消毒灭菌与噬菌体人卫8版

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1、内容内容 利用理化因素对微生物的影响进行消利用理化因素对微生物的影响进行消毒灭菌，是防止其污染或传播的重要措施毒灭菌，是防止其污染或传播的重要措施本节重点与难点本节重点与难点 1.1.1.1.掌握消毒、灭菌、无菌、防腐、无菌操作的概念掌握消毒、灭菌、无菌、防腐、无菌操作的概念2.2.2.2.掌握热力灭菌的种类、原理及应用范围掌握热力灭菌的种类、原理及应用范围;湿热与干热湿热与干热灭菌法的比较；巴氏消毒法灭菌法的比较；巴氏消毒法3.3.3.3.掌握紫外线杀菌的原理及特点；滤过除菌的应用掌握紫外线杀菌的原理及特点；滤过除菌的应用4.4.4.4.熟悉影响消毒剂作用的因素熟悉影响消毒剂作用的因素杀死物

2、体上病原微生物杀死物体上病原微生物,不一定能杀死含芽不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物胞的细菌或非病原微生物 消毒消毒disinfection灭菌灭菌sterilization无菌无菌asepsis防腐防腐antisepsis防止或抑制体外细菌生长繁殖防止或抑制体外细菌生长繁殖不含活菌不含活菌杀死物体上的所有微生物杀死物体上的所有微生物无菌操作无菌操作一、消毒灭菌的常用术语一、消毒灭菌的常用术语二、物理消毒灭菌法二、物理消毒灭菌法n 热力灭菌法热力灭菌法n 辐射灭菌法辐射灭菌法n 滤过除菌法滤过除菌法n 干燥低温抑菌法干燥低温抑菌法一）热力灭菌法一）热力灭菌法1.杀菌机制杀菌机制 有干热和

3、湿热两大类灭菌法有干热和湿热两大类灭菌法n 损伤机制复杂损伤机制复杂n菌体蛋白凝固变性菌体蛋白凝固变性同一温度下湿热比干热灭菌效果好同一温度下湿热比干热灭菌效果好n 湿热中细菌菌体蛋白较易凝固湿热中细菌菌体蛋白较易凝固n 湿热的穿透力比干热大湿热的穿透力比干热大n 湿热的蒸汽有潜热湿热的蒸汽有潜热2.灭菌效果灭菌效果3.干热灭菌法干热灭菌法n 焚烧焚烧：直接点燃物品或将其置于焚烧炉内，最彻：直接点燃物品或将其置于焚烧炉内，最彻 底的灭菌法，适用于废弃物品或动物尸体灭菌底的灭菌法，适用于废弃物品或动物尸体灭菌n 烧灼烧灼：直接用火焰灭菌，适用于接种环或试管口灭菌：直接用火焰灭菌，适用于接种环或试

4、管口灭菌n 干烤干烤：利用干烤箱，加热：利用干烤箱，加热160-180 2160-180 2小时，适用小时，适用 于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品n 红外线红外线：利用电磁波的热效应灭菌，其热效应只：利用电磁波的热效应灭菌，其热效应只 在照射表面产生。多用于医疗器械灭菌在照射表面产生。多用于医疗器械灭菌n 微波微波：利用高频电磁波的热效应灭菌，其热效应：利用高频电磁波的热效应灭菌，其热效应 有一定穿透性。用于食品、药品、非金属有一定穿透性。用于食品、药品、非金属 器械及其他物品灭菌器械及其他物品灭菌n 巴氏消毒法巴氏消毒法：用：用较低温度杀灭液体中的特定

5、微生较低温度杀灭液体中的特定微生 物物,用于牛奶、啤酒等消毒用于牛奶、啤酒等消毒4.湿热灭菌法湿热灭菌法n 煮沸消毒法煮沸消毒法：100100水煮水煮5min-2hr,5min-2hr,用于餐具和小手用于餐具和小手 术刀剪的消毒术刀剪的消毒61.1-62.8 3061.1-62.8 30分分71.7 3071.7 30秒秒n 高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法 医学上最常用、最有效的灭菌方医学上最常用、最有效的灭菌方法，灭菌温度取决于蒸汽压力。法，灭菌温度取决于蒸汽压力。利用高压蒸锅，在利用高压蒸锅，在103.4kPa103.4kPa蒸汽蒸汽下，温度达下，温度达121.3121.3维持维持15-20

6、min15-20min，杀死包括芽胞在内的所有微生物。杀死包括芽胞在内的所有微生物。用于耐高温、耐潮湿物品的灭菌用于耐高温、耐潮湿物品的灭菌n 流通蒸汽消毒法流通蒸汽消毒法：利用利用100 100 水蒸汽，经水蒸汽，经15-30min15-30min 杀死繁殖体，不能将芽胞全杀死杀死繁殖体，不能将芽胞全杀死n 间歇蒸汽灭菌法间歇蒸汽灭菌法：反复多次流通蒸汽间歇加热以达反复多次流通蒸汽间歇加热以达 到灭菌目的。适用于不耐高温的到灭菌目的。适用于不耐高温的 含糖、牛奶等培养基的灭菌含糖、牛奶等培养基的灭菌 波长波长200-300nm200-300nm的紫外线能干扰细菌的紫外线能干扰细菌DNADNA

7、的复制与的复制与转录而杀菌转录而杀菌二）辐射杀菌法二）辐射杀菌法1.紫外线紫外线n 穿透力较弱，常用于穿透力较弱，常用于空气及物品表面消毒空气及物品表面消毒n 损伤人体皮肤黏膜，注意自我防护损伤人体皮肤黏膜，注意自我防护n DNA损伤的修复损伤的修复2.电离辐射电离辐射包括高速电子、包括高速电子、X X射线和射线和 射线射线n 有较高的能量和穿透力有较高的能量和穿透力n 干扰干扰DNADNA合成，破坏细胞膜合成，破坏细胞膜n 大量一次性医用塑料制品大量一次性医用塑料制品n 食品、药品、生物制品食品、药品、生物制品 利用滤菌器的机械性阻挡，除去液体或利用滤菌器的机械性阻挡，除去液体或空气中的细菌

8、空气中的细菌 主要用于血清、毒素、抗生素、酶制剂主要用于血清、毒素、抗生素、酶制剂等不耐热的液体及空气等的灭菌等不耐热的液体及空气等的灭菌 三）滤过除菌法三）滤过除菌法1.滤菌器滤菌器硝基纤维素膜制成，孔径硝基纤维素膜制成，孔径0.1-0.450.1-0.45mn 滤膜滤器滤膜滤器n 玻璃滤器玻璃滤器n Seitz Seitz滤器滤器玻璃细砂压成滤板，镶嵌在玻璃漏斗中玻璃细砂压成滤板，镶嵌在玻璃漏斗中金属制成，中间嵌石棉滤板金属制成，中间嵌石棉滤板2.影响过滤的因素影响过滤的因素n 介质类型介质类型n 细菌种类细菌种类n 细菌数量细菌数量n 使用压力、过滤时间、室温等使用压力、过滤时间、室温等

9、3.生物洁净技术（生物洁净技术（HEPA）初、中、高三级高效分子空气过滤器，除去初、中、高三级高效分子空气过滤器，除去0.5-0.5-5m5m的尘埃，并采用合理气流方式以洁净空气的尘埃，并采用合理气流方式以洁净空气 生物洁净室装有高效或亚高效过滤系统，如无生物洁净室装有高效或亚高效过滤系统，如无菌护理室，无菌手术间等菌护理室，无菌手术间等n 低温状态下真空抽去水分低温状态下真空抽去水分n 主要用于菌种保藏主要用于菌种保藏n 可存数年到数十年可存数年到数十年四）干燥与低温抑菌法四）干燥与低温抑菌法冷冻真空干燥法冷冻真空干燥法一）杀菌机制一）杀菌机制n 使菌体蛋白凝固变性使菌体蛋白凝固变性n 改变

10、细胞膜通透性，使胞内含物逸出改变细胞膜通透性，使胞内含物逸出 n 干扰细菌的酶系统及代谢干扰细菌的酶系统及代谢如酚类、醇类、酸碱类等如酚类、醇类、酸碱类等如表面活性剂、脂溶剂等如表面活性剂、脂溶剂等如重金属类、某些氧化剂等如重金属类、某些氧化剂等三、化学消毒灭菌法三、化学消毒灭菌法二）常用消毒剂种类二）常用消毒剂种类1.1.醇类醇类n 除去细胞膜中脂质，使菌体蛋白变性除去细胞膜中脂质，使菌体蛋白变性n 乙醇乙醇、异丙醇、异丙醇2.2.酚类酚类n 低浓度破坏细胞膜，高浓度凝固菌体蛋白低浓度破坏细胞膜，高浓度凝固菌体蛋白n 石碳酸、来苏、氯已定等石碳酸、来苏、氯已定等3.3.重金属类重金属类n 使

11、菌体蛋白变性或沉淀；灭活细菌酶蛋白使菌体蛋白变性或沉淀；灭活细菌酶蛋白n 红汞、硫柳汞、硝酸银等红汞、硫柳汞、硝酸银等4.4.氧化剂氧化剂n 依靠氧化作用灭活细菌酶蛋白依靠氧化作用灭活细菌酶蛋白n 过氧化氢、过氧乙酸、高锰酸钾、卤素等过氧化氢、过氧乙酸、高锰酸钾、卤素等5.5.表面活性剂表面活性剂n 降低液体表面张力，乳化油脂，发挥清洁作用降低液体表面张力，乳化油脂，发挥清洁作用n 改变胞壁通透性，使胞内容物溢出，呈现灭菌作用改变胞壁通透性，使胞内容物溢出，呈现灭菌作用n 苯扎溴安、度米芬等苯扎溴安、度米芬等6.6.烷化剂烷化剂n 灭活细菌酶蛋白灭活细菌酶蛋白n 甲烷、戊二醛、甲烷、戊二醛、环

12、氧乙烷环氧乙烷等等三）按杀菌能力分类三）按杀菌能力分类n 高效消毒剂高效消毒剂n 中效消毒剂中效消毒剂n 低效消毒剂低效消毒剂用于进体内的物品，包括氧化剂、醛类、环氧乙烷等用于进体内的物品，包括氧化剂、醛类、环氧乙烷等用于进入腔道的器材，包括含碘消毒剂、醇类等用于进入腔道的器材，包括含碘消毒剂、醇类等用于体表及外环境，包括表面活性剂、高锰酸钾等用于体表及外环境，包括表面活性剂、高锰酸钾等四）消毒剂的应用四）消毒剂的应用消毒消毒剂常用常用浓度度 适用范适用范围含含氯消毒消毒剂有效有效氯量量2-2-5mg/L5mg/L饮水水过氧乙酸氧乙酸0.2%-0.5%0.2%-0.5%皮肤、物体表面、空气皮肤

13、、物体表面、空气戊二戊二醛2%2%医医疗器械器械碘酒碘酒2.5%2.5%皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面碘伏碘伏2%2%皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面乙醇乙醇75%75%医医疗器械、皮肤器械、皮肤新新洁尔灭0.4%-1.6%0.4%-1.6%皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面高高锰酸酸钾0.1%0.1%皮肤、黏膜、食具、蔬菜等皮肤、黏膜、食具、蔬菜等1.医疗器械物品的消毒灭菌医疗器械物品的消毒灭菌物品物品类型型消毒消毒灭菌方法菌方法高危器械物品高危器械物品针头、注射器、手、注射器、手术器械、注射液器械、注射液体、静脉体、静脉导管等管等高高压蒸汽蒸汽灭菌；菌；环氧乙氧乙烷

14、、戊二戊二醛等高效消毒等高效消毒剂中危器械物品中危器械物品呼吸机、麻醉机、胃呼吸机、麻醉机、胃镜、支气管、支气管镜、体温体温计、口腔器械等、口腔器械等流通蒸汽、煮沸消毒；流通蒸汽、煮沸消毒；过氧氧乙酸、醇乙酸、醇类、戊二、戊二醛浸泡浸泡低危器械物品低危器械物品治治疗盘、治、治疗车、食品器皿等、食品器皿等清洗后一般消毒即可清洗后一般消毒即可快速周快速周转物品物品纤维内内镜、牙、牙钻、牙科手、牙科手术器械等器械等瞬瞬时灭菌、微波菌、微波灭菌、高效菌、高效消毒消毒剂快速快速处理等理等2.室内空气消毒灭菌室内空气消毒灭菌n 紫外线照射，滤过除菌紫外线照射，滤过除菌n 过氧乙酸、过氧化氢、二氧化氯喷雾或

15、熏蒸过氧乙酸、过氧化氢、二氧化氯喷雾或熏蒸n 中草药（艾叶）烟熏中草药（艾叶）烟熏3.手和皮肤消毒手和皮肤消毒n 肥皂和流动水正确洗手肥皂和流动水正确洗手n 75%75%乙醇，乙醇，0.05%0.05%氯已定、过氧乙酸水溶液等氯已定、过氧乙酸水溶液等4.粘膜消毒粘膜消毒n 口腔黏膜可用口腔黏膜可用3%3%过氧化氢过氧化氢n 尿道、阴道冲洗可用尿道、阴道冲洗可用0.05%0.05%氯已定，氯已定，1g/L1g/L高锰酸钾高锰酸钾5.排泄物及分泌物消毒排泄物及分泌物消毒n 50g/L50g/L有效氯的次氯酸钠、漂白粉等作用有效氯的次氯酸钠、漂白粉等作用1h1hn 等量等量200g/L200g/L漂

16、白粉搅拌混匀作用漂白粉搅拌混匀作用2h2h五）影响消毒剂作用的因素五）影响消毒剂作用的因素消毒剂消毒剂细菌细菌 环境环境种类种类浓度浓度作用时间作用时间数量数量种类种类有机物有机物温度温度酸硷度酸硷度 感染细菌等微生物的病毒，感染细菌等微生物的病毒，具有严格具有严格的宿主特异性，的宿主特异性，也是赋予宿主菌生物学性也是赋予宿主菌生物学性状的遗传物质。状的遗传物质。据其感染微生物的后果分为：毒性据其感染微生物的后果分为：毒性噬菌体和温和噬菌体噬菌体和温和噬菌体本章重点与难点本章重点与难点1.1.掌握噬菌体、毒性掌握噬菌体、毒性/温和噬菌体的概念温和噬菌体的概念2.2.掌握温和噬菌体与宿主菌的关系

17、及其在细菌遗传掌握温和噬菌体与宿主菌的关系及其在细菌遗传物质转移中的意义物质转移中的意义 3.3.掌握毒性噬菌体的生活周期掌握毒性噬菌体的生活周期4.4.熟悉噬菌体的生物学特性及噬菌体的应用熟悉噬菌体的生物学特性及噬菌体的应用第一节第一节 噬菌体的生物学性状噬菌体的生物学性状n 形态结构形态结构n 化学组成化学组成n 抗原性抗原性n 抵抗力抵抗力1 1、形态与结构、形态与结构个体微小，个体微小，nm为测量单位，为测量单位，EM下可见下可见有蝌蚪形、微球形和细杆形有蝌蚪形、微球形和细杆形头部头部六棱柱体六棱柱体尾部尾部管状器官管状器官2 2、化学组成、化学组成位于头部中央位于头部中央DNADNA

18、或或RNARNA噬菌体的遗传物质噬菌体的遗传物质n n 核酸核酸n n 蛋白质蛋白质构成头部外壳及尾部构成头部外壳及尾部保护核酸保护核酸决定噬菌体的表型特征决定噬菌体的表型特征3 3、抗原性、抗原性n n 具有抗原性，能刺激机体产生抗体具有抗原性，能刺激机体产生抗体n 抗体能阻止相应噬菌体侵袭敏感菌抗体能阻止相应噬菌体侵袭敏感菌n 主要表现在阻断吸附主要表现在阻断吸附4 4、抵抗力、抵抗力 比一般细菌繁殖体强比一般细菌繁殖体强第二节第二节 毒性噬菌体毒性噬菌体一、毒性噬菌体（一、毒性噬菌体（Virulent Virulent phagephage）能在敏感宿主菌内大量增殖能在敏感宿主菌内大量增

19、殖并使之裂解的噬菌体并使之裂解的噬菌体二、溶菌周期二、溶菌周期吸附吸附 穿入穿入生物合成生物合成成熟与释放成熟与释放基因的复制基因的复制 蛋白质的合成蛋白质的合成AdsorptionAdsorption吸附吸附PenetrationPenetration穿入穿入 Biological SynthesisBiological Synthesis 生物合成生物合成 Maturation and ReleaseMaturation and Release 成熟和释放成熟和释放 Lytic cycle三、噬菌现象三、噬菌现象液体培养基液体培养基浑浊变澄清浑浊变澄清固体培养基噬菌斑噬斑噬斑荧光假单胞菌荧

20、光假单胞菌 噬菌体基因整合于宿主菌基因组中，并随噬菌体基因整合于宿主菌基因组中，并随其染色体复制而复制，随菌分裂而分裂。其染色体复制而复制，随菌分裂而分裂。具有溶原周期及溶菌周期。具有溶原周期及溶菌周期。一、溶原性噬菌体（一、溶原性噬菌体（Lysogenic phageLysogenic phage）第三节第三节 温和噬菌体温和噬菌体AdsorptionAdsorption吸附吸附PenetrationPenetration穿入穿入 IntegrationIntegration整合整合 Lysogenic cycle二、前噬菌体（二、前噬菌体（prophageprophage）整和在细菌基因组

21、中的噬菌体基因组整和在细菌基因组中的噬菌体基因组三、溶原性细菌（三、溶原性细菌（lysogenic bacteriumlysogenic bacterium）带有前噬菌体基因组的细菌带有前噬菌体基因组的细菌溶原性转换示意图溶原性转换示意图-棒状杆菌噬菌体棒状杆菌噬菌体无毒白喉棒状杆菌无毒白喉棒状杆菌有毒白喉棒状杆菌有毒白喉棒状杆菌InductionInductionReplicationReplicationMaturation and ReleaseMaturation and Releasen n 具有感染性的噬菌体颗粒具有感染性的噬菌体颗粒n 宿主细胞内类似质粒形式的噬菌体核酸宿主细胞内

22、类似质粒形式的噬菌体核酸n 前噬菌体前噬菌体四、溶原性噬菌体的存在状态四、溶原性噬菌体的存在状态n n 细菌的鉴定与分型细菌的鉴定与分型n 检测标本中的未知菌检测标本中的未知菌n 基因工程的工具基因工程的工具n 用于细菌性感染的治疗用于细菌性感染的治疗第四节第四节 噬菌体的应用噬菌体的应用小小 结结 消毒灭菌的常用术语；消毒灭菌的常用术语；常用物理消毒灭菌常用物理消毒灭菌法的作用机制及法的作用机制及适用范围；适用范围；化学消毒灭菌法；化学消毒灭菌法；影响化学消毒剂作用效果的因素；影响化学消毒剂作用效果的因素；消毒灭菌消毒灭菌的运用；噬菌体的生物学性状；的运用；噬菌体的生物学性状；毒性噬菌体毒性

23、噬菌体与温和噬菌体；与温和噬菌体；噬菌体的应用噬菌体的应用思考题思考题1 1、试述常用物理灭菌法的作用机制及适用范围、试述常用物理灭菌法的作用机制及适用范围2 2、试分析影响化学消毒剂作用效果的因素、试分析影响化学消毒剂作用效果的因素3 3、什么是噬菌体？简述噬菌体的生物学特性、什么是噬菌体？简述噬菌体的生物学特性4 4、试述噬菌体与宿主菌的关系、试述噬菌体与宿主菌的关系5 5、思考噬菌体在细菌遗传变异中的意义、思考噬菌体在细菌遗传变异中的意义中英文关键词中英文关键词 灭菌灭菌 sterilization 消毒消毒 disinfection防腐防腐 antisepsis 无菌无菌 asepsi

24、s消毒剂消毒剂 disinfectant高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器 autoclave高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法 sterilization by pressured steam 噬菌体噬菌体 Bacteriophage毒性噬菌体毒性噬菌体 virulent phage 溶原性噬菌体溶原性噬菌体 lysogenic phage前噬菌体前噬菌体 prophage 溶原性转换溶原性转换 lysogenic conversion 溶原性细菌溶原性细菌 lysogenic bacterium 噬噬 斑斑 plaque参参 考考 文文 献献1BrooksGF，BrutelJS，MorseSA.Jaw

25、etz，Melnick&AdelbergsMedicalMicrobiology.24nded.NewYork：LangeMedicalBooks/McGraw-Hill，20072MurrayPA，RosenthalKS，KobayashiGSetal.MedicalMicrobiology.6thed.Missouri，USA：Mosby，20093HanZ,SmithHL.Bacteriophage-resistantandbacteriophage-sensitivebacteriainachemostat.MathBiosciEng.2012Oct1;9(4):737-65.预预 习习细菌的遗传与变异细菌的遗传与变异