《生长与繁殖的概念》PPT课件

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1、生 长 与 繁 殖 的 概 念生 长 微 生 物 细 胞 吸 收 营 养 物 质 ， 进 行 新 陈 代 谢 ，当 同 化 作 用 异 化 作 用 时 ， 生 命 个 体 的 重 量 和 体 积不 断 增 大 的 过 程 。繁 殖 生 命 个 体 生 长 到 一 定 阶 段 ， 通 过 特 定 方 式产 生 新 的 生 命 个 体 ， 即 引 起 生 命 个 体 数 量 增 加 的 生物 学 过 程 。发 育 从 生 长 到 繁 殖 ， 是 生 物 的 构 造 和 机 能 从 简单 到 复 杂 、 从 量 变 到 质 变 的 发 展 变 化 过 程 ， 这 一 过程 称 为 发 育 。第 一

2、节 微 生 物 纯 培 养 分 离 及 测 定 生 长 繁 殖 的 方 法 l个 体 生 长 微 生 物 细 胞 个 体 吸 收 营 养 物质 ， 进 行 新 陈 代 谢 ， 原 生 质 与 细 胞 组 分 的增 加 为 个 体 生 长 。l群 体 生 长 群 体 中 个 体 数 目 的 增 加 。 可以 用 重 量 、 体 积 、 密 度 或 浓 度 来 衡 量 。（ 由 于 微 生 物 的 个 体 极 小 ， 所 以 常 用 群 体生 长 来 反 映 个 体 生 长 的 状 况 ）个 体 生 长 个 体 繁 殖 群 体 生 长群 体 生 长 = 个 体 生 长 + 个 体 繁 殖 l纯 培

3、 养 (pure culture)微 生 物 学 中 把从 一 个 细 胞 或 一 群 相 同 的 细 胞 经 过 培 养 繁殖 而 得 到 的 后 代 ,称 纯 培 养 .一 、 获 得 纯 培 养 的 方 法 液 体 稀 释 法 平 板 划 线 分 离 法 （ Streak Plate） 倾 注 平 板 法 （ Pour Plate） 平 板 涂 布 分 离 法 （ Spread Plate） 选 择 性 培 养 分 离 法 单 细 胞 （ 单 孢 子 ） 分 离 法 膜 过 滤 （ Membrane Filter） 首 先 将 待 分 离 的 样 品 进 行 连 续 稀 释 ,目 的 是

4、 得 到 高度 稀 释 的 效 果 ,使 一 支 试 管 中 分 配 不 到 一 个 微 生 物 .如果 经 过 稀 释 后 的 大 多 数 试 管 中 没 有 微 生 物 生 长 ,那 么 有微 生 物 生 长 的 试 管 得 到 的 培 养 物 可 能 就 是 由 一 个 微 生物 个 体 繁 殖 而 来 的 纯 培 养 物 . 这 种 方 法 适 合 于 细 胞 较 大 的 微 生 物 . 液 体稀 释 法 平 板 划 线 分 离 法 （ Streak Plate）An inoculating loop is used to thin out organisms on the surfa

5、ce of the agar. 特 点 ： 快 速 、 方 便 。 分 区 划 线 （ 适 用 于 浓 度 较 大 的 样 品 ） 连 续 划 线 （ 适 用 于 浓 度 较 小 的 样 品 ） 连 续 划 线 划 线 分 离 后 平 板 上 显 示的 菌 落 照 片 倾 注 平 板 法 （ Pour Plate） O rganisms are serially diluted, then asmall amount is added to an empty sterile petri dish, to which melted agar at 50 C isadded. Then mix t

6、o distribute the organisms. 1ml 1ml9ml 1ml9ml 平 板 涂 布 分 离 法 （ Spread Plate）Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile bent glass rod. 简 单 易 行 ， 但 易 造 成 机 械 损 伤 选 择 性 培 养 分 离 法 为 了 从 混 杂 的 微 生 物 群 体 中 分 离 出 某 种 微 生 物 ，可 以 根 据 该 微 生 物 的 特 点 ， 包 括 营 养 、 生 理 、 生 长条 件 等 ， 采 用 选

7、 择 培 养 的 方 法 进 行 分 离 。 利 用 选 择 培 养 基 进 行 直 接 分 离 富 集 培 养 单 细 胞 （ 单 孢 子 ） 分 离 法 采 用 显 微 分 离 法 从 混 杂 群 体 中 直 接 分 离 单 个 细 胞 或单 个 个 体 进 行 培 养 以 获 得 纯 培 养 的 方 法 。 该 方 法 要 在 显微 镜 下 进 行 。毛 细 管 法 ： 用 毛 细 管 提 取 微 生 物 个 体 ， 适 合 于 较 大 微 生物 。显 微 操 作 仪 ： 用 显 微 针 、 钩 、 环 等 挑 取 单 个 细 胞 或 孢 子以 获 得 纯 培 养 。小 液 滴 法 ：

8、将 经 过 适 当 稀 释 后 的 样 品 制 成 小 液 滴 ， 在 显微 镜 下 选 取 只 含 一 个 细 胞 的 液 滴 来 进 行 纯 培 养 物 的 分 离 。 Membrane Filter When there is a small number of organisms in a large amount of liquid, the liquid is filtered through a mem-brane and then the membrane is placed on agarin a petri dish. 二 、 测 定 生 长 繁 殖 的 方 法描 述 不

9、同 种 类 、 不 同 生 长 状 态 的 微 生 物 生 长 情 况 ，需 选 用 不 同 的 测 定 指 标 。（ 一 ） 微 生 物 生 长 量 和 生 理 指 标 测 定 法直 接 法 (测 体 积 法 ， 干 重 法 )间 接 法 （ 比 浊 法 ， 碳 、 氮 含 量 法 ， 其 它 生 理 指 标 ） （ 二 ） 微 生 物 细 胞 数 目 的 检 测 法直 接 法 （ 血 球 计 数 板 法 ）间 接 法 （ 活 菌 计 数 法 、 液 体 稀 释 法 、 膜 过 滤 法 ） 1.干 重 法 将 一 定 量 的 菌 液 中 的 菌 体 通 过 离 心 或 过 滤分 离 出 来

10、,然 后 烘 干 (干 燥 温 度 可 采 用 105 、100 或 80 )、 称 重 。 一 般 干 重 为 湿 重 的 10-20%， 而 一 个 细 菌 细 胞 一 般 重 约 10-12-10-13g。 该 法 适 合 菌 浓 度 较 高 的 样 品 。 2.比 浊 法 原 理 是 在 一 定 范 围 内 ， 菌 悬 液 中 的 细 胞 浓 度 与 混 浊度 成 正 比 ， 即 与 光 密 度 成 正 比 ， 菌 数 越 多 ， 光 密 度 越 大 。因 此 ， 借 助 于 分 光 光 度 计 ， 在 一 定 波 长 下 （ 450 650nm）测 定 菌 悬 液 的 光 密 度 ，

11、 就 可 反 应 出 菌 液 的 浓 度 。 特 点 ： 快 速 、 简 便 ； 但 易 受 干 扰 。 3.生 理 指 标 法测 含 氮 量 蛋 白 质 是 细 胞 的 主 要 物 质 ， 含 量 稳 定 ， 而 氮 是 蛋 白 质的 主 要 成 分 ， 通 过 测 含 氮 量 就 可 推 知 微 生 物 的 浓 度 。 一 般 细 菌 含 氮 量 为 干 重 的 12.5%， 酵 母 菌 为 7.5%， 霉 菌为 6.0%， 根 据 一 定 体 积 培 养 液 中 的 含 氮 量 再 乘 以 6.25， 就 可测 得 粗 蛋 白 的 含 量 。其 他 方 法 含 碳 、 磷 、 DNA、

12、RNA、 耗 氧 量 、 消 耗 底 物 量 、 产 二 氧化 碳 、 产 酸 、 产 热 、 粘 度 等 ， 都 可 用 于 生 长 量 的 测 定 。 4.血 球 计 数 板 法 （ 1） 16 25规 格 的 计 数 板计 数 方 法 ： 菌 液 稀 释 倍 数个 小 格 细 胞 数细 胞 数 10000400100100ml/ 稀 释 倍 数个 小 格 内 细 胞 数细 胞 数 100004008080ml/（ 2） 25 16规 格 的 计 数 板 原 理 ： 将 1mm2 0.1mm的 薄 层 空 间 划 分 为 400小 格 ，从 中 均 匀 分 布 地 选 取 80或 100小

13、 格 ， 计 数 其 中 的 细 胞数 目 ， 换 算 成 单 位 体 积 中 的 细 胞 数 。适 用 范 围 ： 个 体 较 大 细 胞 或 颗 粒 ， 如 霉 菌 孢 子 、 酵母 菌 等 ， 不 适 用 于 细 菌 等 个 体 较 小 的 细 胞 。特 点 ： 快 速 ， 准 确 ， 对 酵 母 菌 可 同 时 测 定 出 芽 率 ，或 在 菌 悬 液 中 加 入 少 量 美 蓝 可 以 区 分 死 活 细 胞 。 缺点 ： 测 定 结 果 为 细 菌 总 数 ， 不 能 区 分 活 菌 和 死 菌 。 5.涂 片 染 色 法应 用 ： 可 同 时 计 数 不 同 微 生 物 的 菌

14、数 ， 适 于 土 壤 、 牛奶 中 细 菌 计 数 。 方 法 ：用 镜 台 测 微 尺 计 算 出 视 野 面 积 ；取 0.1ml菌 液 涂 于 1cm 2面 积 上 ， 计 数 后 代 入 公 式 ： 每 ml原 菌 液 含 菌 数 = 视 野 中 平 均 菌 数 涂 布 面 积 /视 野 面 积 100 稀 释 倍 数 平 板 菌 落 计 数 法 最 常 用 的 活 菌 计 数 法 。将 适 当 稀 释 的 菌 液 倾 注 平 板 或 涂 布 在 平 板 表 面 ， 经 保温 培 养 后 ， 以 平 板 上 出 现 的 菌 落 数 乘 以 稀 释 度 就 可 以 计 算 出 原 菌

15、液 的 含 菌 量 。直 径 9cm的 培 养 皿 平 板 上 出 现 菌 落 数 一 般 以 50500为宜 。 按 照 国 家 标 准 规 定 的 样 品 菌 落 总 数 测 定 的 计 数 原 则 ， 以 平 板 菌 落 数 在 30300之 间 为 报 告 依 据 。 9ml 9ml 9ml 9ml1ml 1ml 1ml1ml 1ml 1ml 1ml 2 2 2 6.平 板 菌 落 计 数 法 技 术 要 求 ： 样 品 充 分 混 匀 ， 操 作 熟 练 快 速 （ 1520min完成 操 作 ） ， 严 格 无 菌 操 作 ； 注 意 事 项 ： 每 一 支 吸 管 只 能 用 于

16、 一 个 稀 释 度 ， 样 品 混 匀处 理 ， 倾 注 平 板 时 的 培 养 基 温 度 ； 适 用 范 围 ： 中 温 、 好 氧 和 兼 性 厌 氧 、 能 在 营 养 琼 脂 上 生长 的 微 生 物 ， 误 差 ： 多 次 稀 释 造 成 的 误 差 是 主 要 来 源 ， 其 次 还 有 由 于样 品 内 菌 体 分 布 不 均 匀 、 以 及 不 当 操 作 Colony-Forming Unit When we observe colonies, we cannot assume each arose from just one cell originally plan-

17、ted on the medium, however. A pair, chain or cluster of ce- lls which land on the medium in close proximity to each o- ther can multiply and prod- uce a single colony. Thus, we use the term colony-forming unit when we consider the common origin for the cells of any colony.This term is us- ually abbreviated CFU. 请 提 宝 贵 意 见谢 谢