第八章尿液分析仪及其临床应用课件

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1、第二节第一节返回首页第四节 尿液分析仪检查第二节第一节返回首页一、尿干化学分析仪 尿干化学分析仪又称尿液分析仪是用干化学方法检测尿中某些成分，有半自动和全自动两类仪器。（一）检测原理 尿分析仪组成 尿分析仪通常由机械系统、光学系统、电路系统三部分组成。第二节第一节返回首页 尿液分析试剂带 单项试带是干化学发展初期一种形式，也是最基本的结构形式。它以滤纸为载体，将各种试剂浸渍后干燥，作为试剂层，再在表面覆盖一层纤维膜，作为反射层。尿液侵入试剂带后与试剂发生反应，产生颜色变化。多联试剂带是将多种检测项目的试剂块，按一定的间隔、顺序固定在同一条带上的试剂。使用多联试带，浸入一次尿液可同时测定多个项目

2、。第二节第一节返回首页 尿液分析仪检测原理 尿液中相应的化学成分使尿多联试带上各种含特殊试剂的模块发生颜色变化，颜色的深浅尿液中的相应物质的浓度成正比；将多联试带置于尿液分析仪比色进样槽，各膜块依次受到仪器光源照射并产生不同的反射光，仪器接以不同强度的光信号后将其转换为相应的电讯号。再经微处理器由下列公式计算出再经微处理器由下列公式计算出各测试项目的反射率，然后与标准曲线比较后校正为测定值，最后以定性或半定量方式自动打印出结果。尿液分析仪测试原理的本质是光的吸收和反射.试剂块颜色的深浅对光的吸收、反射是不一样的。颜色越深，吸光值越大，反射光量值越小；反之，颜色越浅，吸收光量值越小，反射光量值越

3、大，反射率越大。第二节第一节返回首页 （二）.检测参数 从最初的单一测试到现今的多项测试，尿液分析仪检测参数随尿试带的发展而发展。尿试带常依测试参数分为两类：用于初诊患者及健康体检使用的811项筛检组合试带。8项检测项目包括酸碱度、蛋白、葡萄糖、酮体、胆红素、尿胆原、红细胞或血红蛋白或隐血和亚硝酸盐;9项检测项目在8项基础上增加了尿白细胞10项检测项目又在9项的基础上增加了尿比密(SG);11项则又增加了VitC.用于已确诊疾病的疗效观察,如尿糖、尿蛋白等单项试带和各种组合型试带.第二节第一节返回首页 常用组合型试带有:肾病四联试带:PH、蛋白、隐血、比密.糖尿病型五联试带:PH、蛋白、葡萄糖

4、、酮体、比密.肝病型二联试带:胆红素、尿胆原.1.酸碱度 采用酸碱指示剂法.PH试剂块含有甲基红(PH4.66.2)和溴麝香草酚蓝(P6.07.6)两种酸碱指示剂,在PH4.59.0的范围内,颜色由橙红红黄绿到蓝色变化.2.比密 采用多聚电解质离子解离法.3.尿糖 采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法.第二节第一节返回首页 4.蛋白质 采用PH指示剂蛋白质误差(protein error of indicator)法.即在PH3.2的条件下,溴酚蓝产生阴离子,与带阳离子的蛋白质结合发生颜色变化.蛋白质试剂块含有四溴酚蓝、柠檬酸、柠檬酸盐和表面活性剂,四溴酚蓝为酸碱指示剂同时也是灵敏的蛋白显色剂.当尿

5、中含有蛋白质,由于蛋白质离子对指示剂相反电荷的吸引而生成复合物,引起指示剂的进一步电离,当超过缓冲范围时,指示剂发生由黄红绿到蓝的颜色变化,颜色的深浅与蛋白质含量成正比.第二节第一节返回首页 5.酮体 采用亚硝酸基铁氰化钠法.酮体试剂块主要含有亚硝基铁氰化钠、甘氨酸、碱缓冲剂。在碱性条件下，亚硝基铁氰化钠可饿与尿液中乙酰乙酸、丙酮起反应，试剂膜块发生由黄色到紫色的颜色变化，颜色的深浅与酮体含量成正比。6.胆红素 采用偶氮反应法。胆红素试剂块主要含有2，4-二氯苯胺重氮盐、缓冲剂及其他表面活性物质。在强酸性介质中，结合胆红素与二氯苯胺重氮盐起偶联反应，生成红色复合物。颜色由黄色到红色的颜色变化，

6、颜色的深浅与胆红素含量成正比。第二节第一节返回首页 7.尿胆原 采用醛反应法或重氮反应法。尿胆原试剂块主要含有对-二甲氨基苯甲醛、缓冲剂及其他表面活性物质。在强酸性条件下，尿胆原与对-二甲氨基苯甲醛发生醛化反应,生成红樱红色缩合物.试剂膜块发生由黄色到红色的颜色变化.8.尿红细胞或血红蛋白 采用血红蛋白类过氧化物酶法.9.亚硝酸盐 采用亚硝酸盐还原法.第二节第一节返回首页 10.白细胞 采用白细胞酯酶法.白细胞试剂块主要含有吲哚酚酯法、重氮盐及其他物质.11.Vit C 采用还原法.Vit C试剂膜块区含有2,6-二氯酚靛酚钠、中性红、亚甲基绿磷酸二氢钠、磷酸氢二钠.Vit C具有1,2-稀二

7、醇还原性基团,在酸性条件下,能将氧化态粉红色的2,6-二氯酚靛酚钠染料还原为无色的2,6二氯二对酚胺.试剂膜块区发生由绿或深蓝至粉红色的颜色变化.第二节第一节返回首页 三.临床应用 （一）酸碱度 pH的检测主要用于了解酸碱平衡情况，监测泌尿系统患者的临床用药情况，同时了解尿pH变化对试带上其它模块区反应的干扰作用。（二）比密 尿比密的检测主要用于了解尿液中固体物质的浓度，顾及肾脏的浓缩功能。影响因素：干化学尿比密测定，变化范围为pH6.27.0，当尿液PH7.0时，造成结果偏低。第二节第一节返回首页 （三）尿糖 尿糖检测主要用于内分泌疾病如糖尿病及其他相关疾病的诊断与治疗的监测等。干化学法测定

8、尿糖是采用酶法，其主要成分是模块中含有葡萄糖氧化酶把葡萄糖氧化成葡萄糖醛酸和过氧化氢后者在有过氧化物酶催化释放出O，使色原呈现不同的颜色变化。1.干化学法测定尿糖应注意的事项 （1）干华学法与班氏法的特异性不同。干化学的特异性强，且与葡萄糖反应；而斑氏法与尿内的有还原性糖（葡萄糖乳糖和半乳糖等）和所有还原性物质都反应，故在干化学法氏阴性的标本而有可能在斑氏法呈阳性结果。第二节第一节返回首页 （2）干化学与班氏法的灵敏度不同，干化学灵敏度高，葡萄糖含量为1.672.78mmolL即可出现阳性；而班氏法在8.33mmoL才呈现阳性。（3）干扰物质（如维生素C）对于干化学法与班氏法两法的不同影响。（

9、4）感化学法测定尿糖只是一般半定量的过筛试验，所设计的档次与传统斑氏法的档次存在着差异，因此对糖尿病人的动态观察，在干化学法出现阳性结果时，最好用特异葡萄糖定量的方法以确立准确的尿糖范围或收集昼夜尿标本作定量。第二节第一节返回首页 2.尿糖测定的临床意义 尿糖阳性见于糖尿病肾性糖尿病甲状腺功能亢进症等；内服注射大量葡萄糖及应激反应也可致阳性。（四）蛋白质 尿蛋白检测主要用于肾脏疾病及其它相关疾病的诊断治疗预防等。1.感化学检测尿蛋白应注意的事项 （1）尿液的pH 由于蛋白测定采用指示剂的蛋白质误差原理，因此，尿液的pH是影响测试结果的重要因素之一。尿液必须新鲜。不管鸟也是由于保存不当引起pH大

10、的变化，还是尿标本过酸过碱都会影响实验结果。第二节第一节返回首页 （2）病人服用奎宁奎宁丁和嘧啶等药物引起的抢碱尿（pH9.0）时.会使干化学法假阳性和磺基水杨酸出现假阳性。鉴别方法是用稀醋酸将尿液pH条至57，在做实验，借以区别是否由于强碱尿而导致假阳性。（3）药物干扰 研究证明及四种药物可使尿蛋白检插出假阳性。如青霉素族药物。（4）灵敏度 尿蛋白干化学法对尿内不同蛋白质成分的灵敏度不一，主要对清蛋白敏感（70100mL），而对球蛋白粘蛋白本周氏蛋白不敏感。因此对于肾病患者，特别是在疾病发展过程中需要系统尿蛋白含量的病例最好使用磺柳酸法（或加热乙酸法）和双缩脲法进行定性和定量实验。第二节第一

11、节返回首页 （5）标本内还有其他分泌物（如生殖系统）或含有较多细胞成分时可引起假阳性，这种蛋白尿绝非泌尿系统病变所致。2尿蛋白测定的临床意义 （1）生理性蛋白尿：指泌尿系统并无血质性病变，尿内暂时出现蛋白而言。（2）病理性蛋白尿：指泌尿系统因器质性病变，尿内持续的出现蛋白尿。（五）酮体 尿酮体检查主要用于糖代谢障碍和脂肪不完全氧化的疾病或状态的诊断及其他相关疾病的诊断和治疗。第二节第一节返回首页 检测尿酮体的模块中主要含有亚硝基铁氯化钠，可与尿液中的乙酰乙酸，丙酮产生紫色反应。其对乙酰乙酸的敏感度50100mg/L,对丙酮仅为400700mg/L,不于-羟丁酸起反应.1.在反应中注意的问题 （

12、1）由于尿酮体中的丙酮和乙酰乙酸都具有挥发性,乙酰乙酸更易受热分解成丙酮,尿液被细菌污染后酮体消失.因此尿液新鲜,及时送检,以免因酮体的挥发后分解出现假阳性后结果偏低.（2）注意干化学法与酮体粉法的灵敏度的差异.（3）注意不同病理酮体的变化会给检测结果带来差异.第二节第一节返回首页 2.尿酮体测定的临床意义 尿酮体阳性见于糖尿病酮症酸中毒、妊娠剧吐、长期饥饿、营养不良及剧烈运动后.（六）胆红于尿胆原 尿胆红素测定原理是直接在强酸介质中,与2.4-二氯苯胺重氮盐起偶联反应呈紫红色.测定尿胆原的原理与改良Ehrlich法相同.1.两实验法的主要注意点 （1）标本必须新鲜，以免胆红素在阳光照射下成为

13、胆绿素。（2）尿液中含高浓度维生素C和亚硝酸盐时，抑制偶氮反应使尿胆红素呈阴性。第二节第一节返回首页 （3）尿液中一些内源性物质如胆色素原、吲哚、胆红素等和一些药物如酚噻嗪类、vitk、磺胺药物等，因颜色干扰尿胆原监测时呈假阳性。（4）正常人尿胆原排出量波动很大，夜间和上午两位为后者迅速增加，在午后24时达高峰；同时尿胆原的清除率与尿pH相关,pH5.0时，清除率为2ml/min;pH8.0时增至25m/min，因此有学者倡勇预先给患者服用碳酸氢钠，简化碱化尿液收集午后24h尿（24排出量）进行测量，以提高尿检出率。2.尿胆红素、尿胆原检查的临床意义、主要鉴别三种黄疸。第二节第一节返回首页 （

14、七）（七）隐血 尿胆原主要用于肾脏、泌尿道疾病及其它相关疾病的诊断、治疗。干化学法隐血检测采用血红蛋白类过氧化物酶法，灵敏度为150300ug/l。尿液中含有肌红蛋白、对热不稳定酶、氧化剂或菌尿，可使干化学法尿隐血测定呈现假阳性结果；尿液中大量的VitC的存在（100mg/l）,可竞争性抑制反应，产生假阴性结果。第二节第一节返回首页 （八）亚硝酸盐 尿亚硝酸盐是用于尿路细菌感染的快速筛检实验，采用亚硝酸盐还原法，灵敏度为0.30.6mg/l。尿亚硝酸盐实验是细菌感染的指标，阳性结果的产生取决于三个条件尿液中的致病菌须含有碳酸盐还原酶。体内有适量的磷酸盐存在。尿液在膀胱内有足够的保留时间（4h）

15、且排除药物等干扰因素。第二节第一节返回首页 （九）白细胞 尿白细胞检测主要用于肾脏、泌尿道疾病的诊断、治疗等。干化学法白细胞检测采用中性粒细胞酯酶法灵敏度为515l。中性粒细胞胞质中含有酯酶，而单核细胞、林把细胞胞质中则无酯酶，因此，干化学法白细胞检测方法只对粒细胞敏感。尿液标本污染甲醛、或高浓度胆红素、或使用某些药物如呋喃妥因时，干化学法呈现假阳性结果。尿中vitC、或尿液中含有大剂量先锋霉素、庆大等药物、或尿蛋白大于5gL时，干化学法呈现假阳性结果。第二节第一节返回首页 （十）vitC 干化学法的检测vitC采用还原法.灵敏度因所用试剂带不同而用所不同.一般为50100mgL。尿液中维生素

16、C含量的高低对血红蛋白胆红素葡萄糖及硝酸盐可产生严重的负干扰，干扰程度随维生素C浓度的增加而增加。四 质量控制 尿液干花学分析仪各测试项目的主要检测原理，是依据多联试带上各自对应模块化学反应后颜色变化的深浅来确定尿液中的含量，因此，任何外源性因素或人为因素对尿标本或对多联世代模块的干扰，菌可引起检测结果的错误，出现假阳性或假阴性。第二节第一节返回首页 （一）检测前质量控制 主要是标本采积极影响因素。（二）检测中质量控制 分析结果中质量控制。（三）检测后的质量控制 化学分析结果与显微镜镜检结果的互相关系，如出现：化学分隐血阴性，而镜检见多量红细胞。化学分析隐血阳性，而镜检却见不到红细胞或仅见少量

17、红细胞。第二节第一节返回首页 化学分析白细胞阴性，而镜检见多量白细胞 化学分析白细胞阳性，而镜检却见不到白细胞或仅见少量白细胞。化学分析亚硝酸盐为阳性，而尿蛋白质及白细胞均阴性。尿镜检红细胞白细胞和管型增多，尿化学分析蛋白质阴性等等。这些结果就为可疑结果，应进一步查明原因。第二节第一节返回首页 二 尿有形成分分析仪检查第二节第一节返回首页 尿沉渣分析仪主要由两大类：1.基于尿沉渣镜检影象分析原理：影像或尿沉渣分析仪（或称“工作站”）其检测原理与人工显微镜镜检原理基本相似，部分直接观察有形成分的形态。但它毕学经过严格的定时、定速离心，尔后留取定量的尿沉渣，配套动力装置将其移至显微镜载物台上刻有标

18、尺的流动样品池内经过频内光源灯、相聚光流、彩色摄像机等，在电脑显示屏上得到清稀的尿沉渣画面，在由操作员在屏幕上统计出各种有形成分的数目，由计算机自动换算成每升的单位数据。2.流式细胞术尿沉渣中自动分析仪 第二节第一节返回首页 （一）、检测原理 在全自动尿液沉渣分析仪检测分析中，应用了流式细胞和电阻抗分析的原理；尿液中细胞等经荧光色素染色后，在韒流液的作用下，形成单个纵列细胞流、快速通过氩激光检测区，以及检测荧光、散射光和电阻抗的变化；当仪器捕获了荧光强度（Fl）前向荧光脉冲宽度、前向散射光强度（Fsc）、前向散射光脉冲宽度（Fscw）电阻看信号台，综合绘制和计算得到了相应细胞的大小、长度、体积

19、和染色质长度等资料，并红细胞、白细胞、细菌、管型等的散点图及质量报告。第二节第一节返回首页 在测试前，须先用菲啶（Plconamtione）与羟花氰（Carboagamine）染料对尿液中的有形成分进行染色。主要作用：菲啶：主要是细胞核酸成分DNA着色。在480nm光波激发时，产生610nm的橙黄色光波，用于区分有校的细胞和无校的细胞，如白细胞与红细胞、病理性管型和透明管型。羟花氰：穿透力强，与细胞质膜（红细胞膜、核膜和线粒体）的脂层成分发生结合，在460nm的光波激发时，产生505nm的绿色光波，主要区别细胞大小，如上皮细胞与白细胞。第二节第一节返回首页 荧光强度（FL）：指从染色尿液细胞发

20、出的荧光，主要反映细胞染色质的强度。前向荧光脉冲宽度（Flw）:主要反映细胞染色质的长度。前向荧光脉冲宽度（Flw）：主要反映细胞染色质的长度 散射光强度（Fsc）：主要指前向散射光强度，反映细胞大小。前向散射光脉冲宽度（Fscw）：主要反映细胞长度。电阻抗大小：主要与细胞体积成正比。第二节第一节返回首页 （二）.检测参数 流式细胞尿沉渣分析仪在检测报告中住了给出主要有形成分的定量参数外，还给出一些标记参数，同时给出FlFsc、FscwFlw散点图和有关红细胞的信息。（一）定量参数 主要包括：红细胞白细胞上皮细胞管型细菌。（二）标记参数 主要包括：病理性管型小园上皮细胞美酶母细胞（YZC）结晶

21、和精子。第二节第一节返回首页 红细胞信息主要提示红细胞均一性：以血浆80红细胞前向散射光（FSC）84ch，称为均一性红细胞。仪器将80红细胞前向散射光（FSC）126ch，称为非均一性红细胞，界于两者之间的即为混合性红细胞，由此可得到均一性红细胞的百分率非均一性百分率非溶血性红细胞数量和百分率。（三）分析FlFscFscwFlw散射图 1.红细胞 在尿液中直径大约为8.0m，没有细胞核和线粒体常常溶解成小红细胞碎片，呈现明显的大小不等，因此Fl几乎极低和Fsc大小不等都可以在红细胞的分布区域出现在FlFsc散点图中。第二节第一节返回首页 2.白细胞 在尿液中直径大约为10m，有细胞核，因此，

22、有高强度的前向荧光和前向散射光强度，出现在FlFsc散射图中。3.细菌 虽体积小但含有DNA，所以前向散射光潜度要比红细胞白细胞强；荧光强度比红细胞强但比白细胞弱，出现在FlFsc 及FscwFl散射图中。4.上皮细胞 种类较多且大小不等，但不管何种类型的上皮细胞均有细胞核，主要分布在FscwFlw散射图左上角。第二节第一节返回首页 5.透明管型 由于管型体积大不含内容物，有较高的前向散射光脉冲宽度的和微弱的荧光脉冲宽度。6.酵母细胞和精子细胞 含有RNA和DNA，有很多的荧光强度，具有散射光强度与红、白细胞相似，故分布在红、白细胞之间的区域。7.结晶 在染色过程中不着色，其fl较红细胞更低，

23、由于结晶的多样性，根据结晶的大小，FSC相应变化，所以其散射光强度分布很亮。第二节第一节返回首页 三、临床应用 1.红细胞 尿沉渣红细胞数量可帮助血尿有关疾病的诊断和鉴别诊断，如肾炎、膀胱炎、肾结核、肾结石等；通过动态观察类患者尿红细胞数量的变化，可以确定患者的治疗结果和判断预后。2.白细胞和细菌 白细胞数量变化可协助诊断和鉴别诊断泌尿系统感染、膀胱炎、结核、肿瘤等疾病。3.上皮细胞 正常尿液中可见少量的鳞状上皮细胞和移行上皮细胞。如这两种细胞增多并有小圆上皮细胞，则认为是泌尿系统感染。第二节第一节返回首页 4.管型 正常尿液中可见极少量的通明管型。管型对肾脏的器质性病变有重要意义。管型的种类

24、很多，病理和正常管型尿沉渣分析仪无法区别仅能借助显微镜的加以区别。5.其他 流式细胞术尿沉渣分析仪还能标记类酵母细胞(YLC)、结晶(XTAL)、精子(SPERM)。第二节第一节返回首页第三节 方法学评价 一.尿干化学分析仪与显微镜检查 （一）尿干化学分析仪 1.只要优点 标本用量少、检测快速、检测项目多。2.主要不足 不能替代对病理性尿标本的显微镜检查。特别是管型、结晶、上皮细胞、淋巴细胞、单核细胞等其它有形物质；尿蛋白的检测试剂以清蛋白为主，对于球蛋白不敏感；故不变用于肾病患者。第二节第一节返回首页 （二）显微镜检查方法 显微镜的检查方法通过显微镜的放大作用，直接将细胞等有形成分直观、真实

25、地呈现在镜下，而干化学法是根据多联试带上各膜块化学反应后的颜色变化的深浅来检测胞质酶溶物，间接鉴别细胞有无。两种方法结果分析不等的有：1.白细胞 分析依法（）、镜检法（）：可能的解释为尿液在膀胱贮存时消失或其他原因致使白细胞破坏中性粒细胞酯酶释放到尿中所致。第二节第一节返回首页 分析仪法（）镜检法（）：种种情况发生在肾移植患者发生排异反应时，尿中以淋巴细胞为主，另外尿液中以单核细胞为主是会出现此结果，应按化学法检测的使尿中完整的及新鲜的中性粒细胞，而与淋巴细胞及单核细胞不起反应，此时，应以显微镜检查为主。2.红细胞 分析依法（）、镜检法（）：这种情况可由于尿中红细胞常被破坏，而释放出血红蛋白，

26、多发生与肾病患者或某些患者尿中含有对热不稳定的酶、肌红蛋白或菌尿，引起红细胞干化学法法测定结果的假阳性。第二节第一节返回首页 分析仪法（）镜检法（）：这种情形一般很少，但可发生在尿液找你干的含有大量VitC（100mg/L）或试带失效时。二 尿沉渣分析仪与显微镜检查 显微镜的检查方法是通过显微镜的放大作用，直接将细胞等有形成分直观、真实地呈现在镜下，这种传统的手工操作方法供各个环节难以进行控制和定量的报告，致使尿沉渣检查标准化进程缓慢。第二节第一节返回首页 影像式尿沉渣分析仪，经过严格的定时、定速离心、留取定量的尿沉渣，以标准单位定量报告，因此同手工显微镜方法相比，它的分析标准定量。视野清晰、精密度较高，但许多步骤应须人为操作，故应可能存在人为误差。流式细胞术尿沉渣分析仪，尿液不须离心，标本用量少、检测细胞多，美以标本分析量相当与显微镜检策5个高倍视野；检测速度快；每小时可检测出100个尿液标本；检测中粒子范围大为0.040000；每一标本检测步骤一致，且易与质量控制和标准化，因此检测精密度较高。