《抗生素类药物分析》PPT课件

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1、第 十 一 章 第 一 节 概 述抗 生 素 的 定 义 抗 生 素 是 细 菌 、 放 线 菌 和 真菌 等 微 生 物 的 代 谢 产 物 ， 对 各 种病 原 微 生 物 有 强 大 的 抑 制 或 杀 灭作 用 。 抗 生 素 的 来 源1. 生 物 合 成 （ 发 酵 ） 2. 化 学 合 成 或 半 合 成 抗 生 素 质 量 的 复 杂 性 产 品 稳 定 性 差 分 子 结 构 大 多 不 稳 定 ， 降 解 后 疗 效 下降 、 失 效 或 增 加 毒副 作 用发 酵 过 程 不 易 控 制易 受 污 染生 产 工 艺 复 杂 发 酵 液 中 杂 质 无 机 盐 、 脂 肪

2、、 各 种 蛋 白 质 、各 种 降 解 产 物 、 色 素 、 热 原 、毒 性 物 质 增 加 异 常 毒 性 、 细 菌 内 毒 素 、热 原 、 降 压 物 质 、 无 菌 检 查 含 量 测 定 方 法（ 一 ） 生 物 学 方 法测 定 抗 生 素 抑 菌 或 杀 菌 的 能 力优 点 1、 与 临 床 效 果 一 致2、 灵 敏 度 高3、 干 扰 物 质 少缺 点 1、 操 作 繁 琐2、 培 养 时 间 长2、 测 定 误 差 大 （ 二 ） 化 学 及 物 理 化 学 方 法以 理 化 方 法 测 定 主 药 含 量优 点 1. 准 确 度 高2. 简 单 、 快 速1.

3、不 一 定 代 表 生 物 效 价缺 点 2. 易 受 杂 质 干 扰 分 类 （ 按 结 构 与 性 质 ） ： 内 酰 胺 类 、 氨 基 糖 苷 类 、 四 环 素 类 、 大 环 内 酯 类 、 氯 霉 素 类 、 多 肽 类 、 抗 肿 瘤 类 林 可 霉 素 类 、 其 他 抗 生 素 类 N S CH3CH3COOHOHN 1 234567RCO母 核 （ 6-氨 基 青 霉 烷 酸 ）第 二 节 内 酰 胺 类 抗 生 素 青 霉 素 类 头 孢 菌 素 类7 6 5 4 321NONH S CH2R1COOH母 核 （ 7-氨 基 头 孢 菌 烷 酸 ）RCO CO N SO

4、HN COOHCH3CH3CH2 青 霉 素（ 青 霉 素 G、 苄 青 霉 素 ） NH2 CO N SOHN COOHCH3 CH3CH2 氨 苄 西 林（ 氨 苄 青 霉 素 ） 阿 莫 西 林（ 羟 氨 苄 青 霉 素 ）NH2 CO N SOHN COOHCH3CH3HO CH2 C2H5 2NCH2CH2OOCN SOHN COOHCH3CH3OCCH2 NH2普 鲁 卡 因 青 霉 素 头 孢 氨 苄 NONH S CH3COOHOCNH2CH2 头 孢 拉 定CH2NH2 CO NONH S CH3COOH 头 孢 羟 氨 苄 NONH S CH3COOHOCNH2CH2HO

5、头 孢 噻 吩 钠S CH2 CO NONH S CH2OCOCH3COONa N SOHN COOKCH3CH3OCCH2 酸 性结 构 与 性 质一 、 Na与 碱 金 属 (Na+、 K+)成 盐 （ 一 ） 羧 基 易 溶 于 水 与 有 机 碱 (普 鲁 卡 因 )成 盐 难 溶 于 水普 鲁 卡 因 青 霉 素 C2H5 2NCH2CH2OOCN SOHN COOHCH3CH3OCCH2 NH2 N SO 1 234567 （ 二 ） 手 性 C 87 65 4 321NO S(5%头 孢 唑 啉 钠 溶 液 18 24 )20D 头 孢 菌 素 类 C6 C7 青 霉 素 类 C

6、3 C5 C6 旋 光 性 （ 三 ） 共 轭 体 系 N SO头 孢 菌 素 类 母 核 有 共 轭 体 系 青 霉 素 类 母 核 无 明 显 UV 多 数 有 苯 环 取 代 基 NO S UV 青 霉 素 钠 UV7-20 （ 四 ） 内 酰 胺 环 水 溶 液 不 稳 定 干 燥 纯 净 稳 定 不 稳 定性 因 素 四 元 环 张 力 大 酰 胺 键 易 水 解 （ 某 些 金 属 离 子 ）（ 温 度 ） 失 效降 解青 霉 素 类 酸 、 碱 、 青 霉 素 酶 某 些 氧 化 剂 例 青 霉 素 的 降 解 反 应青霉素 青 霉 噻 唑 酸H2O/OH青 霉 素 酶 青 霉

7、酸H2OpH2 100青 霉 噻 唑酰 基 羟 胺 酸NH2OH 青 霉 烯 酸pH4 青 霉 胺CO2青 霉 醛HgCl2 失 效降 解头 孢 菌 素 类 酸 、 碱 、 胺 类 内 酰 胺 酶 二 、 K+、 Na+反 应（ 一 ）鉴 别 焰 色 鲜 黄 色 + 醋 酸 氧 铀 锌 黄 Na+ 焰 色 紫 色 + 0.1%四 苯 硼 钠 + Ac白 K+ （ 二 ） 呈 色 反 应1. 羟 肟 酸 铁 反 应 -内 酰 胺 类NaOH HClNOHH内 酰 胺 类呈 色 羟 肟 酸 衍 生 物Fe3+/3H+ N SO N SCO HNHOHH2NOH HCl N SC HNH OFe3+

8、3 O H +Fe3+/3 （ 红 、 棕 、 褐 ） 2、 与 H2SO4 - HNO3反 应 亮 黄红 棕黄 色头 孢 噻 肟 钠头 孢 噻 吩 钠头 孢 氨 苄 HNOSOH头 孢 菌 素 类 NH2 CO N SOHN COOHCH3 CH3CH2 3. 茚 三 酮 反 应 蓝 紫 色氨 基 茚 三 酮 -氨 基 -氨 基 、 伯 胺某 些 羟 基 胺 类 酮 式烯 醇 式茚 三 酮茚 三 酮 缩 合 蓝 紫 色 + H2O C NCH2R C OH 2 RCHH2N COOH2OHCCOCO COH NH2CCO COCO COH CNCCO COCO COH CHRNCCO COC

9、O 4. 双 缩 脲 反 应 -内 酰 胺 类CONH 紫内 酰 胺 类 碱 性 酒 石 酸 铜 （ 开 环 分 解 ） 2OHCO NH2 CuCOHN C CH3COONaCH3SN HN CH3CH3COONaC SNOHO HO OCH2NH2 CH2 H H 蓝 紫 色 5. 与 变 色 酸 -硫 酸 反 应活 泼 “ -CH2-” 青 霉 素阿 莫 西 林氨 苄 西 林HCHOCH SOH ”羰 基 侧 链 含 “ （ 分 解 ）变 色 酸显 色 NH2 CO N SOHN COOHCH3 CH3HO CH2 变 色 酸阿 莫 西 林 HCHOSOH150 （ 缩 合 ） 色褐 S

10、O3H SO3HHO HO SO3H SO3HHO HO OHOHHO3S HO3S CH HCHO （ 缩 合 ） 6. 与 重 氮 苯 磺 酸 反 应 橙 黄 色重 氮 苯 磺 酸 OHHC （ 偶 合 ）酚 羟 基 头 孢 哌 酮 SN OH CONHCHCONHH5C2 O ONN O COOHCH2S NNN N CH3 NClNNaO3SOH（ 偶 合 ） NNN NCH3SNOH CONHCHCONHH5C2 O ONN O COOHCH2SNNNaO3S 7. 与 铜 盐 反 应 CuSOHAc头 孢 氨 苄 橄 榄 绿 色NaOH专 属 反 应 （ 三 ） 沉 淀 反 应1.

11、 遇 酸 白青 霉 素青 霉 素 钠 青 霉 素 钾 H 2. 有 机 胺 盐 反 应（ 1） 重 氮 化 - 偶 合 反 应 青 霉 素普 鲁 卡 因普 鲁 卡 因 青 霉 素 H 重 氮 化 -偶 合 反 应 红 芳 伯 氨 基 C2H5 2NCH2CH2OOCN SOHN COOHCH3CH3OC H+C 2H5 2 CH2 NH2 H2N COOCH2CH2N普 鲁 卡 因 普 鲁 卡 因 青 霉 素 NCH2CH2OOC2C2H5 N+Cl-N2C2H5COOCH2CH2N NH2 H ClNaNO2 （ 2） 与 三 硝 基 苯 酚 反 应 三 硝 基 苯 酚二 苄 基 乙 二 胺

12、苄 星 青 霉 素 NaOH 二 苄 基 乙 二 胺 三 硝 基 苯 酚 H2OH OH- H CO N SOHN COOHCH3CH3CH2 CH2NCH2CH2NHCH2 OH NO2 O2N NO2CH2 NCH2CH2NHCH2 光 谱 法（ 四 ） 1、 UV法 A,Emin,max, %1cm1光 谱 图 样 品 、 分 解 产 物 nm339H A 苯 唑 青 霉 烯 酸苯 唑 青 霉 素 Cu2+头 孢 氨 苄 max = 262nm青 霉 素 V钠 A280nm/A264nm = 1.30 1.50 N O CONHCH3 NO S CH3CH3COONa N O CHCH3

13、O C OCN HNCH HC CH3CH3SH CH COOH Cu2+ pH 3.8 氯 唑 青 霉 素 341 0.682双 氯 青 霉 素 342 0.653苯 唑 青 霉 素 339 1.328max %1cm1E(nm) ml/g50 2、 IR法 117401815 cmV OC 116901710 cmV OC -内 酰 胺 环酰 胺 3、 NMR法 利 用 不 同 结 构 的 原 子 核 在 D2O中 有不 同 的 NMR光 谱 进 行 鉴 别JP以 吸 收 峰 频 率 对 峰 强 度 进 行 作 图 主 要 研 究 原 子 核 的 磁 化 性 质 及 其 在外 磁 场 中

14、的 运 动 规 律 硫 酸 庆 大 霉 素 NMR谱 7-08硫 酸 庆 大 霉 素 NMR 色 谱 法（ 五 ）1、 TLC法 对 照 品 对 照 法和 斑 点 颜 色比 较供 试 品对 照 品 相 同 条 件 fR 2、 HPLC法 Rt比 较供 试 品对 照 品 相 同 条 件 精 密 称 取 样 品 0.1009g， 置 250ml碘 瓶 中 ，加 水 10ml， 振 摇 使 溶 解 ， 精 密 加 溴 滴 定 液(0.1mol/L)25.0ml， 再 加 盐 酸 5ml， 立 即 密 塞并 振 摇 1分 钟 ， 在 暗 处 静 置 15分 钟 后 ， 注 意微 开 瓶 塞 ， 加 碘

15、 化 钾 试 液 10ml， 立 即 密 塞 ，摇 匀 后 ， 用 硫 代 硫 酸 钠 滴 定 液 （ 0.09863mol/L） 滴 定 ， 至 近 终 点 时 ， 加 淀 粉 指 示 液 ， 继续 滴 定 至 蓝 色 消 失 ， 消 耗 硫 代 硫 酸 钠 滴 定 液(0.09863mol/L)13.80ml， 并 将 滴 定 结 果 用 空白 试 验 校 正 ， 空 白 试 验 消 耗 硫 代 硫 酸 钠 滴 定液 （ 0.09863mol/L） 21.64ml。 每 1ml溴 滴 定液 (0.1mol/L)相 当 于 13.01mg的 C 12H17N2NaO3。 N SOHN COO

16、KCH3CH3OCCH2 酸 性结 构 与 性 质一 、 Na与 碱 金 属 (Na+、 K+)成 盐 （ 一 ） 羧 基 易 溶 于 水 与 有 机 碱 (普 鲁 卡 因 )成 盐 难 溶 于 水普 鲁 卡 因 青 霉 素 C2H5 2NCH2CH2OOCN SOHN COOHCH3CH3OCCH2 NH2 N SO 1 234567 （ 二 ） 手 性 C 87 65 4 321NO S(5%头 孢 唑 啉 钠 溶 液 18 24 )20D 头 孢 菌 素 类 C6 C7 青 霉 素 类 C3 C5 C6 旋 光 性 （ 三 ） 共 轭 体 系 N SO头 孢 菌 素 类 母 核 有 共

17、轭 体 系 青 霉 素 类 母 核 无 明 显 UV 多 数 有 苯 环 取 代 基 NO S UV 青 霉 素 钠 UV7-20 （ 四 ） 内 酰 胺 环 水 溶 液 不 稳 定 干 燥 纯 净 稳 定 不 稳 定性 因 素 四 元 环 张 力 大 酰 胺 键 易 水 解 （ 某 些 金 属 离 子 ）（ 温 度 ） 失 效降 解青 霉 素 类 酸 、 碱 、 青 霉 素 酶 某 些 氧 化 剂 例 青 霉 素 的 降 解 反 应青霉素 青 霉 噻 唑 酸H2O/OH青 霉 素 酶 青 霉 酸H2OpH2 100青 霉 噻 唑酰 基 羟 胺 酸NH2OH 青 霉 烯 酸pH4 青 霉 胺C

18、O2青 霉 醛HgCl2 失 效降 解头 孢 菌 素 类 酸 、 碱 、 胺 类 内 酰 胺 酶(头 孢 噻 吩 钠 水 溶 液 25 24h失 活 8%) 二 、 K+、 Na+反 应（ 一 ）鉴 别 焰 色 鲜 黄 色 + 醋 酸 氧 铀 锌 黄 Na+ 焰 色 紫 色 + 0.1%四 苯 硼 钠 + Ac白 K+ （ 二 ） 呈 色 反 应1. 羟 肟 酸 铁 反 应 -内 酰 胺 类NaOH HClNOHH内 酰 胺 类呈 色 羟 肟 酸 衍 生 物Fe3+/3H+ N SO N SCO HNHOHH2NOH HCl N SC HNH OFe3+3 O H +Fe3+/3 （ 红 、

19、棕 、 褐 ） 例 ： ChP(2000)头 孢 哌 酮鉴 别 取 本 品 10mg， 加 水 2ml与 盐酸 羟 胺 溶 液 取 34.8%盐 酸 羟 胺 溶液 1份 ， 醋 酸 钠 -氢 氧 化 钠 溶 液 1份 ，乙 醇 4份 3ml， 振 摇 溶 解 后 ， 放 置5min， 加 酸 性 硫 酸 铁 铵 试 液 1ml，摇 匀 ， 显 红 棕 色 。 2、 与 H2SO4 - HNO3反 应 蓝 绿 色红 棕黄 色头 孢 噻 啶头 孢 噻 吩 钠头 孢 氨 苄 HNOSOH头 孢 菌 素 类 NH2 CO N SOHN COOHCH3 CH3CH2 3. 茚 三 酮 反 应 蓝 紫 色

20、氨 基 茚 三 酮 -氨 基 、 伯 胺某 些 羟 基 胺 类 酮 式烯 醇 式茚 三 酮茚 三 酮 缩 合 蓝 紫 色 + H2O C NCH2R C OH 2 RCHH2N COOH2OHCCOCO COH NH2CCO COCO COH CNCCO COCO COH CHRNCCO COCO 4. 双 缩 脲 反 应 -内 酰 胺 类CONH 紫内 酰 胺 类 碱 性 酒 石 酸 铜 （ 开 环 分 解 ） 2OHCO NH2 CuCOHN C CH3COONaCH3SN HN CH3CH3COONaC SNOHO HO OCH2NH2 CH2 H H 蓝 紫 色 5. 与 变 色 酸

21、-硫 酸 反 应活 泼 “ -CH2-” 青 霉 素阿 莫 西 林氨 苄 西 林HCHOCH SOH ”羰 基 侧 链 含 “ （ 分 解 ）变 色 酸显 色 变 色 酸阿 莫 西 林 HCHOSOH150 （ 缩 合 ） NH2 CO N SOHN COOHCH3 CH3HO CH2 色褐 SO3H SO3HHO HO SO3H SO3HHO HO OHOHHO3S HO3S CH HCHO （ 缩 合 ） 6. 与 重 氮 苯 磺 酸 反 应 橙 黄 色重 氮 苯 磺 酸 OHHC （ 偶 合 ）酚 羟 基 头 孢 哌 酮 SN OH CONHCHCONHH5C2 O ONN O COOH

22、CH2S NNN N CH3 NClNNaO3SOH（ 偶 合 ） NNN NCH3SNOH CONHCHCONHH5C2 O ONN O COOHCH2SNNNaO3S 7. 与 铜 盐 反 应 CuSOHAc头 孢 氨 苄 橄 榄 绿 色NaOH专 属 反 应 （ 三 ） 沉 淀 反 应1. 遇 酸 白青 霉 素青 霉 素 钠 青 霉 素 钾 H 2. 有 机 胺 盐 反 应（ 1） 重 氮 化 - 偶 合 反 应 青 霉 素普 鲁 卡 因普 鲁 卡 因 青 霉 素 H 重 氮 化 -偶 合 反 应 红 芳 伯 氨 基 C2H5 2NCH2CH2OOCN SOHN COOHCH3CH3OC

23、 H+C 2H5 2 CH2 NH2 H2N COOCH2CH2N普 鲁 卡 因 普 鲁 卡 因 青 霉 素 NCH2CH2OOC2C2H5 N+Cl-N2C2H5COOCH2CH2N NH2 H ClNaNO2 （ 2） 与 三 硝 基 苯 酚 反 应 三 硝 基 苯 酚二 苄 基 乙 二 胺苄 星 青 霉 素 NaOH 二 苄 基 乙 二 胺 三 硝 基 苯 酚 H2OH OH- H CO N SOHN COOHCH3CH3CH2 CH2NCH2CH2NHCH2 OH NO2 O2N NO2CH2 NCH2CH2NHCH2 光 谱 法（ 四 ）1、 UV法 A,Emin,max, %cm光

24、 谱 图 样 品 、 分 解 产 物头 孢 氨 苄 max = 262nm青 霉 素 V钠 A280nm/A264nm = 1.30 1.50苯 唑 青 霉 烯 酸苯 唑 青 霉 素 HCu2+ nmA N O CONHCH3 NO S CH3CH3COONa N O CHCH3O C OCN HNCH HC CH3CH3SH CH COOH Cu2+ pH3.8 氯 唑 青 霉 素 341 0.682双 氯 青 霉 素 342 0.653苯 唑 青 霉 素 339 1.328max %cmE(nm) ml/g 2、 IR法 117401815 cmV OC 116901710 cmV OC

25、-内 酰 胺 环酰 胺 3、 NMR法 利 用 不 同 结 构 的 原 子 核 在 D2O中 有不 同 的 NMR光 谱 进 行 鉴 别JP 主 要 研 究 原 子 核 的 磁 化 性 质 及 其 在外 磁 场 中 的 运 动 规 律 色 谱 法（ 五 ）1、 TLC法 对 照 品 对 照 法和 斑 点 颜 色比 较供 试 品对 照 品 相 同 条 件 fR 2、 HPLC法 Rt比 较供 试 品对 照 品 相 同 条 件 三 、 含 量 测 定 IINaOH头 孢 菌 素 族青 霉 素 族 （ 水 解 ） H碘 量 法（ 一 ）1. 原 理 水 解 产 物 OSNaNaIOSNaI 定 量

26、过 量剩 余 -内 酰 胺 类ChP 反 应 分 两 步 进 行 ：1. 水 解 反 应 (按 化 学 计 算 量 进 行 )2. 氧 化 -还 原 反 应 (无 固 定 的 量 关系 ， 受 温 度 、 PH值 和 时 间 等 因 素影 响 ， 应 严 格 控 制 反 应 条 件 并 采用 标 准 品 平 行 对 照 测 定 ) N S CH3CH3COOHOHNRCO RCO HHN COONaCH3CH3SNCOONaI 24 + 5 H2O +2HCl NaOH CCH3CH3 SO3H CHNH2 COOHCHNHCORCOOH 2 +2NaCl+8HI 第 一 步第 二 步 例 注

27、 射 用 普 鲁 卡 因 青 霉 素 含 量 测 定 取 装 量 差 异 项 下 的 内 容 物 ， 精 密 称取 约 0.12g， 置 100ml量 瓶 中 ， 加 水 使 溶解 并 稀 释 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 精 密 量 取 5ml，置 碘 瓶 中 ， 加 1mol/L氢 氧 化 钠 溶 液 1ml放 置 20分 钟 ， 再 加 1mol/L盐 酸 溶 液 1ml与 醋 酸 -醋 酸 钠 缓 冲 液 (pH4.5)5ml， 精 密加 入 碘 滴 定 液 (0.01mol/L)15ml， 密 塞 ，摇 匀 ， 在 20 25 暗 处 放 置 20分 钟 ， 用硫 代 硫 酸 钠 滴

28、定 液 （ 0.01mol/L） 滴 定 ， 至 近 终 点 时 加 淀 粉 指 示 液 ， 继 续 滴 定 并强 力 振 摇 ， 至 蓝 色 消 失 ； 另 精 密 量 取 供试 品 溶 液 5ml， 置 碘 瓶 中 ， 加 醋 酸 -醋 酸钠 缓 冲 液 （ pH4.5） 5ml， 精 密 加 入 碘 滴定 液 （ 0.01mol/L） 15ml， 密 塞 ， 摇 匀 ，在 暗 处 放 置 20分 钟 ， 用 硫 代 硫 酸 钠 滴 定液 （ 0.01mol/L） 滴 定 ， 作 为 空 白 。 同 时用 青 霉 素 钠 对 照 品 同 法 测 定 作 对 照 ， 算出 供 试 品 的 含

29、 量 。 V样 空 V样对 照 液 +缓 冲 液 +碘 液 +回 滴+碱 +酸 +缓 冲 液 +碘 液 +回 滴 V对 空 V对2. 方 法供 试 液 +缓 冲 液 +碘 液 +回 滴+碱 +酸 +缓 冲 液 +碘 液 +回 滴 空 白 试 验A、 消 除 样 品 已 降 解 产 物 的 干 扰B、 消 除 样 品 中 其 他 消 耗 碘 的 杂 质 的 干 扰C、 消 除 碘 挥 发 造 成 的 误 差 以 未 经 水 解 的 样 品 作 空 白 测 定 空 白 样 品 I2Na2S2O3I-I2 采 用 标 准 品 平 行 对 照 测 定A、 可 消 除 温 度 、 pH、 操 作 、 环

30、 境 等 条 件 的 影 响B、 使 本 法 测 定 结 果 与 微 生 物 检 定 法 一 致 3. 条 件（ 1） 弱 酸 性 pH4.5碱 I2 IO3- + I-酸 普 鲁 卡 因 与 碘 在 酸 性 条 件 下 会 产 生 复 盐 沉 淀（ 2） 温 度 24 26温 度 38 未 水 解 的 供 试 品 亦 消 耗 碘 （ 3） 水 解 时 间以 水 解 20分 钟 后 的 耗 碘 量 最 大（ 4） 反 应 时 间反 应 20分 钟 后 ， 耗 碘 量 随 时 间 的变 化 较 小 ， 可 减 小 含 量 测 定 的 误差 。 4. 特 点（ 1） 灵 敏 度 高样 品 : 碘

31、= 1 : 8（ 2） 反 应 条 件 、 实 验 操 作 要 求 高V对 、 V对 空V样 、 V样 空1份 含 量加 试 剂 次 序 、 反 应 时 间 、 滴 定 速 度 相 同4I28I- 5. 计 算 原 料 %WWVV VV 对 照 品）（ ）（含 量 样对对对 空 样样 空 汞 量 法（ 二 ） 1. 原 理 SHROH 青 霉 素 族 （ 水 解 ） HgRS ）（ 青 霉 素 族ChP Hg.pH 2. 方 法 总样VNOHgHNONaOH 醋 酸 盐 缓 冲 液pH4.6 滴 定水 解 降空醋 酸 盐 缓 冲 液 VNOHg pH4.6 滴 定样品 以 未 经 水 解 的

32、样 品 作 空 白 测 定 例 青 霉 素 钠 含 量 测 定 取 本 品 约 50mg， 精 密 称 定 ， 加 水5ml溶 解 后 ， 加 1mol/L氢 氧 化 钠 溶 液 5ml， 摇 匀 ， 放 置 15分 钟 ， 加 1mol/L硝 酸 溶液 5ml， 醋 酸 盐 缓 冲 液 (pH4.6)20ml及 水20ml， 摇 匀 ， 照 电 位 滴 定 法 (附 录 A),用 铂 电 极 为 指 示 电 极 ， 汞 -硫 酸 亚 汞 电 极为 参 比 电 极 ， 在 35 40 ， 用 硝 酸 汞 滴定 液 (0.02mol/L)缓 慢 滴 定 ， （ 控 制 滴 定 过 程 约 为 1

33、5分 钟 ） ， 不 计 第一 个 等 当 点 ， 计 算 第 二 个 等 当 点 时 消 耗滴 定 液 的 量 。 每 1ml硝 酸 汞 滴 定 液 (0.02mol/L)相 当 于 7.128mg的 总 青 霉 素 (按C16H17N2NaO4S计 算 )。 另 取 本 品 约 0.5g， 精 密 称 定 ， 加 水与 上 述 醋 酸 盐 缓 冲 液 各 25ml， 振 摇 使 完全 溶 解 ， 在 室 温 下 ， 立 即 用 硝 酸 汞 滴 定液 (0.02mol/L)滴 定 ， 终 点 判 断 方 法 同 上 . 每 1ml硝 酸 汞 滴 定 液 （ 0.02mol/L） 相 当于 7

34、.128mg的 降 解 物 （ 按 C16H17N2NaO4S计 算 ） 。 总 青 霉 素 的 百 分 含 量 与 降 解 物 的 百分 含 量 之 差 值 即 为 青 霉 素 的 含 量 。 3、 讨 论（ 1） 以 第 二 次 滴 定 突 跃 为 终 点 电 位 法 指 示 终 点 （ 2） 反 应 摩 尔 比 1 : 1（ 3） 空 白 试 验 消 除 已 降 解 产 物 干 扰（ 4） 优 点 不 需 标 准 品 %W FTV%W FTV% 空空样样含 量4、 计 算 %FTWVWV% ）（含 量 空空样样 精 密 称 取 含 水 量 为 0.5%的 青 霉 素钠 0.0502g，

35、按 药 典 方 法 测 定 总 青 霉 素 含量 时 ， 用 去 硝 酸 汞 滴 定 液 (0.02009mol/L)6.97ml。 另 精 密 称 取 上 述 样 品 0.5013g，按 药 典 方 法 测 定 降 解 物 含 量 时 ， 用 去 硝酸 汞 滴 定 液 (0.02009mol/L)1.33ml。 以 干燥 品 计 算 ， 求 样 品 中 青 霉 素 的 含 量 。例 青 霉 素 钠 含 量 测 定 .T %. . %. （ 三 ）1、 原 理 青 霉 噻 唑 酸青 霉 素 类 NaOH （ 钠 盐 ） OHNaClHClNaOH （ 剩 余 ） -内 酰 胺 类 ChP N

36、S CH3CH3COONaOHNRCO N S CH3CH3COONaCHN ONaORCO 定 量 过 量NaOH 2、 方 法 供 试 液内 酰 胺 类 OH NaOH定 量 过 量 HCl回 滴 中 和中 和 例 苯 唑 西 林 钠 含 量 测 定 取 本 品 约 0.5g， 精 密 称 定 ， 加 新 沸过 的 并 用 0.01mol/L氢 氧 化 钠 溶 液 中 和 至酚 酞 指 示 液 刚 显 红 色 的 水 20ml， 使 溶 解 ,再 用 0.01mol/L氢 氧 化 钠 溶 液 中 和 后 ， 精密 加 氢 氧 化 钠 滴 定 液 (0.1mol/L)25ml，摇 匀 ， 置

37、 水 浴 中 加 热 20分 钟 ， 注 意 避 免吸 收 空 气 中 的 二 氧 化 碳 ， 冷 却 后 ， 加 酚酞 指 示 液 1 2滴 ， 用 盐 酸 滴 定 液 （ 0.1mol/L） 滴 定 ， 并 将 滴 定 结 果 用 空白 试 验 校 正 。 每 1ml的 氢 氧 化 钠 滴 定 液(0.1mol/L)相 当 于 40.14mgC19H19N3O5S。 %W FTVV% 样空含 量 3、 讨 论（ 1） 水 解 前 先 中 和 溶 剂 和 样 品（ 2） 加 热 时 避 免 吸 收 CO2 CONaNaOH CO 不 能 使 酚 酞 变 红（ 3） 空 白 试 验 校 正 (

38、消 除 Na2CO3干 扰 )（ 4） 特 点 简 便 快 速 不 适 用 于 有 残 留 酯 的 产 品 %. %. . 799 1001010090 09863001301080136421 nmCupH A 青 霉 烯 酸青 霉 素 族 （ 水 解 ）可 见 -紫 外 分 光 光 度 法（ 四 ）1、 酸 水 解 法 （ 铜 盐 法 ）（ 1） 原 理 稳 定 剂 JP青 霉 素 族 CH2 C O C O NHH C CH3CH3C COOHCCN H SH CO N SOHN COOHCH3CH3CH2 pH ACu （ 2） 方 法 标样枸 橼 酸硫 酸 铜标 准 液供 试 液 A

39、AnmA 320（ 3） 特 点实 验 条 件 随 各 药 物 稳 定 性 不 同 而 定标 准 品 对 照 法 %WWAA 标 准 品含 量 样标标样 （ 4） 计 算 2、 硫 醇 汞 盐 法（ 1） 原 理 青 霉 烯 酸 硫 醇 汞 盐青 霉 素 族 HgCl（ 咪 唑 ） nmmax 青 霉 素 族ChP HgClCH3CH 3COONaSNHC ONCH2NHCOCH3 N SOHN COONaCH3CH3OCCH2NHCOCH3 HgCl咪 唑 nmmax （ 2） 方 法 对 照 品 法 %WWAA% 对 照 品 样标标样 计 算 标样 咪 唑硼 酸 缓 冲 液标 准 液供 试

40、 液 AAH gCl 2pH 9 例 氨 苄 西 林 钠 含 量 测 定 取 本 品 约 60mg 置 100ml量 瓶 中 ， 加水 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 精 密 量 取5ml， 置 另 一 100ml量 瓶 中 ， 加 水 稀 释 至刻 度 ， 摇 匀 ， 再 精 密 量 取 5ml， 置 25ml量 瓶 中 ， 加 硼 酸 缓 冲 液 2.5ml与 醋 酐 的 乙腈 溶 液 （ 150） 0.25ml， 放 置 5min后 ，加 咪 唑 溶 液 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 置 60 水 浴 中 ， 加 热 30min， 取 出 冷 却 ， 照 分 光 光度 法

41、（ 附 录 A ） ， 在 325nm的 波 长处 测 定 吸 收 度 ； 另 取 氨 苄 西 林 三 水 合物 标 准 品 ， 按 同 法 测 定 ， 计 算 ， 即 得 。 （ 3） 讨 论a. 咪 唑 催 化 的 水 解 产 率 高 ， 硫 醇 汞 盐 稳 定 （ 3h）b. 侧 链 有 -NH2时 ， 需 加 醋 酐 先 将 其 乙 酰 化 后 才 能 发 生 上 述 反 应 N SOHN COOCH3CH3OCCH2NH2 Na N SOHN COONaCH3CH3OCCH2NHCOCH3 OCHCH pH9 （ 4） 特 点A、 简 便 快 速B、 用 标 准 品 对 照 ， 重

42、现 性 良 好 ， RSD1% 3、 羟 肟 酸 比 色 法 USP JP Fe3+/3H +红 色-内 酰 胺 类 NaOH HClNOHH内 酰 胺 类 羟 肟 酸 衍 生 物 HPLC法 ChP 头 孢 菌 素 类内 标 法 校 正 因 子外 标 法特 点 快 速 、 高 效 、 灵 敏 专 属 性 强 、 重 现 性 好 一 法 多 用 （ 鉴 别 、 检 查 、 含 测 ） 哌 拉 西 宁 原 料 药 含 量 测 定色 谱 条 件 用 十 八 烷 基 硅 烷 键 合 硅 胶 为 填 充剂 ； 以 甲 醇 0.2mol/L磷 酸 二 氢 钠 溶液 10 氢 氧 化 四 乙 基 铵 溶

43、液 水（ 400 50 3 547） 用 磷 酸 调 节pH值 至 5.5为 流 动 相 。 检 测 波 长 为254nm。 第 三 节 氨 基 糖 苷 类 抗 生 素苷苷 元糖 缩 合 氨 基 糖 苷苷 元氨 基 糖 缩 合 链 霉 素 双 氢 链 霉 素新 霉 素 卡 那 霉 素庆 大 霉 素 巴 龙 霉 素 链 霉 素链 霉 胍 + 链 霉 糖 + N-甲 基 -L-葡 萄 糖 胺 苷 元 糖链 霉 双 糖 胺 NH CNHNH2HO OH OHNHCH2N NH O O CH3 OHCHOO O CH2OHOHOHNHCH3链 霉 胍 链 霉 糖 N-甲 基 -L-葡 萄 糖 胺 NH

44、 CNHNH2HO OH OHNHCH2N NH O O CH3 OHCHOO O CH2OHOHOHNHCH3链 霉 胍 链 霉 糖 N-甲 基 -L-葡 萄 糖 胺 庆 大 霉 素 糖 苷 元绛 红 糖 胺 + 脱 氧 链 霉 胺 + 加 洛 糖 胺 糖 R OC R1R2HN NH2O OHH2N NH2O OOH NHCH3OHCH3绛 红 糖 胺紫 素 胺 2-脱 氧 链 霉 胺 加 洛 糖 胺N-甲 基 -3-去 氧 -4-甲基 戊 糖 胺 R OC R1R2HN NH2O OHH2N NH2O OOH NHCH3OHCH3绛 红 糖 胺紫 素 胺 2-脱 氧 链 霉 胺 加 洛

45、糖 胺N-甲 基 -3-去 氧 -4-甲基 戊 糖 胺 庆 大 霉 素 C复 合 物 庆 大 霉 素 C1 R=H R1、 R2=CH3 庆 大 霉 素 C2 R=R2=H R1=CH3 庆 大 霉 素 C1a R、 R1、 R2=H 庆 大 霉 素 C2a R=CH3 R1= R2=H 庆 大 霉 素 C2b R=R1=H R2=CH3 一 、 结 构 与 性 质 多 与 硫 酸 成 盐链 霉 素 3个庆 大 霉 素 5个碱 性 中 心碱 性（ 一 ） 水 溶 性溶 解 性（ 二 ） 链 霉 素 pH5 7.5庆 大 霉 素 pH2 12 稳 定UV（ 三 ） 稳 定 性（ 四 ） 链 霉

46、素 水 解 产 物 反 应（ 五 ） NH CNHNH2HO OH OHNHCH2N NH O O CH3 OHCHOO O CH2OHOHOHNHCH3坂 口 反 应 N-甲 基 葡 萄糖 胺 反 应麦 芽 酚 反 应 二 、 鉴 别 茚 三 酮 反 应（ 一 ） 蓝 紫 色庆 大 霉 素链 霉 素 茚 三 酮 羟 基 胺 结 构 N-甲 基 葡 萄 糖 胺 反 应（ 二 ） 甲 基 葡 萄 糖 胺庆 大 霉 素链 霉 素 水 解 N乙 酰 丙 酮 OH-吡 咯 衍 生 物对 二 甲 氨 基 苯 甲 醛 H+红 色（ Elson-Morgan反 应 ） NHCH3NH NHNH C NH2H

47、O OH OHNHCH2N O O CH3OHCHO O O CH2OHOHOH N CH3COCH3HHOCH2 CHOH 3 (缩 合 )323 COCHCOCHCH OH HHH3CH3C CHN N COCH3CH3 COCH3CH3N红 色 对 二 甲 氨 基 苯 甲 醛H+ N CH3COCH3HHOCH2 CHOH 3 麦 芽 酚 反 应（ 三 ） 链 霉 糖 特 有 反 应链 霉 糖链 霉 素 OH 麦 芽 酚紫 红 色 3FeH + 分 子 重 排 NH C NH2HO OH OHNHCH2N O O CH3OHCHO O O CH2OHOHOHNH NH NHCH3H2O

48、NaOH O O OH CH3 O O CH3Fe3+H+ O Fe 33+/紫 红麦 芽 酚 链 霉 胍 特 有 反 应 橙 红羟 基 喹 啉 链 霉 胍链 霉 素 次 溴 酸 钠 8 OH（ 或 -萘 酚 ） N OH8-羟 基 喹 啉 坂 口 反 应（ 四 ） -萘 酚 OH O N Br R NH CO NH （ 四 ） 24SO 反 应 白 BaSOSO BaH+UV法（ 五 ） IR法（ 六 ） 庆 大 霉 素 无 UV吸 收 nmmax 链 霉 素TLC法（ 七 ） 三 、 检 查 链 霉 素 杂 质（ 一 ）链 霉 素 B（ 甘 露 糖 链 霉 素 ）2. 方 法 TLC中 的

49、 对 照 品 法 （ BP）1. 来 源 反 应 中 间 体 对 微 生 物 的 活 性 无 明 显 差 异毒 副 作 用 和 耐 药 性 不 同发 酵 菌 种 不 同工 艺 差 别 C组 分 比 例不 一 致规 定 控 制 各 组 分 的 相 对 百 分 含 量 ChPUSPBPJP庆 大 霉 素 C组 分 的 测 定（ 二 ） .pH吲 哚 衍 生 物 巯 基 醋 酸邻 苯 二 醛氨 基 max = 330nm衍 生 化 原 理 1. 1-烷 基 硫 代 -2-烷 基异 吲 哚 衍 生 物RNH2 + + HSCH2COOHOH-CHOCHO NRSCH2COOH RP HPLC方 法 2

50、.规 定 C1 2550% C1a 1540% C2a +C2 2050%计 算 3. %AAAA A%A CCCC ii aa 峰 面 积 归 一 化 法 三 、 含 量 测 定 链 霉 素 、 庆 大 霉 素微 生 物 检 定 法 本 法 系 利 用 抗 生 素 在 琼 脂 培 养基 内 的 扩 散 作 用 量 反 应 平 行 线 原 理的 设 计 ， 比 较 标 准 品 与 供 试 品 两 者对 接 种 的 试 验 菌 产 生 抑 菌 圈 的 大 小， 以 测 定 供 试 品 效 价 的 一 种 方 法 。 四 、 血 清 中 庆 大 霉 素 的 HPLC法 血 浆 样 品 的 预 处

51、理 离 子 对 色 谱 法 的 目 的 ： 除 去 氨 基 酸 、 肽 、 胺 的 干 扰 选 用 OPA为 荧 光 衍 生 化 试 剂 采 用 柱 后 衍 生 化 法 2CH3NR R3H OH CONH2OOHOHOOH R2R1第 四 节 四 环 素 类 抗 生 素ABCD 2CH3NR R3H OH CONH2OOHOHOOH R2R1 1 23456789 10 11 12 2CH3NH OH CONH2OOHOHOOH CH3HO 四 环 素 （ TC） tetracycline 2CH3NH OH CONH2OOHOHOOH CH3HOCl 金 霉 素 (CTC) chlorte

52、tracycline氯 四 环 素 2CH3NH OH CONH2OOHOHOOH CH3HO OH 土 霉 素 (OTC) oxytetracycline氧 四 环 素 2CH3NH OH CONH2OOHOHOOH CH3 OH 多 西 环 素 (DOTC) doxycycline脱 氧 土 霉 素 美 他 环 素 （ METC） metacycline H OH CONH2OOHOHOOH N CH3 2OHCH2 2CH3NR R3H OH CONH2OOHOHOOH R2R1 一 、 结 构 与 性 质两 性（ 一 ）1. 与 酸 、 碱 均 能 成 盐2. 强 酸 或 强 碱 中

53、溶 解 度 酚 羟 基 、 烯 醇 型 羟 基 弱 酸 性二 甲 胺 基 弱 碱 性 吸 湿 性（ 二 ） 多 含 结 晶 水与 金 属 离 子 生 成 有 色 配 位 化 合 物Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ UV（ 三 ） 与 金 属 离 子 络 合（ 四 ）pH3 7.5 荧 光 HO HO CaOO OOH OH O O 不 稳 定 性（ 四 ）1. 差 向 异 构 化 差 向 金 霉 素差 向 四 环 素金 霉 素四 环 素 pH 淡 黄 黑蓝 色 荧 光 OHCONH 2OOHOHOOH CH3 HCH3 2NHO差 向 四 环 素 2CH3NH OH CONH2OOHOH

54、OOH CH3HO 2CH3NH OH CONH2OOHOHOOH R2R1 HO（ 土 霉 素 、 多 西 环 素 不 易 差 向 异 构 化 ） 2. 降 解 反 应（ 1） 酸 性 下 降 解脱 水 金 霉 素脱 水 四 环 素金 霉 素四 环 素 pH max = 445nmmax = 435nm橙 黄 色 2CH3NH OH CONH2OOHOHOOH CH3HO N CH3 2H OH CONH2OOHOOH CH3 OH脱 水 四 环 素 2CH3NH OHCONH2 OOHOHOOH CH3HO pH2 6 pH2 6 TC OHCONH2OOHOHOOH CH3 HCH3 2

55、NHO ETC N CH3 2H OHCONH 2OOHOOH CH3 OHATC N2CH3 OHCONH 2OOHO HOH O CH3 H EATC pH 2 pH 2 （ 2） 碱 性 下 降 解 异 四 环 素四 环 素 OH （ 荧 光 ） H OH CONH2OOHOHOOH CH3 O N CH3 2 二 、 鉴 别 试 验H2SO4反 应（ 一 ） 黄 色朱 红 色绿蓝深 紫 色盐 酸 多 西 环 素盐 酸 土 霉 素盐 酸 金 霉 素盐 酸 四 环 素 SOH FeCl3反 应（ 二 ） 褐 色橙 褐 色深 褐 色红 棕 色盐 酸 多 西 环 素盐 酸 土 霉 素盐 酸 金

56、 霉 素盐 酸 四 环 素 FeCl Cl-反 应（ 三 ） 白 AgClAgCl HNO nmmax 1mol/L盐 酸 -甲 醇 （ 1100）0.01mg/mlUV法（ 四 ） 荧 光 法（ 五 ）土 霉 素金 霉 素四 环 素 绿 色 荧 光蓝 色 荧 光黄 色 荧 光 OHUV 绿 色 荧 光H+UV TLC法（ 六 ） 正 相 分 配 薄 层 色 谱IR法（ 五 ） EDTA 克 服 痕 量 金 属 造 成 的 拖 尾 现 象 三 、 检 查 4-差 向 四 环 素 （ ETC） 脱 水 四 环 素 （ ATC） 差 向 脱 水 四 环 素 （ EATC） 盐 酸 金 霉 素 （

57、CTC） 有 关 物 质（ 一 ）TLC法 （ 1995版 ）HPLC法 （ 2000版 ）标 准 品 对 照 法盐 酸 四 环 素 四 环 素 有 关 物 质 TLC图 I. 供 试 液 ( 5 mg/ml)II. ETC( 0.2 mg/ml)III. ATC( 0.025 mg/ml)IV. EATC ( 0.025 mg/ml)V. CTC ( 0.1 mg/ml)VI. 混 合 液 40.50.52 吸 收 度（ 二 ） nmmax 、盐 酸 四 环 素 CTC).(A nm 控 制杂 质 吸 收 度 EATCATC.A nm 、控 制 异 四 环 素控 制 .A nm 注 射 用

58、四 、 含 量 测 定 ChP、 USPHPLC法 （ 外 标 法 ）系 统 适 用 性 试 验 1. 防 护 柱2. 预 试 溶 液 4-差 向 脱 水 四 环 素 四 环 素3. RSD2.0% 90.tR 01.t R .R JP 比 色 法 （ 标 准 曲 线 法 ）标 nmHCl.dHCl.d A 标 准 液标 调 零标 准 液空 样 nmHCl.dHCl.d A 供 试 液样 调 零供 试 液空 原 理 脱 水 四 环 素四 环 素 pH 1. 熟 悉 抗 生 素 类 药 物 分 析 的 特 点 及 其 常 规 检 验 项 目 。 了 解 抗 生 素 类 药 物 的 分 析 现 状

59、 ， 熟 悉 生 物 学 法 与 物 理 化 学 法 测 定 效 价 的 原 理 及 优 缺 点 。2. 掌 握 内 酰 胺 类 抗 生 素 的 结 构 、 性 质 、 鉴 别 及 含 量 测 定 。第 十 一 章 复 习 内 容 3. 掌 握 氨 基 糖 苷 类 抗 生 素 的 结 构 、性 质 及 鉴 别 ， 了 解 其 检 查 及 含 量测 定4. 掌 握 四 环 素 类 抗 生 素 的 结 构 及 性质 ， 了 解 其 鉴 别 、 检 查 及 含 量 测定5. 了 解 抗 生 素 类 药 物 的 质 量 考 察 方法 99： 89 下 列 哪 个 药 物 会 发 生 羟 肟 酸 铁 反

60、 应 A. 青 霉 素 B. 庆 大 霉 素 C. 红 霉 素 D. 链 霉 素 E. 维 生 素 C 99m： 71 中 国 药 典 (1995年 版 )测 定 头 孢 菌 素 类 药 物 的 含 量 时 ， 多 数 采 用 的 方 法 是 A. 微 生 物 法 B. 碘 量 法 C. 汞 量 法 D. 正 相 高 效 液 相 色 谱 法 E. 反 相 高 效 液 相 色 谱 法 95： 139 属 于 -内 酰 胺 类 的 抗 生 素 药 物 有 A. 青 霉 素 B. 红 霉 素 C. 头 孢 菌 素 D. 庆 大 霉 素 E. 四 环 素 45 能 和 茚 三 酮 发 生 呈 色 反

61、应 的 物 质 有 A 链 霉 素 B 庆 大 霉 素 C 土 霉 素 D 氨 基 酸 E 苯 巴 比 妥 96： 135.青 霉 素 类 药 物 可 用 下 面 哪 些 方 法 测 定 A. 三 氯 化 铁 比 色 法 B. 汞 量 法 C. 碘 量 法 D. 硫 醇 汞 盐 法 E. 酸 性 染 料 比 色 法 110 能 发 生 重 氮 化 一 偶 合 反 应 的 抗 生 素 类 药 物 是 A. 青 霉 素 B. 庆 大 霉 素 C. 苄 星 青 霉 素 D. 盐 酸 四 环 素 E. 普 鲁 卡 因 青 霉 素 99： 116120以 下 反 应 可 适 用 的 药 物 A. 青 霉

62、 素 B. 链 霉 素 C. 两 者 均 能 D. 两 者 均 不 能 116 Kober反 应 117. 羟 肟 酸 铁 反 应 118. 坂 口 反 应 119. N甲 基 葡 萄 糖 胺 反 应 120. 在 酸 性 溶 液 中 水 解D AB BC 98： 126130 可 以 鉴 别 的 药 物 是 A. 链 霉 素 B. 庆 大 霉 素 C. 两 者 均 可 D. 两 者 均 不 可 126. 用 Kober反 应 127. 用 坂 口 反 应 128. 用 麦 芽 酚 反 应 129. 用 三 氯 化 铁 反 应 130. 用 茚 三 酮 反 应 DAADC 问 题 46 50 A. 茚 三 酮 反 应 B. 麦 芽 酚 反 应 C. 坂 口 反 应 D. FeC13反 应 E. 羟 肟 酸 铁 反 应 46 头 孢 唑 林 钠 47 金 霉 素 48 链 霉 素 49 庆 大 霉 素 50 青 霉 素 EDEAABC （ ） 青 霉 素 分 子 能 与 碘 定 量 反应 ， 因 此 可 以 根 据 消 耗 的 碘 量 计算 青 霉 素 的 含 量 。 99m： 90 四 环 素 在 酸 性 条 件 下 的 降 解 产 物 是 A. 差 向 四 环 素 B. 脱 水 四 环 素 C. 异 四 环 素 D. 去 甲 四 环 素 E. 去 甲 氧 四 环 素