微生物与发酵工艺实训一显微镜的使用和微生物测微技术

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1、微生物与发酵工艺实训一显微镜的使用和微生物测微技术一、实验目的一、实验目的 1.1.练习和掌握显微镜的使用方法（低倍镜、练习和掌握显微镜的使用方法（低倍镜、高倍镜、油镜）。高倍镜、油镜）。2.2.掌握使用测微尺测定微生物大小的方法，掌握使用测微尺测定微生物大小的方法，熟悉微生物大小的一般概念。熟悉微生物大小的一般概念。二、实验原理二、实验原理（一）显微镜的结构、光学原理和操作方法（一）显微镜的结构、光学原理和操作方法 1.1.显微镜分机械系统和光学系统两部分显微镜分机械系统和光学系统两部分 机械系统包括：镜筒、转换器、载物台、镜机械系统包括：镜筒、转换器、载物台、镜臂、镜座、粗准焦螺旋、细准焦

2、螺旋。臂、镜座、粗准焦螺旋、细准焦螺旋。光学系统包括：目镜、物镜、聚光器、光源、光学系统包括：目镜、物镜、聚光器、光源、滤光片、虹彩光圈。滤光片、虹彩光圈。双目光学显微镜双目光学显微镜双目光学显微镜双目光学显微镜二、实验原理二、实验原理（二）显微镜的光学原理（二）显微镜的光学原理 1.1.成像原理成像原理 光路：光源光路：光源虹彩光圈虹彩光圈聚光镜聚光镜通光孔通光孔标本（一定要透明）标本（一定要透明）物镜物镜镜筒镜筒目镜目镜眼。眼。二、实验原理二、实验原理(三三)油镜工作原理油镜工作原理 香柏油的折光率讲义与玻璃 片折光率（1.52）相近似，因此在物镜（玻璃）与标本载片（玻璃）之间加入香柏油可

3、以使光线不致因从一个介质（玻璃）进入到另一折光率不同的介质即空气（折光率为1.0）而引起部分散射，造成亮度不够而观察不清，这对透镜弯曲度较大，直径较小（通过光线亦较小）的油镜头是特别重要的。做法是在用油镜观察时要把油镜头（100）浸入香柏油中。二、实验原理二、实验原理 1.1.物测微尺物测微尺 物测微尺是一厚玻片，中央有一圆形盖物测微尺是一厚玻片，中央有一圆形盖玻片，中央刻有玻片，中央刻有1mm1mm长的标尺，等分为长的标尺，等分为100100格，格，每格每格100100m m，用以标定目测微尺，在不同放，用以标定目测微尺，在不同放大倍数下每格的实际长度。大倍数下每格的实际长度。二、实验原理二

4、、实验原理(四四)测微技术测微技术二、实验原理二、实验原理 物测微尺物测微尺 目测微尺目测微尺 2.目测微尺的标定 将目测微尺装入目镜的隔板上，使刻度朝下；把将目测微尺装入目镜的隔板上，使刻度朝下；把将目测微尺装入目镜的隔板上，使刻度朝下；把将目测微尺装入目镜的隔板上，使刻度朝下；把物测微尺放在载物台上使刻度朝上。用低倍镜找到目物测微尺放在载物台上使刻度朝上。用低倍镜找到目物测微尺放在载物台上使刻度朝上。用低倍镜找到目物测微尺放在载物台上使刻度朝上。用低倍镜找到目测微尺的刻度，移动物测微尺和目测微尺，使两者的测微尺的刻度，移动物测微尺和目测微尺，使两者的测微尺的刻度，移动物测微尺和目测微尺，使

5、两者的测微尺的刻度，移动物测微尺和目测微尺，使两者的第一条刻度线重合，顺着刻度找到另一条重合刻度线。第一条刻度线重合，顺着刻度找到另一条重合刻度线。第一条刻度线重合，顺着刻度找到另一条重合刻度线。第一条刻度线重合，顺着刻度找到另一条重合刻度线。计算在该放大倍数下目测微尺每个小格的实际长度。计算在该放大倍数下目测微尺每个小格的实际长度。计算在该放大倍数下目测微尺每个小格的实际长度。计算在该放大倍数下目测微尺每个小格的实际长度。目测微尺每小格长度目测微尺每小格长度目测微尺每小格长度目测微尺每小格长度(m)=m)=m)=m)=二、实验原理二、实验原理用物测微尺标定目测微尺二、实验原理二、实验原理1.

6、1.材料材料 枯草芽孢染色涂片。枯草芽孢染色涂片。金黄色葡萄球菌涂片。金黄色葡萄球菌涂片。酵母菌染色涂片。酵母菌染色涂片。2.2.用具：显微镜、二甲苯、香柏油、镜头纸、用具：显微镜、二甲苯、香柏油、镜头纸、物测微尺、目测微尺。物测微尺、目测微尺。三、实验材料和用具三、实验材料和用具（一）显微镜的使用（一）显微镜的使用 1.1.取镜和安放取镜和安放 右手握住镜臂，左手托住镜座。右手握住镜臂，左手托住镜座。把显微镜放在水平的实验台上，略偏左把显微镜放在水平的实验台上，略偏左（显微镜放在距实验台边缘（显微镜放在距实验台边缘7 7厘米左右处）。厘米左右处）。四、实验方法四、实验方法2.2.低倍镜的操作

7、低倍镜的操作 置显微镜于固定的桌上，接通电源，打开光源。置显微镜于固定的桌上，接通电源，打开光源。置显微镜于固定的桌上，接通电源，打开光源。置显微镜于固定的桌上，接通电源，打开光源。将标本片放在载物台上，是观察的目的物处于圆孔的正中将标本片放在载物台上，是观察的目的物处于圆孔的正中将标本片放在载物台上，是观察的目的物处于圆孔的正中将标本片放在载物台上，是观察的目的物处于圆孔的正中央。央。央。央。将粗准焦螺旋向下旋转，眼睛在测向注视物镜，防止物镜将粗准焦螺旋向下旋转，眼睛在测向注视物镜，防止物镜将粗准焦螺旋向下旋转，眼睛在测向注视物镜，防止物镜将粗准焦螺旋向下旋转，眼睛在测向注视物镜，防止物镜和

8、载玻片相碰。和载玻片相碰。和载玻片相碰。和载玻片相碰。张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十分清楚，张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十分清楚，张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十分清楚，张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细准焦螺旋，至目的物清晰为止。注意观察时两眼应可用细准焦螺旋，至目的物清晰为止。注意观察时两眼应可用细准焦螺旋，至目的物清晰为止。注意观察时两眼应可用细准焦螺旋，至目的物清晰为止。注意观察时两眼应同时睁开。使用单筒显微镜，应习惯用左眼观察，以便绘同时睁开。使用单筒显微镜，应习惯用左眼观察，以便绘同时睁开。使用单筒显微镜，应习惯用左眼

9、观察，以便绘同时睁开。使用单筒显微镜，应习惯用左眼观察，以便绘图。图。图。图。四、实验方法四、实验方法 3.3.3.3.高倍镜的操作高倍镜的操作高倍镜的操作高倍镜的操作 使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物后将它移至视野正中处。后将它移至视野正中处。后将它移至视野正中处。后将它移至视野正中处。旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及

10、载玻片立即停止旋动，这说明原来低倍镜并没有调准，目的物并停止旋动，这说明原来低倍镜并没有调准，目的物并停止旋动，这说明原来低倍镜并没有调准，目的物并停止旋动，这说明原来低倍镜并没有调准，目的物并没有真正找到，必须用低倍镜重新调节。如果高倍镜没有真正找到，必须用低倍镜重新调节。如果高倍镜没有真正找到，必须用低倍镜重新调节。如果高倍镜没有真正找到，必须用低倍镜重新调节。如果高倍镜下观察目的物有点模糊，调节细准焦螺旋，直到视野下观察目的物有点模糊，调节细准焦螺旋，直到视野下观察目的物有点模糊，调节细准焦螺旋，直到视野下观察目的物有点模糊，调节细准焦螺旋，直到视野清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与

11、载物台上清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台上清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台上清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台上升或下降的关系，防止镜头与载玻片强力接触，损坏升或下降的关系，防止镜头与载玻片强力接触，损坏升或下降的关系，防止镜头与载玻片强力接触，损坏升或下降的关系，防止镜头与载玻片强力接触，损坏镜头或载玻片。镜头或载玻片。镜头或载玻片。镜头或载玻片。四、实验方法四、实验方法 4.4.4.4.油镜的操作油镜的操作油镜的操作油镜的操作 如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用低如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用低如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用

12、低如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用低倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。在载玻片上滴一滴香柏油（或液体石蜡），将油镜在载玻片上滴一滴香柏油（或液体石蜡），将油镜在载玻片上滴一滴香柏油（或液体石蜡），将油镜在载玻片上滴一滴香柏油（或液体石蜡），将油镜移至正中使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。用移至正中使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。用移至正中使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。用移至正中使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。用细准焦螺旋

13、微微向上调（切忌不用粗准焦螺旋）即可。细准焦螺旋微微向上调（切忌不用粗准焦螺旋）即可。细准焦螺旋微微向上调（切忌不用粗准焦螺旋）即可。细准焦螺旋微微向上调（切忌不用粗准焦螺旋）即可。油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另用油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另用油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另用油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另用擦镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。擦镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。擦镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。擦镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。四、实验方法四、实验方法5.显微镜使用注意事项.显微镜应置于平坦的

14、桌面上。显微镜应置于平坦的桌面上。显微镜应置于平坦的桌面上。显微镜应置于平坦的桌面上。.将标本片夹在显微镜载物台的十字夹中，注意要正将标本片夹在显微镜载物台的十字夹中，注意要正将标本片夹在显微镜载物台的十字夹中，注意要正将标本片夹在显微镜载物台的十字夹中，注意要正面向上。面向上。面向上。面向上。.先用低倍镜再用高倍镜观察寻找目的物，此时要控先用低倍镜再用高倍镜观察寻找目的物，此时要控先用低倍镜再用高倍镜观察寻找目的物，此时要控先用低倍镜再用高倍镜观察寻找目的物，此时要控制视野不能太亮，注意区别镜头上的灰尘和目的物。制视野不能太亮，注意区别镜头上的灰尘和目的物。制视野不能太亮，注意区别镜头上的灰

15、尘和目的物。制视野不能太亮，注意区别镜头上的灰尘和目的物。.在标本中央滴加一小滴香柏油，从镜筒侧面观察，在标本中央滴加一小滴香柏油，从镜筒侧面观察，在标本中央滴加一小滴香柏油，从镜筒侧面观察，在标本中央滴加一小滴香柏油，从镜筒侧面观察，将油镜（将油镜（将油镜（将油镜（100100100100）轻轻旋下，使它浸在香柏油内。切）轻轻旋下，使它浸在香柏油内。切）轻轻旋下，使它浸在香柏油内。切）轻轻旋下，使它浸在香柏油内。切勿猛烈的将镜头压在标本片上，防止损坏物镜！勿猛烈的将镜头压在标本片上，防止损坏物镜！勿猛烈的将镜头压在标本片上，防止损坏物镜！勿猛烈的将镜头压在标本片上，防止损坏物镜！四、实验方法

16、四、实验方法.将眼睛移至目镜，一边观察一边慢慢旋动粗准焦将眼睛移至目镜，一边观察一边慢慢旋动粗准焦将眼睛移至目镜，一边观察一边慢慢旋动粗准焦将眼睛移至目镜，一边观察一边慢慢旋动粗准焦螺旋，将载物台上提。当见到物象时，再用细准焦螺旋，将载物台上提。当见到物象时，再用细准焦螺旋，将载物台上提。当见到物象时，再用细准焦螺旋，将载物台上提。当见到物象时，再用细准焦螺旋调至图像清晰。对于单目显微镜，使用油镜时螺旋调至图像清晰。对于单目显微镜，使用油镜时螺旋调至图像清晰。对于单目显微镜，使用油镜时螺旋调至图像清晰。对于单目显微镜，使用油镜时要将聚光器尽量上升，虹彩光圈放大。要将聚光器尽量上升，虹彩光圈放大

17、。要将聚光器尽量上升，虹彩光圈放大。要将聚光器尽量上升，虹彩光圈放大。.注意在旋动粗准焦螺旋时，必须特别小心。决不注意在旋动粗准焦螺旋时，必须特别小心。决不注意在旋动粗准焦螺旋时，必须特别小心。决不注意在旋动粗准焦螺旋时，必须特别小心。决不能在观察时将载物台很快提升，以免损伤螺旋。能在观察时将载物台很快提升，以免损伤螺旋。能在观察时将载物台很快提升，以免损伤螺旋。能在观察时将载物台很快提升，以免损伤螺旋。.假如用油镜时一再看不清目的物，可验看油中是假如用油镜时一再看不清目的物，可验看油中是假如用油镜时一再看不清目的物，可验看油中是假如用油镜时一再看不清目的物，可验看油中是否存在气泡。如存在气泡

18、，可将镜头及标本片上的否存在气泡。如存在气泡，可将镜头及标本片上的否存在气泡。如存在气泡，可将镜头及标本片上的否存在气泡。如存在气泡，可将镜头及标本片上的油擦去，重新滴加。油擦去，重新滴加。油擦去，重新滴加。油擦去，重新滴加。四、实验方法四、实验方法.观察完毕后，下降载物台，取下标本片，用干净的擦观察完毕后，下降载物台，取下标本片，用干净的擦观察完毕后，下降载物台，取下标本片，用干净的擦观察完毕后，下降载物台，取下标本片，用干净的擦镜纸蘸少量的二甲苯，轻揩去载玻片上的香柏油后，立镜纸蘸少量的二甲苯，轻揩去载玻片上的香柏油后，立镜纸蘸少量的二甲苯，轻揩去载玻片上的香柏油后，立镜纸蘸少量的二甲苯，

19、轻揩去载玻片上的香柏油后，立即用干擦镜纸揩干。即用干擦镜纸揩干。即用干擦镜纸揩干。即用干擦镜纸揩干。.收存显微镜时，应将最短的镜头对准透光孔，或将物收存显微镜时，应将最短的镜头对准透光孔，或将物收存显微镜时，应将最短的镜头对准透光孔，或将物收存显微镜时，应将最短的镜头对准透光孔，或将物镜的长镜头转成镜的长镜头转成镜的长镜头转成镜的长镜头转成“八八八八”字式，使两个镜头同时搁在载物字式，使两个镜头同时搁在载物字式，使两个镜头同时搁在载物字式，使两个镜头同时搁在载物台上。切勿将长镜头对准透光孔，以免与聚光器相碰而台上。切勿将长镜头对准透光孔，以免与聚光器相碰而台上。切勿将长镜头对准透光孔，以免与聚

20、光器相碰而台上。切勿将长镜头对准透光孔，以免与聚光器相碰而损坏。镜台、镜身上占有水及污物，必须及时擦去。然损坏。镜台、镜身上占有水及污物，必须及时擦去。然损坏。镜台、镜身上占有水及污物，必须及时擦去。然损坏。镜台、镜身上占有水及污物，必须及时擦去。然后套上显微镜罩，对号放入显微镜箱中锁好。后套上显微镜罩，对号放入显微镜箱中锁好。后套上显微镜罩，对号放入显微镜箱中锁好。后套上显微镜罩，对号放入显微镜箱中锁好。四、实验方法四、实验方法（二）微生物测微（二）微生物测微 1.1.1.1.分别在低倍镜、高倍镜和油镜下进行目测微尺分别在低倍镜、高倍镜和油镜下进行目测微尺分别在低倍镜、高倍镜和油镜下进行目测

21、微尺分别在低倍镜、高倍镜和油镜下进行目测微尺的标定。的标定。的标定。的标定。2.2.2.2.菌体大小的测量菌体大小的测量菌体大小的测量菌体大小的测量 将物测微尺取下，换上标本片，选择适当的物镜将物测微尺取下，换上标本片，选择适当的物镜将物测微尺取下，换上标本片，选择适当的物镜将物测微尺取下，换上标本片，选择适当的物镜测量目的物的大小，分别找出菌体的长和宽占目测微测量目的物的大小，分别找出菌体的长和宽占目测微测量目的物的大小，分别找出菌体的长和宽占目测微测量目的物的大小，分别找出菌体的长和宽占目测微尺的格数，再按照目测微尺尺的格数，再按照目测微尺尺的格数，再按照目测微尺尺的格数，再按照目测微尺1

22、 1 1 1格的长度算出菌体的长格的长度算出菌体的长格的长度算出菌体的长格的长度算出菌体的长度和宽度。用目测微尺测量微生物的大小。即可算出度和宽度。用目测微尺测量微生物的大小。即可算出度和宽度。用目测微尺测量微生物的大小。即可算出度和宽度。用目测微尺测量微生物的大小。即可算出标本（菌体）的大小。标本（菌体）的大小。标本（菌体）的大小。标本（菌体）的大小。四、实验方法四、实验方法 1.1.1.1.在低倍镜、高倍镜和油镜下观察标本片在低倍镜、高倍镜和油镜下观察标本片在低倍镜、高倍镜和油镜下观察标本片在低倍镜、高倍镜和油镜下观察标本片 2.2.2.2.测量菌体的大小测量菌体的大小测量菌体的大小测量菌

23、体的大小 在高倍镜下测量酵母的大小在高倍镜下测量酵母的大小在高倍镜下测量酵母的大小在高倍镜下测量酵母的大小(测测测测1010101020202020个菌，求个菌，求个菌，求个菌，求平均值平均值平均值平均值)。在油镜下测枯草芽孢杆菌的长与宽，测金黄色葡在油镜下测枯草芽孢杆菌的长与宽，测金黄色葡在油镜下测枯草芽孢杆菌的长与宽，测金黄色葡在油镜下测枯草芽孢杆菌的长与宽，测金黄色葡萄球菌的直径萄球菌的直径萄球菌的直径萄球菌的直径(测量测量测量测量10102020个菌体求平均值个菌体求平均值个菌体求平均值个菌体求平均值)。在低倍镜下求出目测微尺每格长度后，再用同法在低倍镜下求出目测微尺每格长度后，再用同

24、法在低倍镜下求出目测微尺每格长度后，再用同法在低倍镜下求出目测微尺每格长度后，再用同法求出在高倍镜下和油镜下求出在高倍镜下和油镜下求出在高倍镜下和油镜下求出在高倍镜下和油镜下(物测微尺上需加物测微尺上需加物测微尺上需加物测微尺上需加1 1滴香柏油滴香柏油滴香柏油滴香柏油)目测微尺每格的长度。目测微尺每格的长度。目测微尺每格的长度。目测微尺每格的长度。五、实验内容五、实验内容1 1.绘出油镜下的枯草芽孢染色涂片、金黄色葡萄球菌涂绘出油镜下的枯草芽孢染色涂片、金黄色葡萄球菌涂绘出油镜下的枯草芽孢染色涂片、金黄色葡萄球菌涂绘出油镜下的枯草芽孢染色涂片、金黄色葡萄球菌涂片，高倍镜下酵母菌染色涂片。片，

25、高倍镜下酵母菌染色涂片。片，高倍镜下酵母菌染色涂片。片，高倍镜下酵母菌染色涂片。2.2.2.2.微生物大小的测量的结果填入下列空白微生物大小的测量的结果填入下列空白微生物大小的测量的结果填入下列空白微生物大小的测量的结果填入下列空白在低倍镜下：目镜测微尺（在低倍镜下：目镜测微尺（在低倍镜下：目镜测微尺（在低倍镜下：目镜测微尺（）格镜台测微尺（）格镜台测微尺（）格镜台测微尺（）格镜台测微尺（）格格格格 目镜测微尺每格（目镜测微尺每格（目镜测微尺每格（目镜测微尺每格（）m m m m在高倍镜下：目镜测微尺（在高倍镜下：目镜测微尺（在高倍镜下：目镜测微尺（在高倍镜下：目镜测微尺（）格镜台测微尺（）格

26、镜台测微尺（）格镜台测微尺（）格镜台测微尺（）格格格格 目镜测微尺每格目镜测微尺每格目镜测微尺每格目镜测微尺每格 （）m m m m六、实验报告六、实验报告在油镜下：目镜测微尺（在油镜下：目镜测微尺（在油镜下：目镜测微尺（在油镜下：目镜测微尺（）格镜台测微尺（）格镜台测微尺（）格镜台测微尺（）格镜台测微尺（）格）格）格）格 目镜测微尺每格目镜测微尺每格目镜测微尺每格目镜测微尺每格 （）m m m m枯草杆菌在油镜下：长目镜测微尺（枯草杆菌在油镜下：长目镜测微尺（枯草杆菌在油镜下：长目镜测微尺（枯草杆菌在油镜下：长目镜测微尺（）格）格）格）格 （）m m m m 宽目镜测微尺（宽目镜测微尺（宽目

27、镜测微尺（宽目镜测微尺（）格（）格（）格（）格（）m m m m金黄色葡萄球菌在油镜下：金黄色葡萄球菌在油镜下：金黄色葡萄球菌在油镜下：金黄色葡萄球菌在油镜下：直径目镜测微尺（直径目镜测微尺（直径目镜测微尺（直径目镜测微尺（）格）格）格）格=（）m m m m 酵母菌在高倍镜下：长目镜测微尺（酵母菌在高倍镜下：长目镜测微尺（酵母菌在高倍镜下：长目镜测微尺（酵母菌在高倍镜下：长目镜测微尺（）格）格）格）格 （）m m m m 宽目镜测微尺（宽目镜测微尺（宽目镜测微尺（宽目镜测微尺（）格）格）格）格 （）m m m m六、实验报告六、实验报告 1.1.1.1.使用油镜时为什么要先用低倍镜和高倍镜检

28、查？使用油镜时为什么要先用低倍镜和高倍镜检查？使用油镜时为什么要先用低倍镜和高倍镜检查？使用油镜时为什么要先用低倍镜和高倍镜检查？2.2.2.2.试述显微镜成像原理并作图表示之。试述显微镜成像原理并作图表示之。试述显微镜成像原理并作图表示之。试述显微镜成像原理并作图表示之。3.3.3.3.油镜使用时为什么一定要浸在香柏油里？油镜使用时为什么一定要浸在香柏油里？油镜使用时为什么一定要浸在香柏油里？油镜使用时为什么一定要浸在香柏油里？4.4.4.4.在使用油镜时应怎样控制聚光器与光圈？在使用油镜时应怎样控制聚光器与光圈？在使用油镜时应怎样控制聚光器与光圈？在使用油镜时应怎样控制聚光器与光圈？5.5.5.5.为什么目测微尺必须用物测微尺标定为什么目测微尺必须用物测微尺标定为什么目测微尺必须用物测微尺标定为什么目测微尺必须用物测微尺标定?七、思考题七、思考题