有机物的分离与纯化方法

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1、第 二 章 有 机 化 合 物 的 分 离 与 纯 化方 法v分 离 纯 化 是 有 机 化 合 物 分 析 必 不 可 少 的 过 程v1、 有 机 化 合 物 样 品 分 析 ， 首 先 要 进 行 分 离 纯化 步 骤 ,才 能 达 到 分 析 结 果 准 确 的 目 的 。v2、 不 同 的 有 机 化 合 物 样 品 有 不 同 的 纯 化 方法 。v3、 依 据 样 品 中 有 机 化 合 物 的 性 质 和 杂 质 的性 质 差 别 来 选 择 分 离 纯 化 的 方 法 一 、 固 体 有 机 物 的 纯 化 方 法 简 介v固 体 有 机 化 合 物 一 般 用 重 结 晶

2、法 提 纯 。v1、 提 纯 原 理 v在 某 一 种 溶 剂 中 ， 固 体 有 机 化 合 物 的 溶 解 度随 温 度 变 化 有 较 大 的 变 化 。 在 较 高 温 度 时 的饱 和 溶 液 趁 热 过 滤 除 不 溶 性 杂 质 。 母 液 放 冷 ，在 较 低 温 度 时 有 机 化 合 物 以 晶 体 析 出 ， 过 滤 ，可 溶 性 杂 质 留 在 母 液 中 而 除 去 。v（ 可 反 复 重 结 晶 直 到 提 纯 有 机 化 合 物 熔 点 不变 为 止 ） 。 2、 重 结 晶 的 关 键 因 素v关 键 ： 选 合 适 溶 剂 。v重 结 晶 溶 剂 具 备 条

3、件 ：va.不 与 被 提 纯 成 分 发 生 化 学 反 应vb.被 提 纯 物 与 杂 质 要 有 显 著 溶 解 度 差vc.被 提 纯 物 在 该 溶 剂 中 溶 解 度 随 温 度 变 化 变 化 大vd. 溶 剂 沸 点 适 中 （ 不 高 也 不 低 ）v如 没 有 合 适 的 纯 溶 剂 则 用 混 合 溶 剂 重 结 晶 。 3、 混 合 溶 剂 的 选 择 方 法v ） 确 定 两 种 溶 剂 可 以 互 相 混 溶 ， 一 种 是 良好 溶 剂 ， 一 种 是 不 良 溶 剂 。v如 乙 醇 和 水 ； 苯 和 乙 醇 ； 丙 酮 和 三 氯 甲 烷 等 。v ） 取 0

4、.02g0.03g样 品 溶 解 于 一 定 量（ 1mL） 的 良 好 溶 剂 中 （ 试 管 ） ， 然 后 在 不 断摇 动 下 缓 慢 滴 加 不 良 溶 剂 ， 直 到 出 现 浑 浊 为止 。v ） 记 下 不 良 溶 剂 的 体 积 ， 计 算 得 到 混 合 溶剂 的 组 成 比 例 ， 通 过 重 复 试 验 进 行 适 当 调 整 。 4、 重 结 晶 的 一 般 操 作 步 骤v ） 制 成 饱 和 热 溶 液 （ 接 近 溶 剂 的 沸 点 ）v ） 热 过 滤 （ 除 不 溶 杂 质 ） 。v ） 自 然 冷 却 结 晶v ） 过 滤 晶 体 与 洗 涤 。v ） 干

5、 燥 （ 减 压 或 常 压 ） v ） 标 准 品 多 次 重 结 晶 ， 直 到 m.p 不 变为 止 5、 重 结 晶 操 作 要 点v ） 制 成 饱 和 热 溶 液v选 用 适 当 容 积 的 烧 瓶 ， 将 被 提 纯 物 质 放 入 烧瓶 ， 装 好 回 流 装 置 。v热 浴 温 度 下 缓 慢 滴 加 溶 剂 ， 并 搅 动 ， 使 溶 质在 接 近 容 积 沸 点 时 刚 好 溶 解 ， 立 刻 停 止 滴 加溶 剂 。v记 下 溶 剂 的 体 积 与 溶 质 的 质 量 。v ） 热 过 滤 ： 保 温 漏 斗v或 布 氏 漏 斗 减 压 过 滤 。 6、 重 结 晶 操

6、 作 注 意v ） 结 晶 ： 滤 液 自 然 冷 却 结 晶 （ 密 闭 结 晶 ） 。v 如 果 冷 至 室 温 不 结 晶 ， 则 放 入 晶 种 、 玻 棒 擦 容 器 器壁 、 冰 箱 进 行 结 晶 。v ） 过 滤 与 洗 涤 晶 体 ： 减 压 、 低 温 、 少 量 溶 剂 洗 涤 。v 减 压 过 滤 应 该 在 布 氏 漏 斗 完 全 没 有 液 滴 滴 下 为 止 。v ） 干 燥 方 法 a、 低 熔 点 不 吸 潮 物 质 、 不 易 氧 化 ， 在 空 气 中 干 燥 。 b、 高 熔 点 , 热 稳 定 ， 烘 箱 中 干 燥 c、 热 不 稳 定 ， 或 吸

7、潮 、 或 易 氧 化 ， 低 于 m.p 2030 ， 真 空 干 燥 。 7、 干 燥 程 度 与 纯 度 检 验v ） 恒 重 法 检 验 ， 即 称 重 后 再 干 燥 一 段 时 间 ，看 重 量 是 否 发 生 变 化 。v ） 熔 点 法 检 验 干 燥 程 度 。v ） 纯 度 检 验 用 熔 点 法 ： 与 标 准 样 品 同 时 测熔 点 进 行 比 较 ；v测 一 次 熔 点 后 再 重 结 晶 一 次 ， 再 干 燥 测 熔 点 ，两 次 熔 点 不 变 化 。v纯 度 检 验 还 可 以 用 薄 层 法 检 验 ， 液 相 或 者 气相 色 谱 。 二 、 液 体 有

8、 机 物 分 离 提 纯 方 法v 液 体 有 机 化 合 物 蒸 馏 法v 蒸 馏 法 原 理 ： 依 液 体 混 合 物 中 各 组 分 沸 点 不 同 而分 离 。v 关 键 ： 控 制 温 度 缓 慢 上 升 ， 收 集 不 同 温 度 范 的 围 馏份 。v 蒸 馏 方 法 分 类 ： 常 压 蒸 馏 适 用 于 b.p较 低 ， 在 b.p时 不 分 解 的 物 质 。 减 压 蒸 馏 适 用 于 b.p较 高 ， 或 在 b.p发 生 分 解 的 物 质 。 水 蒸 气 蒸 馏 适 用 于 不 与 水 反 应 ， b.p较 高 的 物 质 。 、 常 压 蒸 馏 ） 装 置 不

9、扭 、 歪 、 漏 ） 温 度 计 水 银 球 位 置 ） 加 沸 石 ） 容 器 中 液 体 体 积 ） 热 源 选 择 ） 馏 出 速 度 v = 2 D/S ） 液 体 的 干 燥v 液 体 含 水 ： 干 燥 剂 脱 水 后 蒸 馏 （ 干 燥 剂 不 可 进 入 蒸馏 体 系 ） （ 容 量 与 速 度 ）v 干 燥 剂 种 类 及 性 能 ：v CaO 中 、 碱 性 化 合 物 可 用 ， 脱 水 力 强 。v CaCl2 卤 烃 、 烃 、 酯 、 醚 可 用 （ 醇 、 酸 不 可 用 ） 脱 水 力 强 。v Na2 SO4 多 数 溶 剂 可 用 ， 脱 水 能 力 不

10、强 。v K2 CO3 碱 性 化 合 物 、 醇 、 酯 脱 水 力 较 强 。v P 2 O5 卤 烃 、 烃 （ 醇 、 酸 不 可 用 ） ， 脱 水 力 强 。v NaOH 饱 和 烃 、 肼 、 胺 （ 酸 性 物 质 不 可 用 ）v 分 子 筛 多 数 可 用 ， 脱 水 力 强 。 、减压蒸馏 ） 减 压 蒸 馏 的 原 理液 体 的 沸 点 随 液 面 压 强 降 低 而 降 低 。v对 沸 点 和 压 强 进 行 估 算 。过 如 下 途 径 进 行 估 算 。v ） 查 T-P关 系 图A线 标 减 压 沸 点 数 据 ，B线 正 常 压 强 沸 点C线 压 强 刻 度

11、 （ mmHg). A B C沸点低压强小压强大 ） 用 近 似 公 式 估 算v用 近 似 公 式 lgP=A+B/Tv P 蒸 汽 压 ;v T 绝 对 温 度 ;v A 、 B为 常 数 （ 可 以 通 过 化 合 物 物 理 性 质 手册 或 者 化 工 手 册 查 阅 ） ） 减 压 蒸 馏 装 置v 仪 器 装 置v 带 橡 皮 套 的 毛 细 管 、 容 积=1/2V、 不 用 平 底 接 受 器v 减 压 泵v （ 水 泵 7-20mmHg） 机 械泵 （ 油 泵 ） 0.1mmHg （ 要连 接 吸 收 装 置 ）减压蒸馏装置图注 意 ： 负 压 与 正 压操 作 一 样 要

12、 带 护 目镜 防 爆 ！ ） 减 压 蒸 馏 操 作 步 骤v A、查 蒸 馏 系 统 可 否 达 应 有 真 空 度 开 始 ： 关 安 全 瓶 活 塞 ， 紧 毛 细 管 螺 丝 夹 ， 开 抽 气 泵 ， 压 力 达 要 求 。 停 止 ： 慢 慢 打 开 安 全 瓶 活 塞 ， 压 力 与 外 界 平 衡 ， 松 毛 细 管 螺 丝 夹 ， 关 抽 气 泵 。v B、 加 液 料 、 关 活 塞 、 开 抽 气 、 调 毛 细 （ 气 泡 与 线 ） 、 达 到 压 力后 （ 平 衡 、 稳 定 ） 再 加 热 。v C、 热 源 温 高 于 b.p20-30 ， 压 力 不 稳 调

13、 热 源 。v 馏 出 速 度 0.51D/S v D、 多 组 分 蒸 馏 ： 馏 出 温 度 上 升 时 转 换 接 收 器 （ 使 用 多 头 接 受 器 ） 。v E、 蒸 馏 完 后 先 撤 热 源 、 再 开 活 塞 ， 压 力 平 衡 后 关 气 泵 与 打 开毛 细 管 夹 。 可旋转多用接头 、 旋 转 浓 缩 蒸 馏 法v一 般 用 于 提 取 液 浓 缩v ） 浓 缩 原 理v使 溶 剂 在 瓶 壁 形 成 一 层 薄 膜 ， 扩 大 蒸 馏面 积 ， 提 高 蒸 馏 速 度 。v ） 应 用 条 件v压 力 400600mmHgv转 速 50160转 /分 。 ） 操

14、作 步 骤 ：va、 装 好 仪 器vb、 调 热 浴 温 度 高 于 b.p10 以 上vc、 冷 却 水 接 蛇 形 冷 凝 管 （ 低 于 b.p20 ）vd、 接 真 空 泵 （ 不 低 于 300mmHg）ve、 加 热 、 开 自 动 加 液 旋 塞 ，vf、 开 动 电 机 使 旋 转 ， 收 集 馏 出 液 。v g、 关 电 机 、 除 热 源 、 关 加 液 旋 塞 、 压力 平 衡 停 抽 气 、 水 蒸 汽 蒸 馏v ） 主 要 用 途v 沸 点 比 较 高 ， 容 易 热 分 解 ， 或 者 糊 状 混 合 物 中 的 成分 。v ） 蒸 馏 原 理v 混 合 体 系

15、 中 总 的 蒸 汽 压 等 于 各 组 分 蒸 汽 分 压 之 和 。 被 蒸 馏 体 系 接 近 100 时 ， 水 的 蒸 汽 压 接 1atm， 故被 蒸 馏 的 物 质 蒸 汽 可 以 和 水 蒸 气 合 计 等 于 1atm， 从而 在 接 近 100 从 混 合 物 被 蒸 馏 出 来 。v ） 必 须 满 足 的 条 件 ： v 不 与 水 反 应v 在 100 时 不 低 与 5mmHg的 蒸 汽 压 ） 水 蒸 气 蒸 馏 操 作v 水 蒸 气 蒸 馏 操 作 与 常 压 蒸 馏 操 作 类 似 ， 其 装 置 比 常压 蒸 馏 装 置 多 一 个 水 蒸 气 发 生 器

16、。水蒸气发生器T形管安全管 三 、 柱 层 析 分 离 （ 固 液 ） 有 机 物v1、 柱 层 析 技 术 用 途v架 设 一 个 带 活 塞 的 玻 璃 柱 ， 填 入 吸 附 剂 ， 可以 用 于 分 离 混 合 物 是 分 离 混 合 物 的 重 要 方 法 。 v2、 柱 色 谱 的 几 种 技 术 指 标 直 径 与 长 度 比 ： 1： 101： 40 短 而 粗 的 柱 子 ， 分 离 快 ， 分 离 效 果 差 长 而 细 的 柱 子 ， 分 离 慢 ， 分 离 效 果 好色 谱 柱 的 分 离 效 果 还 与 吸 附 剂 和 洗 脱 剂 的 选 择 、柱 子 的 装 填 质

17、 量 有 关 。 3、 柱 层 析 原 理 与 分 类v ） 原 理 ： 混 合 物 被 束 缚 在 色 谱 柱 的 固 定 相上 ， 流 动 相 自 上 而 下 流 经 固 定 相 ， 带 动 被 分离 组 分 向 下 移 动 。 与 固 定 相 作 用 力 大 的 组 分在 流 动 过 程 中 留 在 了 后 面 ， 与 固 定 相 作 用 力小 的 组 分 在 流 动 过 程 中 跑 在 了 前 面 （ 略 ） ，v ） 柱 层 析 分 类 ： 吸 附 、 分 配 、 凝 胶vA、 吸 附 色 谱 柱 ： 吸 附 剂 固 体 表 面 吸 附 各 成 分 。vB、 分 配 色 谱 柱 ：

18、惰 性 载 体 表 面 涂 高 沸 点 液 体 ，被 分 离 物 在 淋 洗 剂 与 高 沸 点 液 体 之 间 溶 解 分配 。vC、 凝 胶 色 谱 柱 ： 多 凝 胶 填 粒 、 淋 洗 ， 凝 胶 网眼 大 小 筛 分 不 同 尺 寸 的 分 子 4、 吸 附 柱 的 装 填 要 求v吸 附 剂 要 装 填 均 实 ， 淋 洗 剂 等 速 水 平 下 降 ，分 离 效 果 好 。v ） 干 装 ： 先 装 洗 脱 剂 于 柱 内 ， 吸 附 剂 通 过漏 斗 直 接 装 入 盛 有 洗 脱 剂 的 色 谱 柱 （ 边 装 边敲 ） ， 最 后 应 使 吸 附 剂 上 有 一 薄 层 溶

19、 剂 。v为 保 持 柱 上 有 平 整 表 面 ， 最 上 层 可 加 石 英 砂 。v ） 湿 装 ： 先 装 洗 脱 剂 于 柱 内 ， 用 淋 洗 剂 调成 糊 状 的 吸 附 剂 慢 慢 加 入 ， 慢 慢 沉 降 。 最 后应 使 吸 附 剂 上 有 一 薄 层 溶 剂 。 亦 应 边 加 边 敲 。 5、 吸 附 剂 的 分 类v吸 附 剂 种 类 ： 氧 化 铝 、 硅 胶 、 弗 罗 里 硅 土 、 纤维 素 、 氧 化 镁 、 碳 酸 钙 、 活 性 碳 等 。v吸 附 剂 的 要 求 ： 对 被 吸 附 物 有 一 定 的 作 用 ， 与被 吸 附 物 ， 淋 洗 剂 无

20、 化 学 反 应 。v吸 附 能 力 ： 与 颗 粒 粗 细 有 关 ， 粗 则 流 速 快 ， 分离 效 果 差 ； 粗 则 流 速 慢 ， 分 离 效 果 好 。v氧 化 铝 分 类 ： 酸 性 、 中 性 、 碱 性 三 种v酸 性 ： HCl浸 泡 ， 蒸 馏 水 洗 pH4 . ，用 于 分 离 酸 性 物 质v中 性 ： pH为 . 左 右 ， 用 于 分 离 中 性 物 质v碱 性 ： pH ， 用 于 分 离 碱 性 物 质 或 烃 类 。 6、 吸 附 剂 的 活 性v 含 水 量 越 低 活 性 越 高 。v氧 化 铝 依 含 水 量 分 为 五 级 ， 含 水 量 分 别

21、 为 ； ； ； ； v硅 胶 五 级 对 应 含 水 量 为 ； ； ； ； v 一 般 制 备 方 法 ： 烘 至无 水 （ 小 时 ） 加 入 相 应 水 量 得 相 应 级 别 。v 极 性 越 强 吸 附 力 越 大 。 7、 常 见 吸 附 剂 的 处 理v中 性 氧 化 铝 ： 活 化 h， 使 用 前130 活 化 5h， 可 保 一 周 ， 过 期 重 新 活 化 ； 时 中 性 变 碱 性 。 吸 附 色 素 最 佳 。v硅 胶 ： 水 玻 璃 加 盐 酸 ， 沉 淀 脱 水 得 无 定 形 多孔 物 质 。 表 面 Si-OH称 硅 醇 ， 与 不 饱 和 化 合 物或

22、极 性 基 形 成 氢 键 而 吸 附 ； Si-O-Si氧 桥 可 水解 ， 称 溶 解 度 ， pH = 以 上 显 著 ， 故 不 可 用强 碱 性 淋 洗 液 ；v硅 胶 层 析 性 能 与 多 孔 骨 架 及 坑 穴 体 系 密 切 相关 ， 加 热 有 变 。 活 化 温 度 不 超 过 。130 活 化 h备 用 。 用 于 有 机 氯 有 机 化 合 物分 离 。 8、 混 合 吸 附 剂 柱v用 混 合 吸 附 剂 装 柱 柱 可 以 用 于 纯 化 多 种 杂 质的 样 品 。 不 同 的 有 机 化 合 物 样 品 的 提 纯 用 不同 的 混 合 柱 。 常 见 混 合

23、 柱 如 下 。v活 性 碳 氧 化 镁 ， 用 于 有 机 磷 有 机 化 合 物 分离 。v活 性 碳 纤 维 素 ， 由 于 有 机 磷 ， 有 机 氯 有 机化 合 物 分 离 。v弗 罗 里 硅 土 中 性 氧 化 铝 酸 性 硅 藻 土 ， 用于 植 物 食 品 中 有 机 氦 有 机 化 合 物 净 化 ；v活 性 碳 中 性 氧 化 铝 ， CHCl3淋 洗 由 于 提 纯有 机 磷 有 机 化 合 物 。 9、 淋 洗 剂 选 择v ） 极 性 递 增 顺 序 ：v R-X C=C R-OCH3 R-CO2R R2C=O v R-CHO R-SHR-NH2 R-OHR-CO

24、2Hv ） 吸 附 力 与 淋 洗 剂 性 质 有 关 。v 选 淋 洗 剂 时 应 考 虑 被 洗 脱 物 质 的 极 性 与 溶 解 度 。v 极 性 大 的 化 合 物 用 极 性 大 的 淋 洗 剂 洗 脱 ；v 极 性 小 的 化 合 物 用 小 极 性 淋 洗 剂 洗 脱 ；v 几 种 极 性 差 别 大 的 混 合 物 用 几 种 不 同 极 性 的 淋 洗 剂 分批 洗 脱 。 v 亦 可 以 用 混 合 淋 洗 剂 。 10、 淋 洗 剂 洗 脱 能 力 与 洗 脱 要 点v ） 常 用 淋 洗 剂 洗 脱 能 力 ： v正 己 烷 CCl4 C6H5-CH3 C6H6 CH

25、2Cl2 CHCl3 Et 2O CH3CO2C2H5 Me2CO C3H7OH MeOH H2O v ） 淋 洗 要 点 ： 连 续 不 断 ， 不 快 不 慢 ， 吸附 剂 不 露 出 液 面 。v ） 淋 洗 速 度 V=1 滴 /S为 宜 。v洗 脱 快 则 交 换 不 平 衡 ；v洗 脱 慢 则 具 有 大 表 面 的 吸 附 剂 使 某 些 成 分破 坏 。 ） 淋 洗 曲 线v分 段 收 集 标 准 品 洗 脱 液 进 行 含 量 分 析 ， 绘 成的 淋 洗 剂 体 积 样 品 含 量 曲 线 。v用 途v使 要 收 集 的 组 分 尽 可 能 收 集 完 全 ， 无 色 化

26、合物 用 标 准 品 进 行 实 验 。 分 段 收 集 洗 脱 液 进 行含 量 分 析 ， 绘 成 曲 线 。v确 定 淋 洗 过 程 应 收 集 的 洗 脱 液 体 积 。可 以 确 定 淋 洗 所 需 溶 剂 。 含量淋洗剂体积 11、 分 配 柱 与 凝 胶 渗 透 柱 层 析 法v分 配 柱 层 析 法 ： 把 有 机 氯 有 机 化 合 物 从 极 性小 的 有 机 化 合 物 样 品 中 分 配 到 极 性 大 的 溶 剂中 去 。 主 要 分 离 含 脂 肪 、 蜡 质 试 样 的 有 机 氯 。v凝 胶 渗 透 柱 层 析 法 ： 用 凝 胶 sephadex LH-20作

27、 有 机 磷 有 机 化 合 物 .分 离 净 化 。v被 纯 化 物 质 的 分 子 量 范 围 ： 有 机 磷 200-400；色 素 500-900。 用 118g葡 聚 糖 LH-20装 柱 。 乙醇 或 丙 酮 淋 洗 ； 淋 洗 速 度 V=4.5ml/h。v多 数 有 机 磷 （ .水 平 0.050.005ppm） 淋 洗体 积 在 305428ml； 回 收 率 可 达 66-98%。 六 ） 薄 层 色 谱 分 离 提 纯v比 柱 色 谱 更 加 应 用 广 泛 的 分 离 分 析 手 段 。v用 于 分 离 提 纯 具 有 简 单 快 速 的 特 点 。 分 离容 量 不

28、 及 柱 色 谱 大 ， 效 果 也 不 及 柱 色 谱 好 。v薄 层 分 类 ： 吸 附 与 分 配 色 谱 ，v分 配 色 谱 又 分 正 相 色 谱 与 反 相 色 谱 。v正 相 ： 含 水 吸 附 剂 （ 固 定 相 ） ， 弱 极 性 流动 相 ， 极 性 小 的 移 动 快 。v反 相 ： 钝 化 吸 附 剂 （ 固 定 相 ） ， 强 极 性 流动 相 ， 极 性 强 的 移 动 快 。 薄 层 吸 附 色 谱v 1、 固 定 相 ： 硅 胶 、 氧 化 铝 活 化 。v a加 石 膏 为 G型 ， 不 加 为 H型 ， 加 荧 光 剂 为 GF或 HFv b正 相 分 配

29、色 谱 ： 纤 维 素 或 用 缓 冲 水 溶 液 处 理 过 的硅 胶 、 或 用 极 性 有 机 溶 剂 处 理 过 的 硅 胶 。v C、 反 相 分 配 色 谱 固 定 相 ： 用 硅 酮 、 石 蜡 等 非 极 性溶 剂 处 理 过 的 硅 胶 或 纤 维 素 。v D、 薄 层 涂 层 ： 薄 层 自 然 晾 干 后 进 行 活 化 。v E、 活 化 温 度 与 时 间 ： v 硅 胶 板 105-120 ， 1h；v 氧 化 铝 板 ： 70 ， 40min。 2、 吸 附 剂 选 择吸 附 剂 用 途 吸 附 剂 用 途硅 胶 吸 附 ， 分 配 氧 化 铝 吸 附 ， 分

30、配硅 藻 土 分 配 纤 维 素 分 配氢 氧 化 钙 吸 附 聚 酰 胺 吸 附离 子 交 换 树 脂 离 子 交 换 氧 化 镁 吸 附 ， 分 配吸 附 剂 粒 度 的 要 求 ： 5-50 m。粒 度 太 大 推 进 快 ， 影 响 分 离 ；粒 度 太 小 则 展 开 慢 ， 出 现 拖 尾 或 横 向 扩 散 过 度。 3、 制 备 薄 层 板 的 参 数v 薄 层 板 规 格v 20 20cm， 20 15cm， 10 20cm， 10 15cm，7.5 20cm， 7.5 15cm， 5 20cm， 5 15cm。v 制 板 ： 皂 液 洗 净 ， 烘 干 备 用 。v 浆 液

31、 与 活 化v 硅 胶 G:水 =1:2（ W W） ， 110-130 ， 1hv 氧 化 铝 G:水 =1:11:3 （ W W） ， 80-100 /30minv 硅 藻 土 G:水 =1:2 （ W W） ， 110 ， 30min v 纤 维 素 粉 :95%乙 醇 （ 丙 酮 ） =1:51:6 （ W W） ，100 ， 3-5min v 聚 酰 胺 :甲 醇 =1:41:6 （ W W） ，60-70，1h。 4、薄 层 板 的 制 备v 制 浆 ： 按 照 比 例 将 吸 附 剂 和 相 应 的 液 体 加 入 烧 杯 ，搅 拌 均 匀 。v 铺 板 ： 一 般 将 均 匀

32、浆 液 适 量 倒 在 薄 板 上 ， 两 手 指夹 薄 板 两 侧 ， 旋 转 倾 斜 ， 让 浆 液 在 薄 板 上 流 均 匀 ，也 可 以 适 度 敲 击 震 荡 ， 使 浆 液 流 平 。v 或 者 将 两 板 贴 紧 ， 插 入 浆 液 中 ， 在 提 起 ， 让 多 余浆 液 流 下 ， 一 次 可 以 制 备 两 块 板 。v 还 有 用 涂 布 器 铺 板 的 。v 薄 板 铺 好 后 置 平 台 自 然 晾 干 ， 活 化 备 用 。 5、 展 开 剂 选 择v与 淋 洗 剂 标 准 一 致 。 官 能 团 极 性 如 下：vRHRClCH=CH2ROCH3RNO2vRNM

33、e2RCOCH3RCO2RR2C=OvRCHORSHRNH2RNHCORvROHRCONH2RCO2Hv一 般 单 一 展 开 剂 没 有 很 适 合 的 极 性 ， 多 用相 容 的 展 开 剂 混 合 ， 以 调 节 展 开 剂 极 性 。 6、被 分 离 物 质 、 淋 洗 （ 展 开 剂 ） 及固 定 相 的 极 性 选 择 关 系v 圆 弧 内 三 角 形 可 以 绕 圆 心 转 动 ， 其 三 个 角 顶 点 分 别指 向 三 类 物 质 的 极 性 区 限 。 采 用 混 合 溶 剂 调 节 极 性 。v 弧 线 A代 表 吸 附 剂 的 活 性 ，弧 线 B代 表 展 开 剂

34、的 极 性 ，弧 线 C代 表 被 分 离 物质 极 性 ， 都 顺 箭 头 方 向 增 大 。三 角 形 的 三 个 角 所 指 位 置是 三 者 的 关 系 。 A B C 7、一 般 薄 层 色 谱 实 验 操 作v点 样 展 开 显 色 计 算 Rf值v点 样 ： 在 距 薄 板 下 沿 1cm处 的 水 平 线 上 ， 毛 细管 口 液 滴 与 薄 层 表 面 相 切 ， 切 忌 玻 璃 管 戳 破 薄层 ， 可 以 重 复 点 样 。v展 开 ： 薄 层 板 下 沿 水 平 插 入 层 析 缸 ， 展 开 剂 不能 淹 没 样 点 ， 缸 内 充 满 展 开 剂 蒸 汽 ， 要 盖

35、 上 盖子 ， 展 开 剂 水 平 线 上 升 ， 接 近 薄 层 上 沿 时 为 止 。v显 色 ： 大 多 物 质 要 进 行 物 理 或 者 化 学 方 法 显 色 。v薄 层 板 从 层 析 缸 取 出 ， 在 展 开 剂 前 沿 作 一 记 号 ，待 展 开 剂 挥 发 干 后 显 色 。v物 理 方 法 ： 紫 外 灯 照 射 ； 碘 蒸 汽 熏 蒸 等 。 v化 学 方 法 ： 可 以 产 生 有 色 物 质 的 反 应 。 几 种 点 样 方 法v直 接 点 样v离 下 沿 1.5-2.0cm处 毛 细 管 分 次 点 样 0.3 cm。v间 接 点 样v打 孔 器 打 滤 纸

36、 片 2-3mm直 径 ， 试 液 点 满 纸 片 ，晾 干 ； 打 孔 器 打 薄 层 2-3mm的 孔 ， 纸 片 嵌 入 。v试 样 液 用 打 孔 器 打 下 的 吸 附 剂 吸 收 ， 干 后 填入 孔 中 ；v薄 层 上 挖 一 条 水 平 沟 槽 ， 试 样 液 用 吸 附 剂 吸收 ， 干 后 填 入 沟 槽 （ 展 开 后 是 平 行 带 状 ） 8、等 温 吸 附 线 与 分 离 效 果 的 关 系v 恒 温 下 以 展 开 相 浓 度 为 横 坐 标 ， 吸 附 相 浓 度 为 纵 坐标 作 图 ， 得 到 等 温 吸 附 曲 线 。v 曲 线 中 ， A物 质 斜 率

37、大 ， 被 吸 附 作 用 强 ， 展 开 速 度慢 ， Rf值 小 。 v 是 理 想 状 况 ， 显 色 后 是 标 准 圆 斑 ；v 和 出 现 “ 拖 尾 ” 现 象 ， 分 离 效 果 不 好 。 、 A B BA A B BA A B BA 9、 影 响 Rf的 因 素v 薄 层 厚 度v 吸 附 剂 种 类 、 活 度 、 展 开 剂 极 性 、 展 层 的 饱 和 度v 展 开 方 法 ： 一 般 不 加 黏 合 剂 ， 薄 板 水 平 展 开 。v 单 向 上 行 一 次 展 开 ， 倾 角 70-80v Rf值 接 近 的 物 质 要 多 次 单 向 展 开 。 每 次 可

38、 用 同 一 展开 剂 ， 也 可 不 同 的 展 开 剂 。v 双 向 展 开 法 ： 用 正 方 形 薄 板 ， 展 开 剂 一 次 走 到 上 沿后 取 出 风 干 ， 旋 转 90 后 再 展 开v 边 缘 效 应 ： 溶 剂 前 沿 线 一 般 朝 下 弯 造 成 Rf不 准 ， 且使 色 斑 大 小 及 形 状 不 规 则 v 显 色 是 配 合 薄 层 进 行 鉴 别 。 四 、 扫 集 共 蒸 馏 法v1、 分 离 原 理 ： 将 试 样 用 注 射 器 注 入 事 先 填 入的 无 吸 附 性 的 填 充 剂 （ 玻 璃 棉 、 玻 璃 珠 、 海砂 等 ） 的 净 化 柱

39、内 ， 在 规 定 温 度 下 ， 有 机 化合 物 和 溶 剂 蒸 汽 随 氮 气 流 进 冷 凝 管 ， 冷 凝 后进 入 接 收 器 。 脂 肪 、 色 素 不 能 汽 化 的 杂 质 沉积 在 柱 内 填 充 剂 上 ， 使 杂 质 得 以 分 离 。v2、 用 途 ： 用 于 有 机 磷 、 有 机 氮 有 机 化 合 物 的分 离 提 纯 。v 3、 构 成 部 件 ： 柱 温 箱 、 温 度 控 制 器 、 载 气流 量 控 制 器 、 自 动 淋 洗 装 置 、 净 化 柱 、 冷 凝管 、 冷 阱 、 收 集 器 。 五 、 低 温 冷 冻 分 离 法v食 品 中 有 机 化

40、 合 物 .的 分 析 ， 取 样 后 .有 机 化合 物 与 大 量 的 脂 肪 、 蜡 质 混 合 在 一 起 ， 给 分离 造 成 困 难 。v由 于 动 植 物 组 织 中 的 脂 肪 、 蜡 质 可 以 在 低 温下 于 丙 酮 溶 液 中 生 成 沉 淀 ， 将 样 品 用 丙 酮 反复 萃 取 ， 萃 取 液 经 过 冷 冻 ， 过 滤 而 分 离 掉 脂肪 、 蜡 质 沉 淀 ， 而 有 机 化 合 物 留 在 丙 酮 中 。v冷 冻 温 度 一 般 在 -70 六 、 液 相 萃 取 法v1、 萃 取 原 理 ： 一 组 互 不 相 溶 的 溶 剂 中 溶 有 某一 成 分

41、溶 质 。 这 种 溶 质 以 一 定 比 例 （ 浓 度 比 ）在 两 相 中 分 配 。 两 相 中 分 配 比 称 分 配 系 数 。利 用 同 组 溶 剂 中 各 物 质 分 配 系 数 不 同 或 同 种物 质 在 不 同 溶 剂 组 中 分 配 系 数 不 同 而 分 开 。（ 选 择 合 适 溶 剂 ， 反 复 分 配 ）v2、 等 容 一 次 分 配 ： 一 组 等 容 互 不 相 溶 的 溶 剂中 加 入 某 一 溶 质 ， 平 衡 后 弱 极 性 溶 剂 中 有 机化 合 物 比 值 是 P； 强 极 性 溶 剂 中 比 值 是 Q; v显 然 P+Q=1， 两 相 浓 度

42、 比 为 P/Q。 3、 等 容 多 次 分 配 与 不 等 容 分 配v取 几 份 等 体 积 强 极 性 溶 剂 在 1份 弱 极 性 溶 剂中 萃 取 几 次 后 ， 弱 极 性 溶 剂 中 溶 质 含 量 是Pn ,强 极 性 溶 剂 中 溶 剂 含 量 是 1- Pn 。v不 等 容 一 次 分 配 ： 设 弱 极 性 溶 剂 体 积 是 强极 性 体 积 的 倍 。 依 定 义 ， 一 次 分 配 后 弱极 性 溶 剂 中 含 量 是 P， 强 极 性 溶 剂 中 含量 为 Q； 弱 极 性 溶 剂 中 所 含 有 机 化 合 物 占有 机 化 合 物 总 量 比 例 为 ： P/

43、（ Q+ P） 。v用 此 比 例 式 可 以 计 算 两 相 的 有 机 化 合 物 含量 。v设 P=0.7 Q=0.3因 两 相 浓 度 比 不 变 。 设0.7的 相 用 2倍 体 积 ， 则 有 0.7的 液 相 中 含 有 2 0.7/（ 0.3+ 2 0.7） = 1.4/1.7 七 、 化 学 提 纯 法v 化 学 净 化 法 是 使 杂 质 与 某 种 试 剂 发 生 化学 反 应 除 掉 或 者 消 除 干 扰 。v .有 机 化 合 物 提 取 液 干 扰 分 析 成 分 很 大程 度 是 脂 肪 与 色 素 。v 最 常 用 的 化 学 净 化 法 是 用 酸 处 理

44、对 酸 稳定 的 有 机 化 合 物 或 用 碱 处 理 对 碱 稳 定 的有 机 化 合 物 来 除 杂 。v 1、 酸 净 化 ： 用 浓 H2SO4或 浓 H2SO4与 发烟 硫 酸 （ 1： 1） 混 合 液 在 分 液 漏 斗 中 处理 萃 取 液 ， 可 以 除 脂 肪 、 色 素 。 v 浓 硫 酸 净 化 原 理v 不 饱 和 脂 肪 ， 色 素 中 含 有 C=C， 可 以 和 浓H2SO4加 成 生 ， 成 可 溶 于 浓 H2SO4的 化 合物 而 除 去 。 R R H2SO4 R R OSO3H 硫 酸 除 杂 注 意 事 项v ） 对 酸 不 稳 定 的 有 机 化

45、 合 物 如 有 机 磷 、 氨基 甲 酸 酯 不 可 用 。v ） 酸 体 积 与 提 取 液 体 积 之 比 为 1： 10； 一 般净 化 两 次 。v ） 提 取 液 脱 水 不 完 全 或 潮 天 加 发 烟 H2SO4效 果 较 好 ；v ） 防 乳 化 ： 第 一 次 净 化 轻 摇 ， 第 二 次 净 化猛 摇 ， 已 乳 化 可 以 加 水 消 乳 八 、 固 相 萃 取 技 术（ solid phase extraction SPE)vSPE的 基 本 模 式v基 本 原 理 是 样 品 在 两 相 的 差 异 ， 即 在 固 相和 液 相 分 配 系 数 不 同 。 保

46、留 或 洗 脱 的 机 制取 决 于 被 分 析 物 与 固 相 表 面 活 性 基 团 ， 以及 被 分 析 物 与 液 相 之 间 分 子 作 用 力 。 两 种 洗 脱 模 式v一 种 是 被 分 析 物 与 固 相 之 间 的 亲 和 力 比 其 与所 存 在 的 生 物 介 质 的 亲 和 力 更 强 ， 因 而 被 保留 。 用 一 种 亲 和 力 更 强 的 洗 脱 液 洗 脱 。v另 一 种 是 存 在 的 生 物 介 质 与 固 相 亲 和 力 更 强 ，用 溶 剂 直 接 洗 脱 。v现 代 SPE方 法 采 用 长 约 2 3cm的 聚 丙 烯 小柱 ， 内 装 各 种

47、填 料 ， 两 端 装 有 烧 结 片 或 多 孔圆 片 ， 可 以 经 过 加 压 或 抽 负 压 的 方 法 使 液 体经 过 小 柱 。 SPE操 作 步 骤v1.用 甲 醇 湿 润 小 柱 ， 活 化 填 料 ， 使 固 相 表 面 易于 和 被 分 析 物 发 生 分 子 间 相 互 作 用 ， 同 时 除去 填 料 中 可 能 存 在 的 杂 质 。vC18柱 在 甲 醇 含 量 大 于 8%的 水 溶 液 中 才 能 保持 湿 润 有 利 于 物 质 吸 附 。v2.用 水 或 适 当 的 缓 冲 溶 液 冲 洗 小 柱 ， 转 移 过多 甲 醇 ， 以 便 样 品 和 固 体

48、表 面 发 生 作 用 。 清洗 不 宜 过 分 ， 否 则 是 甲 醇 含 量 过 低 ， 从 而 导致 湿 润 度 不 够 。 SPE操 作 步 骤v3.加 样 ， 使 样 品 经 过 小 柱 。v4.用 水 或 适 当 缓 冲 溶 液 冲 洗 小 柱 ， 转 移 样 品中 内 原 性 杂 质 和 其 它 相 关 杂 质 。v5.选 择 适 当 的 洗 脱 液 洗 脱 被 分 析 物 ， 收 集 洗脱 液 ， 挥 发 干 溶 剂 后 备 用 ， 或 直 接 在 线 分 析 。 SPE填 料v可 以 用 于 SPE的 填 料 很 多 ： 活 性 炭 、 硅 胶 、 硅藻 土 、 硅 酸 镁 、 氧 化 镁 、 氧 化 铝 等 。v化 学 键 合 硅 胶 ， 用 于 正 相 的 有 ： 氨 基 、 腈 基 、二 醇 基 等 。v化 学 键 合 硅 胶 ， 用 于 反 相 的 有 ： C1 、 C2 、 C6、 C8 、 C18、 环 己 基 等 。v离 子 交 换 的 有 ： 季 铵 盐 、 氨 基 、 二 氨 基 、 苯磺 酸 基 、 羧 基 等 。 v聚 合 物 类 ： 苯 乙 烯 二 乙 烯 基 苯 共 聚 物