标本中未知细菌的分离和鉴定

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1、实验九实验九-十十标本中未知细菌的分离和鉴定标本中未知细菌的分离和鉴定实验目的实验目的掌握脓汁标本中未知细菌的鉴别掌握脓汁标本中未知细菌的鉴别掌握粪便标本中未知细菌的鉴别掌握粪便标本中未知细菌的鉴别实验步骤实验步骤标本采集标本采集分离培养分离培养扩增扩增染色，观察镜下形态结构特征染色，观察镜下形态结构特征生化反应检测生化反应检测血清学实验血清学实验药物（抗生素）敏感实验药物（抗生素）敏感实验实验内容实验内容一、脓汁标本中未知病原菌的分离和鉴定一、脓汁标本中未知病原菌的分离和鉴定二、粪便标本中肠道致病菌的分离和鉴定二、粪便标本中肠道致病菌的分离和鉴定一、脓汁标本中未知病原菌一、脓汁标本中未知病原

2、菌的分离鉴定的分离鉴定脓汁标本检验流程示意图脓汁标本检验流程示意图脓脓 汁汁革兰氏染色，镜检革兰氏染色，镜检血平板琼脂血平板琼脂观察菌落形态及溶血情况观察菌落形态及溶血情况生化反应及致病力试验生化反应及致病力试验（一）标本：含菌棉拭子（一）标本：含菌棉拭子（二）分离方法：（二）分离方法：将棉拭子轻按血琼脂平板，然后用划线将棉拭子轻按血琼脂平板，然后用划线分离法分离，分离法分离，37培养培养24h。菌落圆形、直径约菌落圆形、直径约2mm、凸起、表面光滑、润湿、凸起、表面光滑、润湿、边缘整齐。边缘整齐。金黄色葡萄球菌呈金黄金黄色葡萄球菌呈金黄色，白色葡萄球菌呈白色色，白色葡萄球菌呈白色金黄色葡萄球

3、菌菌落周金黄色葡萄球菌菌落周围有透明溶血环围有透明溶血环白色葡萄球菌：白色色素，无溶血环白色葡萄球菌：白色色素，无溶血环白色葡萄球菌与金黄色葡萄球菌溶血素比较白色葡萄球菌与金黄色葡萄球菌溶血素比较以上为第一次实验，其结果做为操作以上为第一次实验，其结果做为操作考试成绩考试成绩（三）分离、扩增细菌（三）分离、扩增细菌（不做，第一次的量已够）（不做，第一次的量已够）目的：得到纯种细菌后，大量扩增细菌目的：得到纯种细菌后，大量扩增细菌方法方法:斜面培养基斜面培养基液体培养基（最常用）液体培养基（最常用）平板培养基平板培养基以下实验选两种菌落做以下实验选两种菌落做(四四)涂片镜检（选作）涂片镜检（选作

4、）根据菌落特点及溶血情况，取根据菌落特点及溶血情况，取溶血菌落溶血菌落进行革兰氏进行革兰氏染色染色镜下可见：镜下可见：球形，葡萄串状，球形，葡萄串状，G+（五）生化反应（五）生化反应触酶试验：金葡阳性触酶试验：金葡阳性生化管：甘露醇（原理及现象同葡萄糖，金黄色葡萄球生化管：甘露醇（原理及现象同葡萄糖，金黄色葡萄球菌使培养基由紫色变黄色，阳性）菌使培养基由紫色变黄色，阳性）金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验（血浆没金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验（血浆没购买到）购买到）多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可被血浆多数致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可被血浆中的协同因子激活为凝血酶，使含有枸橼酸纳获肝中的协

5、同因子激活为凝血酶，使含有枸橼酸纳获肝素抗凝剂的兔或人血浆中的纤维蛋白原变成不溶性素抗凝剂的兔或人血浆中的纤维蛋白原变成不溶性的纤维蛋白，导致血浆凝固。的纤维蛋白，导致血浆凝固。非致病性葡萄球菌一非致病性葡萄球菌一般不产生此酶。般不产生此酶。血浆凝固酶血浆凝固酶玻片凝集试验玻片凝集试验血清生理盐水抑菌圈抑菌圈（六）药物敏感实验（六）药物敏感实验青霉素青霉素庆大霉素庆大霉素菌必治菌必治环丙沙星环丙沙星抑菌圈抑菌圈（mm）（七）实验结果和意义（七）实验结果和意义上报结果，辅助诊断疾病上报结果，辅助诊断疾病上报药物敏感实验结果，辅助治疗上报药物敏感实验结果，辅助治疗二、二、粪便标本中未知细菌的鉴别粪

6、便标本中未知细菌的鉴别（一）标本：含菌棉拭子（一）标本：含菌棉拭子（二）划线分离（二）划线分离平板：平板：SS平板平板划线分离法：培养划线分离法：培养24h，大肠杆菌菌落红色，变形杆菌菌，大肠杆菌菌落红色，变形杆菌菌落无色透明落无色透明SS平板：肠道杆菌致病性鉴别平板：肠道杆菌致病性鉴别SS平板培养：平板培养：非致病菌：非致病菌：分解乳糖，分解乳糖，PH下降，菌落显红色下降，菌落显红色如大肠杆菌如大肠杆菌致病菌：致病菌：不分解乳糖，不分解乳糖，PH不下降，菌落显无色不下降，菌落显无色如痢疾杆菌、伤寒杆菌如痢疾杆菌、伤寒杆菌大肠杆菌：发酵乳糖大肠杆菌：发酵乳糖 红色菌落红色菌落以上为第一次实验，

7、其结果做为以上为第一次实验，其结果做为操作考试成绩操作考试成绩（三）分离、扩增细菌（不做）（三）分离、扩增细菌（不做）目的：得到纯种细菌后，大量扩增细菌目的：得到纯种细菌后，大量扩增细菌方法方法:斜面培养基斜面培养基液体培养基（最常用）液体培养基（最常用）平板培养基平板培养基以下实验选两种菌落做以下实验选两种菌落做(四四)涂片镜检（选做）涂片镜检（选做）Granms staining镜下可见：镜下可见：杆形，散在排列状，杆形，散在排列状，G（五）生化管（五）生化管乳糖生化管：发酵乳糖反应乳糖生化管：发酵乳糖反应葡萄糖生化管：发酵葡萄糖反应葡萄糖生化管：发酵葡萄糖反应H2S反应管：如菌种（乙型副

8、伤寒沙门菌、变形杆菌）产生反应管：如菌种（乙型副伤寒沙门菌、变形杆菌）产生H2S，则与管内，则与管内Pb发生反应，产生黑色的发生反应，产生黑色的PbS，从而使菌落，从而使菌落变黑变黑尿素生化管：变形杆菌尿素生化管：变形杆菌具有尿素酶，迅速分解尿素，具有尿素酶，迅速分解尿素，PH升高升高穿刺培养：动力实验（不做，示教）穿刺培养：动力实验（不做，示教）无动力无动力 有动力有动力抑菌圈抑菌圈（六）药物敏感实验（六）药物敏感实验青青庆庆菌菌环环抑菌圈抑菌圈（mm）肠道杆菌生化反应的结果判定参考肠道杆菌生化反应的结果判定参考葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖乳糖乳糖乳糖乳糖动力动力动力动力H2SH2S尿素尿素尿素尿素 产酸产产酸产产酸产产酸产气气气气 艾希菌属艾希菌属艾希菌属艾希菌属非致病菌非致病菌非致病菌非致病菌 产酸产酸产酸产酸克雷伯菌属克雷伯菌属克雷伯菌属克雷伯菌属 变形杆菌变形杆菌变形杆菌变形杆菌 乙型副伤寒乙型副伤寒乙型副伤寒乙型副伤寒致病菌致病菌致病菌致病菌 甲型副伤寒甲型副伤寒甲型副伤寒甲型副伤寒伤寒杆菌伤寒杆菌伤寒杆菌伤寒杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌痢疾杆菌