紫外分光光度法测定氨茶碱的含量

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1、实 验 四 ： 紫 外 分 光 光 度 法 测 定 氨 茶 碱 的 含 量 紫 外 -可 见 分 光 光 度 法 （ 药 典 相 关 规 定 ）1.对 溶 剂 的 要 求 含 杂 原 子 的 有 机 溶 剂 ， 通 常 具 有 末 端 吸 收 。 因 此 ， 它们 的 适 用 范 围 不 能 小 于 截 止 波 长 。 例 如 甲 醇 、 乙 醇 的 截 止 使用 波 长 为 205nm。 另 外 ， 当 溶 剂 不 纯 时 ， 也 可 能 增 加 干 扰 吸收 。 因 此 ， 在 测 定 样 品 前 ， 应 先 检 查 所 用 溶 剂 在 样 品 所 用 波长 附 近 是 否 符 合 要 求

2、 ， 即 将 溶 剂 置 1cm石 英 吸 收 池 中 ， 以 空气 为 空 白 测 定 其 吸 光 度 。 溶 剂 和 吸 收 池 的 吸 光 度 在 220-240nm范 围 内 不 超 过 0.4， 在 241-250nm范 围 内 不 得 超 过 0.2，在 251-300nm范 围 内 不 得 超 过 0.10， 在 300nm以 上 时 不 得 超 过 0.05. 测 定 法 应 以 配 制 样 品 溶 液 的 同 批 溶 剂 为 空 白 对 照 ，吸 收 峰 波 长 应 在 该 品 种 项 下 规 定 的 波 长 2nm以 内 ，并 以 吸 光 度 最 大 的 波 长 为 测 定

3、 波 长 。 含 量 测 定（ 1） 对 照 品 比 较 法（ 2） 吸 收 系 数 法 （ 3） 计 算 分 光 光 度 法（ 4） 比 色 法 样 品 本 身 在 紫 外 -可 见 区 没 有 强 吸 收 ， 或 在紫 外 区 虽 有 吸 收 但 为 避 免 干 扰 或 提 高 灵 敏 度 ， 可加 入 适 当 的 显 色 剂 显 色 后 测 定 。 药 物 其 他 分 析 定 量 方 法l标 准 曲 线 法 也 称 外 标 法 或 直 接 比 较 法 ， 是 一 种 简 便 、 快 速 的 定量 方 法 。 与 分 光 光 度 分 析 中 的 标 准 曲 线 法 相 似 ， 首 先 用

4、欲测 组 分 的 标 准 样 品 绘 制 标 准 曲 线 。 l内 标 法 标 准 曲 线 法l 标 准 曲 线 的 横 坐 标 (X)表 示 可 以 精 确 测 量 的 变 量(如 标 准 溶 液 的 浓 度 )， 称 为 普 通 变 量 ， 纵 坐 标 (Y)表示 仪 器 的 响 应 值 (也 称 测 量 值 ， 如 吸 光 度 、 电 极 电 位等 )， 称 为 随 机 变 量 。 当 X取 值 为 X1, X2, Xn时 ，仪 器 测 得 的 Y值 分 别 为 Y1, Y2, Yn。 将 这 些 测 量点 Xi, Yi描 绘 在 坐 标 系 中 ， 用 直 尺 绘 出 一 条 表 示

5、X与 Y之 间 的 直 线 线 性 关 系 ， 这 就 是 常 用 的 标 准 曲 线 法 。l 用 作 绘 制 标 准 曲 线 的 标 准 物 质 ， 它 的 含 量 范 围 应包 括 试 祥 中 被 测 物 质 的 含 量 ， 标 准 曲 线 不 能 任 意 延 长 。 l标 准 曲 线 法 的 优 点 是 ： 绘 制 好 标 准 工 作 曲 线 后 测定 工 作 就 变 得 相 当 简 单 ， 可 直 接 从 标 准 工 作 曲 线上 读 出 含 量 ， 因 此 特 别 适 合 于 大 量 样 品 的 分 析 。l标 准 曲 线 法 的 缺 点 是 ： 每 次 样 品 分 析 的 色 谱

6、 条 件（ 检 测 器 的 响 应 性 能 ， 柱 温 ， 流 动 相 流 速 及 组 成 ，进 样 量 ， 柱 效 等 ） 很 难 完 全 相 同 ， 因 此 容 易 出 现较 大 误 差 。 此 外 ， 标 准 工 作 曲 线 绘 制 时 ， 一 般 使用 欲 测 组 分 的 标 准 样 品 （ 或 已 知 准 确 含 量 的 样品 ） ， 而 实 际 样 品 的 组 成 却 千 差 万 别 ， 因 此 必 将给 测 量 带 来 一 定 的 误 差 。 内 标 法l 内 标 法 internal standard method 是 色 谱 分 析 中 一 种 比较 准 确 的 定 量 方

7、法 ， 尤 其 在 没 有 标 准 物 对 照 时 ， 此 方 法 更显 其 优 越 性 。 它 尤 其 广 泛 的 应 用 于 高 效 液 相 色 谱 中 。 这 种方 法 可 以 抵 消 仪 器 和 操 作 过 程 带 来 的 误 差 。l 内 标 法 是 将 一 定 重 量 的 纯 物 质 作 为 内 标 物 加 到 一 定 量 的 被分 析 样 品 混 合 物 中 ， 然 后 对 含 有 内 标 物 的 样 品 进 行 色 谱 分析 ， 分 别 测 定 内 标 物 和 待 测 组 分 的 峰 面 积 （ 或 峰 高 ） 及 相对 校 正 因 子 ， 内 标 物 在 色 谱 图 上 得

8、到 分 离 的 峰 。 根 据 已 知含 量 的 内 标 物 的 峰 面 积 和 样 品 的 峰 面 积 ， 计 算 组 分 的 百 分含 量 。 内 标 物 的 选 择 要 符 合 以 下 要 求 ：（ 1） 内 标 物 的 峰 与 组 分 峰 能 完 全 分 离 。（ 2） 内 标 物 峰 在 色 谱 图 上 出 现 的 位 置 ， 最 好 在 欲 定 量 组 分 峰 的 邻 近 位 置 。 如 果 样 品 中 有 几 个 组 分 需 要 定 量 ， 并 且 他 们 的 k 值 差 别 较 大 ， 这 时 就 需 要 用 几 个 内 标 物 来 作 定 量 测 定 。（ 3） 内 标 物

9、的 性 质 和 浓 度 尽 量 与 预 测 定 峰 的 接 近 。（ 4） 内 标 物 是 样 品 中 不 存 在 的 ， 与 样 品 各 组 分 、 柱 填 料 和 移 动 相 不 发 生 化 学 反 应 。 内 标 法 优 缺 点l优 点 ： 内 标 法 能 够 消 除 大 部 分 的 误 差 ， 如仪 器 造 成 的 。 外 标 法 无 法 消 除 ， 需 要 求 仪器 不 产 生 误 差 。l缺 点 ： 操 作 复 杂 。 实 验 目 的Y 了 解 紫 外 分 光 光 度 法 检 测 药 物 含 量 的 原 理 ；Y 熟 悉 紫 外 分 光 光 度 计 的 基 本 构 造 和 功 能

10、；Y 掌 握 紫 外 分 光 光 度 法 检 测 药 物 含 量 基 本 过 程 ;Y 掌 握 标 准 曲 线 的 建 立 方 法 。 实 验 原 理 单 色 光 辐 射 穿 过 被 测 物 质 溶 液 时 ， 被 该 物 质 吸 收 的 量与 该 物 质 的 浓 度 和 液 层 的 厚 度 （ 光 路 长 度 ） 成 正 比 ， 即 朗伯 -比 尔 定 律 ， 这 是 吸 收 光 谱 法 定 量 的 理 论 依 据 ， 其 关 系式 如 下 A = ECL式 (3-1) 式 中 A为 吸 收 度 ； E为 吸 收 系 数 ， 即 单 位 浓 度 、 单 位液 层 厚 度 的 吸 收 度 数

11、值 ； C为 溶 液 浓 度 ； L为 液 层 厚 度 。 紫 外 -可 见 分 光 光 度 法 是 根 据 物 质 分 子 对 波 长 为 200-760nm这 一 范 围 的 电 磁 波 的 吸 收 特 性 所 建 立 的 光 谱 分 析 方法 。 其 主 要 特 点 为 ： 灵 敏 度 高 ， 可 达 10-4g/ml 10-7g/ml； 准 确 度 高 ， 相 对 误 差 为 2 -5 。 中 药 中 有 紫 外 吸收 的 成 分 或 本 身 有 颜 色 的 成 分 ， 在 一 定 的 浓 度 范 围 内 ， 其溶 液 的 吸 收 度 与 浓 度 符 合 朗 伯 -比 尔 定 律 ，

12、均 可 用 此 法 进 行 分 析 。 实 验 仪 器 与 材 料S实 验 仪 器 ： 紫 外 分 光 光 度 计 、 精 密 天 平 、石 英 比 色 皿 、 50ml烧 杯 、 玻 璃 棒 、 称 量 纸 、10ml容 量 瓶 、 25ml容 量 瓶 、 洗 瓶 。S实 验 材 料 ： 氨 茶 碱 原 料 、 氨 茶 碱 标 准 品 、蒸 馏 水 、 氢 氧 化 钠 。S0.01M NaOH溶 液 的 配 制 ： 称 取 氢 氧 化 钠0.4g， 用 蒸 馏 水 定 容 至 1000ml， 即 得 。 实 验 方 法标 准 品 溶 液 的 制 备 ： 精 密 称 取 氨 茶 碱 对 照 品

13、12.5mg置 于 25mL容 量 瓶 中 ， 先 用 少 量 0.01M的 NaOH溶 液 振 摇 使 溶 解 ， 再 用 该 溶 液 定 容 至 刻 度 ， 配 成浓 度 为 0.5mg/mL的 标 准 储 备 液 ；样 品 溶 液 的 制 备 ： 精 密 称 取 氨 茶 碱 原 料 药 12.5mg，置 于 25ml容 量 瓶 中 ， 用 0.01M NaOH溶 液 溶 解 并 定容 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 再 从 中 取 出 0.2ml定 容 至 10ml，即 得 氨 茶 碱 样 品 溶 液 。 一 、 标 准 曲 线 的 建 立 精 密 吸 取 氨 茶 碱 标 准 储 备 液 分

14、 别 为 100、150、 200、 250、 300 l于 10mL容 量 瓶 中 ，然 后 用 0.01M的 NaOH溶 液 定 容 至 刻 度 ， 摇 匀 ，照 紫 外 分 光 光 度 法 在 275nm波 长 处 测 定 吸 光度 ， 并 以 浓 度 为 横 坐 标 ， 吸 光 度 值 为 纵 坐标 ， 进 行 线 性 回 归 ， 并 建 立 标 准 曲 线 。 二 、 氨 茶 碱 样 品 含 量 测 定 取 已 配 制 好 的 氨 茶 碱 样 品 溶 液 适 量 ，置 于 石 英 比 色 皿 中 ， 采 用 紫 外 分 光 光 光 度法 在 275nm波 长 处 测 定 溶 液 中 氨 茶 碱 吸 光 度 ，最 后 通 过 标 准 曲 线 计 算 样 品 中 氨 茶 碱 的 含量 。 实 验 结 果1.标 准 曲 线 方 程 、 相 关 系 数 及 绘 图 。2.氨 茶 碱 样 品 含 量 。 思 考 题 ：1.标 准 曲 线 方 程 中 对 相 关 系 数 r值 有 何 要 求 ？2.标 准 曲 线 制 备 中 ， 各 点 浓 度 取 值 范 围 是 根据 什 么 确 定 的 ？3.实 验 中 为 什 么 选 择 用 0.01M的 NaOH溶 液 作 为溶 剂 来 溶 解 氨 茶 碱 。