《氨基酸螯合锌和维生素E互作对肉仔鸡生长、免疫和抗氧化功能的影响-开题报告课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《氨基酸螯合锌和维生素E互作对肉仔鸡生长、免疫和抗氧化功能的影响-开题报告课件（25页珍藏版）》请在装配图网上搜索。
1、氨基酸螯合锌和维生素氨基酸螯合锌和维生素E互作对肉仔互作对肉仔鸡生长、免疫和抗氧化功能的影响鸡生长、免疫和抗氧化功能的影响 一、论文选题意义 1 1、科学和实践意义、科学和实践意义 2 2、国内外研究动态、国内外研究动态 3 3、创新和特色、创新和特色 1 1 科学和实践意义科学和实践意义随随着着畜畜牧牧业业的的发发展展，饲饲料料中中矿矿物物元元素素和和维维生生素素添添加加剂剂的的应应用用日日益益普普遍遍，与与此此同同时时，由由于于不不了了解解矿矿物物元元素素与与维维生生素素互互作作而而产产生生的的资资源源浪浪费费、环环境境污污染染等等问问题题也也日日益益严严重重，因因此此，对对矿矿物物元元素
2、素与与维生素互作的研究具有很重要的意义。维生素互作的研究具有很重要的意义。VE和和微微量量元元素素Zn作作为为肉肉鸡鸡维维持持健健康康、正正常常生生长长发发育育、免免疫疫所所必必需需的的微微量量营营养养成成分分，在在肉肉鸡鸡生生产产中中起起着着极极其其重重要要的的作作用用。但但是是以以前前的的研研究究只只注注重重于于单单一一养养分分的的添添加加效效果果的的探探讨讨，对对于于锌锌和和VE互互作作在在肉肉鸡鸡生生长长、免免疫疫中中作作用用的的研研究究很很少少，而而氨氨基基酸酸螯螯合合锌锌与与VE互作的报道更少，所以，我们有必要进行更进一步的研究。互作的报道更少，所以，我们有必要进行更进一步的研究。
3、本本试试验验通通过过给给予予肉肉仔仔鸡鸡不不同同剂剂量量的的氨氨基基酸酸螯螯合合锌锌和和VE，探探讨讨锌锌与与VE互互作作对对肉肉鸡鸡生生长长、免免疫疫和和抗抗氧氧化化功功能能的的影影响响，并并根根据据生生长长、免免疫疫等等指指标标确确定定Zn-AA与与VE同同时时添添加加时时的的适适宜宜量量，为为今今后后生生产产中中进进一一步步合合理理利利用用氨氨基基酸酸螯螯合合锌锌和和VE，以以及及肉肉仔仔鸡鸡日日粮粮的的合理配制提供科学依据。合理配制提供科学依据。2 国内外研究动态VE对生长、免疫抗氧化功能的研究进展vv许许许许多多多多研研研研究究究究均均均均已已已已证证证证明明明明VEVE有有有有促促
4、促促生生生生长长长长的的的的作作作作用用用用，给给给给肉肉肉肉鸡鸡鸡鸡日日日日粮粮粮粮中中中中添添添添加加加加VEVE可可可可以以以以提提提提高高高高日日日日增增增增重重重重和和和和料料料料肉肉肉肉比比比比，从从从从而而而而提提提提高高高高其其其其生生生生产产产产性性性性能能能能（MorrisseyMorrissey等等等等 19971997；蔺蔺蔺蔺 志志志志 刚刚刚刚 等等等等 20042004；李李李李 绍绍绍绍 钰钰钰钰 等等等等20052005）。）。）。）。vvVEVE也也也也可可可可以以以以影影影影响响响响免免免免疫疫疫疫系系系系统统统统(MeydaniMeydani等等等等19
5、89)1989)。一一一一方方方方面面面面，可可可可以以以以增增增增强强强强机机机机体体体体的的的的体体体体液液液液免免免免疫疫疫疫（MorandiMorandi等等等等19931993）。另另另另一一一一方方方方面面面面，也也也也提提提提高高高高淋淋淋淋巴巴巴巴细细细细胞胞胞胞的的的的转转转转化化化化率率率率和和和和数数数数量量量量，提提提提高高高高细细细细胞胞胞胞免免免免疫疫疫疫能能能能力力力力（C.LauridsenC.Lauridsen等等等等20052005；孙尼，孙尼，孙尼，孙尼，20042004）。）。）。）。vvVEVE还还还还可可可可以以以以提提提提高高高高机机机机体体体体抗
6、抗抗抗氧氧氧氧化化化化力力力力。机机机机体体体体缺缺缺缺乏乏乏乏VEVE时时时时，不不不不仅仅仅仅会会会会干干干干扰扰扰扰肉肉肉肉鸡鸡鸡鸡正正正正常常常常的的的的免免免免疫疫疫疫反反反反应应应应GoreGore等等等等19971997；王王王王文文文文君君君君2002)2002)，而而且且机机体体的的抗抗氧氧化化能能力力也也下下降降了了（J.E.Oldfield等等2003；T.L.Toepfer-Berg等等2004）。）。氨基酸螯合锌对生长、免疫、抗氧化研究进展氨基酸螯合锌对生长、免疫、抗氧化研究进展v肉肉鸡鸡日日粮粮中中添添加加蛋蛋氨氨酸酸锌锌时时，以以增增重重、采采食食量量和和饲饲料料
7、转转化化率率为为评评价价指指标标，能能促促进进生生长长，而而且且添添加加效效果果在在前前、中中期期优优于于后后期期（Aeda等等2002；KSahin等等2005)。v氨氨酸酸螯螯合合锌锌在在增增强强肉肉鸡鸡免免疫疫和和抗抗应应激激方方面面也也有有一一定定的的作作用用（Dardeune等等1993；KSahin2005）一一方方面面主主要要是是通通过过提提高高血血清清中中IgG含含量量，增增强强机机体体的的体体液液免免疫疫功功能能(Ahn等等1998)，另另一一方方面面，也也可可以以提提高高淋淋巴巴细细胞胞的的免免疫疫活活性性，从从而而提提高高细细胞胞免免疫疫力力（Kidd 1992，1994
8、），降降低低发发病病率率和和死死亡亡率率(Dudley-cash1997；Christ等等2000）。）。v肉肉鸡鸡缺缺锌锌，肝肝脏脏、脾脾脏脏、法法氏氏囊囊和和胸胸腺腺中中Cu,Zn-SOD、GSH-Px的的 活活 性性 明明 显显 下下 降降(张张 日日 俊俊 1996)、机机 体体 抗抗 氧氧 化化 力力 下下 降降（Salgueiro2000；Zago等等2001），血血清清锌锌含含量量降降低低、AKP活活性性降降低低(Kraus等等1997)、MDA含含量量显显著著升升高高(周周丽丽英英等等1999)。但但是日粮高锌可使雏鸡免疫功能受损是日粮高锌可使雏鸡免疫功能受损(崔恒敏等崔恒敏等
9、2005)。锌和锌和VE对生长、免疫抗氧化研究进展对生长、免疫抗氧化研究进展vDove和和Evans(1981)报道畜禽饲料中添加高水报道畜禽饲料中添加高水平的平的Zn、Mn可增加可增加VE的损失。的损失。vSahin和和Kucuk（2003）报道猪饲料中添加报道猪饲料中添加VE和锌对环境应激有改善作用。和锌对环境应激有改善作用。v孙尼（孙尼（2004）认为饲料中含高水平的锌与铜可）认为饲料中含高水平的锌与铜可增加鸡对缺乏维生素增加鸡对缺乏维生素E症状的易感性。症状的易感性。v张维睿等张维睿等(2005)认为微量元素氨基酸螯合物可认为微量元素氨基酸螯合物可防止维生素的破坏。防止维生素的破坏。3
10、 3 创新和特色创新和特色 v提出锌（氨基酸螯合锌）和提出锌（氨基酸螯合锌）和VE互作对肉互作对肉仔鸡生长性能、免疫机能和抗氧化功能仔鸡生长性能、免疫机能和抗氧化功能的影响。的影响。v比比较较肉肉仔仔鸡鸡不不同同生生长长阶阶段段（0-3w，4-7w），锌锌和和VE互互作作对对其其生生长长性性能能、免免疫疫机能和抗氧化功能的影响。机能和抗氧化功能的影响。v了解微量元素锌与了解微量元素锌与VE的协同或颉抗作用。的协同或颉抗作用。二、研究内容、预期达到的目标及拟解决 的关键问题 1、研究内容及预期达到的目标、研究内容及预期达到的目标 2、拟解决的关键问题、拟解决的关键问题 1 研究内容及预期达到的目
11、标研究内容及预期达到的目标v本本研研究究以以0-7周周龄龄肉肉仔仔鸡鸡为为研研究究对对象象，通通过过饲饲养养试试验验，探探讨讨氨氨基基酸酸螯螯合合锌锌与与VE互互作作对对肉肉仔仔鸡鸡生生长长性性能能、免免疫疫和抗氧化功能的影响，为现今生产中提供理论依据。和抗氧化功能的影响，为现今生产中提供理论依据。v本本研研究究以以0-7周周龄龄肉肉仔仔鸡鸡为为研研究究对对象象，通通过过同同时时添添加加氨氨基基酸酸螯螯合合锌锌和和VE，探探讨讨锌锌和和VE之之间间是是否否存存在在颉颉抗抗或或协同。协同。v本本研研究究通通过过两两个个实实验验阶阶段段（0-3w，4-7w），比比较较不不同同阶阶段段锌锌和和VE互
12、互作作对对肉肉仔仔鸡鸡生生长长、免免疫疫和和抗抗氧氧化化功功能能的的影响。影响。v本研究以本研究以0-7周龄肉仔鸡为研究对象，根据生产性能免周龄肉仔鸡为研究对象，根据生产性能免疫机能和抗氧化指标结果，筛选出维持肉仔鸡生长性疫机能和抗氧化指标结果，筛选出维持肉仔鸡生长性能以及免疫功能和抗氧化功能最佳的能以及免疫功能和抗氧化功能最佳的VE和锌水平。和锌水平。2 拟解决的关键问题拟解决的关键问题v日日粮粮中中氨氨基基酸酸螯螯合合锌锌与与VE互互作作对对肉肉仔仔鸡鸡生长性能的影响；生长性能的影响；v日日粮粮中中氨氨基基酸酸螯螯合合锌锌与与VE互互作作对对肉肉仔仔鸡鸡免疫功能的影响；免疫功能的影响；v日
13、日粮粮中中氨氨基基酸酸螯螯合合锌锌与与VE互互作作对对肉肉仔仔鸡鸡抗氧化功能的影响。抗氧化功能的影响。三、研究方法和技术路线三、研究方法和技术路线1.拟采取的研究实验方法、步骤、技术路线及可行性论证2.研究工作的总体安排及进度1.拟采取的研究实验方法、步骤、技术路线及可行性论证1.1实验方法及实验设计1.2饲养管理1.3测定指标及方法1.4实验步骤1.5技术路线及可行性论证1.1实验方法及实验设计 本试验选用1日龄健康的艾维茵肉仔鸡300只（公母各半）采用33（ZnVE）二因子完全随机化设计，随机分为10个处理，每个处理3个重复，每个重复10只鸡。试验期为期7周。试验日粮为玉米一豆粕型日粮，参
14、照NRC（1998）肉鸡营养标准。对照组为基础日粮，试验组日粮是根据基础日粮中维生素和微量元素的含量和以前有于添加量的研究结果，在基础日粮基础上添加：蛋氨酸锌水平为10、50、100mg/kg（以锌计）；维生素E为5、10、100IU/kg（具体设计见表1）。表1试验设计处理组锌添加水平(mg/kg)VE添加水平(IU/kg)1002105310104101005505650107501008100591001010100100注：锌为蛋氨酸螯合锌，VE为VE醋酸酯1.2 饲养管理 试验鸡，按照该品种鸡管理手册管理。保证自由采食与饮水。1.3 测定指标及方法（1）生长性能有关指标：各重复组分别
15、在3、5、6和7周龄末测定两阶段鸡体重，统计耗料量，和各组鸡死亡数，计算增重、料肉比。（2）T淋巴细胞百分数：采用-醋酸萘酯染色法1。（3）免疫器官指数（g/kg）=免疫器官鲜重/体重（4 4）淋巴细胞转化率：采用淋巴细胞转化率：采用淋巴细胞转化实验淋巴细胞转化实验22。（5 5）NDVNDV抗体效价：采用抗体效价：采用酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验33测定。测定。（6 6）血清铜锌超氧化物歧化酶（）血清铜锌超氧化物歧化酶（Cu,Cu,ZnSODZnSOD）、）、谷胱谷胱甘肽过氧化物酶（甘肽过氧化物酶（GSH-GSH-PxPx）血清铜蓝蛋白血清铜蓝蛋白(CP)CP)和血和血清丙二醛（清丙二醛
16、（MDAMDA）都由南京建成生物工程研究所提供都由南京建成生物工程研究所提供的试剂盒测定。的试剂盒测定。（7 7）组织器官锌浓度）组织器官锌浓度组织器官锌浓度：准确称取烘干粉碎后样品组织器官锌浓度：准确称取烘干粉碎后样品2.00002.0000克克于于3030毫升坩埚中，在电炉上炭化至无烟，冷却，然后毫升坩埚中，在电炉上炭化至无烟，冷却，然后置于置于500-550500-550高温电炉中灰化高温电炉中灰化8 8小时，冷却后，加小时，冷却后，加1 1mol/Lmol/L的硝酸的硝酸2 2ml35ml35烘箱过夜，再转移到烘箱过夜，再转移到5050mlml容量容量瓶中，定容，用原子吸收分光光度计测
17、定瓶中，定容，用原子吸收分光光度计测定。1.41.4实验步骤实验步骤 试验期试验期4949天。分两个阶段，第一阶段为天。分两个阶段，第一阶段为0 0 3 3周龄，第二周龄，第二阶段为阶段为4 4 7 7周龄。周龄。分分别别在在7 7、1414日日龄龄接种接种NDVNDV疫苗，疫苗，并并检测检测相应抗体效价。相应抗体效价。1.4.11.4.1样品的采集和制备样品的采集和制备 分别在分别在3 3、5 5、6 6、7 7w w末采集（公母比例相同）血样。从末采集（公母比例相同）血样。从每个重复内随机抽取接近平均体重的鸡各两只，心脏采血。每个重复内随机抽取接近平均体重的鸡各两只，心脏采血。制备全血和血
18、清制备全血和血清。最后一次采血并称重后，将鸡屠宰，去最后一次采血并称重后，将鸡屠宰，去毛，称屠体重，然后将法氏囊、胸腺、脾脏分别称重。毛，称屠体重，然后将法氏囊、胸腺、脾脏分别称重。1.4.2 1.4.2 数据统计分析数据统计分析 试验所有数据均采用试验所有数据均采用SASSAS统计软件中（统计软件中（ANOVAANOVA）进行方进行方差分析，多重比较用邓肯氏法差分析，多重比较用邓肯氏法(DUNCAN)DUNCAN)。1.5技术路线及可行性论证技术路线及可行性论证饲养试验：试验期7周，分两个阶段，03周龄和47周龄第21、35、42、49日龄从每组各重复固定2只鸡，空腹心脏采血。第 21、35
19、、42、49日龄分别从每个重复选取两只鸡，取胸腺、法氏囊和脾脏。并称重与体重作比较。测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性用于测定碱性磷酸酶(AKP)、血清铜蓝蛋白(CP)，丙二醛（MDA），血清铜锌超氧化物歧化酶（Cu,ZnSOD）的含量分别在第7、14日龄接种NDV疫苗。用酶联免疫方法测定NDV抗体效价。用-乙酸萘酯酶染色法和体内诱导法分别测定淋巴细胞百分数和淋巴细胞转化率。分离 血清 加 2%肝素 钠 抗凝全血2、研究工作的总体安排及进度、研究工作的总体安排及进度2005.72006.3搜集并整理资料，准备试验的前期工作；搜集并整理资料，准备试验的前期工作；2006.42007.1操
20、作饲养试验，并检测各项指标；操作饲养试验，并检测各项指标；2007.22007.5统统计计分分析析试试验验数数据据，总总结结试试验验结结果果并并撰撰写写论文论文四、研究基础和已具备的工作条件四、研究基础和已具备的工作条件1、与本项目有关的研究基础，已发表的论文、与本项目有关的研究基础，已发表的论文本课题是在查阅了大量有关氨基酸螯合锌、维生素本课题是在查阅了大量有关氨基酸螯合锌、维生素E及及其相互关系方面的中外文资料，借鉴前人研究经验，熟练其相互关系方面的中外文资料，借鉴前人研究经验，熟练掌握相关指标检测分析技术的基础上提出的。掌握相关指标检测分析技术的基础上提出的。2、已有的主要仪器设备，尚缺
21、的仪器设备及解决途已有的主要仪器设备，尚缺的仪器设备及解决途径径本本试试验验可可利利用用我我校校动动物物科科技技学学院院实实验验室室及及牧牧站站实实验验室室，本本研研究究所所需需的的主主要要仪仪器器设设备备有有酶酶联联免免疫疫检检测测仪仪、分分光光光光度度计等，购买雏鸡和配料等问题可以解决计等，购买雏鸡和配料等问题可以解决。五、本研究项目经费预算（单位：万元）五、本研究项目经费预算（单位：万元）1.科研业务费科研业务费：0.12.实验材料费：实验材料费：试验鸡及养殖费：试验鸡及养殖费：0.4药品费：药品费：0.3共计：共计：0.81一醋酸萘酯染色法一醋酸萘酯染色法1、基本原理：T淋巴细胞的胞浆
22、内存在着酸性一醋酸萘酯酶，在弱酸性条件下，能使底物醋酸萘酯水解，产生醋酸离子和一萘酚。其中一萘酚与六偶氮副品红偶连，生成不溶性的红色沉淀物，沉积在T淋巴细胞胞浆内酯酶所在的部位。经甲基绿复染后，反应颗粒变暗而呈深紫红色。2、所需试剂4%副品红盐酸溶液；4%亚硝酸钠水溶液(现用现配)；2%一乙酸萘酯乙二醇甲醚溶液(现用现配)；福尔马林一丙酮固定液；PH7.6磷酸盐缓冲液(PBS)；0.5%孔雀绿染色液；孵育液配制(现用现配)。3、操作步骤静脉取血，载玻片上涂血片2张，晾干，将血片置冷的福尔马林一丙酮固定液中，4下固定lmin。取出血片用自来水冲洗3min，用蒸馏水冲掉自来水，室温干燥；将血片放入
23、孵育液中，37孵育1.5hr，取出血片，水洗3min，用双馏水冲去沉淀物，孔雀绿染色液复染lmin，自来水和双馏水先后冲洗，晾干，油镜观察，计数100个淋巴细胞，求出ANAE阳性细胞百分比。2淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化是体外检测T淋巴细胞功能的一种方法。取肝素抗凝血0.lml，无菌加入1.8ml的RPM11640完全培养液(含20%小牛血清，青霉素、链霉素各100ug/m1，30.0g/lL-谷氨酸lml，PH7.6)，再加入0.lmlPHA，置373天，每天摇动一次。取出后吸出大部分上清夜，加入8.5g/lNH4Cl4ml，混匀后置37水浴10分钟。2500离心l0分钟，弃上清，沉淀后加5
24、ml固定液(甲醇：冰醋酸=9:1)，室温中l0分钟后离心弃上清，留0.2ml沉淀。轻轻混匀后滴加于一洁净玻片上，使其均匀铺开。自然干燥后用Giemsa染液染色，油镜一下观察200个淋巴细胞，计算其母细胞转化率。3酶联免疫吸附方法一、主要仪器酶联免疫检测仪(Bio550)酶标板(96孔)微量注射器。二、主要试剂HRP标记羊抗兔IgG(1:1000，国产)；标准牛IgG；兔抗牛血清（1：32）；碳酸盐一重碳酸盐缓冲液(pH=9.6)；柠檬酸盐缓冲液(pH=4.0)；磷酸盐缓冲液PBS；ELISA缓冲液：PBS+1%BSA；清洗液：PBS+0.05%Tween20；底物溶液贮液为20mg/mlABTS，使用时用柠檬酸盐缓冲液稀释20倍，再用等体积的0.3%H2O稀释；终止液。三、操作步骤1.包被抗原和洗涤2.加封闭液200微升，37放置一小时。洗涤(同2).3.加被检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释,每孔200微升。同时作稀释液对照。37放置2小时。洗涤(同2).4.加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG,每孔200微升,放置371小时，洗涤(同2)。5.加底物：邻苯二胺溶液加200ml，室温暗处10-15分钟。6.加终止液：每孔50微升。7.观察结果：用酶联免疫检测仪记录490nm读数。
氨基酸螯合锌和维生素E互作对肉仔鸡生长、免疫和抗氧化功能的影响-开题报告课件
