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1、相 关 知 识 点 回 忆 NRE RE直 链 淀 粉 支 链 淀 粉 或 糖 原 分 支 点 的 结 构RENRE(1 6)分 支 点支 链 淀 粉 或 糖 原 分 子 示 意 图 直 链 淀 粉 的 螺 旋 结 构0.8nm 1.4nm 6个 残 基1. 重 要 的 多 糖 -淀 粉 支 链 淀 粉 的 分 枝 结 构 开 始 分 枝 的 残 基非 还 原 端残 基 两 个 葡 萄 糖 单 位 之间 的 1， 6-糖 苷 键 两 个 葡 萄 糖 单 位 之间 的 1， 4-糖 苷 键 a -淀 粉 酶 -淀 粉 酶 切 -1,4-糖 苷 键 淀 粉 的 水 解 麦 芽 糖 酶 酶 促 脱
2、支 酶 切 -1,6-糖 苷 键 降 解 异 麦 芽 糖 酶 磷 酸 解 : 淀 粉 磷 酸 化 酶2、 淀 粉 的 酶 促 降 解 3. 淀 粉 的 酶 促 水 解淀 粉 酶 淀 粉 酶 ： 在 淀 粉分 子 内 部 任 意 水 解 -1， 4糖 苷 键 。 产 物 为 麦 芽糖 ， 麦 芽 三 糖 ， 糊 精 等还 原 糖 （ 内 切 酶 ） 淀 粉 酶 :从 非 还原 端 开 始 ， 水 解 ， 4糖 苷 键 ， 依 次 水 解 下一 个 麦 芽 糖 单 位 （ 外 切 酶 ） 淀 粉 酶 淀 粉 酶极 限 糊 精 -淀 粉 酶 -淀 粉 酶 可 跨 越 分 枝 点 不 能 跨 越 分
3、枝 点 内 切 酶 （ 随 机 切 ） 端 解 酶 （ 非 还 原 端 两 两 相 切 ） 产 物 糊 精 分 子 量 小 糊 精 分 子 量 大 （ 极 限 糊 精 ） 耐 70 15min, 不 耐 酸 耐 pH=3.3 酸 性 , 不 耐 高 温 分 布 发 芽 种 子 休 眠 种 子 -淀 粉 酶 和 -淀 粉 酶 的 异 同 点 ：相 同 点 ： 都 作 用 于 -1,4糖 苷 键 ， 产 物 都 是 麦 芽 糖不 同 点 ： 实 验 04 一 、 目 的二 、 原 理淀 粉 -淀 粉 酶（ 内 切 酶 ） -淀 粉 酶（ 外 切 酶 ） 麦 芽 糖 等寡 聚 糖麦 芽 糖 3， 5
4、-二 硝基 水 杨 酸 3-氨 基 -5-硝 基 水 杨 酸（ 棕 红 色 ）淀 粉 酶 的 作 用 机 制 及 产 物 显 色 原 理 ： D-麦 芽 糖 淀 粉 酶 活 性 大 小 的 表 示 方 法 ：淀 粉 酶 活 性 的 大 小 与 产 生 的 还 原 糖 的 量 成 正 比 。 以 单位 质 量 样 品 单 位 时 间 生 成 的 还 原 糖 的 量 表 示 。测 定 -淀 粉 酶 和 -淀 粉 酶 ： -淀 粉 酶 不 耐 酸 ， -淀 粉 酶 不 耐 热 ， 本 实 验 采 用 70。C保 温 15min钝 化 -淀 粉 酶 而 测 出 -淀 粉 酶 。 总 活 力减 去 -淀
5、 粉 酶 活 力 则 为 -淀 粉 酶 活 力 。 三 、 材 料 、 仪 器 设 备 及 试 剂材 料 ： 萌 发 的 小 麦 种 子 （ 芽 长 1cm）仪 器 设 备 ： 分 光 光 度 计 、 恒 温 水 浴 、 刻 度 试 管 、 容 量 瓶试 剂 ： 1、 标 准 麦 芽 糖 溶 液 （ 1mg/mL） 2、 3， 5-二 硝 基 水 杨 酸 （ 含 NaOH） 3、 1%淀 粉 溶 液 四 、 实 验 步 骤2、 酶 液 制 备 称 取 1g萌 发 的 小 麦 种 子 加 少 量 蒸 馏 水 研 磨 转 入 100 mL容 量 瓶 定 容 放 置 15min 过 滤 淀 粉 酶
6、原 液 （ 酶 液 ） 取 酶 液 10 mL于 50 mL容 量 瓶 ， 用 蒸 馏 水 定 容 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 即 为 淀 粉 酶 稀 释 液 （ 酶 液 ）1、 麦 芽 糖 标 准 曲 线 的 制 作 A540=0.264x-0.052 (x为 mg麦 芽 糖 ） 3、 酶 活 力 的 测 定取 4支 干 净 的 具 塞 刻 度 试 管 ， 编 号 ， 按 下 表 操 作 ： 摇 匀 ， 沸 水 浴 中 5min， 取 出 流 水 冷 却 ， 加 蒸 馏 水 至 20mL。摇 匀 ， 540nm比 色 测 定 。操 作 项 目 管 号 -1 -2 -1 -2淀 粉 酶 原 液
7、 （ 酶 液 ） /mL 1.0 1.0 0 0钝 化 -淀 粉 酶 置 70 0C水 浴 中 15min， 取 出 后 流 水 冷 却淀 粉 酶 稀 释 液 （ 酶 液 ） /mL 0 0 1.0 1.03， 5-二 硝 基 水 杨 酸 / mL 2.0 0 2.0 0预 保 温 40 0C恒 温 水 浴 中 保 温 10min 1%淀 粉 溶 液 / mL（ 40。 C ） 1.0 1.0 1.0 1.0保 温 40 0C恒 温 水 浴 中 保 温 5min 3， 5-二 硝 基 水 杨 酸 / mL 0 2.0 0 2.0 空 白 管 ：2 mL蒸 馏 水 + 2 mL3， 5-二 硝
8、基 水 杨 酸 ， 沸 水 浴5min， 定 容 至 20 mL 五 、 实 验 数 据VT= VS= W=A -1= A -2 = A1 = A -2 - A -1 x1=A -1= A -2 = A2 = A -2 - A -1 x2= 六 、 结 果 计 算 X1 VT -淀 粉 酶 活 力 mg/(g.min)= W VS t X2 VT N( + )-淀 粉 酶 活 力 mg/(g.min)= W VS t -淀 粉 酶 活 力 =( + )-淀 粉 酶 活 力 - -淀 粉 酶 活 力 七 、 分 析 讨 论注 意 事 项 ：1、 三 个 水 浴 温 度 的 不 同 ， 不 能 混 淆 。2、 实 验 步 骤 较 复 杂 ， 理 解 之 后 动 手 操 作 。
生化实验04-淀粉酶活性的测定-陈桃
