免疫组化在皮肤科中的应用课件

《免疫组化在皮肤科中的应用课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《免疫组化在皮肤科中的应用课件（77页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、免疫组织化学免疫组织化学在皮肤肿瘤中的应用在皮肤肿瘤中的应用吴潞明吴潞明 定义：定义：又称免疫细胞化学。它是组织化学的分又称免疫细胞化学。它是组织化学的分支，为确定某一特定物质在组织内的局支，为确定某一特定物质在组织内的局部定位，使用以目的物作为抗原的特异部定位，使用以目的物作为抗原的特异性抗体进行检测的方法，即免疫组织化性抗体进行检测的方法，即免疫组织化学学(简称免疫组化简称免疫组化)。免疫组织化学概论（Immunohistochemistry）原理原理其主要原理是用荧光素、生物素或地高辛其主要原理是用荧光素、生物素或地高辛等标记的抗体（或抗原）对细胞或组织内等标记的抗体（或抗原）对细胞或组

2、织内的相应抗原（或抗体）进行定性、定位或的相应抗原（或抗体）进行定性、定位或定量检测，经过组织化学的呈色反应之定量检测，经过组织化学的呈色反应之后，用显微镜、荧光显微镜或电子显微镜后，用显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察。观察。免疫组化的技术分类免疫组化的技术分类n免疫组化的方法有直接法和间接法：免疫组化的方法有直接法和间接法：直接法直接标记特异性抗体；直接法直接标记特异性抗体；间接法不直接标记特异性抗体，一般标记间接法不直接标记特异性抗体，一般标记免疫球蛋白，将被标记的免疫球蛋白再结免疫球蛋白，将被标记的免疫球蛋白再结合到特异性抗体上。合到特异性抗体上。n免疫组化技术常用方法按标记物种类可分

3、免疫组化技术常用方法按标记物种类可分为：免疫荧光法、免疫酶法、免疫金属技为：免疫荧光法、免疫酶法、免疫金属技术、亲和免疫组化技术以及免疫电镜技术术、亲和免疫组化技术以及免疫电镜技术等。等。常用标记物荧光素：最常用的是异硫氰酸荧光素（荧光素：最常用的是异硫氰酸荧光素（FITCFITC）荧光显微镜下呈绿色荧光；四乙基罗达明荧光显微镜下呈绿色荧光；四乙基罗达明（RB200RB200）荧光显微镜下发橙红色荧光；使荧光显微镜下发橙红色荧光；使用荧光显微镜观察上述荧光标记物（荧光抗体用荧光显微镜观察上述荧光标记物（荧光抗体法）。法）。辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、生物素等：运辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、生物

4、素等：运用普通光学显微镜观察的标记物。用普通光学显微镜观察的标记物。铁蛋白金等：主要应用于免疫电镜。铁蛋白金等：主要应用于免疫电镜。免疫组化在皮肤病理中的应用n凡是组织细胞内具有抗原性的物质，如肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原、病原体等均可用免疫组织化学方法显示。n免疫组化在皮肤病理中的作用主要是鉴别组织类型或细胞来源，在淋巴细胞增生疾病中，免疫组化可在其克隆方面提供信息，有助于判断细胞的良恶性来源。亲和亲和免疫组织化学技术免疫组织化学技术n70年代以来，免疫组织化学在技术方法上不断年代以来，免疫组织化学在技术方法上不断改进，涌现了一批新的技术方法，其特点为一改进，涌现了一批新的

5、技术方法，其特点为一些具有双价或多价结合力的物质如植物凝集素些具有双价或多价结合力的物质如植物凝集素（Lectin）、生物素（）、生物素（Biotin）、亲和素）、亲和素（avidin）和葡萄球菌）和葡萄球菌A蛋白（蛋白（SPA）等被应）等被应用于免疫细胞化学技术，从而建立了用于免疫细胞化学技术，从而建立了SPAHRP法、法、ABC法、法、BRAB法和法和LAB法等。法等。n其共同特点是以一种物质对某种组织成分具有高其共同特点是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础，其本质上又非抗原抗体反应。度亲合力为基础，其本质上又非抗原抗体反应。因此，因此，Bayer（1976）首次称之为亲合组织化

6、学。）首次称之为亲合组织化学。事实上，抗原抗体反应从本质上也属于亲合组织事实上，抗原抗体反应从本质上也属于亲合组织化学这一范畴。化学这一范畴。n目前，亲合组织化学包括抗原与抗体、植物凝集素和糖类、生物素与抗生物素、葡萄球菌A蛋白与IgG、阳离子与阴离子、激素、维生素、糖及类脂质作用部位和受体等。n亲合细胞化学引入免疫细胞化学后使其敏感性亲合细胞化学引入免疫细胞化学后使其敏感性得到进一步提高，因此更有利于微量抗原（或得到进一步提高，因此更有利于微量抗原（或抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，从而出尽抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，从而出尽了免疫组化技术的发展和亲和免疫组化的创立。了免疫组化技术的发展

7、和亲和免疫组化的创立。亲和素与生物素系统1 1、亲和素、亲和素 是一种碱性糖蛋白，分子量为是一种碱性糖蛋白，分子量为6800068000，具，具有有4 4个同维生素个同维生素H H亲合力极高的结合点。一般从蛋白清亲合力极高的结合点。一般从蛋白清中提取，故又称卵白素。中提取，故又称卵白素。2 2、维生素、维生素H H（以下统称生物素）（以下统称生物素）是一种小分子的维生是一种小分子的维生素，与卵白素之间有极强的亲合力，较之抗体对抗原素，与卵白素之间有极强的亲合力，较之抗体对抗原亲合力要高出亲合力要高出100100万倍，能彼此牢固结合而不影响彼此万倍，能彼此牢固结合而不影响彼此的生物学活性。的生物

8、学活性。注：生物素与卵白素都具有与其它示踪物质如荧光素、注：生物素与卵白素都具有与其它示踪物质如荧光素、铁蛋白和过氧化物酶等相结合的能力。利用上述特性，铁蛋白和过氧化物酶等相结合的能力。利用上述特性，建立了卵白素建立了卵白素生物素免疫染色系统，即亲和素生物素免疫染色系统，即亲和素生生物素免疫染色法。物素免疫染色法。3、链霉亲和素、链霉亲和素 是一种从链霉菌培养物中提取的蛋白质，是一种从链霉菌培养物中提取的蛋白质，相对分子量相对分子量60000，且不含糖链。同亲和素一样，具有，且不含糖链。同亲和素一样，具有4个生物素结合位点，亲和力高达个生物素结合位点，亲和力高达10-15mol/L，是一种更，

9、是一种更完美的生物素结合蛋白。完美的生物素结合蛋白。n优点：很少有低聚糖残余成分，可保持中性等电点，避优点：很少有低聚糖残余成分，可保持中性等电点，避免了组织中的非特异性染色。免了组织中的非特异性染色。n借助此特点建立了亲和素借助此特点建立了亲和素链霉免疫染色法。链霉免疫染色法。基本原理n近年来，亲和免疫组化技术不断创新，目前为近年来，亲和免疫组化技术不断创新，目前为止拥有标记亲和素止拥有标记亲和素-生物素技术（生物素技术（LAB）、桥亲）、桥亲和素和素-生物素技术（生物素技术（BAB）、亲和素）、亲和素生物素生物素过氧化物酶复合物法（过氧化物酶复合物法（ABC）以及链霉亲和）以及链霉亲和素素

10、生物素生物素过氧化物酶复合物法（过氧化物酶复合物法（SP）等。）等。1LAB法法n以生物素标记抗体作第一抗体，过氧化物酶标以生物素标记抗体作第一抗体，过氧化物酶标记亲和素作为第二抗体（见图）：记亲和素作为第二抗体（见图）：BAB法n把两者连接起来先用生物素标记的抗体与细胞/组织内的抗原反应，洗去未结合的抗体，加入抗生物素孵育后，洗去未结合的抗生物素，再加入已标记酶的生物素孵育，洗片以细胞化学方法呈色反应（见图）。ABC法法（1）ABC复合物的制备：复合物的制备：（2）ABC法反应原理法反应原理SP或或SAP法法n即过氧化物酶标记的链霉卵白素或过氧化物酶即过氧化物酶标记的链霉卵白素或过氧化物酶标

11、记的碱性磷酸酶染色。标记的碱性磷酸酶染色。n反应原理反应原理链霉链霉SP或或SAP法法n该法是该法是ABCABC法基础上的进一步改良，使卵白素与链霉法基础上的进一步改良，使卵白素与链霉（而非生物素）结合，而后再结合过氧化物酶（而非生物素）结合，而后再结合过氧化物酶 。它有。它有4 4个亚基可与生物素结合，灵敏特异，背景低，成本低。个亚基可与生物素结合，灵敏特异，背景低，成本低。n优点：更简便，放大倍数优点：更简便，放大倍数，等电点中性更适合组织，等电点中性更适合组织，分子量小，穿透力分子量小，穿透力。（三）染色步骤（三）染色步骤（SPSP法为例）法为例）n每份组织均切每份组织均切3m3m的薄片

12、的薄片,于于6060烤箱烤片烤箱烤片6h6h以上备用。具体步骤如下：以上备用。具体步骤如下：石蜡切片常规脱蜡和水化石蜡切片常规脱蜡和水化石蜡切片常规脱蜡和水化石蜡切片常规脱蜡和水化热修复热修复热修复热修复3%H3%H3%H3%H2 2 2 2O O O O2 2 2 2，室温室温室温室温1010 滴加非免疫性动物血清，室温滴加非免疫性动物血清，室温滴加非免疫性动物血清，室温滴加非免疫性动物血清，室温10101010 滴加一抗，室温滴加一抗，室温滴加一抗，室温滴加一抗，室温60min60min60min60min或或或或4444过夜过夜过夜过夜封片，镜下观察，保存封片，镜下观察，保存封片，镜下观

13、察，保存封片，镜下观察，保存水冲洗，苏木素复染，水冲洗，苏木素复染，水冲洗，苏木素复染，水冲洗，苏木素复染，PBSPBSPBSPBS返蓝返蓝返蓝返蓝镜下观察控制镜下观察控制镜下观察控制镜下观察控制DABDABDABDAB显色显色显色显色加链霉加链霉加链霉加链霉-过氧化物酶溶液室温过氧化物酶溶液室温过氧化物酶溶液室温过氧化物酶溶液室温10-3010-3010-3010-30 加生物素加生物素加生物素加生物素-二抗，室温孵育二抗，室温孵育二抗，室温孵育二抗，室温孵育1010101030303030 PBS冲洗冲洗3次次3min PBSPBS冲洗冲洗3 3次次3min3min除去除去PBSPBS液液

14、除去血清除去血清PBSPBS冲洗冲洗3 3次次3min3min除去除去PBSPBS液液PBSPBS冲洗冲洗3 3次次3min3min，除去，除去PBSPBS液液PBSPBS冲洗冲洗3 3次次3min3min除去除去PBSPBS液液人体常见细胞的免疫组化特性n淋巴细胞淋巴细胞n浆细胞浆细胞n自然杀伤细胞自然杀伤细胞n肥大细胞肥大细胞n组织细胞组织细胞n皮肤、粘膜、软组织器官皮肤、粘膜、软组织器官n间质细胞间质细胞n间皮细胞间皮细胞n骨髓骨髓 n神经来源细胞神经来源细胞淋巴细胞淋巴细胞B 细胞：细胞：CD45+;CD20+;CD45RA+;CD79a+T 细胞：细胞：CD45+;CD3+;CD45

15、RO+;CD43+;多数多数TCR-,有时有时TCR-;CD4+/CD8+;T细胞亚群可表达细细胞亚群可表达细胞溶解因子胞溶解因子(granzyme B,TIA1,perforin)人体常见细胞的免疫组化特性人体常见细胞的免疫组化特性浆细胞浆细胞nCD138+;CD45-/+;CD20-;CD79a+/-;Ig+;EMA+/-NK 细胞细胞nCD45+;表面表面CD3-;胞浆胞浆 CD3+;CD43+;CD45RO+;CD56+;CD57+/-;Granzyme B+;TIA1+;Perforin+人体常见细胞的免疫组化特性人体常见细胞的免疫组化特性肥大细胞肥大细胞nCD117+组织细胞组织细

16、胞nCD45+;S100-;CD68+;CD1a-;lysozyme+;HLA-DR+;CD43+人体常见细胞的免疫组化特性人体常见细胞的免疫组化特性皮肤、粘膜、软组织器官皮肤、粘膜、软组织器官1、上皮、上皮 CK+(腺上皮倾向表达低分子量腺上皮倾向表达低分子量CK，有些上皮，有些上皮可表达特殊可表达特殊CK亚型亚型);vimentin-/+;BerEP4+/-;EMA+/-;E-cadherin+/-人体常见细胞的免疫组化特性人体常见细胞的免疫组化特性2、特殊类型上皮细胞、特殊类型上皮细胞n*表皮：表皮：34E12+,CAM5.2-,CK5/6+基底层上方：基底层上方：CK1、CK10基底层

17、：基底层：CK5、CK14n*腺上皮：腺上皮：CEA 可能可能+(管腔面管腔面);EMA 通通常常+，CK8+人体常见细胞的免疫组化特性人体常见细胞的免疫组化特性3、肌上皮、肌上皮 CK+;CK14+;高分子量高分子量 CK+;Actin+;calponin+;S100-/+;GFAP-/+;Vimentin+4、黑素细胞、黑素细胞 S100+;Vimentin+;CK-;c-kit+；HMB45-(交界区黑色素细胞可交界区黑色素细胞可+);人体常见细胞的免疫组化特性人体常见细胞的免疫组化特性5、Merkel细胞：细胞：CK+;CK20+;NSE+;synaptophysin+;chromog

18、ranin+;neurofilament+6、Langerhans细胞：细胞：CD45+;S100+;CD68-/+;CD1a+;lysozyme-/+;HLA-DR+7、基底膜：、基底膜：IV型胶原型胶原8、皮脂腺：、皮脂腺：EMA+;CEA-;低分子量低分子量CK（CAM5.2）-；S100-。人体常见细胞的免疫组化特性人体常见细胞的免疫组化特性间质细胞间质细胞1、纤维母细胞、纤维母细胞 Vimentin+;Actin-;Desmin-;CK-2、肌纤维母细胞、肌纤维母细胞 Vimentin+;Actin+;Desmin-/+;CK-/+3、平滑肌、平滑肌 Vimentin+;Actin+

19、;Desmin+;CK-/+4、树枝状细胞、树枝状细胞 Vimentin+;CD34+;Actin-/+;Desmin-人体常见细胞的免疫组化特性人体常见细胞的免疫组化特性5、内皮细胞：第、内皮细胞：第VIII 因子相关抗原因子相关抗原+;CD31+;CD34+;Vimentin+6、血管周细胞：第、血管周细胞：第VIII 因子相关抗原因子相关抗原-;CD31-;CD34-;vimentin+;Actin+;Desmin-7、脂肪细胞：、脂肪细胞：Vimentin+;S-100+人体常见细胞的免疫组化特性人体常见细胞的免疫组化特性8、软骨细胞、软骨细胞 Vimentin+;S100+;GFAP

20、+/-9、骨骼肌、骨骼肌 Vimentin+;Actin+/-;Desmin+;Myoglobin+;MyoD1-(仅原始或胚胎肌细仅原始或胚胎肌细胞胞+);Myogenin-(仅原始或胚胎肌细胞仅原始或胚胎肌细胞+);S100-/+(弱阳性弱阳性);CD56-/+(受损肌受损肌肉肉+)人体常见细胞的免疫组化特性人体常见细胞的免疫组化特性间皮细胞间皮细胞nCK+;CK5/6+;Vimentin+;Calretinin+;HBME1+;N-cadherin+;E-cadherin-;CEA-;BerEP4-;LeuM1-;Desmin-/+(occasional)人体常见细胞的免疫组化特性人体常

21、见细胞的免疫组化特性常见皮肤病和性病的常见皮肤病和性病的IHC标记标记n肿瘤标记：上皮来源肿瘤、间叶来源肿瘤、造肿瘤标记：上皮来源肿瘤、间叶来源肿瘤、造血干细胞来源肿瘤血干细胞来源肿瘤n色素性疾病标记色素性疾病标记n其他标记：其他标记：银屑病、扁平苔藓、副银屑病等常见皮肤肿瘤常见皮肤肿瘤n表皮肿瘤n黑素细胞痣n恶性黑素瘤n皮肤淋巴增生性疾病及相关肿瘤n皮肤附属器肿瘤n结缔组织肿瘤表皮肿瘤表皮肿瘤 基底细胞癌基底细胞癌重要病理改变重要病理改变na a 瘤体由基底样细胞组成，核大，浆少，染色瘤体由基底样细胞组成，核大，浆少，染色嗜碱，嗜碱，nb b 周边细胞呈栅栏状排列，肿瘤团块与周围基周边细胞呈

22、栅栏状排列，肿瘤团块与周围基质间常有裂隙。质间常有裂隙。n基底细胞癌基底细胞癌组织类型很多，如结节性、浅表性、组织类型很多，如结节性、浅表性、色素性、透明细胞性、印戒细胞性、侵袭性、色素性、透明细胞性、印戒细胞性、侵袭性、硬化性、角化性、多形性、腺样、异型基底细硬化性、角化性、多形性、腺样、异型基底细胞癌、基底鳞状细胞癌、向毛囊分化基底细胞胞癌、基底鳞状细胞癌、向毛囊分化基底细胞癌、纤维上皮瘤型、向肌上皮、皮脂腺、大汗癌、纤维上皮瘤型、向肌上皮、皮脂腺、大汗腺、小汗腺分化基底细胞癌。腺、小汗腺分化基底细胞癌。IHC标记：标记：CK8CK8、Bcl-2Bcl-2等等鉴别诊断：鉴别诊断：鳞癌鳞癌(

23、低分化低分化)、毛发上皮瘤、毛源性、毛发上皮瘤、毛源性肿瘤、毛囊漏斗肿瘤、汗管样小汗腺癌、肿瘤、毛囊漏斗肿瘤、汗管样小汗腺癌、日光日光角化病等角化病等n右图：右图：BCC表达表达CK8阳性，阳性，CK10阴性阴性n左图：左图：BCCn化生性化生性BCC：梭形细胞：梭形细胞表达结合蛋白，示其向表达结合蛋白，示其向平滑肌分化平滑肌分化nBCC伴有导管分化：伴有导管分化：CEA表达阳性表达阳性nBowen病（原位鳞状细胞癌）肿瘤细胞标记如下：泛角蛋白+；EMA+；CAM5.2-；CEA-；S-100-，HMB-45-。n鉴别诊断：浅表性基癌、光化性角化病、Bowen病样丘疹病、Paget病等。鳞状细

24、胞癌nIHC：CK10、EMA、CAM5.2等等n多种亚型：透明细胞多种亚型：透明细胞SCC、梭形细胞、梭形细胞SCC、促、促结缔组织增生性结缔组织增生性SCC、棘突松解型、棘突松解型SCC、假血、假血管性管性SCC、腺性、腺性SCC、疣状癌、化生性皮肤癌、疣状癌、化生性皮肤癌（癌肉瘤）等。（癌肉瘤）等。n鉴别诊断：日光性角化病以及与各亚型相似的鉴别诊断：日光性角化病以及与各亚型相似的各种疾病等。各种疾病等。高分化高分化CK10阳性阳性低分化低分化CK10阴性阴性低分化低分化CK8阴性阴性黑素细胞痣n分型：皮内痣、交界痣和复合痣。分型：皮内痣、交界痣和复合痣。nIHC标记：标记：S-100等。

25、等。n鉴别诊断：恶性黑素瘤鉴别诊断：恶性黑素瘤HMB-45、Ki-67和和Cyclin D1肿瘤细胞全层阳性表达，而黑素细肿瘤细胞全层阳性表达，而黑素细胞痣只有表浅的痣细胞表达阳性；恶黑表达胞痣只有表浅的痣细胞表达阳性；恶黑表达P53蛋白，而痣阴性。蛋白，而痣阴性。n左：浅层细胞表达左：浅层细胞表达HMB-45，深层痣细胞不表达；，深层痣细胞不表达；n中：只有一种或两种痣细胞表达中：只有一种或两种痣细胞表达Ki-67；n右：只有少量真皮浅层痣细胞表达右：只有少量真皮浅层痣细胞表达CyclinD1，注意只有胞核着，注意只有胞核着 色的细胞才是阳性细胞。色的细胞才是阳性细胞。n左图：晕痣，多数为复

26、合痣，可见色素失禁。左图：晕痣，多数为复合痣，可见色素失禁。n右图：随着痣细胞的调亡，痣细胞越来越难鉴别，而被含色素的右图：随着痣细胞的调亡，痣细胞越来越难鉴别，而被含色素的巨噬细胞所取代，残余的痣细胞巨噬细胞所取代，残余的痣细胞S-100染色阳性可识别。染色阳性可识别。Spitz痣痣n又称又称Spitz瘤、幼年黑素瘤和梭形上皮痣。瘤、幼年黑素瘤和梭形上皮痣。nIHC鉴别诊断：与恶性黑素瘤鉴别如下鉴别诊断：与恶性黑素瘤鉴别如下HMB-45Ki-67Cyclin D1P53CD40CD44Spitz痣痣真皮浅真皮浅表表nSpitz痣：复合痣随深痣：复合痣随深度增加的成熟现象度增加的成熟现象nSp

27、itz痣：粉红或红棕痣：粉红或红棕色圆顶状丘疹或结节色圆顶状丘疹或结节恶性黑素瘤恶性黑素瘤n主要亚型：恶性雀斑样黑素瘤、浅表扩散性恶主要亚型：恶性雀斑样黑素瘤、浅表扩散性恶黑、肢端恶黑和结节性恶黑等。黑、肢端恶黑和结节性恶黑等。n其它亚型：痣样恶黑、小细胞黑素瘤、其它亚型：痣样恶黑、小细胞黑素瘤、Spitz痣样恶黑、印戒细胞黑素瘤、棒状黑素瘤、透痣样恶黑、印戒细胞黑素瘤、棒状黑素瘤、透明细胞黑素瘤、粘液性黑素瘤、腺样黑素瘤、明细胞黑素瘤、粘液性黑素瘤、腺样黑素瘤、恶性蓝痣、结缔组织增生性恶黑以及皮肤鳞状恶性蓝痣、结缔组织增生性恶黑以及皮肤鳞状恶黑等。恶黑等。恶性黑素瘤恶性黑素瘤IHC标记nS-

28、100：特异性较差；：特异性较差；nHMB-45：有助于与普通痣鉴别。：有助于与普通痣鉴别。90%-100%原发恶黑和原发恶黑和80%-86%转移性恶黑阳性表达，但梭形细胞型恶黑对其敏感性转移性恶黑阳性表达，但梭形细胞型恶黑对其敏感性较差，且结缔组织增生性恶黑多为阴性。较差，且结缔组织增生性恶黑多为阴性。nKi-67：有助于鉴别良性痣与恶黑，前者只有不到：有助于鉴别良性痣与恶黑，前者只有不到5%的细胞核阳的细胞核阳性，且位置表浅；后者性，且位置表浅；后者25%的细胞阳性。的细胞阳性。nBcl-2：在正常黑素细胞和良性痣、先天性痣、：在正常黑素细胞和良性痣、先天性痣、Sptiz痣、蓝痣等痣、蓝痣

29、等多种痣组织都强阳性表达；其表达的降低被认为与恶黑相关。多种痣组织都强阳性表达；其表达的降低被认为与恶黑相关。nCyclin D1：有助于良性痣与痣样恶黑或恶黑中的痣细胞成分鉴：有助于良性痣与痣样恶黑或恶黑中的痣细胞成分鉴别，别，60%以上的恶黑全层表达，而痣完全没有或只有浅表部位表以上的恶黑全层表达，而痣完全没有或只有浅表部位表达。达。nCD68：约：约80%以上的恶黑表达阳性，有助于区别恶黑细胞和组以上的恶黑表达阳性，有助于区别恶黑细胞和组织细胞。织细胞。n 其它：还有其它：还有P53、CD40、CD44、角蛋白等。、角蛋白等。nb：瘤细胞：瘤细胞HMB-45阳性，阳性，痣细胞阴性。痣细胞

30、阴性。na：本例肿瘤源于原有的普：本例肿瘤源于原有的普通痣，瘤细胞呈嗜酸性、形通痣，瘤细胞呈嗜酸性、形态多样，痣细胞呈嗜碱性、态多样，痣细胞呈嗜碱性、胞体较小。胞体较小。n恶性黑素瘤：本例肿瘤（下恶性黑素瘤：本例肿瘤（下方）起源于原有的先天性痣方）起源于原有的先天性痣（上方）；（上方）；na和和b：恶性黑素瘤中：恶性黑素瘤中Ki-67呈显著阳性表达，而痣组织呈显著阳性表达，而痣组织中为阴性。中为阴性。n无色素性恶性黑素瘤无色素性恶性黑素瘤：a 瘤细胞形态多样，核分裂瘤细胞形态多样，核分裂像明显。像明显。b 可见弥漫的可见弥漫的S-100蛋白阳性表达，蛋白阳性表达，MART-1也为阳性。也为阳性

31、。n注：注：在某些罕见的情况下，在某些罕见的情况下，恶性黑素瘤不表达恶性黑素瘤不表达S-100，这时需要选用至少，这时需要选用至少2种其种其它恶性黑素瘤标记物进行它恶性黑素瘤标记物进行IHC染色。染色。n巨细胞性恶性黑素瘤：巨细胞性恶性黑素瘤：瘤细胞呈瘤细胞呈HMB-45阳性。阳性。Ki-67A 痣样恶性黑素瘤全层中表达活跃，可见大量阳性着色的胞核；痣样恶性黑素瘤全层中表达活跃，可见大量阳性着色的胞核；b 普通皮内痣中只有极少数散在的阳性细胞；普通皮内痣中只有极少数散在的阳性细胞；皮肤淋巴增生性疾病皮肤淋巴增生性疾病及相关肿瘤及相关肿瘤nT细胞性淋巴瘤细胞性淋巴瘤nB细胞性淋巴瘤细胞性淋巴瘤皮

32、下脂膜炎样皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤（细胞淋巴瘤（SPTL）n临床表现：典型的为皮下脂肪出现单个或多个肉色到临床表现：典型的为皮下脂肪出现单个或多个肉色到红色或紫色无症状结节、斑块和肿块。皮损可发生在红色或紫色无症状结节、斑块和肿块。皮损可发生在许多部位，但常见于四肢和躯干。许多部位，但常见于四肢和躯干。n组织病理：典型浸润为细胞从真皮深部网状层扩展到组织病理：典型浸润为细胞从真皮深部网状层扩展到皮下脂肪小叶或间隔，散在分布于真皮乳头层。淋巴皮下脂肪小叶或间隔，散在分布于真皮乳头层。淋巴细胞往往围绕脂肪细胞排列，形成花边样外观。细胞往往围绕脂肪细胞排列，形成花边样外观。nIHC特征：淋巴样细胞通

33、常特征：淋巴样细胞通常CD45+、CD2+、CD3+、CD43+和和CD45RO+.其中的组织细胞表达其中的组织细胞表达CD68。nSPTL：皮下脂肪的致：皮下脂肪的致密浸润，产生特征性密浸润，产生特征性的花边样外观。的花边样外观。nSPTL：该患者腿部出：该患者腿部出现多个溃疡性结节。现多个溃疡性结节。nSPTL：组织细胞清晰：组织细胞清晰表达表达CD68。nSPTL：淋巴细胞表达：淋巴细胞表达CD3。皮肤淋巴细胞浸润症皮肤淋巴细胞浸润症n临床表现：皮损可单发，但多发皮疹更多见。临床表现：皮损可单发，但多发皮疹更多见。病变最常位于面颈、背和上胸部，表现为盘状、病变最常位于面颈、背和上胸部，表

34、现为盘状、红色或淡褐色丘疹或斑块。中央常消退形成环红色或淡褐色丘疹或斑块。中央常消退形成环状。状。n组织病理：真皮浅层和中层血管周围有成熟的组织病理：真皮浅层和中层血管周围有成熟的淋巴细胞浸润。淋巴细胞浸润。nIHC特征：主要为特征：主要为T细胞，多为细胞，多为CD4+T淋巴细淋巴细胞。细胞常表达胞。细胞常表达Leu-8。n中央消退形成环状皮中央消退形成环状皮疹。疹。n面额可见多个红色斑面额可见多个红色斑块。块。n左：真皮浅层和中层血管周左：真皮浅层和中层血管周围有致密慢性炎细胞浸润，围有致密慢性炎细胞浸润，形成袖口状外观。浸润的炎形成袖口状外观。浸润的炎细胞几乎全是小淋巴细胞。细胞几乎全是小

35、淋巴细胞。n右：大多数细胞表达右：大多数细胞表达CD4+弥漫性大弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤n临床表现：多见于老年患者的头颈、躯干和四肢，蓝临床表现：多见于老年患者的头颈、躯干和四肢，蓝红色或紫红结节。红色或紫红结节。n组织病理：肿瘤从真皮乳头至网状层呈弥漫性浸润，组织病理：肿瘤从真皮乳头至网状层呈弥漫性浸润，皮下脂肪也常受累。常无向表皮现象，大多境界带清皮下脂肪也常受累。常无向表皮现象，大多境界带清晰。晰。nIHC特征：特征：CD19+、CD20+、CD22+、CD79a+和单和单一形一形sIg/cIg。50%的表达的表达bcl-2和和bcl-6，通常，通常CD5-和和CD10-。Ki-6

36、7明显表达（明显表达（50%细胞）。细胞）。nCD20+肿瘤紧靠表皮，但肿瘤紧靠表皮，但无浸润。无浸润。nBcl-6+nBcl-2+皮肤B细胞假性淋巴瘤n临床表现：与原发性皮肤临床表现：与原发性皮肤B细胞淋巴瘤相似。细胞淋巴瘤相似。n组织病理：常为浅表性、结节性或局限性，但组织病理：常为浅表性、结节性或局限性，但偶尔可弥漫并累及整个真皮层。偶尔可弥漫并累及整个真皮层。nIHC特征：特征：B细胞和细胞和T细胞混合组成，有时后者细胞混合组成，有时后者占多数，生发中心在占多数，生发中心在CD21染色下更明显。轻染色下更明显。轻链呈多克隆性。链呈多克隆性。n滤泡结构外围为滤泡滤泡结构外围为滤泡树突状细

37、胞群表达树突状细胞群表达CD21。n真皮内致密的淋巴样真皮内致密的淋巴样浸润伴明显的生发中浸润伴明显的生发中心。心。n左图：左图：CD20示示B细胞；细胞；n右图：右图：T细胞层（细胞层（CD3）包绕）包绕B细胞结节。细胞结节。乳房和乳房外乳房和乳房外Paget病病n组织病理：表皮表现均为角化过度或角化不全，常有组织病理：表皮表现均为角化过度或角化不全，常有棘层肥厚。浸润细胞数量不等，胞体较大，胞质丰富，棘层肥厚。浸润细胞数量不等，胞体较大，胞质丰富，淡染或嗜酸性，胞核大呈空泡状。细胞单个或成簇分淡染或嗜酸性，胞核大呈空泡状。细胞单个或成簇分布，偶见腺样分化。布，偶见腺样分化。nIHC特征：特

38、征：c-erB-2、CK7、CAM5.2、EMA和和GCDFP-15为为+标记，但阳性程度不一。最近研究，标记，但阳性程度不一。最近研究，CK7对其诊断特异较差。然而，继发性乳外对其诊断特异较差。然而，继发性乳外Paget病肿病肿瘤细胞通常瘤细胞通常CK7和和CK20均均+，这一检测是有价值的，这一检测是有价值的，因为原发性的肿瘤细胞因为原发性的肿瘤细胞CK7常为常为+但但CK20-。左图：乳房外左图：乳房外Paget：肿瘤细胞富含嗜酸性胞质，空泡状大胞核，核仁明显。：肿瘤细胞富含嗜酸性胞质，空泡状大胞核，核仁明显。中图：乳房外中图：乳房外Paget：可见腺样分化。：可见腺样分化。右图：肿瘤细

39、胞表达右图：肿瘤细胞表达CAM5.2。皮肤纤维瘤皮肤纤维瘤n又称纤维组织细胞瘤、硬化性血管瘤、皮肤组织细胞又称纤维组织细胞瘤、硬化性血管瘤、皮肤组织细胞瘤、结节性表皮下纤维化等。瘤、结节性表皮下纤维化等。n临床表现：好发于中年，多发于四肢，表现为小的隆临床表现：好发于中年，多发于四肢，表现为小的隆起于皮面的角化过度的皮肤结节。起于皮面的角化过度的皮肤结节。n组织病理：皮损边界不清，位于真皮内或延伸至脂肪组织病理：皮损边界不清，位于真皮内或延伸至脂肪浅层。在疏松的胶原样基质内可见成束的细长梭形细浅层。在疏松的胶原样基质内可见成束的细长梭形细胞，呈交织状或席纹状排列。梭形细胞间混有泡沫状胞，呈交织

40、状或席纹状排列。梭形细胞间混有泡沫状组织细胞、多核巨细胞和薄壁血管。典型者病变周围组织细胞、多核巨细胞和薄壁血管。典型者病变周围可见由肿瘤细胞所包绕的透明样胶原束。可见由肿瘤细胞所包绕的透明样胶原束。细胞性纤维组织细胞瘤细胞性纤维组织细胞瘤nIHC特征：特征：Vimentin+;SMA和钙结合蛋白可和钙结合蛋白可呈灶状呈灶状+表达，表达，CD34-/肿瘤的外周灶状肿瘤的外周灶状+。n鉴别诊断：平滑肌肉瘤，鉴别诊断：平滑肌肉瘤，SMA和肌丝蛋白弥漫和肌丝蛋白弥漫+表达；隆突性皮肤纤维肉瘤表达；隆突性皮肤纤维肉瘤CD34弥漫弥漫+表达。表达。n右：可见大量的肿瘤右：可见大量的肿瘤细胞。细胞。n左图

41、：细胞性纤维组织细左图：细胞性纤维组织细胞瘤：肿瘤较大，有时发胞瘤：肿瘤较大，有时发生于少见部位。生于少见部位。Vimentin+SMA+nKaposi肉瘤肉瘤nKS：大多：大多HHV-8阳性阳性表达。表达。nKS：梭形细胞弥漫：梭形细胞弥漫CD34阳性表达，局部阳性表达，局部CD31 和和Actin阳性。阳性。其他疾病其他疾病n银屑病、扁平苔藓等：银屑病、扁平苔藓等：真皮浅层浸润的细胞以真皮浅层浸润的细胞以T淋巴细胞为主，偶见散在淋巴细胞为主，偶见散在B淋巴细胞存在，此淋巴细胞存在，此类疾病类疾病T细胞标记通常阳性，而细胞标记通常阳性，而B细胞阴性。细胞阴性。n疱类疾病：疱类疾病：如表皮下疱等疾病的鉴别，要依赖如表皮下疱等疾病的鉴别，要依赖于于胶原来确定基底膜的位置。胶原来确定基底膜的位置。石蜡包埋标本的免疫过氧化物抗原定位鉴别诊断石蜡包埋标本的免疫过氧化物抗原定位鉴别诊断n左图：大疱性类天疱疮左图：大疱性类天疱疮IV型胶原定位在疱的底部；型胶原定位在疱的底部；n右图：在获得性大疱性表皮松解症，右图：在获得性大疱性表皮松解症，IV型胶原定位在型胶原定位在疱的顶部。疱的顶部。