十五章厌氧菌

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1、十五章厌氧菌 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 无芽胞厌氧菌在临床厌氧菌标本检无芽胞厌氧菌在临床厌氧菌标本检出率中约占出率中约占9090,分布广泛，多为条件分布广泛，多为条件致病菌；厌氧菌的感染遍及临床各科，致病菌；厌氧菌的感染遍及临床各科，且多为混合感染；对氨基糖甙类抗生素且多为混合感染；对氨基糖甙类抗生素耐药，而对甲硝唑耐药，而对甲硝唑(灭滴灵灭滴灵)普遍敏感普遍敏感,40 40多个菌属，多个菌属，300300多个菌种。有芽胞厌多个菌种。有芽胞厌

2、氧菌只有梭菌属，共氧菌只有梭菌属，共130130个种。个种。n 无无芽芽胞胞厌厌氧氧菌菌同同需需氧氧菌菌与与兼兼性性厌厌氧氧菌菌共共同同构构成成机机体体的的正正常常菌菌群群,其其中中厌厌氧氧菌菌占占有有绝绝对对优优势势，例例如如肠肠道道菌菌群群占占99999 9。正正常常情情况况下下菌菌群群之之间间保保持持着着微微生生态态平平衡衡，厌厌氧氧菌菌代代谢谢产产生生的的乙乙酸酸、乳乳酸酸等等能能抑抑制制病病原原菌菌生生长长。如如长长期期使使用用广广谱谱抗抗生生素素、激激素素、免免疫疫抑抑制制剂剂等等，在在发发生生菌菌群群失失调调或或机机体体免免疫疫力力下下降降或或细细菌菌进进人人非非正正常常寄寄居居

3、部部位位时时，这这些些厌厌氧氧菌菌即即可可作作为为条件致病菌而导致内源性感染。条件致病菌而导致内源性感染。(一一)厌氧菌感染的条件厌氧菌感染的条件1.1.组组织织缺缺氧氧或或氧氧化化还还原原电电势势(Eh)(Eh)降降低低可可造造成成厌厌氧氧菌菌生生长长的的适适宜宜环环境境，易易于于遭遭受受厌厌氧氧菌菌感染。感染。2.2.机机体体免免疫疫功功能能下下降降，如如老老年年人人、早早产产儿儿,接接受受免免疫疫抑抑制制剂剂、抗抗代代谢谢药药物物、放放射射或或化化疗疗治治疗疗的的患患者者，其其全全身身免免疫疫功功能能受受损损或或降降低，厌氧菌感染率相当高。低，厌氧菌感染率相当高。3.3.长长期期应应用用

4、氨氨基基糖糖甙甙类类抗抗生生素素，或或长长期期应应用用头头孢孢菌菌素素、四四环环素素等等无无效效者者，均均可可诱诱发发厌厌氧菌感染。氧菌感染。4.4.需需氧氧菌菌、兼兼性性厌厌氧氧菌菌的的混混合合感感染染。需需氧氧菌菌生长耗竭了氧气，有利于厌氧菌的生长。生长耗竭了氧气，有利于厌氧菌的生长。(二二)厌氧菌感染临床细菌学指征厌氧菌感染临床细菌学指征1.1.感染局部产生气体，组织肿胀和坏死。感染局部产生气体，组织肿胀和坏死。2.2.粘膜附近的感染。粘膜附近的感染。3.3.深部外伤的继发感染，流产胃肠手术后发深部外伤的继发感染，流产胃肠手术后发 生的感染。生的感染。4.4.分泌物有恶臭，或为暗血红色，

5、并在紫外分泌物有恶臭，或为暗血红色，并在紫外 光下发出红色荧光。光下发出红色荧光。5.5.分泌物涂片镜检有细菌，而常规培养阴性分泌物涂片镜检有细菌，而常规培养阴性 者；或在培养基深部长的细菌。者；或在培养基深部长的细菌。6.6.长期应用氨基糖甙类抗生素治疗无效病例。长期应用氨基糖甙类抗生素治疗无效病例。第二节厌氧性细菌的检验 (一一)采集标本采集标本 不不能能被被正正常常菌菌群群污污染染；应应尽尽量量避避免免接接触触空空气气。最最理想是能取得组织标本。理想是能取得组织标本。下列标本无送检价值，不宜做厌氧菌培养：下列标本无送检价值，不宜做厌氧菌培养：鼻鼻咽拭子；咽拭子；齿龈拭子；齿龈拭子；痰和气

6、管抽取物；痰和气管抽取物；胃胃和肠道内容物、肛拭；和肠道内容物、肛拭；接近皮肤和粘膜的分泌接近皮肤和粘膜的分泌物；物；褥疮溃疡及粘膜层表面；褥疮溃疡及粘膜层表面；排出的尿或导排出的尿或导尿；尿；阴道或子宫拭子；阴道或子宫拭子；前列腺分泌物。前列腺分泌物。标本运送中应尽量避免接触空气。不要冷藏标本运送中应尽量避免接触空气。不要冷藏 。(二二)直接涂片直接涂片染色镜检染色镜检 结结合合标标本本来来源源，性性状状与与气气味味，可可提提供供许许多多有有用用的的信信息息,对对估估计计标标本本中中含含菌菌量量、细细菌菌种种类类和和选选择择培培养养基基等等都都有有意意义义 。标标本本发发臭臭，镜镜检检发发现

7、现细细菌菌染染色色不不均均，形形态态奇奇特特者者常常是是厌厌氧氧菌的表现菌的表现 。如如两两端端钝钝圆圆着着色色深深，中中间间着着色色浅浅不不均均匀匀，且且有有空空泡泡，长长短短不不一一的的革革兰兰阴阴性性杆杆菌菌常常脆脆弱弱类类杆菌。杆菌。标本呈琥珀酸味，带血性或用紫外灯照射发标本呈琥珀酸味，带血性或用紫外灯照射发红色荧光，涂片镜检为红色荧光，涂片镜检为G-G-球杆菌，间或有长球杆菌，间或有长短不一的多形性，并有恶臭者，常为产黑色短不一的多形性，并有恶臭者，常为产黑色素普雷沃菌。素普雷沃菌。菌体细长，两端尖菌体细长，两端尖,为梭形的为梭形的G-G-杆菌，有紫杆菌，有紫色颗粒沿菌体长轴排列，成

8、双排列尖端相对，色颗粒沿菌体长轴排列，成双排列尖端相对，并有丁酸臭味者，常是具核梭杆菌。并有丁酸臭味者，常是具核梭杆菌。菌体高度多形性，长短不一，菌体中部肿胀菌体高度多形性，长短不一，菌体中部肿胀或呈圆球者，可能是坏死梭杆菌或呈圆球者，可能是坏死梭杆菌 。极小的极小的G-G-球菌，可能是韦荣球菌。球菌，可能是韦荣球菌。G+G+无芽胞杆菌，呈乳酸气味者，可能是乳无芽胞杆菌，呈乳酸气味者，可能是乳酸杆菌。呈丙酸气味者，并有特殊排列呈酸杆菌。呈丙酸气味者，并有特殊排列呈X X、Y Y、或栅状者可能是、或栅状者可能是痤疮痤疮丙酸杆菌。丙酸杆菌。有醋酸气味的可能是双歧杆菌。有醋酸气味的可能是双歧杆菌。菌

9、体分枝，呈棒状或栅状排列，且发现黄菌体分枝，呈棒状或栅状排列，且发现黄色颗粒，有琥珀酸气味者，多是放线菌。色颗粒，有琥珀酸气味者，多是放线菌。G+芽胞杆菌，肯定是梭状芽胞杆菌芽胞杆菌，肯定是梭状芽胞杆菌属。属。G+G+短短粗粗两两端端钝钝圆圆杆杆菌菌，无无芽芽胞胞，中中性性粒粒细细胞胞也也很很少少且且变变形形破破碎碎，标标本本来来自自战战伤伤或或肢肢体体严严重重肿胀者，大多是产气荚膜梭菌。肿胀者，大多是产气荚膜梭菌。G+G+杆杆菌菌，有有芽芽胞胞，并并有有异异丁丁酸酸或或异异戊戊酸酸等等气气味味，标标本本来来自自抗抗生生素素相相关关性性肠肠炎炎者者，大大多多是是艰艰难梭菌。难梭菌。（三）厌氧菌

10、培养基（三）厌氧菌培养基 1)1)强化血琼脂平板强化血琼脂平板(BAP)(BAP)：即即布布氏氏琼琼脂脂或或牛牛心心、牛牛脑脑浸浸出出液液琼琼脂脂为为基基础础培培养养基基，补补加加酵酵母母浸浸膏膏(0(05 5)、动动物物血血(5(51010)、维维生生素素k1(0.1gk1(0.1gml)ml)和和氯氯化化血血红红素素(5g(5gml)ml)，是是一一种种非非选选择择性性培培养养基基，几乎能培养出所有的厌氧菌。几乎能培养出所有的厌氧菌。2)2)卡卡那那万万古古霉霉素素冻冻溶溶血血琼琼脂脂平平板板(KVLB)(KVLB)：可可抑抑制制大大多多数数兼兼性性厌厌氧氧菌菌，使使产产黑黑色色素素普普雷

11、雷沃沃菌菌早早期期形形成成黑黑色色素素。只只需需2 23d3d出出现现黑黑色色菌菌落落。绝绝大大多多数数类类杆杆菌菌属属、普普雷雷沃沃菌菌属属和和紫紫单单胞胞菌菌属属都都生生长长良良好好，梭梭杆杆菌菌和和厌厌氧氧球球菌菌不不能能生生长长。是是常常用用的的选选择择 性性 培培 养养 基基。卡卡 那那 霉霉 素素 含含 量量 为为 7575100g100gmlml，万古霉素为，万古霉素为75g75gmlml。3)3)七叶苷胆汁平板七叶苷胆汁平板(BBI)(BBI)：本培养基含：本培养基含2020胆汁，胆汁，1g1gL L七叶苷和七叶苷和100g100gmlml的庆大霉的庆大霉素。抑制需氧菌，胆汁抑

12、制对之敏感的厌素。抑制需氧菌，胆汁抑制对之敏感的厌氧菌。只有耐胆汁的脆弱类杆菌与可变梭氧菌。只有耐胆汁的脆弱类杆菌与可变梭杆菌和死亡梭杆菌不被抑制，反被刺激菌杆菌和死亡梭杆菌不被抑制，反被刺激菌落较大，还能水解七叶苷，菌落周围有棕落较大，还能水解七叶苷，菌落周围有棕黑色的晕。黑色的晕。4)4)卵卵黄黄平平板板(EYA)(EYA)和和兔兔血血平平板板：用用于于选选择择产产气气荚荚膜膜梭梭菌菌，标标本本接接种种兔兔血血平平板板，见见有有双双溶溶血血环环，内内环环是是与与菌菌落落一一样样大大小小的的透透明明溶溶血血，外外环环是是宽宽的的甲甲型型溶溶血血，放放半半小小时时后后菌菌落落变变绿绿色色或或褐

13、褐色色，同同时时可可接接种种卵卵黄黄平平板板，以进行卵磷脂酶试验鉴定产气荚膜梭菌。以进行卵磷脂酶试验鉴定产气荚膜梭菌。(四四)厌氧菌培养常用方法厌氧菌培养常用方法 1)1)厌厌氧氧罐罐培培养养法法：应应用用物物理理或或化化学学方方法法造造成成无无氧氧环环境境。如如冷冷触触媒媒法法：利利用用气气体体发发生生器器产产生生氢氢及及二二氧氧化化碳碳，产产生生的的氢氢在在触触媒媒作作用用下下，与与罐罐内内的的氧氧结结合合成成水水，将将氧氧消消耗耗掉掉，造造成成无无氧氧环环境境。产产生生的的二二氧氧化化碳碳约约为为1010，也也适适宜宜厌厌氧氧菌菌生生长长。方方法法为为：先先将将触触媒媒(金金属属钯钯或或

14、铂铂)及及美美蓝蓝指指示示剂剂放放入入罐罐内内，然然后后将将已已接接种种的的平平板板置置于于罐罐内内，将将气气体体发发生生袋袋的的指指定定角角剪剪开开，加加入入lOmllOml水水，立即放入罐内，封闭厌氧罐即可。立即放入罐内，封闭厌氧罐即可。2)2)气气袋袋法法：原原理理相相同同，只只是是将将厌厌氧氧罐罐用用无毒、透明的塑料袋代替。无毒、透明的塑料袋代替。3)3)厌厌氧氧手手套套箱箱培培养养法法：厌厌氧氧手手套套箱箱公公认认的的培培养养厌厌氧氧菌菌最最佳佳仪仪器器。它它是是密密闭闭的的大大型型金金属属箱箱，前前面面有有透透明明面面板板，板板上上装装两两个个手手套套，可可通通过过手手套套在在箱箱

15、内内进进行行操操作作。适适用用于于在在无无氧氧环环境境中中连连续续进进行行标标本本接接种种、培培养养和和鉴鉴定定等等全全部工作。部工作。(六六)鉴定试验鉴定试验 据据厌厌氧氧菌菌的的菌菌体体形形态态、染染色色反反应应、菌菌落落性性状状以以及及对对某某些些抗抗生生素素的的敏敏感感性性等等作作出出初初步步鉴鉴定定。最最后后鉴鉴定定则则要要进进行行生生化化反反应应及及终终末末代代谢谢产产物物等等项检查。项检查。1 1形态与染色形态与染色 不仅能反映各种厌氧菌的特殊形态，同时也不仅能反映各种厌氧菌的特殊形态，同时也为鉴定厌氧菌提供参考依据为鉴定厌氧菌提供参考依据。2 2菌落性状菌落性状 不不同同厌厌氧

16、氧菌菌其其菌菌落落形形状状和和性性质质不不同同。梭梭菌菌的的菌菌落落特特点点是是形形状状不不规规则则，而而无无芽芽胞胞厌厌氧氧菌菌多多呈呈单单个的圆形小菌落。个的圆形小菌落。(1)(1)色色素素：产产黑黑色色素素普普鲁鲁沃沃菌菌产产生生黑黑褐褐色色或或黑黑色色色色素素。龋龋齿齿放放线线菌菌产产生生粉粉红红色色色色素素。奈奈氏氏放线菌产生黄褐色色素：放线菌产生黄褐色色素：(2)(2)溶溶血血：产产气气荚荚膜膜梭梭菌菌在在新新鲜鲜血血琼琼脂脂平平板板形成双溶血圈。形成双溶血圈。(3)(3)荧光：产黑色素普鲁沃菌在紫外线灯下，荧光：产黑色素普鲁沃菌在紫外线灯下，显示砖红色荧光；梭杆菌常发生黄绿色荧光

17、；显示砖红色荧光；梭杆菌常发生黄绿色荧光；艰难梭菌发生绿色荧光。艰难梭菌发生绿色荧光。3 3耐氧试验耐氧试验 当当在在厌厌氧氧平平板板上上有有菌菌生生长长时时，为为确确定定是是否否为为厌氧菌，必须做耐氧试验厌氧菌，必须做耐氧试验。4 4药物鉴定试验药物鉴定试验 用于鉴定厌氧菌的抗生素有卡那霉素和灭滴用于鉴定厌氧菌的抗生素有卡那霉素和灭滴灵。卡那霉素的敏感性叮将梭杆菌属与类杆灵。卡那霉素的敏感性叮将梭杆菌属与类杆菌属区分开，大多数类杆菌对卡那霉素耐药：菌属区分开，大多数类杆菌对卡那霉素耐药：灭滴灵纸片在鉴别厌氧菌灭滴灵纸片在鉴别厌氧菌(敏感敏感)与非厌氧菌与非厌氧菌(不敏感不敏感)有重要意义有重

18、要意义。5聚茴香脑磺酸钠试验聚茴香脑磺酸钠试验 厌厌氧氧消消化化链链球球菌菌对对50g50gL L的的聚聚茴茴香香脑脑磺磺酸酸钠钠溶溶液液敏敏感感，而而绝绝大大多多数数其其他他G+G+球菌耐药。球菌耐药。6 6生化特性生化特性鉴定鉴定 主要包括多种糖类发酵试验、吲哚试验、硝主要包括多种糖类发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、酸盐还原试验、触酶试验、卵磷脂酶试验、脂肪酶试验、蛋白溶解试验、明胶液化试验脂肪酶试验、蛋白溶解试验、明胶液化试验及胆汁肉汤生长试验和硫化氢试验等。为简及胆汁肉汤生长试验和硫化氢试验等。为简化厌氧菌鉴定，有多种试验鉴定系统，如推化厌氧菌鉴定，有多种试

19、验鉴定系统，如推测性平皿系统等。虽然不完善，但可使厌氧测性平皿系统等。虽然不完善，但可使厌氧菌的鉴定标准化，自动化。菌的鉴定标准化，自动化。7 7气液相色谱技术气液相色谱技术(GLC)(GLC)应应用用GLCGLC分分析析厌厌氧氧菌菌的的终终末末代代谢谢产产物物，因因各各种种厌厌氧氧菌菌的的代代谢谢产产物物不不同同，故故已已成成为为鉴鉴定定厌厌氧氧菌菌及及其其分分类类的的比比较较可可靠靠的的方方法法可可在在数数十十分钟至数小时即可作出诊断。分钟至数小时即可作出诊断。8PCR 如如采采用用PCRPCR方方法法检检测测抗抗生生素素相相关关性性腹腹泻泻病病人人粪粪便便中中艰艰难难梭梭菌菌的的毒毒素素

20、基基因因阳阳性性率率高高达达82828 8，明明显显高高于于厌厌氧氧培培养养法法的的检检出出率率19192 2，且且与与厌厌氧氧培培养养法法的的一一致性为致性为 100 100。9 9基因探针基因探针 如用地高辛标记脆弱类杆菌的基因探针，如用地高辛标记脆弱类杆菌的基因探针，检测标本中的脆弱类杆菌其敏感性为检测标本中的脆弱类杆菌其敏感性为8989，特异性为，特异性为91917 7，检测灵敏度为，检测灵敏度为10pgDNA10pgDNA，故其特异性强，敏感性和灵敏，故其特异性强，敏感性和灵敏度均高，并具有快速简便的优点。度均高，并具有快速简便的优点。(七七)检验结果分析与报告检验结果分析与报告 根

21、根据据革革兰兰染染色色镜镜检检，菌菌落落性性状状、耐耐氧氧试试验验及及药药敏敏试试验验若若发发现现厌厌氧氧菌菌可可初初步步报报告告：“检出厌氧菌，形似检出厌氧菌，形似x x xx x x菌菌”；再再根根据据生生化化反反应应及及终终末末代代谢谢产产物物作作最最终终报报告告：“分分离离鉴鉴定定出出x x x x x x菌菌”及及“药药物物敏感试验：敏感试验：x x x x x x结果结果”。有有条条件件的的单单位位可可采采用用基基因因探探针针或或PCRPCR技技术术，快速准确的检测厌氧菌。快速准确的检测厌氧菌。第三节 厌氧球菌 在临床标本中检出的厌氧菌大约有在临床标本中检出的厌氧菌大约有2525为

22、厌氧性球菌。其中为厌氧性球菌。其中G+G+消化消化球菌和球菌和消消化链球化链球菌属以及菌属以及G-G-韦荣球菌属与临床感染相关。韦荣球菌属与临床感染相关。、消化球菌属、消化球菌属 黑黑色色消消化化球球菌菌是是消消化化球球菌菌属属中中惟惟一一的的菌菌种种。通通常常寄寄居居在在人人的的体体表表和和与与外外界界相相通通的的腔腔道道中中，是是人人体体正正常常菌菌群群。在在临临床床上上可可引引起起人人体体各各部部组组织织和和器器官官的的感感染染，常常与与其其他他细细菌菌混混合感染，如腹腔感染、肝脓肿等。合感染，如腹腔感染、肝脓肿等。微生物特性微生物特性 菌菌体体圆圆形形，排排列列成成双双、短短链链或或成

23、成堆堆。生生长长缓缓慢慢，厌厌氧氧培培养养2 24d4d才才形形成成黑黑色色不不溶溶血血的的小小菌菌落落，接接触触空空气气后后颜颜色色变变浅浅，传传代代后后黑黑色色消消失失，通通过过庖庖肉肉培培养养后后又又可可产产生生黑黑色色素素。不不发发酵酵糖糖，触触酶酶阳阳性性为为其其特特点点。对对青青霉霉素素、红红霉霉素素、氯氯霉霉素素、洁洁霉霉素素、四四环环素素及及灭灭滴滴灵灵敏敏感感。DNADNA的的G+CG+C为为505051mol51mol。微生物检验微生物检验 从从感感染染部部位位采采集集标标本本，作作直直接接涂涂片片镜镜检检和和分分离离培培养养。接接种种血血琼琼脂脂平平板板，并并同同时时接接

24、种种含含血血清清硫硫乙乙醇醇酸酸盐盐培培养养基基或或庖庖肉肉培培养养基基(增增菌菌培培养养)，经经厌厌氧氧培培养养2 24d4d后后，观观察察菌菌落落形形态态，革革兰兰染染色色观观察察菌菌体体形形态态和和排排列列作作出出初初步步报报告告。据据生生化化反反应应、抗抗生生素素纸纸片片敏敏感感试试验验以以及及气气液液相相色色谱谱分分析析代谢产物作出最后报告。代谢产物作出最后报告。二、消化链球菌属二、消化链球菌属 分成厌氧消化链球菌、不解糖消化链球分成厌氧消化链球菌、不解糖消化链球菌、吲哚消化链球菌、大消化链球菌、菌、吲哚消化链球菌、大消化链球菌、微小消化链球菌、普氏消化链球菌、产微小消化链球菌、普氏

25、消化链球菌、产生消化链球菌、四联消化链球菌与天芥生消化链球菌、四联消化链球菌与天芥菜春还原消化链球菌等菜春还原消化链球菌等9 9个菌种，其代表个菌种，其代表菌种为厌氧消化链球菌。主要依据是菌种为厌氧消化链球菌。主要依据是DNADNA的的G+CG+C为为27-4527-45molmol。临床意义临床意义以厌氧消化链球菌最常见，产生消化链球菌则以厌氧消化链球菌最常见，产生消化链球菌则很少见。消化链球菌可引起各部组织和器官感很少见。消化链球菌可引起各部组织和器官感染，又以混合感染为多见，如腹腔感染、肝脓染，又以混合感染为多见，如腹腔感染、肝脓肿、外阴、阴道及盆腔感染、肺部和胸膜感染、肿、外阴、阴道及

26、盆腔感染、肺部和胸膜感染、口腔感染、颅内感染以及皮肤和软组织感染等。口腔感染、颅内感染以及皮肤和软组织感染等。厌氧消化链球菌可与金黄色葡萄球菌或溶血性厌氧消化链球菌可与金黄色葡萄球菌或溶血性链球菌协同引起严重的创伤感染，即厌氧链球链球菌协同引起严重的创伤感染，即厌氧链球菌肌炎。该菌常可引起细菌性心内膜炎，主要菌肌炎。该菌常可引起细菌性心内膜炎，主要由原发病灶口腔、牙周和尿道感染而引起。致由原发病灶口腔、牙周和尿道感染而引起。致菌血症较少见。菌血症较少见。在临床标本分离株中，本菌属占在临床标本分离株中，本菌属占20203535，为第为第2 2位，仅次于脆弱类杆菌。位，仅次于脆弱类杆菌。微生物特性

27、微生物特性 为为G+G+球球形形或或卵卵圆圆形形，成成双双或或呈呈短短链链状状排排列列。无无鞭鞭毛毛。在在35-37pH7-735-37pH7-75 5时时生生长长佳佳。在在厌厌氧氧血血平平板板上上，菌菌落落1mm1mm，灰灰白白色色凸凸起起、不不透透明明边边缘缘整整齐齐，不不溶溶血血。在在硫硫乙乙醇醇酸酸钠钠液液体体培培养养基基中中，呈呈颗颗粒粒状状沉沉淀淀生生长长。吐吐温温-8080促促进进生生长长。触触酶酶阴阴性性，发发酵酵葡葡萄萄糖糖不不发发酵酵乳乳糖糖，不不水水解解胆胆汁汁七七叶叶苷苷，吲吲哚哚、尿尿素素酶酶、硝硝酸酸盐盐还还原原试试验验均均为为阴阴性性，对对多多聚聚茴茴香磺酸钠敏感

28、。香磺酸钠敏感。微生物检验微生物检验 检查方法与检查黑色消化球菌基本相同。检查方法与检查黑色消化球菌基本相同。本菌培养物常有恶臭气味，为其特点。可通过本菌培养物常有恶臭气味，为其特点。可通过形态、染色、培养特性、生化反应形态、染色、培养特性、生化反应发酵葡萄糖发酵葡萄糖产酸，分解甘露醇产酸，分解甘露醇等与黑色消化球菌鉴别。等与黑色消化球菌鉴别。三、韦荣球菌三、韦荣球菌 韦荣球菌属为革兰阴性厌氧球菌，有韦荣球菌属为革兰阴性厌氧球菌，有7 7个种，其中小韦荣球菌和产碱韦荣球菌是常个种，其中小韦荣球菌和产碱韦荣球菌是常见的二个种见的二个种 。口口腔腔、咽咽部部、胃胃肠肠道道和和女女性性生生殖殖道道的

29、的正正常常菌菌群群，致致病病力力不不强强，为为条条件件致致病病菌菌。本本属属菌可产生内毒素，为脂多糖，有抗原性。菌可产生内毒素，为脂多糖，有抗原性。临床标本可采自软组织脓肿和血液。大临床标本可采自软组织脓肿和血液。大多见于混合感染。临床分离率小于多见于混合感染。临床分离率小于1 1。小小韦韦荣荣球球菌菌可可引引起起上上呼呼吸吸道道感感染染，而而产产碱韦荣球菌多见于肠道感染。碱韦荣球菌多见于肠道感染。微生物特性微生物特性 韦韦荣荣球球菌菌形形态态相相似似，为为G-G-球球菌菌，排排列列成成对对或或短短链，近似奈瑟球菌。无鞭毛和芽胞。链，近似奈瑟球菌。无鞭毛和芽胞。专专性性厌厌氧氧，在在血血琼琼脂

30、脂平平板板上上发发育育良良好好，培培养养48h48h后后，形形成成1 12mm2mm圆圆形形、凸凸起起灰灰白白色色至至黄黄色色混混浊浊菌菌落落，不不溶溶血血。生生化化反反应应不不活活泼泼，不不分分解解糖类，还原硝酸盐，触酶反应糖类，还原硝酸盐，触酶反应-+。小小韦韦荣荣球球菌菌触触酶酶试试验验阴阴性性，而而产产碱碱韦韦荣荣球球菌菌为为阳性。阳性。微生物检验微生物检验 取取临临床床标标本本作作直直接接涂涂片片、革革兰兰染染色色、镜镜检检。如如发发现现-小小球球菌菌、成成对对或或短短链链或或不不规规则则排排列列，疑疑为为本本菌菌属属。可可用用厌厌氧氧血血琼琼脂脂平平板板分分离离培培养养，2 23d

31、3d观观察察结结果果，同同时时可可接接种种硫硫乙乙醇醇酸酸盐盐肉肉汤汤或或庖庖肉肉培培养养基基，观观察察生生长长情情况况与与形形态态，并并做做生化反应进行鉴定。生化反应进行鉴定。第四节-无芽胞厌氧杆菌 是一群不形成芽胞的厌氧杆菌，种类较是一群不形成芽胞的厌氧杆菌，种类较多，包括类杆菌属、普雷沃菌属、紫单多，包括类杆菌属、普雷沃菌属、紫单胞菌属和梭杆卤属等。是正常菌群，可胞菌属和梭杆卤属等。是正常菌群，可作为条件致病菌引起作为条件致病菌引起内源性内源性感染。感染。一、类杆菌属一、类杆菌属 是最重要的是最重要的-无芽胞厌氧杆菌，其中无芽胞厌氧杆菌，其中以脆弱类杆菌最常见，是本属代表菌株，以脆弱类杆

32、菌最常见，是本属代表菌株，其其DNADNA的的G+CG+C为为39-4839-48molmol。临床意义临床意义 类类杆杆菌菌常常寄寄生生于于口口腔腔、肠肠道道和和女女性性生生殖殖道道，其其中中脆脆弱弱类类杆杆菌菌占占临临床床分分离离株株的的2525，占占类类杆杆菌菌分分离离株株的的5050，居居临临床床厌厌氧氧菌菌分分离离株株首首位位。肠肠道道的的重重要要菌菌群群，为为大大肠肠埃埃希希菌菌的的10010010001000倍。倍。脆脆弱弱类类杆杆菌菌能能产产生生一一种种锌锌依依赖赖金金属属蛋蛋白白酶酶或或肠肠毒毒素素，能能使使肠肠粘粘膜膜细细胞胞产产生生病病理理效效应应。可可引起女性生殖系统、

33、胸腔及颅内感染。引起女性生殖系统、胸腔及颅内感染。微生物特性微生物特性 -着着色色不不均均，培培养养物物涂涂片片呈呈明明显显多多形形性性，无鞭毛、无芽胞，多数有荚膜。无鞭毛、无芽胞，多数有荚膜。专性厌氧，在厌氧血平板经专性厌氧，在厌氧血平板经2448h2448h培养后，培养后，菌落圆形，表面光滑，边缘整齐，不溶血，菌落圆形，表面光滑，边缘整齐，不溶血，加入氯化血红素、维生素加入氯化血红素、维生素K K和和2020胆汁可促胆汁可促进生长。在胆汁七叶苷进生长。在胆汁七叶苷(BBE)(BBE)培养基中生长培养基中生长旺盛，菌落较大，能分解胆汁七叶苷，使培旺盛，菌落较大，能分解胆汁七叶苷，使培养基变黑

34、色，菌落周围有黑晕，故养基变黑色，菌落周围有黑晕，故BBEBBE可作可作为脆弱类杆菌的选择鉴别培养基。为脆弱类杆菌的选择鉴别培养基。触酶试验阳性，发酵葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，触酶试验阳性，发酵葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，不发酵阿拉伯糖、鼠李糖、山梨醇和海藻糖，不发酵阿拉伯糖、鼠李糖、山梨醇和海藻糖，水解胆汁七叶苷，耐水解胆汁七叶苷，耐2020胆汁，并生长旺盛。胆汁，并生长旺盛。发酵代谢产物是乙酸、丙酸和琥珀酸，一般发酵代谢产物是乙酸、丙酸和琥珀酸，一般不产生丁酸：大部分菌株对青霉素不产生丁酸：大部分菌株对青霉素G G、卡那霉、卡那霉素和新霉素耐药，但素和新霉素耐药，但9595以上对氯霉素、氨以上对氯霉

35、素、氨苄青霉素、氧哌嗪青霉素、羧塞吩青霉素、苄青霉素、氧哌嗪青霉素、羧塞吩青霉素、亚胺硫霉素、甲硝唑等敏感。亚胺硫霉素、甲硝唑等敏感。微生物检验微生物检验 标本发现标本发现-杆菌，染色不均，具有多形性，杆菌，染色不均，具有多形性，可疑为本菌，用可疑为本菌，用BBEBBE平板分离培养平板分离培养3737厌氧培厌氧培养养2448h2448h观察菌落特征。胆盐可促进生长。观察菌落特征。胆盐可促进生长。根据发酵葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，水解七叶苷，根据发酵葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，水解七叶苷，耐耐2020胆汁等生化试验作出鉴定。胆汁等生化试验作出鉴定。气液相色谱检查其终末代谢产物，则有助于快气液相色谱检查其终

36、末代谢产物，则有助于快速诊断。同时应注意与其他耐胆盐的类杆菌相速诊断。同时应注意与其他耐胆盐的类杆菌相鉴别。鉴别。二、普雷沃菌属二、普雷沃菌属 代表菌种是产黑色素普雷沃菌。代表菌种是产黑色素普雷沃菌。寄寄生生在在口口腔腔、女女性性生生殖殖道道等等部部位位的的正正常常菌菌群群，仅仅次次于于脆脆弱弱类类杆杆菌菌。是是一一种种常常见见的的条条件件致致病病菌菌，可可引引起起内内源源性性感感染染和和混混合合感感染染，女女性性生生殖殖道道及及口口腔腔感感染染较较为为多多见。见。其其致致病病物物质质可可能能是是胶胶原原酶酶，与与结结缔缔组组织织的分解有关。的分解有关。微生物特性微生物特性 本本群群细细菌菌的

37、的形形态态大大同同小小异异，涂涂片片检检查查为为G-G-球球杆杆状状，成成双双或或短短链链，两两端端钝钝圆圆，有有浓浓染染和和空泡。呈多形性。无鞭毛、芽胞和荚膜、空泡。呈多形性。无鞭毛、芽胞和荚膜、为为专专性性厌厌氧氧菌菌。在在厌厌氧氧平平板板上上生生长长良良好好，经经2 23d3d培培养养后后，菌菌落落为为圆圆形形凸凸起起、呈呈-溶溶血血。菌菌落落初初形形成成时时为为灰灰白白色色，5 57d7d转转为为黑黑色色。生生长长时时需需氯氯化化血血红红素素和和维维生生素素K K，故故在在培养基中加入这两种物质可促进生长。培养基中加入这两种物质可促进生长。在在20%20%胆胆汁汁培培养养基基中中绝绝大

38、大多多数数不不生生长长，触触酶酶阴阴性性，除除中中间间普普雷雷沃沃菌菌、变变黑黑普普雷雷沃沃菌菌和和部部分分洛洛氏氏普普雷雷沃沃菌菌外外脂脂酶酶均均为为阴阴性性，脲脲酶酶阴阴性性。多多数数对对氨氨基基青青霉霉素素、头头孢孢菌菌素素、卡卡那那霉霉素素和和万万古古霉霉素素耐耐药药，而而对对甲甲硝硝唑唑霉霉素素、利利福福平平和和新新霉霉素素敏敏感。感。三、紫单胞菌属三、紫单胞菌属 与人类有关的有不解糖紫单胞菌、牙髓紫单与人类有关的有不解糖紫单胞菌、牙髓紫单胞菌和牙龈紫单胞菌等胞菌和牙龈紫单胞菌等3 3种。代表菌种是不解种。代表菌种是不解糖紫单胞菌。糖紫单胞菌。其其DNADNA的的G+CG+C为为45

39、45-54mol54mol。主主要要分分布布于于人人类类口口腔腔、泌泌尿尿生生殖殖道道和和肠肠道道，在在正正常常人人体体的的检检出出率率低低。动动物物源源性性紫紫单单胞胞菌菌在在被被动动物物咬咬伤伤感感染染的的人人体体中中检检出出，这这些些菌菌株株与与人人源源紫紫单单胞胞菌菌相相似似，但但基基因因型型不不同同。主主要要引引起起人人类类牙牙周周炎炎、牙牙髓髓炎炎、根根尖尖周周炎炎、也也可可引引起起肺肺胸胸膜膜炎炎、阑阑尾尾炎炎和和细细菌菌性性阴阴道道炎炎，尚尚可引起头、颈和下呼吸道感染。可引起头、颈和下呼吸道感染。(三三)微生物特性微生物特性(1)G-G-杆杆菌菌或或球球杆杆菌菌，两两端端钝钝圆

40、圆，着着色色不不均均匀匀。维维生生素素K K和和氯氯化化血血红红素素可可促促进进本本菌菌生生长长及及黑黑色色素素的的产产生生，冻冻溶溶血血较较非非冻冻溶溶血血更更有有利利于于早早期期产产生生黑黑色色素素。在在厌厌氧氧血血琼琼脂脂平平板板上上，35353737厌厌氧氧培培养养3-5d,3-5d,形形成成1-2mm1-2mm圆圆形形凸凸起起、边边缘缘整整齐齐、棕棕色色或或黑黑色色菌菌落落。用用紫紫外外线线灯灯照照射射可可出出现红色荧光。现红色荧光。(三三)微生物特性微生物特性(2)产产生生色色素素，不不分分解解或或弱弱分分解解糖糖。触触酶酶试试验验多多阴阴性性，胆胆汁汁七七叶叶苷苷和和脂脂酶酶试试

41、验验阴阴性性，吲吲哚哚多多阳阳性性。能能液液化化明明胶胶。代代谢谢产产物物为为乙乙酸酸、丙丙酸酸和和异异戊戊酸酸等等。对对卡卡那那霉霉素素、多多粘粘菌菌素素耐耐药药，对对万万古古霉霉素素、头头孢孢菌菌素素、氯氯霉霉素素、氯氯林林可可霉霉素、羟氨苄青霉素等均敏感。素、羟氨苄青霉素等均敏感。（四）微生物检验（四）微生物检验1 1标本采集标本采集 根据病变部位采取适当标本厌氧根据病变部位采取适当标本厌氧 送检：送检：2 2本菌特征本菌特征 G-G-杆菌或球杆菌，着色不均，在杆菌或球杆菌，着色不均，在 厌氧血琼脂平板上形成的棕色菌落，用紫外厌氧血琼脂平板上形成的棕色菌落，用紫外 线照射可出现红色荧光。

42、线照射可出现红色荧光。（四）微生物检验（四）微生物检验3 3与产黑色素普鲁沃菌相签别，产黑色素普鲁与产黑色素普鲁沃菌相签别，产黑色素普鲁 沃菌可发酵葡萄糖、乳糖和蔗糖，而紫单胞沃菌可发酵葡萄糖、乳糖和蔗糖，而紫单胞 菌均不发酵糖。菌均不发酵糖。4 4与其他紫单胞菌相鉴别，不解糖紫单胞菌触与其他紫单胞菌相鉴别，不解糖紫单胞菌触 酶试验阴性，岩藻糖苷酶试验阳性；牙髓紫酶试验阴性，岩藻糖苷酶试验阳性；牙髓紫 单胞菌和牙龈紫单胞菌。岩藻糖苷酶试验均单胞菌和牙龈紫单胞菌。岩藻糖苷酶试验均 为阴性，触酶试验阳性。为阴性，触酶试验阳性。四、梭杆菌属四、梭杆菌属 是是临临床床常常见见的的G-G-无无芽芽胞胞厌

43、厌氧氧菌菌，因因其其两两端端尖尖细细如如梭梭，故故名名梭梭杆杆菌菌。是是人人口口腔腔、上上呼呼吸吸道道、肠肠道道及及泌泌尿尿生生殖殖道道的的正正常常菌菌群群，以以牙牙缝缝中中最最为为多多见见。在在临临床床标标本本中中，常常见见的的有有具具核核梭梭杆杆菌菌、坏坏死死梭梭杆杆菌菌、死死亡亡梭梭杆杆菌菌和和溃溃疡疡梭梭杆杆菌菌等等1616种种。其其代代表表菌菌种种为为具具核核梭梭杆杆菌菌。DNADNA的的G+CG+C含量为含量为26-34mol26-34mol。(一一)临床意义临床意义 具具核核梭梭杆杆菌菌最最常常见见，在在口口腔腔、生生殖殖器器、胃胃肠道和上呼吸道中被发现。肠道和上呼吸道中被发现。

44、坏坏死死梭梭杆杆菌菌是是毒毒力力很很强强的的梭梭杆杆菌菌，可可在在儿儿童童和和青青年年人人中中引引起起扁扁桃桃体体炎炎，有有时时并并发发单单核核细细胞胞增增多多症症，它它是是青青年年人人扁扁桃桃体体周周围围脓脓肿肿中中最最常常分分离离到到的的厌厌氧氧菌菌。尚尚可可引引起起脓脓胸胸和菌血症。和菌血症。(二二)微生物特性微生物特性1 1形态与染色形态与染色 为典型的为典型的G-G-梭形杆菌，无鞭毛梭形杆菌，无鞭毛 不能运动。不能运动。2 2培养特点培养特点 专性厌氧菌，在血平板上生长良专性厌氧菌，在血平板上生长良 好。经好。经48h48h培养后，菌落直径培养后，菌落直径 l l2mm2mm，不规，

45、不规 则圆形略凸起，灰色发光透明，常显示珍珠则圆形略凸起，灰色发光透明，常显示珍珠 光斑点，通常不溶血。光斑点，通常不溶血。3.3.不发酵任何糖类，吲哚和不发酵任何糖类，吲哚和DNADNA酶试验阳性，酶试验阳性，触酶阴性。不还原硝酸盐，在触酶阴性。不还原硝酸盐，在2020胆汁中不胆汁中不 生长，脂酶试验阴性。主要代谢产物是丁酸。生长，脂酶试验阴性。主要代谢产物是丁酸。(三三)微生物检验微生物检验1 1标本采集标本采集 化脓感染者取脓汁，败血症化脓感染者取脓汁，败血症 取血液并先增菌培养。取血液并先增菌培养。2 2本菌特征本菌特征 革兰阴性梭杆菌，两端尖细，革兰阴性梭杆菌，两端尖细，中间膨大、似

46、梭状：绝大部分菌株在中间膨大、似梭状：绝大部分菌株在2020 胆汁中不生长，不发酵葡萄糖，甘露醇，胆汁中不生长，不发酵葡萄糖，甘露醇，不分解胆汁七叶苷，吲哚和不分解胆汁七叶苷，吲哚和DNADNA酶试验阳酶试验阳 性。性。第五节 G+无芽胞厌氧杆菌 在厌氧菌中约占在厌氧菌中约占1515。常见的有丙酸杆菌。常见的有丙酸杆菌属、优杆菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属属、优杆菌属、乳酸杆菌属、双歧杆菌属等四个属。等四个属。一、丙酸杆菌属 主主要要寄寄居居于于人人皮皮肤肤皮皮脂脂腺腺、肠肠道道以以及及乳乳制品中。临床有关的痤疮丙酸杆菌。制品中。临床有关的痤疮丙酸杆菌。痤痤疮疮丙丙酸酸杆杆菌菌。是是血血液液、腰

47、腰穿穿及及骨骨髓髓穿穿刺刺液液培培养养时时常常见见的的污污染染菌菌。在在植植入入修修复复物物或或器器械械引引起起的的感感染染中中也也有有重重要要作作用用，对对心心瓣瓣膜膜损损伤伤者者可可引引起起心心内内膜膜炎炎。与与痤痤疮和酒渣鼻有关。疮和酒渣鼻有关。本菌特征本菌特征 革兰阳性厌氧棒状杆菌，数次革兰阳性厌氧棒状杆菌，数次在厌氧环境下传代后可变为兼性厌氧菌，在厌氧环境下传代后可变为兼性厌氧菌，吐温吐温-80-80可刺激其生长，大都能液化明胶，可刺激其生长，大都能液化明胶，触酶试验阳性，发酵葡萄糖产生丙酸。触酶试验阳性，发酵葡萄糖产生丙酸。二、优杆菌二、优杆菌1.是人口腔与肠道正常菌群的组成成员，

48、对机是人口腔与肠道正常菌群的组成成员，对机 体有营养、生物拮抗和维持肠道微生态学平体有营养、生物拮抗和维持肠道微生态学平 衡等功能。可造成混合感染，引起人体心内衡等功能。可造成混合感染，引起人体心内 膜炎等疾病。膜炎等疾病。2.2.优杆菌呈多形性，优杆菌呈多形性，2020胆汁可促进生长，按胆汁可促进生长，按 生化反应不同可分为水解糖优杆菌和不水解生化反应不同可分为水解糖优杆菌和不水解 糖优杆菌两大群，粘液优杆菌则可发酵葡萄糖优杆菌两大群，粘液优杆菌则可发酵葡萄 糖糖,迟钝优杆菌不发酵糖类。迟钝优杆菌不发酵糖类。三、双歧杆菌三、双歧杆菌1.是重要生理菌群。大肠中可达是重要生理菌群。大肠中可达10

49、108 810101212g g粪便，维持微生态平衡。能合成维生粪便，维持微生态平衡。能合成维生素，提高免疫力，抗肿瘤，起到营养保素，提高免疫力，抗肿瘤，起到营养保健作用。用于药品和食品的有青春双歧健作用。用于药品和食品的有青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、两歧双歧杆菌、杆菌、婴儿双歧杆菌、两歧双歧杆菌、长双歧杆菌和短双歧杆菌。长双歧杆菌和短双歧杆菌。2.2.本菌有高度多形性，着色不均；菌落较本菌有高度多形性，着色不均；菌落较小，圆形不透明；触酶试验阴性，发酵小，圆形不透明；触酶试验阴性，发酵葡萄糖和乳糖。葡萄糖和乳糖。3.3.抵抗力弱，对杆菌肽、青霉素、红霉素、抵抗力弱，对杆菌肽、青霉素、红霉素、

50、氯林可霉素等高度敏感。氯林可霉素等高度敏感。四、乳杆菌四、乳杆菌1.1.是消化道、阴道的正常共生菌，能分解阴道是消化道、阴道的正常共生菌，能分解阴道中的多种糖类而使阴道呈酸性，以抑制某些中的多种糖类而使阴道呈酸性，以抑制某些致病菌的生长。致病菌的生长。2.2.乳杆菌与龋齿的形成有密切的关系乳杆菌与龋齿的形成有密切的关系.口腔的口腔的变异链球菌与消化链球菌使蔗糖变成葡聚糖，变异链球菌与消化链球菌使蔗糖变成葡聚糖，附于牙面形成齿斑。乳杆菌能溶解牙釉使之附于牙面形成齿斑。乳杆菌能溶解牙釉使之脱钙造成龋齿。脱钙造成龋齿。3.G+3.G+细长杆菌，菌落较小边缘不整齐；触酶、细长杆菌，菌落较小边缘不整齐；

51、触酶、硝酸盐还原和吲哚等试验均阴性；发酵葡萄硝酸盐还原和吲哚等试验均阴性；发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和蔗糖产生乳酸糖、乳糖、麦芽糖和蔗糖产生乳酸 。第六节梭状芽胞杆菌属 G+G+，芽芽胞胞正正圆圆形形，直直径径大大于于菌菌体体，位位于于菌菌体体中中央央，极极端端或或次次极极端端，使使菌菌体体膨膨大大呈呈梭梭状，故名梭菌属。状，故名梭菌属。G+C G+C值为值为222254mol54mol，代表菌为酪酸梭菌。，代表菌为酪酸梭菌。在在自自然然界界分分布布广广泛泛，多多数数为为腐腐物物寄寄生生菌菌，有有致致病病性性主主要要有有破破伤伤风风梭梭菌菌、产产气气荚荚膜膜梭梭菌、肉毒梭菌与艰难梭菌。菌、肉毒梭

52、菌与艰难梭菌。引引起起人人类类疾疾病病主主要要有有破破伤伤风风、气气性性坏坏疽疽、食物中毒和假膜性结肠炎等。食物中毒和假膜性结肠炎等。一、破伤风梭菌一、破伤风梭菌 存在于自然界，在土壤和人与动物的肠道中存在于自然界，在土壤和人与动物的肠道中都有存在。都有存在。当机体受创伤时或新生儿接生时使用不洁用当机体受创伤时或新生儿接生时使用不洁用具断脐带，破伤风梭菌可侵入伤口生长繁殖，具断脐带，破伤风梭菌可侵入伤口生长繁殖，分泌外毒素，引起机体强直性痉挛、抽搐，称分泌外毒素，引起机体强直性痉挛、抽搐，称为破伤风。为破伤风。全世界每年约有全世界每年约有100100万病例发生，死亡率在万病例发生，死亡率在20

53、20左右。左右。（1 1）致病因素）致病因素 外毒素称为痉挛毒素。为蛋白质，不耐热，外毒素称为痉挛毒素。为蛋白质，不耐热，可被蛋白消化酶破坏，加可被蛋白消化酶破坏，加0 03 3甲醛于毒素甲醛于毒素中中3737培养培养4 4周可转变为类毒素。周可转变为类毒素。对中枢神经系统有亲和力，尤其是运动神经对中枢神经系统有亲和力，尤其是运动神经细胞，能与神经节苷脂结合。封闭了脊髓抑细胞，能与神经节苷脂结合。封闭了脊髓抑制性触突，阻止释放抑制性冲动介质，而破制性触突，阻止释放抑制性冲动介质，而破坏了正常的抑制性调节功能，从而发生肌肉坏了正常的抑制性调节功能，从而发生肌肉痉挛性收缩痉挛性收缩 。(2)(2)

54、临床意义临床意义 破伤风梭菌通过创伤感染，局部组织氧化还破伤风梭菌通过创伤感染，局部组织氧化还原电势降低。细菌繁殖且产生毒素。细菌不进原电势降低。细菌繁殖且产生毒素。细菌不进入血流，引起严重毒血症，主要症状为骨骼肌入血流，引起严重毒血症，主要症状为骨骼肌痉挛。出现张口困难，牙关紧闭呈苦笑面容。痉挛。出现张口困难，牙关紧闭呈苦笑面容。肌肉发生强直性痉挛，呈角弓反张，呼吸困难肌肉发生强直性痉挛，呈角弓反张，呼吸困难，可因窒息死亡。引起的疾病叫破伤风，可因窒息死亡。引起的疾病叫破伤风 。(3)(3)微生物特性微生物特性 1形形态态与与染染色色 G+G+细细长长。有有周周鞭鞭毛毛，无无荚荚晚晚，芽芽胞

55、胞正正圆圆形形，比比菌菌体体大大，位位于于菌菌体体顶顶端端，使使细细菌菌呈呈鼓鼓槌槌状状。厌厌氧氧培培养养，细细菌菌呈呈薄薄膜膜状状扩扩散生长。散生长。2 2不不发发酵酵糖糖类类，能能液液化化明明胶胶。产产生生H2SH2S，形形成成吲吲哚哚，不不还还原原硝硝酸酸盐盐，对对蛋蛋白白质质有有微微弱弱的的消消化作用。化作用。3 3根根据据鞭鞭毛毛抗抗原原不不同同，可可分分1010个个血血清清型型。产产生生毒毒素素的的生生物物活活性性相相同同，可可被被任任何何型型抗抗毒毒素素中中和。和。（4 4）抵抗力）抵抗力 芽芽胞胞甚甚强强，在在土土壤壤中中数数年年不不死死，煮煮沸沸100 100 1h1h可可被

56、被杀杀灭灭，能能耐耐干干热热1501h1501h，50g50gL L的石炭酸的石炭酸101015h15h。对对青青霉霉素素、红红霉霉素素、四四环环素素敏敏感感，磺磺胺胺类类有有抑抑制制作作用用，对对氨氨基基糖糖苷苷抗抗生生素素耐耐药。药。(5)微生物检验微生物检验 根据临床即可诊断，一般不作细菌学检查。根据临床即可诊断，一般不作细菌学检查。1 1直直接接涂涂片片 从从病病灶灶处处取取脓脓汁汁或或坏坏死死组组织织，直直接接涂涂片片革革兰兰染染色色，镜镜检检观观察察菌菌体体见见一一端端有有圆圆形形芽芽胞胞呈呈鼓鼓槌状的杆菌的形态，可初步报告结果。槌状的杆菌的形态，可初步报告结果。2 2厌厌氧氧培培

57、养养 本本菌菌较较易易分分离离。将将可可疑疑的的材材料料接接种种庖庖肉肉培培养养基基，在在8585水水浴浴加加热热30min30min，杀杀灭灭杂杂菌菌，而而芽芽胞胞得得以以存存活活，35-3735-37培培养养2-4d2-4d。转转种种适适宜宜的的培培养养基基，如如新新鲜鲜血血平平板板。厌厌氧氧培培养养18-24h18-24h，细细菌菌呈呈薄膜状扩散生长。薄膜状扩散生长。3毒力试验毒力试验 可可确确定定毒毒素素的的有有无无及及其其性性质质。小小白白鼠鼠尾尾根根部部皮皮下下或或肌肌肉肉注注射射0 01 10 025ml25ml培培养养滤滤液液。阳阳性性者者，于于注注射射后后 12-24h12-

58、24h，出出现现尾尾部部僵僵直直竖竖起起、后后腿腿强强直直或或全全身身肌肌肉肉痉痉挛挛等等症状，甚至死亡。症状，甚至死亡。保保护护力力试试验验是是将将0 025ml25ml培培养养滤滤液液混混以以l l：1010稀稀释释的的等等量量破破伤伤风风抗抗毒毒素素，给给小小白白鼠鼠注注射，如不发病，为阳性。射，如不发病，为阳性。(6)(6)检验结果分析与报告检验结果分析与报告 一一般般取取伤伤口口分分泌泌物物涂涂片片、染染色色，如如见见到到典典型型的的革革兰兰阳阳性性鼓鼓槌槌样样菌菌，即即可可报报告告：“检检出出破破伤风棱菌伤风棱菌”。如如取取标标本本直直接接涂涂片片、镜镜检检，菌菌体体形形态态不不典

59、典型型或或菌菌甚甚少少，难难以以判判定定时时，则则可可进进行行分分离离培培养养、动动物物试试验验，如如果果试试验验结结果果阳阳性性，则则可可报报告告：“经经x x天天培培养养出出破破伤伤风风梭梭菌菌”和和“破破伤伤风风抗抗毒毒素试验阳性素试验阳性”。二、产气荚膜梭菌二、产气荚膜梭菌 产气荚膜产气荚膜梭梭菌是气性坏疽的主要病原菌。菌是气性坏疽的主要病原菌。本本菌菌可可产产生生外外毒毒素素及及多多种种侵侵袭袭性性酶酶类类，有有1212种。种。这这些些毒毒素素和和酶酶与与组组织织溶溶解解、坏坏死死、产产气气、水水肿肿以以及及病病变变的的迅迅速速扩扩散散蔓蔓延延和和全全身身中中毒毒症状均有密切关系。症

60、状均有密切关系。此此外外，有有些些菌菌株株还还能能产产生生肠肠毒毒素素和和溶溶血血毒毒素素、肠肠毒毒素素能能改改变变肠肠壁壁通通透透性性，促促使使体体液液渗入肠腔，引起腹泻。渗入肠腔，引起腹泻。毒素，为卵磷脂酶，能分解人和动物细胞毒素，为卵磷脂酶，能分解人和动物细胞膜上磷脂和蛋白质的复合物，破坏细胞膜，膜上磷脂和蛋白质的复合物，破坏细胞膜，引起溶血、组织坏死和血管内皮损伤，使血引起溶血、组织坏死和血管内皮损伤，使血管通透性增高，造成水肿。还能促使血小板管通透性增高，造成水肿。还能促使血小板凝聚，导致血栓形成，局部组织缺血。凝聚，导致血栓形成，局部组织缺血。毒素引起人类坏死性肠炎。毒素引起人类坏

61、死性肠炎。毒素有坏死和致死作用。毒素有坏死和致死作用。毒素有溶血和破坏白细胞作用，对心肌有毒素有溶血和破坏白细胞作用，对心肌有毒性。毒性。毒素毒素(胶原酶胶原酶)能分解肌肉和皮下的胶原组能分解肌肉和皮下的胶原组织，使组织溶解。织，使组织溶解。毒素毒素(透明质酸酶透明质酸酶)能分解细胞间质中透明能分解细胞间质中透明质酸质酸毒素毒素(DNA(DNA酶酶)能使细胞核能使细胞核DNADNA解聚，降低坏解聚，降低坏死组织的粘稠度。死组织的粘稠度。(三三)微生物特性微生物特性 1 1为为革革兰兰阳阳性性粗粗短短大大杆杆菌菌，两两端端钝钝圆圆，芽芽胞胞椭椭圆圆形形，位位于于菌菌体体中中央央或或次次极极端端，

62、在在无无糖糖培培养养基基中中有有利利于于形形成成芽芽胞胞。在在机机体体内内可可产产生生荚膜荚膜 无鞭毛，不能运动。无鞭毛，不能运动。2 2培养特征培养特征厌氧，繁殖迅速，培养厌氧，繁殖迅速，培养2h2h后，在液体培养基深层即后，在液体培养基深层即有明显生长；有明显生长；4-6h4-6h孵育后出现表面生长。在固体培孵育后出现表面生长。在固体培养基上，经养基上，经24h24h培养，菌落直径培养，菌落直径2-4mm2-4mm，圆形凸起光，圆形凸起光滑、边缘整齐、无迁徙生长现象。在血平板上有溶滑、边缘整齐、无迁徙生长现象。在血平板上有溶血环，在蛋黄琼脂甲板上，菌落周围出现乳白色混血环，在蛋黄琼脂甲板上

63、，菌落周围出现乳白色混浊圈。在庖肉培养基中产生气体，在牛乳培养基能浊圈。在庖肉培养基中产生气体，在牛乳培养基能分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时产生大量气体，分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面的凡土林层将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面的凡土林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，称为向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，称为“汹涌发酵汹涌发酵”，是此菌的特征。，是此菌的特征。3 3生化反应生化反应 所所有有型型菌菌株株均均能能发发酵酵葡葡萄萄糖糖、麦麦芽芽糖糖、乳乳糖糖和和蔗蔗糖糖，产产酸酸产产气气：不不发发酵酵甘甘露露醇醇或或水水杨杨苷苷；液液

64、化化明明胶胶，产产生生H H2 2S S，不不能能消消化化已已凝凝固固的的蛋蛋白白质质和和血血清清，吲吲哚哚阴阴性性。主主要要代代谢谢产物为乙酸和丁酸，有时也形成丁醇。产物为乙酸和丁酸，有时也形成丁醇。(四四)微生物检验微生物检验1 1标本的采集标本的采集 一般采取创伤深部的分泌物、一般采取创伤深部的分泌物、穿刺物、坏死组织块、血液、可疑食物。穿刺物、坏死组织块、血液、可疑食物。2 2标本直接检查标本直接检查 可见到可见到G+G+粗大杆菌，并有杂粗大杆菌，并有杂 菌，镜下白细胞较少形态不规则，是其特点，菌，镜下白细胞较少形态不规则，是其特点，对早期诊断具有对早期诊断具有定意义。不一定见到荚膜定

65、意义。不一定见到荚膜 和芽胞。和芽胞。3 3分离培养本菌对低浓度氧有耐性，生长分离培养本菌对低浓度氧有耐性，生长 迅速，故容易分离。在庖肉培养基中培迅速，故容易分离。在庖肉培养基中培 养养8 8lOhlOh后，转种于血平板。在厌氧环后，转种于血平板。在厌氧环 境培养境培养18h18h，即可挑取菌落进行鉴定。在，即可挑取菌落进行鉴定。在 组织中一般不成芽胞。故病理材料不需组织中一般不成芽胞。故病理材料不需 加热处理。因为加热处理能杀死繁殖体。加热处理。因为加热处理能杀死繁殖体。4 4鉴定鉴定1)形态特征和缺少芽胞，有荚膜特征。形态特征和缺少芽胞，有荚膜特征。2)2)菌落特征和糖发酵反应，特别是菌

66、落特征和糖发酵反应，特别是“汹涌发酵汹涌发酵”现象。现象。3)Nagler3)Nagler试试验验 卵卵磷磷脂脂酶酶具具有有抗抗原原性性，活活性性可可被被抗抗血血清清所所抑抑制制。测测定定时时在在乳乳糖糖卵卵黄黄牛牛乳乳琼琼脂脂平平板板的的半半侧侧涂涂以以产产气气荚荚膜膜梭梭菌菌与与A A型型诺诺维维梭梭菌菌混混合合抗抗毒毒素素，尔尔后后从从未未涂涂抗抗毒毒素素的的侧侧向向涂涂抗抗毒毒素素一一侧侧接接种种待待测测菌菌，厌厌氧氧培培养养18h18h后后观观察察，未未涂涂抗抗毒毒素素一一侧侧菌菌落落周周围围出出现现混混浊浊的的白白环环，而而在在涂涂抗抗毒毒素素一一侧侧生生长长的的菌菌落落无无此此现现象，为象，为NaglerNagler试验阳性。试验阳性。三、肉毒梭菌三、肉毒梭菌 分分8 8个毒素型，其中个毒素型，其中A A、B B、E E、F F型对人致病，型对人致病，A A、D D型最常见。型最常见。广泛存在于自然界，在厌氧条件下产生毒性极广泛存在于自然界，在厌氧条件下产生毒性极强的肉毒毒素。作用于神经肌肉接头处和植物强的肉毒毒素。作用于神经肌肉接头处和植物神经末梢，阻止释放乙酰胆碱，导