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1、盐析法沉淀蛋白质的原理蛋白质的分离纯化工作较为复杂，从细胞中提取的蛋白质或从含有蛋白质的溶液中经过沉淀、梯度离心、盐析等方法得到的蛋白质经常含有杂质。要去除这 些杂质，同时又要保持蛋白质的生物学活性，如酶的催化活性，就需要根据不同 的蛋白质制定出相应的策略，采用不同的方法。今天重点介绍下盐析法沉淀蛋白 质。用水溶液中蛋白质分子由于表面生成水化层及蛋白质分子上某些基团离子 化而使蛋白质分子表面带有电荷，增加了水化层的厚度而成为稳定的亲水胶体颗 粒，水膜和电荷一旦被除去，蛋白质颗粒将由于失去电荷和脱水而发生沉淀。向蛋白质溶液中加入无机盐（如硫酸铵、硫酸镁、氯化钠等）后，蛋白质便 从溶液中沉淀析出，
2、这种沉淀作用称为蛋白质盐析。其过程是一个可逆过程，当 除去引起蛋白质沉淀因素后，被盐析的蛋白质仍可重新溶于水中，其天然性质不 发生变化。用不同浓度的盐可将不同种类蛋白质从混合溶液中分别沉淀的过程，称为蛋 白质的分级盐析。例如蛋清溶液中的球蛋白可被半饱和的硫酸铵溶液沉淀提取， 饱和的硫酸铵溶液可使清蛋白沉淀析出。盐析法沉淀出的蛋白并没有失活，所以 盐析法常被用于分离和提取各种蛋白质及酶制剂。1）温度：除对温度敏感的蛋白质在低温（4 度）操作外，一般可在室温中进行。一般温度低蛋白质溶解度降低。但有的蛋白质（如血红蛋白、肌红蛋白、 清蛋白）在较高的温度（25 度）比 0 度时溶解度低，更容易盐析。（
3、2）pH 值：大多数蛋白质在等电点时在浓盐溶液中的溶解度最低。（3）蛋白质浓度：蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白 质地一起沉淀出来（共沉现象）。因此在盐析前血清要加等量生理盐水稀释，使 蛋白质含量在 2.5-3.0%。（4）蛋白质盐析常用的中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、 磷酸钠等。 其中应用最多的硫酸铵，它的优点是温度系数小而溶解度大（25 度 时饱和溶液为4.1M即767 克/升;0度时饱和溶解度为3.9M即676克/升）, 在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来；另外硫酸铵分段盐析效 果也比其他盐好，不易引起蛋白质变性。硫酸铵溶液的 pH 常在 4.5-5.5 之间， 当用其他pH值进行盐析时，需用硫酸或氨水调节。
盐析法沉淀蛋白质的原理
