗原）标本（含抗原）酶标抗体酶标抗体EE底物底物第31页，共87页。（+）（-）E EE EE EE EE EE EE EE EE E双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法测抗原第32页，共87页。2.双位点一步法检测抗原双位点一步法检测抗原 即在双抗体夹心法基础上使用针对抗原分子上即在双抗体夹心法基础上使用针对抗原分子上两两个不同表位个不同表位的单克隆抗体，分别作为固相抗体和酶的单克隆抗体，分别作为固相抗体和酶标抗体。测定时将待检标本和酶标抗体同时加入进行标抗体。测定时将待检标本和酶标抗体同时加入进行反应，两种抗体互不干扰，经一次温育和洗涤后，即反应，两种抗体

19、互不干扰，经一次温育和洗涤后，即可加入底物进行显色测定。可加入底物进行显色测定。第33页，共87页。EEE底物底物固相抗体固相抗体标本（含抗原）标本（含抗原）酶标抗体酶标抗体双位点一步法检测抗原双位点一步法检测抗原在包被时使用一种单抗，酶标记时使用一种单抗第34页，共87页。E EE EE EE E（+）E EE E（-）双位点一步法测抗原双位点一步法测抗原第35页，共87页。如果待检标本中抗原浓度过高，如果待检标本中抗原浓度过高，容易形成容易形成“钩状效应钩状效应（hook effect）”。钩状效应严重时，可出钩状效应严重时，可出现假阴性结果，必要时可将待检标本适当稀释后重现假阴性结果，必

20、要时可将待检标本适当稀释后重新测定。新测定。注意事项注意事项 EE底物底物固相抗体固相抗体标本（抗原浓度高）标本（抗原浓度高）酶标抗体酶标抗体E第36页，共87页。3.竞争法检测抗原竞争法检测抗原 酶标抗原和待检抗原对固相特异性抗体具有相同的结酶标抗原和待检抗原对固相特异性抗体具有相同的结合力，二者竞争结合固相特异性抗体。免疫反应后，结合合力，二者竞争结合固相特异性抗体。免疫反应后，结合于固相的酶标抗原量与标本中待检抗原含量呈于固相的酶标抗原量与标本中待检抗原含量呈反比反比。待检。待检抗原量越多，酶标抗原与固相抗体结合越少，底物抗原量越多，酶标抗原与固相抗体结合越少，底物显色反应越浅；反之则显

21、色越深，即底物显色与待显色反应越浅；反之则显色越深，即底物显色与待检标本中抗原含量呈反比。检标本中抗原含量呈反比。第37页，共87页。酶标抗原酶标抗原 EEEE固相抗体固相抗体标本（含抗原）标本（含抗原）底物底物E竞争法检测抗原竞争法检测抗原第38页，共87页。（1 1）将特异性抗体包被于固相反应板上，洗涤。）将特异性抗体包被于固相反应板上，洗涤。（2 2）待测管中加待检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，）待测管中加待检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，待检标本中如果含有抗原，则与酶标抗原竞争固结合相待检标本中如果含有抗原，则与酶标抗原竞争固结合相抗体，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。对照管中抗

22、体，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。对照管中只加酶标抗原，温育，洗涤。只加酶标抗原，温育，洗涤。（3 3）加底物显色。对照管中颜色深，待测管颜色越淡，）加底物显色。对照管中颜色深，待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。表示标本中抗原含量越多。技术要点技术要点第39页，共87页。（+）E EE E（-）E EE EE EE EE EE EE EE E竞争法测抗原竞争法测抗原第40页，共87页。（二）检测抗体的方法（二）检测抗体的方法 将已知抗原吸附于固相载体上，待检标本中相应将已知抗原吸附于固相载体上，待检标本中相应抗体与之结合，形成固相抗原抗体与之结合，形成固相抗原-抗体复合物，再用酶标抗

23、体复合物，再用酶标二抗与固相免疫复合物中的抗体结合，形成固相抗原二抗与固相免疫复合物中的抗体结合，形成固相抗原-抗体抗体-酶标二抗复合物，根据加底物后的显色程度确定酶标二抗复合物，根据加底物后的显色程度确定待检抗体含量。待检抗体含量。1.间接法间接法第41页，共87页。固相抗原固相抗原标本（含抗体）标本（含抗体）酶标二抗酶标二抗底物底物EEE间接法检测抗体间接法检测抗体酶标二抗是针对一类免疫球蛋白(如抗人IgG），因此该法只需要变换固相抗原，即可用一种酶标二抗测各种与抗原相应的抗体，具有更广的通用性第42页，共87页。（+）E EE EE EE EE EE E（-）E EE EE E间接法测抗

24、体间接法测抗体第43页，共87页。2.2.双抗原夹心法双抗原夹心法 将已知抗原包被固相载体，待检标本中的相将已知抗原包被固相载体，待检标本中的相应抗体可分别与固相表面的抗原、酶标抗原结合，应抗体可分别与固相表面的抗原、酶标抗原结合，形成固相抗原形成固相抗原-抗体抗体-酶标抗原复合物，根据加底酶标抗原复合物，根据加底物后的显色程度确定待检抗体含量。物后的显色程度确定待检抗体含量。同双抗体夹心法。同双抗体夹心法。技术要点技术要点第44页，共87页。E固相抗体固相抗体标本（含抗体）标本（含抗体）酶标抗原酶标抗原底物底物EE双抗原夹心法检测抗体双抗原夹心法检测抗体第45页，共87页。（+）（-）E E

25、E EE EE EE EE EE EE EE E双抗原夹心法测抗体双抗原夹心法测抗体第46页，共87页。3.竞争法检测抗体竞争法检测抗体同竞争法结合抗原。同竞争法结合抗原。HBcAb和和HBeAb的测定均采用竞争法，但其测的测定均采用竞争法，但其测定具体模式有区别。定具体模式有区别。1 1原理原理第47页，共87页。（1 1）竞争法检测）竞争法检测HBcAb：将将HBcAg包被于固相反应板上，洗涤。包被于固相反应板上，洗涤。加入待检标本和酶标特异性抗体，温育，洗涤。加入待检标本和酶标特异性抗体，温育，洗涤。加入底物，温育，形成有色产物，用酶标比色仪测加入底物，温育，形成有色产物，用酶标比色仪测

26、定结果。显色深浅与待检标本中相应抗体含量成反比。定结果。显色深浅与待检标本中相应抗体含量成反比。2 2技术要点技术要点第48页，共87页。固相抗原标本（含抗体）底物酶标抗体EEEEE竞争法检测竞争法检测HBcAbHBcAb第49页，共87页。（+）E EE E（-）E EE EE EE EE EE EE E竞争法检测竞争法检测HBcAbHBcAb第50页，共87页。（2 2）竞争法检测）竞争法检测HBeAb：将将HBeAb包被于固相反应板上，洗涤。包被于固相反应板上，洗涤。加入待检标本和加入待检标本和HBeAg，温育，洗涤。，温育，洗涤。加入酶标加入酶标HBeAb，温育，洗涤。，温育，洗涤。加

27、入底物，温育，形成有色产物，用酶标比色加入底物，温育，形成有色产物，用酶标比色仪测定结果。显色深浅与待检标本中相应抗体含仪测定结果。显色深浅与待检标本中相应抗体含量成反比。量成反比。第51页，共87页。固相抗体标本（含抗体）抗原酶标抗体底物EEE竞争法检测竞争法检测HBeAbHBeAb第52页，共87页。（+）（-）E EE EE EE EE EE EE EE EE E竞争法检测竞争法检测HBeAbHBeAb第53页，共87页。4.捕获法捕获法 将抗人将抗人IgM抗体吸附于固相载体上，待检标抗体吸附于固相载体上，待检标本中的本中的IgM类抗体多被固相抗体捕获。加入特异抗原类抗体多被固相抗体捕获

28、。加入特异抗原与固相抗体捕获的与固相抗体捕获的IgM类抗体结合，再加入抗原特异类抗体结合，再加入抗原特异的酶标抗体，形成固相抗人的酶标抗体，形成固相抗人IgM-IgM-抗原抗原-酶标抗酶标抗体复合物。最后根据加底物后的显色程度确定待体复合物。最后根据加底物后的显色程度确定待检检IgM抗体的含量。抗体的含量。第54页，共87页。固相抗人固相抗人lgMlgM抗体抗体E标本（含抗体）标本（含抗体）抗原抗原底物底物EEE固相捕获法检测固相捕获法检测lgMlgM抗体抗体第55页，共87页。E EE EE EE EE EE E（+）（-）捕获法捕获法第56页，共87页。方法评价方法评价ELISA具有操作简

29、便、快速、敏感性高、特异性强、实具有操作简便、快速、敏感性高、特异性强、实验设备要求简单、应用范围广泛、无反射性同位素污染验设备要求简单、应用范围广泛、无反射性同位素污染等优点。等优点。发展最快、应用最广，普及。发展最快、应用最广，普及。第57页，共87页。试剂盒第58页，共87页。第59页，共87页。（图为瑞士HAMILTON FAME24/20全自动酶免分析仪）第60页，共87页。1病原体及其抗体测定病原体及其抗体测定 广泛应用于传染病的诊断。广泛应用于传染病的诊断。2蛋白质测定蛋白质测定 各种免疫球蛋白、补体组分、肿瘤标志物各种免疫球蛋白、补体组分、肿瘤标志物各种血浆蛋白质、同工酶等。各

30、种血浆蛋白质、同工酶等。3非肽类激素测定非肽类激素测定 如如T3、T4、雌激素、绒毛膜促、雌激素、绒毛膜促性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素等。等。4药物和毒品测定药物和毒品测定 如地高辛、苯巴比妥、庆大霉素、如地高辛、苯巴比妥、庆大霉素、吗啡等。吗啡等。第四节第四节 酶免疫测定的应用酶免疫测定的应用第61页，共87页。小小 结结 酶免疫分析技术酶免疫分析技术是以酶标记的抗原或抗体作为主是以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂的免疫检测方法，在抗原与抗体的特异性反应要试剂的免疫检测方法，在抗原与抗体的特异性反应完成后，通过酶对底物的催化作用提高反

31、应的敏感性完成后，通过酶对底物的催化作用提高反应的敏感性。酶免疫分析技术可分为酶免疫组织化学技术和酶免。酶免疫分析技术可分为酶免疫组织化学技术和酶免疫测定两大类疫测定两大类,后者根据抗原抗体反应后是否需要分后者根据抗原抗体反应后是否需要分离结合与游离的酶标记物而分为均相和非均相两种类离结合与游离的酶标记物而分为均相和非均相两种类型。型。第62页，共87页。展展 望望 酶免疫技术酶免疫技术是三大经典标记免疫技术之一，是以是三大经典标记免疫技术之一，是以酶标记抗体或抗原为主要试剂的一种标记免疫分析技酶标记抗体或抗原为主要试剂的一种标记免疫分析技术。随着相关新技术的不断问世，如杂交瘤单克隆抗术。随着

32、相关新技术的不断问世，如杂交瘤单克隆抗体、生物素一亲和素放大系统的应用以及与化学发光体、生物素一亲和素放大系统的应用以及与化学发光和电化学发光技术的偶联等，明显地提高了分析和测和电化学发光技术的偶联等，明显地提高了分析和测定方法的特异性、灵敏度及其自动化程度，使酶免疫定方法的特异性、灵敏度及其自动化程度，使酶免疫分析技术不断更新，应用范围不断拓宽。分析技术不断更新，应用范围不断拓宽。第63页，共87页。练 习第64页，共87页。1.用于标记的HRP的RZ值应该大于A.2.4B.3.0C.1.5D.3.5E.5.0第65页，共87页。1.用于标记的HRP的RZ值应该大于BA.2.4B.3.0C.

33、1.5D.3.5E.5.0第66页，共87页。2.RZ表示A酶活性B.催化效率C.标记率D.酶纯度E效价第67页，共87页。2.RZ表示DA.酶活性B.催化效率C.标记率D.酶纯度E.效价第68页，共87页。3.HRP与底物TMB反应后的测定波长为A.278mmB.450mmC.403mmD.495mmE.492mm第69页，共87页。3.HRP与底物TMB反应后的测定波长为BA.278mmB.460mmC.403mmD.495mmE.492mm第70页，共87页。5.HRP与TMB反应后，加H2SO4终止反应前呈A.蓝色B.橙黄色C.棕黄色D.黄色E.紫色第71页，共87页。5.HRP与TM

34、B反应后，加H2SO4终止反应前呈DA.蓝色B.橙黄色C.棕黄色D.黄色E.紫色第72页，共87页。6.辣根过氧化物酶（HRP）的受氢底物为A.OPDB.TMBC.DABD.H2O2E.Eu第73页，共87页。6.辣根过氧化物酶（HRP）的受氢底物为DA.OPDB.TMBC.DABD.H2O2E.Eu第74页，共87页。7.ELISA常用的固相材料为A.NC膜B.聚苯乙烯C.磁性颗粒D.尼龙膜E.凝胶第75页，共87页。7.ELISA常用的固相材料为BA.NC膜B.聚苯乙烯C.磁性颗粒D.尼龙膜E.凝胶第76页，共87页。8.目前国内ELISA常用的酶是A.HRPB.APC.-GalD.OPD

35、E.TMB第77页，共87页。8.目前国内ELISA常用的酶是AA.HRPB.APC.-GalD.OPDE.TMB第78页，共87页。9.何种ELISA方法其酶标二抗具有通用特性A.双抗体夹心B.一步法C.捕获法D.竞争法E.间接法第79页，共87页。9.何种ELISA方法其酶标二抗具有通用特性EA.双抗体夹心B.一步法C.捕获法D.竞争法E.间接法第80页，共87页。10.间接ELISA可用于检测A.AFPB.胰岛素C.HIV抗体D.吗啡E.HBsAg 第81页，共87页。10.间接ELISA可用于检测CA.AFPB.胰岛素C.HIV抗体D.吗啡E.HBsAg 第82页，共87页。11.捕获法测定病原体抗体的类别是A.IgMB.IgGC.IgAD.IgDE.IgE 第83页，共87页。11.捕获法测定病原体抗体的类别是AA.IgMB.IgGC.IgAD.IgDE.IgE 第84页，共87页。12.目前通用标记HRP的实验方法为A.戊二醛交联B.过碘酸钠氧化法C.琥珀酸酐法D.混合酸酐法E.碳化二亚胺法第85页，共87页。12.目前通用标记HRP的实验方法为BA.戊二醛交联B.过碘酸钠氧化法C.琥珀酸酐法D.混合酸酐法E.碳化二亚胺法第86页，共87页。THANK YOU FOR YOUR ATTENTION!返回总目录返回总目录第87页，共87页。