临床医学临床微生物标本的采集方法与运送

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1、临床微生物标本的采集与运送临床微生物标本的采集与运送标本采集的原则1.遵照医嘱 2.充分准备 3.严格查对 4.正确采集 5.及时送检一般原则一般原则（一）采集标本前n了解检验项目、目的根据检验要求选择适当的容器，贴上标明患者姓名，性别、姓名，性别、床号床号的标签。采集的方法及注意事项。n了解患者的病情，向患者解释采集的目的、方法、要求、以消除顾虑，取得信任与配合。二二采集标本时采集标本时n严格核对，检查标本容器有无破损，是否符合检验目的的要求。n采集方法、采集量、采集时间准确，符合检验要求。n操作规范，避免污染无菌标本。（三）采集标本后（三）采集标本后n标本应尽快送检，不应放置过久，以免影响

2、检查结果。n特殊标本须注明采集时间。n及时查收检验报告单，整理入病历，如有异常结果，尽快通知医生。基本原则基本原则l及时采集微生物标本作病原学检查及时采集微生物标本作病原学检查l在抗菌药物使用前采集标本在抗菌药物使用前采集标本l采样时严格执行无菌操作采样时严格执行无菌操作l采样后立即送检采样后立即送检l棉拭子标本宜用运送培养基棉拭子标本宜用运送培养基l混混有有正正常常菌菌群群污污染染标标本本，不不可可置置肉肉汤汤培培养养细菌室各种标本处理细菌室各种标本处理n所有细菌室标本均要求2小时内送到细菌室进行处理。n痰标本：不及时处理可导致痰液中的肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌由于不适应外界环境和自溶

3、现象而死亡。另外，痰液标本在室外放置过久，会导致口腔的杂菌生长和病人体内定植菌生长过快，而影响结果的准确性。细菌室各种标本处理细菌室各种标本处理n无菌液体（包括脑脊液、胸腹水、心包积液、脓液和关节液等）：由于脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎链球菌和嗜血杆菌对外界环境抵抗力很低，对寒冷和干燥均敏感，如不及时接种，病原菌可能死亡，导致培养阴性。n尿液标本：由于尿液标本采集容易受到外生殖道正常菌群污染，而且尿液是细菌的最好培养基，因此，采集标本后应在2小时内处理完毕，否则置4 冰箱保存，时间不能超过8小时。细菌室各种标本处理细菌室各种标本处理n生殖道分泌物：由于淋球菌离体后，很快会自溶死亡；另外，生殖道标本采集

4、容易污染外生殖道的正常菌群，如果不及时接种，会由于这些正常菌群大量繁殖，导致结果假阳性。n大便标本：由于志贺菌属对理化因素抵抗力较弱，对酸性环境也较敏感，在粪便中由于其他菌属产酸可使本菌属的细菌在数小时内死亡。另外，霍乱弧菌对热，干燥，日光和酸均很敏感，同样离体后不及时处理，则容易死亡。微生物检验的重要性微生物检验的重要性n在医学高度发展，新的抗菌药物不断涌现的今天，感染性疾病的发病率和病死率仍然居高不下。主要原因之一是当代的感染性疾病，在病原上发生了较大的变化，形成了现代感染性疾病在病原学上的新特点 现代感染性疾病的新特点现代感染性疾病的新特点n以条件致病菌为主：很多低致病、弱毒的细菌，在外

5、环境、人体体表以及与外界相通的腔道中广泛存在的细菌，引起感染甚至造成严重后果的现象日益增多。n病原菌的种类更为广泛：包括需氧菌、厌氧菌、苛氧菌、分枝杆菌和真菌等。n细菌的耐药性不断增强：同一种细菌对抗生素的耐药性可以完全不同，甚至出现同时耐多种抗生素的“多重耐药”细菌，往往使临床医师的“经验性”治疗或所谓的常规治疗根本无效。现代感染性疾病的新特点现代感染性疾病的新特点n出现一些新的感染性病原：有人统计，20世纪后期，全世界一共出现种31种新的传染病，其中病毒14种，细菌11种，寄生物6种，由于人们的认识不足，缺乏有效的预防、治疗办法，人群又无免疫力，这些新出现的病菌在不同的地区和范围内流行，来

6、势猛，传播快，造成巨大的损失和社会恐慌。例如：疯牛病、埃博拉出血热、新型肝炎病毒、大肠杆菌O157、出血性肠炎、O139霍乱、艾滋病、莱姆病等。现代感染性疾病的新特点现代感染性疾病的新特点我们应该追求：我们应该追求：“准确的病原学诊断准确的病原学诊断”“针对性病原学治疗针对性病原学治疗”正确的微生物标本采集和运送，正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提！是准确的病原学诊断的前提！微生物让人类步步为营，微生物让人类步步为营，检验误差发生率哪个阶段最高检验误差发生率哪个阶段最高60%以上实验误差发生在分析前以上实验误差发生在分析前 1997年，一位意大利著名检验专家就对急诊检验误差发

7、生的种类和发生率进行了统计。结果显示，约有68.2%的检验误差发生在检验前期，而来自于检验中期和检验后期的误差率分别为13.3%和18.5%。2007年，这位检验专家又进行了类似统计，结果显示，检验前期的误差发生率仍高达61.9%。摘自：摘自：分析前质量控制获得准确结果的重要环节获得准确结果的重要环节基本原则基本原则1.1.及时采集微生物标本作病原学检查及时采集微生物标本作病原学检查2.2.在抗菌药物使用前采集标本在抗菌药物使用前采集标本3.3.采样时严格执行无菌操作采样时严格执行无菌操作4.4.采样后立即送检采样后立即送检5.5.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂标本容器须灭菌处理，但不得

8、使用消毒剂6.6.送检标本应注明来源和检验目的送检标本应注明来源和检验目的如何提高细菌阳性检出率？如何提高细菌阳性检出率？n标本采集时机标本采集时机n标本采集方法标本采集方法n标本的质与量标本的质与量n标本的运送与保存标本的运送与保存n镜检筛选合格标本（退检制度）镜检筛选合格标本（退检制度）n高质量、多种分离培养基高质量、多种分离培养基n培养环境培养环境常见不合格标本主要有以下问题：常见不合格标本主要有以下问题：q标本采集时间错误标本采集时间错误q容器错误容器错误q标本量不足标本量不足q 标本采集延误标本采集延误q 标本未及时正确运送标本未及时正确运送q 以及暂存条件错误。以及暂存条件错误。q

9、 。最有价值的细菌学检测项目最有价值的细菌学检测项目q 血液培养血液培养q 脑脊液培养脑脊液培养q 胆汁培养胆汁培养q 胸腹水培养胸腹水培养q 关节液关节液q 其他无菌体液或分泌液其他无菌体液或分泌液血培养标本血培养标本采集与运送血培养概念血培养概念:n采集患者的血液或无菌体液标本采集患者的血液或无菌体液标本,送至微生物送至微生物实验室培养检测实验室培养检测.n检测原本无菌的血液及体液中是否有细菌存检测原本无菌的血液及体液中是否有细菌存在在.n如有细菌如有细菌,则极有可能为致病的细菌则极有可能为致病的细菌.n进一步进行鉴定进一步进行鉴定/药敏试验药敏试验.完整的血培养过程完整的血培养过程n n

10、医师开出医嘱医师开出医嘱n n护理人员收集送检样本护理人员收集送检样本n n实验室检测、分离并鉴定导致血流感实验室检测、分离并鉴定导致血流感染的微生物染的微生物n n三级报告：为临床医生提供抗菌药物三级报告：为临床医生提供抗菌药物敏感性试验结果敏感性试验结果目前血培养的问题目前血培养的问题：n采血时机不合适采血时机不合适n采血套数不够采血套数不够n采血量不足采血量不足n只做需氧培养，不同时做厌氧培养只做需氧培养，不同时做厌氧培养n采血前或采血时正在使用抗生素治疗采血前或采血时正在使用抗生素治疗血流感染与血培养血流感染与血培养的规范实践的规范实践“只有在只有在发热时发热时，才需要，才需要进进行血

11、培养。行血培养。”关于血培养指征关于血培养指征想想采采就就采采答答 案：血培养的指征案：血培养的指征n n当怀疑血流感染或脓毒症时，应常规行血培养当怀疑血流感染或脓毒症时，应常规行血培养当怀疑血流感染或脓毒症时，应常规行血培养当怀疑血流感染或脓毒症时，应常规行血培养n n怀疑患者有血流感染的症状有：怀疑患者有血流感染的症状有：怀疑患者有血流感染的症状有：怀疑患者有血流感染的症状有：n n不明原因的发烧不明原因的发烧不明原因的发烧不明原因的发烧(3838)或体温过低或体温过低或体温过低或体温过低(3636)n n白细胞增多（白细胞增多（白细胞增多（白细胞增多（10,000/ul10,000/ul

12、），粒细胞减少（），粒细胞减少（），粒细胞减少（），粒细胞减少（1,000ul1,000ul）n n休克，寒颤，僵直休克，寒颤，僵直休克，寒颤，僵直休克，寒颤，僵直n n严重的局部感染严重的局部感染严重的局部感染严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染，肾炎，腹部术后感染，肾炎，腹部术后感染，肾炎，腹部术后感染，)n n心率异常加快心率异常加快心率异常加快心率异常加快n n低血压或高血压低血压或高血压低血压或高血压低血压或高血压n n呼吸频率加快呼吸频率加快呼吸频率加快呼吸频率加快“何何时

13、时采血采血进进行血培养，无特殊行血培养，无特殊时间时间要求。要求。”关于采血时机关于采血时机03060时间(分钟)体温体温血培养采血时机血培养采血时机细菌浓度细菌浓度答答 案：采集血培养样本的最佳时间案：采集血培养样本的最佳时间n尽可能在患者寒战或开始发热时尽可能在患者寒战或开始发热时采血采血n在患者接受抗生素治疗前采血在患者接受抗生素治疗前采血n如患者已经应用抗菌药物进行治如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血培疗，应在下一次用药之前采血培养养 “为为减减轻轻患者痛苦，只从一个穿患者痛苦，只从一个穿刺部位采一份血液刺部位采一份血液标标本即可。本即可。”关于采血套数及部位关于采

14、血套数及部位基本概念基本概念n n成人成人“一套一套”血培养应该包括需氧瓶血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，也叫和厌氧瓶各一个，也叫“一份一份”n n注意：一次穿刺采血，算注意：一次穿刺采血，算“一套一套”，采集第二套应从另一个穿刺点获得。采集第二套应从另一个穿刺点获得。n n儿童一般只做需氧培养，但仍需从多儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采集多次。特殊患者才考虑厌个部位采集多次。特殊患者才考虑厌氧培养。氧培养。采血套数采血套数Weinsteinetal.DetectionofBloodstreamInfectionsinAdults:HowManyWeinsteinetal.Dete

15、ctionofBloodstreamInfectionsinAdults:HowManyBloodCulturesAreNeededJClinMicrobiol.2007;45:3546-3548BloodCulturesAreNeededJClinMicrobiol.2007;45:3546-3548表皮葡萄球菌的临床意义表皮葡萄球菌的临床意义2 23 3套血培养，有助于污染的判断。套血培养，有助于污染的判断。Tokars,JI.Clin Infect Dis 2004;39:333Tokars,JI.Clin Infect Dis 2004;39:333 采集采集1套无法判套无法判断是病原

16、菌还断是病原菌还是污染菌。是污染菌。答答 案案：关于血培养套数与采血部位：关于血培养套数与采血部位n n每位患者每次采血最少每位患者每次采血最少2套，套，3套更好套更好n n初发患者，绝不能只采初发患者，绝不能只采1套标本套标本n n 多个穿刺部位采血。因多部位同时发多个穿刺部位采血。因多部位同时发 生污染的几率较小，便于对结果进判断生污染的几率较小，便于对结果进判断 “两套血培养采集两套血培养采集间间隔无特殊要求。隔无特殊要求。”关于采血间隔关于采血间隔答案：关于标本采集间隔时间答案：关于标本采集间隔时间n n对对对对于于于于非非非非持持持持续续续续性性性性菌菌菌菌血血血血症症症症，同同同同

17、时时时时或或或或短短短短时时时时间间间间内内内内采采采采集集集集2 23 3套套套套血血血血培培培培养养养养，因因因因为为为为体体体体内内内内巨巨巨巨噬噬噬噬细细细细胞胞胞胞吞吞吞吞噬噬噬噬系系系系统统统统会会会会在在在在151530min30min内清除掉进入人体内的细菌。内清除掉进入人体内的细菌。内清除掉进入人体内的细菌。内清除掉进入人体内的细菌。n n可可可可疑疑疑疑急急急急性性性性心心心心内内内内膜膜膜膜炎炎炎炎患患患患者者者者要要要要立立立立即即即即取取取取血血血血作作作作血血血血培培培培养养养养，3030分分分分钟钟钟钟内内内内完完完完成成成成3 3套套套套血血血血培培培培养养养养

18、的的的的采采采采集集集集，采采采采集集集集后后后后立立立立即即即即进进进进行行行行抗抗抗抗菌菌菌菌药药药药的的的的经经经经验验验验治治治治疗疗疗疗。如如如如果果果果2424小小小小时时时时内内内内报报报报告告告告阴阴阴阴性性性性，则则则则继续采集继续采集继续采集继续采集2 2套血培养。套血培养。套血培养。套血培养。n n可可可可疑疑疑疑的的的的亚亚亚亚急急急急性性性性心心心心内内内内膜膜膜膜炎炎炎炎患患患患者者者者每每每每间间间间隔隔隔隔3030分分分分钟钟钟钟至至至至1h1h采采采采集集集集1 1套套套套，连连连连续续续续采采采采集集集集3 3套套套套标标标标本本本本。如如如如果果果果242

19、4小小小小时时时时内内内内报报报报告阴性，则继续采集告阴性，则继续采集告阴性，则继续采集告阴性，则继续采集2 2套血培养。套血培养。套血培养。套血培养。“每瓶采集多少血液无特殊要求。每瓶采集多少血液无特殊要求。”关于采血量关于采血量采血量采血量(ml)与检出率的关系与检出率的关系 Overall血培养物每增加一毫升，真性菌血症血培养物每增加一毫升，真性菌血症成年人微生物的检出率增加成年人微生物的检出率增加3 但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质（补体、

20、抗体、抗生素）。所以血液与肉汤的最佳比例（补体、抗体、抗生素）。所以血液与肉汤的最佳比例为为1：41：10答答 案：关于采集血液量案：关于采集血液量n n采血量是影响灵敏度最关键因素采血量是影响灵敏度最关键因素n n成成人人一一份份标标本本2个个培培养养瓶瓶（需需氧氧厌厌氧氧），每每瓶瓶810ml，共共20ml；要要求求至至少少采采两份标本，即两份标本，即40ml。n n儿儿童童一一般般只只需需采采集集需需氧氧瓶瓶，在在保保证证采采集集血血量量1总血量下，一般为总血量下，一般为13mln n采采血血量量不不足足时时应应优优先先保保证证需需氧氧瓶瓶，因因临临床床90以以上上的的感感染染为为需需氧

21、氧菌菌或或兼兼性性需需氧氧菌菌感染感染 先采生化、凝血先采生化、凝血标标本，再采血培养本，再采血培养标标本。本。”关于关于各种血液标本的各种血液标本的采集顺序采集顺序n血培养对无菌操作的要求比注射、采集血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、凝血等其它标本要高。生化、凝血等其它标本要高。n所以要最先采集血培养标本。所以要最先采集血培养标本。n污染率的指标是污染率的指标是 3%3%（100100份标本里只能有不到份标本里只能有不到3 3个标本出现个标本出现污染。）污染。）答案：采各种血液标本的先后顺序答案：采各种血液标本的先后顺序“消毒的重点是足消毒的重点是足够够量的消毒量的消毒剂剂。”关于皮肤

22、及培养瓶消毒皮肤消毒程序：皮肤消毒程序：推荐使用碘町、洗必泰或碘推荐使用碘町、洗必泰或碘伏作为皮肤消毒剂。伏作为皮肤消毒剂。碘町作用碘町作用1min 碘伏作用碘伏作用1.5-2min 洗必泰作用时间与碘町一样洗必泰作用时间与碘町一样（但不能用于少于（但不能用于少于2个月婴儿个月婴儿皮肤消毒）皮肤消毒）培养瓶的消毒程序：培养瓶的消毒程序：1.1.去掉培养瓶口的塑料瓶盖。去掉培养瓶口的塑料瓶盖。去掉培养瓶口的塑料瓶盖。去掉培养瓶口的塑料瓶盖。2.2.75%75%75%75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子酒精消毒血培养瓶橡皮塞子酒精消毒血培养瓶橡皮塞子酒精消毒血培养瓶橡皮塞子60606060秒。秒。秒。秒

23、。3.3.自然自然自然自然待干待干待干待干。4.4.将标本注入培养瓶内。将标本注入培养瓶内。将标本注入培养瓶内。将标本注入培养瓶内。5.5.5.5.5.5.颠倒混匀标本与肉汤颠倒混匀标本与肉汤颠倒混匀标本与肉汤颠倒混匀标本与肉汤，以避免血，以避免血，以避免血，以避免血液凝集。液凝集。液凝集。液凝集。“培养瓶未使用时，需要冷藏或冷冻。培养瓶未使用时，需要冷藏或冷冻。”关于培养瓶的储存温度 不需冷藏，更不能冷冻。保存在1525的室温即可，温度过低会导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。答案：关于未用培养瓶的储存温度 “加入标本后的培养瓶夜班未能及时送到检加入标本后的培养瓶夜班未能及时送到检验科，可以冷藏

24、或放入验科，可以冷藏或放入35的温箱。的温箱。”关于关于夜班血培养的夜班血培养的送检送检 培养瓶夜班未能及时送到检验科，培养瓶夜班未能及时送到检验科，存在室温即可，不能冷藏也不能放入存在室温即可，不能冷藏也不能放入35 的温箱的温箱。过夜不会对检测造成影响，过夜不会对检测造成影响，但仍需尽快送检。冷藏可能导致对温度但仍需尽快送检。冷藏可能导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。温箱会导致细敏感的耐瑟氏菌等死亡。温箱会导致细菌进入生长对数期，从而错过检测的最菌进入生长对数期，从而错过检测的最佳时期。佳时期。答案：关于夜班血培养的送检答案：关于夜班血培养的送检“患者静脉中插有导管，可直接患者静脉中插有导管

25、，可直接从导管采血。从导管采血。”关于采血部位 不可以不可以，常规血培养不宜从，常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置中采集，静脉导管或静脉留置装置中采集，检出污染或定植菌的可能性较大。检出污染或定植菌的可能性较大。除非怀疑导管相关性血流感染，除非怀疑导管相关性血流感染，请参照导管相关性血流感染的采请参照导管相关性血流感染的采血方法。血方法。答案：关于从静脉留置装置直接采血答案：关于从静脉留置装置直接采血血培养标本的拒收血培养标本的拒收n瓶子上帖的标签错误或未帖标签。瓶子上帖的标签错误或未帖标签。n血培养瓶打破的、损坏的或渗漏。血培养瓶打破的、损坏的或渗漏。n血液凝固。血液凝固。培养基的选择培

26、养基的选择n推荐使用商品化的培养基推荐使用商品化的培养基n使用添加抗菌药物吸附剂的血培养使用添加抗菌药物吸附剂的血培养瓶有助于提高已接受抗菌药物治疗瓶有助于提高已接受抗菌药物治疗患者血培养的检出率，增加细菌的患者血培养的检出率，增加细菌的分离率和分离速度，但同时也会增分离率和分离速度，但同时也会增加污染菌的检出率。加污染菌的检出率。上呼吸道标本上呼吸道标本上呼吸道感染：上呼吸道感染：n绝大部分呼吸道感染局限于口咽、鼻咽和口咽、鼻咽和鼻腔鼻腔部位；n导致n咽痛、鼻涕、常常会发热。感染喉部、中耳、鼻窦炎、结膜炎或角膜炎。n可能与严重疾病百日咳、流行性感冒、麻疹和传染性单核细胞增多症并存。不同的采样

27、拭子不同的采样拭子对标本的检测结果有影响吗对标本的检测结果有影响吗?棉棉+木棍木棍抑菌区域的产生由于棉中所含的脂肪酸以及从木棒中渗出的树脂和甲醛。咽拭子运送培养基咽拭子运送培养基q 可以运送需氧、厌氧、苛养菌可以运送需氧、厌氧、苛养菌q 4或或RTq 24或或48小时小时建议用于病原菌建议用于病原菌培养培养而不是涂片的标本送检。而不是涂片的标本送检。痰培养标本痰培养标本采集与运送病原体种类繁多而复杂使下呼吸道感染病原诊断成为难题使下呼吸道感染病原诊断成为难题细菌（包括放线菌与奴卡菌，厌氧菌与细菌（包括放线菌与奴卡菌，厌氧菌与分枝杆菌）分枝杆菌）真菌（包括肺孢子菌）真菌（包括肺孢子菌）病毒病毒支

28、原体、衣原体与立克次体支原体、衣原体与立克次体原虫原虫寄生虫寄生虫咳痰途经口咽部n唾液中口咽部定植菌的浓度可达唾液中口咽部定植菌的浓度可达108-109/ml。n研究显示，国内常规痰标本中约半研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染现象。数存在唾液严重污染现象。不可避免地受到污染不可避免地受到污染我国痰细菌培养现状我国痰细菌培养现状n标本送检率低标本送检率低n苛养菌检出率极低苛养菌检出率极低n结果重复性差结果重复性差n报告速度慢报告速度慢n感染菌与污染菌不易区分感染菌与污染菌不易区分n药敏结果与治疗反应存在差距药敏结果与治疗反应存在差距下呼吸道感染病原学诊断注意事项下呼吸道感染病原学诊

29、断注意事项n痰标本的正确采集（包括导痰）痰标本的正确采集（包括导痰）n痰标本及时运送和处理的重要性痰标本及时运送和处理的重要性n痰标本的洗涤与匀化痰标本的洗涤与匀化n痰涂片：质量评估和细菌、真菌初步痰涂片：质量评估和细菌、真菌初步报告报告n接种平板：质量与质控，血、巧克力、接种平板：质量与质控，血、巧克力、麦康凯、沙保弱麦康凯、沙保弱n培养环境：培养环境：CO2CO2n培养时间：培养时间：24h24h，48h48hn菌落观察要点菌落观察要点n结果报告：所有菌种（群），包括结果报告：所有菌种（群），包括半定量半定量n临床意义判定临床意义判定n其他病原体的检测：结核、真菌、其他病原体的检测：结核、

30、真菌、厌氧菌、非典型病原体厌氧菌、非典型病原体下呼吸道感染病原学诊断注意事项下呼吸道感染病原学诊断注意事项咳痰标本的采集咳痰标本的采集n标本采集方法标本采集方法n医师或护士直视下采集标本医师或护士直视下采集标本n病人先漱口，去除表面的菌群病人先漱口，去除表面的菌群n教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液的痰液n临床上约半数咳痰标本不合格！临床上约半数咳痰标本不合格！关于咳痰标本关于咳痰标本n在抗生素应用前采集痰标本在抗生素应用前采集痰标本;n标本采集后标本采集后12h内必须立即进行实验室处理内必须立即进行实验室处理n咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标咳痰

31、标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标本本 n取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口n深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导n无痰可用无痰可用35NaCl 5ml雾吸约雾吸约5min导痰导痰n也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取痰痰5种筛选标准判断种筛选标准判断14001份痰标本份痰标本合格率比较合格率比较合格合格不合格不合格不能归类不能归类标本数标本数率率标本数标本数率率标本数标本数率率标准标准1474033.9925366.1*80.1标准标准235832

32、5.611097.9*930966.5标准标准3483234.5916965.5标准标准4911565.1488634.9标准标准5637845.6762354.4注：标准2：卫生部医政局全国临床检验操作规程咳痰标本不合格，退检吗？咳痰标本不合格，退检吗？n如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于2525个，个，白细胞小于白细胞小于1010个，应不做或仅在特殊要个，应不做或仅在特殊要求时做培养。求时做培养。n如做培养，报告中注明如做培养，报告中注明“镜检结果表明镜检结果表明标本口咽分泌物污染明显标本口咽分泌物污染明显”。几种下呼吸道直接采集的标本几种下呼吸道直接采集的标本n

33、经气管穿刺吸引（经气管穿刺吸引（transtracheal aspiration,TTA）n经胸壁针刺吸引（经胸壁针刺吸引（transthoracic needle aspiration,TNA）n经支气管镜采样经支气管镜采样 n支气管肺泡灌洗（支气管肺泡灌洗（bronchoalveolar lavage,BAL）n经支气管镜直接吸引经支气管镜直接吸引n防污染样本毛刷（防污染样本毛刷（protective specimen brush,PSB）n开胸肺活检（开胸肺活检（open-lung biopsy，OLB）n经人工气道吸引分泌物（经人工气道吸引分泌物（endotracheal aspira

34、tes，ETA）痰培养的送检次数痰培养的送检次数n对于普通细菌性肺炎，对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天痰标本送检每天1次，次，连续连续23天。天。不建议不建议24h内多次采集，除非内多次采集，除非痰液外观性状出现改变；痰液外观性状出现改变；n怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨天清晨痰液送检；痰液送检；n怀疑军团菌或深部真菌感染，痰标本理想的怀疑军团菌或深部真菌感染，痰标本理想的送检次数尚无定论。送检次数尚无定论。痰培养的运送和保存痰培养的运送和保存n尽快（尽快（2h）送至实验室。）送至实验室。n如不能及时送达，应将标本暂存于如不能及时送达，应将标本暂存于4，

35、但，但放置时间不可超过放置时间不可超过24h。n厌氧培养标本的最佳运送时间取决于标本量。厌氧培养标本的最佳运送时间取决于标本量。n被口咽部菌群污染的标本如咳痰等不可用于被口咽部菌群污染的标本如咳痰等不可用于厌氧菌培养。厌氧菌培养。痰培养的拒收痰培养的拒收n光学显微镜细胞学检查发现口咽分泌物光学显微镜细胞学检查发现口咽分泌物污染明显。污染明显。n没有标签或贴错标签。没有标签或贴错标签。n运送容器选择不当或有渗漏。运送容器选择不当或有渗漏。n标本采集不符合要求。标本采集不符合要求。n同一天同一试验重复送检同一天同一试验重复送检2次。次。n延时送至实验室的标本。延时送至实验室的标本。尿培养标本尿培养

36、标本采集与运送你知道吗？你知道吗？n尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道内或尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道内或尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能导致错误尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能导致错误的培养结果。的培养结果。n诊断症状明显的病人（如尿急、尿频、尿痛），一份标本诊断症状明显的病人（如尿急、尿频、尿痛），一份标本就已足够，治疗就已足够，治疗48-7248-72小时后再采集第二份标本。对于症小时后再采集第二份标本。对于症状不明显的病人，需采集状不明显的病人，需采集2-32-3份标本。怀疑肾结核时，应份标本。怀疑肾结核时，应连续连续3 3天采集晨尿。

37、天采集晨尿。n多次收集或多次收集或2424小时尿不能用作培养。小时尿不能用作培养。n申请单上必须注明病人症状是否明显，这对于定量培养分申请单上必须注明病人症状是否明显，这对于定量培养分析非常重要，尤其只有少量尿液标本。析非常重要，尤其只有少量尿液标本。n室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此若室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此若30min30min内不能及时培养尿液则必须冷藏，但也不能超过内不能及时培养尿液则必须冷藏，但也不能超过2424小时。小时。尿培养标本尿培养标本 n清洁中段尿清洁中段尿n导尿导管尿导尿导管尿n经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液n送检

38、标本以晨起第一次尿液为佳送检标本以晨起第一次尿液为佳n不能立即送检者，可暂存不能立即送检者，可暂存4冰箱，但保冰箱，但保存不超过存不超过8h清洁中段尿液清洁中段尿液n尽量取早晨第一次尿液尽量取早晨第一次尿液n弃去开始流出的尿液，以冲刷尿道口的细菌，弃去开始流出的尿液，以冲刷尿道口的细菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿取能代表膀胱部位病原菌的中段尿n详细告知病人以下操作步骤详细告知病人以下操作步骤n女性病人女性病人收集标本前用清洗液冲洗干净，从前向后仔收集标本前用清洗液冲洗干净，从前向后仔细擦洗细擦洗尿道区域尿道区域分开阴唇，开始排尿分开阴唇，开始排尿排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿排出几毫

39、升后，不停止尿流，采集中段尿n男性病人男性病人回缩包皮并清洗龟头回缩包皮并清洗龟头排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿导尿管尿液导尿管尿液n集尿袋内的尿液不能用作培养；集尿袋内的尿液不能用作培养；n导尿管末端的尿液也不能用于培养，因为很难导尿管末端的尿液也不能用于培养，因为很难避免没有尿道菌群污染。避免没有尿道菌群污染。n留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不能把导尿管与尿袋拔开后收集尿液。不能把导尿管与尿袋拔开后收集尿液。n采样端口用酒精消毒；必要时，可先夹住导尿采样端口用酒精消毒；必要时，可先夹住导尿管但不

40、能超过管但不能超过3030分钟；将注射器针头插入采样分钟；将注射器针头插入采样端口，抽吸出尿液；注入无菌杯或试管中端口，抽吸出尿液；注入无菌杯或试管中耻骨上穿刺吸取尿液耻骨上穿刺吸取尿液n常用于患儿、泌尿道厌氧菌感染或脊柱损伤病常用于患儿、泌尿道厌氧菌感染或脊柱损伤病人等。人等。n可避免尿道或会阴细菌的污染，但对膀胱内少可避免尿道或会阴细菌的污染，但对膀胱内少量尿液的小儿难以实施。量尿液的小儿难以实施。n方法：消毒自脐以下至尿道之间区域的皮肤，方法：消毒自脐以下至尿道之间区域的皮肤，局麻穿刺点部位；在耻骨联合与脐连线上，高局麻穿刺点部位；在耻骨联合与脐连线上，高于耻骨联合于耻骨联合2cm2cm

41、处进针刺入膀胱；取处进针刺入膀胱；取20ml20ml尿液；尿液；置于无菌容器中并送往实验室。置于无菌容器中并送往实验室。n可用于厌氧菌检测可用于厌氧菌检测粪便培养标本粪便培养标本n采集与运送采集指征：采集指征：粪便标本的采集方法粪便标本的采集方法n自然排便采集标本时，取有脓血、粘液、组织碎片部份的粪便13g（花生米大小）。n液体粪便则取絮状物，一般取13ml，直接装入粪便容器或运送培养基中送检。n直肠拭子采集粪便标本：先以肥皂、水和70%酒精，将肛门周围洗净，然后用经无菌盐水湿润的棉拭子插入肛门超越肛门括约肌约2-4cm，与直肠粘膜表面接触，轻轻旋转，必须将棉拭子置于运送培养基中送检。粪便标本

42、的运送粪便标本的运送n一般粪便标本装于无菌封闭广口塑料杯；直肠拭子置于肠道运送培养基。做霍乱弧菌检查的粪便标本置于碱性蛋白胨水试管中。n粪便标本：室温1小时内送至。n直肠拭子：室温1小时内送至。n高度怀疑霍乱弧菌感染的标本室温1小时内送至，运送必须符合特殊标本的安全要求。脑脊液标本脑脊液标本n采集与运送采集与运送脑脊液标本的采集方法脑脊液标本的采集方法n按脊椎穿刺操作规程，采集约3-5ml脑脊液于3支无菌试管中，每支试管至少1-2ml，然后马上将第2支（或第1支）送至实验室。n做脑脊液培养时，建议同时做血培养。腰穿时必须作彻底消毒和无菌操作。脑脊液标本的运送脑脊液标本的运送n常温立即送检，实验

43、室收到标本后应立即接种。n脑脊液标本送检的理想时间为15分钟内，半小时送检是可接受的，如果送检时间超过1小时，则会影响结果，在结果报告时，在备注处注明此情况。n如不能及时送检，可使用血培养瓶（怀疑脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染时，请勿使用血培养瓶）手术切口与软组织感染标本手术切口与软组织感染标本n采集与运送采集方法采集方法n未破裂脓肿：不能用拭子。消毒覆于脓肿表面的皮肤，用注射器将脓肿内容物吸出。然后切开脓肿、引流，取部分脓肿壁送检。用于厌氧培养。n开放病灶和脓肿：尽量去除表面菌群，用拭子采集病灶及底部或边缘的标本，置于需氧培养基中。开放病灶不能做厌氧培养。n脓疱或水疱：酒精消毒使之干燥，对于患

44、儿用23号针头挑破脓疱，拭子采集脓疱液和基底部标本。注意事项注意事项n迅速送往实验室，1小时内不能培养应将标本冷藏。n皮肤消毒对培养结果至关重要。n革兰染色对标本进行评估。涂片中如出现上皮细胞提示标本已被污染。没有上皮细胞而有白细胞说明标本采集正确。n不要仅送检脓液。脓液不能代表伤口特点，应在病灶活动区域或基底部采集标本。皮肤软组织感染的标本采集皮肤软组织感染的标本采集脓肿的症状、体征和并发症1.皮肤或皮下脓肿的的症状和体征受累部位的热、肿、触痛和发红，可有发热，特别是当周围有蜂窝组织炎时发热更多见深部脓肿表现为局部疼痛和触痛，并伴有全身症状，特别典型的是发热及厌食，体重下降和疲倦。某些脓肿则

45、主要表现为器官功能失常，如脑脓肿可引起偏瘫。皮肤软组织感染的标本采集皮肤软组织感染的标本采集n2.脓肿的并发症n伴有感染向远处部位扩散的菌血症n脓肿溃破入附近组织n炎症侵蚀血管引起出血n重要器官功能受损n厌食和分解代谢对全身影响所致的营养不良闭锁性脓肿标本的采集闭锁性脓肿标本的采集n闭锁性脓肿标本指有完整脓壁与外界不相通的脓肿标本，如：疖、痈、淋巴结脓肿、乳腺脓肿、关节腔积液肛周脓肿等等。n闭锁脓肿应采集渗出物和脓肿壁标本，注意不主张用拭子采集标本，在采集此类标本前，对在采集此类标本前，对患者病灶局部的皮肤或粘膜表面，用合适的消患者病灶局部的皮肤或粘膜表面，用合适的消毒剂消毒，用无菌注射器将脓

46、肿内容物吸出，毒剂消毒，用无菌注射器将脓肿内容物吸出，然后切开脓肿、引流，采集的浓汁（大于然后切开脓肿、引流，采集的浓汁（大于1ml），立即送检。），立即送检。开放性脓肿的采集开放性脓肿的采集n首首先先用用生生理理盐盐水水清清洗洗病病灶灶表表面面的的污污染染菌菌，用用无无菌菌棉棉签签拭拭子子先先蘸蘸少少许许生生理理盐盐水水以以保保持持标标本本的的湿湿度度，然然后后采采取取脓脓液液及及病病灶灶部部的的分分泌泌物物（最最好好从从脓脓肿肿底底部部或或脓脓肿肿壁壁取取样）置于无菌的容器中送检样）置于无菌的容器中送检n从从伤伤口口深深处处采采集集渗渗出出物物的的拭拭子子标标本本至至少少要要采采集集2 2

47、个个拭拭子子，其其中中一一个个用用于于细细菌菌培培养养，另一个用于涂片染色。另一个用于涂片染色。与临床沟通中常见问题1、我们想用的药物在药敏试验中、我们想用的药物在药敏试验中 没有做？没有做？可能是天然耐药可能是药物的敏感性被其他药物所预报2.为什么有的菌报告很多种药物，为什么有的菌报告很多种药物，有有的仅报告几种药物？的仅报告几种药物？报告的药物种类根据细菌种类的不同而有所不同，如铜绿假单胞菌报告的药物较多，而嗜麦芽窄食单胞菌报告的药敏较少与临床沟通中常见问题3、是否能将所用的药都做药敏试、是否能将所用的药都做药敏试验验?没有必要：通过耐药机制和标志性药物可以预测其他抗菌药物的敏感性没有可能

48、：不是所用药物都可以做药敏试验（需要药物在体外稳定，需要有操作标准和解释标准）与临床沟通中常见问题4、在药敏试验报告中、在药敏试验报告中MIC越小越小的抗菌药物效果越好吗？如何根的抗菌药物效果越好吗？如何根据据MIC联合用药？联合用药？感染菌对同一种药物的MIC越小，效果越好不同种抗菌药物之间MIC无可比性目前很多仪器报告的是检测折点，而不是真正的MIC与临床沟通中常见问题5、培养阳性的细菌都需要用抗菌药、培养阳性的细菌都需要用抗菌药物治疗吗？物治疗吗？不是的不是的培养阳性培养阳性 感染，可能为污染感染，可能为污染（血培养）（血培养），可能为，可能为定植定植（痰培养）（痰培养）任何结果必须结合

49、临床情况进行评价任何结果必须结合临床情况进行评价（很重要）（很重要）感染部位的清创、引流、换药比使用抗菌药物更加感染部位的清创、引流、换药比使用抗菌药物更加重要重要改善患者全身情况：器官功能支持，纠正酸碱平衡，改善患者全身情况：器官功能支持，纠正酸碱平衡，电解质紊乱，低蛋白血症，高血糖等电解质紊乱，低蛋白血症，高血糖等与临床沟通中常见问题6、选择药敏报告敏感的药物，为、选择药敏报告敏感的药物，为什么临床治疗无效？什么临床治疗无效？体外药敏试验只能预测体内治疗效果，并不等同；体外药敏试验只能预测体内治疗效果，并不等同；一一般来说，耐药治疗无效；般来说，耐药治疗无效；敏感敏感治治疗疗有效。有效。可

50、能不是真正的致病菌（污染或定植菌）可能不是真正的致病菌（污染或定植菌）细菌本身因素（如诱导耐药，生物被膜）细菌本身因素（如诱导耐药，生物被膜）感染部位与药代动力学因素感染部位与药代动力学因素细菌的细菌的MIC，给药剂量和用药方式，给药剂量和用药方式药敏试验药物中有些药物单独使用无效，但可以与药敏试验药物中有些药物单独使用无效，但可以与其他药物联合用药其他药物联合用药药物剂型及生物利用度（纯品、商品）药物剂型及生物利用度（纯品、商品）与临床沟通中常见问题7、涂片镜检结果与培养结果不吻、涂片镜检结果与培养结果不吻合？合？n涂片镜检是报告所有检见的细菌，而培养的目的是检出致病菌。n一些苛氧菌需在特殊

51、的环境或培养基上才能生长。与临床沟通中常见问题8、取的明显就是脓液标本，为何、取的明显就是脓液标本，为何鉴定报告为无菌生长？鉴定报告为无菌生长？n我们做的是有氧培养，脓液可能为厌氧菌感染。n可能细菌被大量的中性粒细胞吞噬。与临床沟通中常见问题9、鉴定结果明明写着四联球菌、鉴定结果明明写着四联球菌、革兰氏阳性杆菌，为何没有药敏革兰氏阳性杆菌，为何没有药敏结果？结果？n四联球菌为微球菌，一般不引起人体致病，为非致病菌，故考虑污染可能。n药敏结果参照CLSI标准，目前革兰氏阳性菌没有参照标准，故暂不能做药敏试验，若需治疗可参照阳性球菌用药。与临床沟通中常见问题10、一般培养不是三天出结果吗，、一般培

52、养不是三天出结果吗，今天第四天了怎么还没出来？今天第四天了怎么还没出来？n一般培养经48小时后，即第三天出报告，若需分离致病菌的则第四天出报告。与临床沟通中常见问题11、今天的培养结果怎么与前天、今天的培养结果怎么与前天的不一样？的不一样？n取材是否规范。n痰标本，有时选优势菌做，就可能导致两次不一样。与临床沟通中常见问题12.明显稀便，培养结果为何正常明显稀便，培养结果为何正常？n大便普通培养，通常只能鉴定志贺菌、沙门菌感染，致病性大肠杆菌我们没有鉴定血清。n怀疑霍乱时，需开霍乱弧菌培养。n可能病毒感染(轮状病毒)。小 结n耐药菌，尤其是多重耐药菌的出现，使临床抗感染治疗面临着困难的用药决策n细菌药敏试验在选择抗菌药物种类上为临床提供参考（经验治疗）；可以指导临床个体化治疗。n临床实验室检验有自身的局限性n各科室间交流非常重要！微生物培养微生物培养n微生物检验标本的正确采集、运送及处理，与细菌的培养、鉴定结果有十分密切的关系，医生、护士、检验人员均应重视微生物标本的正确采集的有关问题，并有责任向患者及家属进行正确采集标本的宣传和指导。n正确的微生物标本采集和运送，正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提！是准确的病原学诊断的前提！生物危险多沟通多沟通 共学习共学习 同进取同进取谢谢!