实验五、无菌操作及接种技术课件.ppt

《实验五、无菌操作及接种技术课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验五、无菌操作及接种技术课件.ppt（22页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、实 验 七无 菌 操 作 及 接 种 技 术 一 、 微 生 物 接 种 技 术一 ） 、 实 验 目 的 学 习 微 生 物 接 种 工 具 的 使 用 ， 掌 握 无 菌 操 作 方 法 ， 建立 有 菌 概 念 。二 ） 、 实 验 原 理无 菌 技 术 ： 指 在 微 生 物 实 验 工 作 中 ， 控 制 或 防 止 各 类 微 生物 的 污 染 及 其 干 扰 的 一 系 列 操 作 方 法 和 有 关 措 施 。接 种 ： 将 微 生 物 接 到 适 于 它 生 长 繁 殖 的 人 工 培 养 基 上 或 活的 生 物 体 内 的 过 程 。 三 ） 实 验 用 品 四 ） 实

2、验 步 骤 ：1、 接 种 工 具 的 介 绍 接 种 环 、 接 种 钩 、 接 种 针 、 接 种 圈 、 接 种 锄 、 玻 璃 涂 棒 、 其他 接 种 工 具 2、 超 净 工 作 台 超 净 工 作 台 是 为 实 验 室 工 作 提 供 无 菌 操 作 环 境 的 设 施 ，以 保 护 实 验 免 受 外 部 环 境 的 影 响 ， 同 时 为 外 部 环 境 提 供某 些 程 度 的 保 护 以 防 污 染 并 保 护 操 作 者 。 原 理 ： 超 净 工 作 台 的 洁 净 环 境 是 在 特 定 的 空 间 内 ， 洁净 空 气 (进 滤 空 气 )按 设 定 的 方 向

3、 流 动 而 形 成 的 。 以 气 流方 向 来 分 ， 现 有 的 超 净 工 作 台 可 分 为 垂 直 式 ， 由 内 向 外式 以 及 侧 向 式 。 垂 直 流 超 净 工 作 台 水 平 流 超 净 工 作 台 垂 直 流 超 净 工 作 台 超 净 台 的 使 用 与 维 护o 风 速 保 持 在 0.32-0.48米 /秒o 使 用 前 打 开 紫 外 灯 照 射 4060mino 开 启 超 净 工 作 台 工 作 电 源 ， 关 闭 紫 外 灯 ， 并 用 75%的 酒 精 或 0.5%过氧 乙 酸 喷 洒 擦 拭 消 毒 工 作 台 面 。o 使 用 中 ， 有 机 玻

4、 璃 罩 受 到 污 染 ， 严 禁 用 酒 精 棉 球 擦 拭 ， 请 用 含 水 棉 布檫 拭 ；o 请 保 持 超 净 台 整 洁 、 干 燥 ， 不 要 堆 积 杂 物 ；o 使 用 完 毕 ， 关 闭 煤 气 开 关 或 酒 精 灯 ；o 使 用 完 毕 后 ， 用 消 毒 液 擦 拭 工 作 台 面 ， 关 闭 工 作 电 源 ， 重 新 开 启 紫外 灯 照 射 15min .o 定 期 做 无 菌 试 验 ， 以 测 定 净 化 台 是 否 符 合 无 菌 要 求 。 2、 无 菌 操 作 要 点1） 、 要 求 建 立 “ 有 菌 概 念 ” 。2） 、 接 种 时 要 有

5、一 个 洁 净 的 环 境 ， 整 个 操 作 过程 必 须 在 火 焰 旁 进 行 。3） 接 种 环 ， 棉 塞 一 定 要 拿 在 手 上 ， 不 能 随 便 乱丢 。3、 微 生 物 接 种 技 术1） 、 斜 面 接 种 技 术 从 斜 面 菌 种 将 菌 移 接 至 另 一 斜 面 培 养 基 的方 法 ， 叫 做 斜 面 接 种 。 接 种 方 法 ：A、 接 种 前 用 酒 精 棉 球 擦 净 桌 面 ；B、 将 试 管 贴 上 标 签 ， 注 明 菌 名 、 接 种 日 期 、 接 种人 姓 名 等 ， 然 后 用 酒 精 棉 球 擦 手 消 毒 ；C、 点 燃 酒 精 灯

6、以 后 ， 在 火 焰 旁 将 每 一 支 试 管 内 的棉 塞 稍 微 转 一 下 ， 使 其 松 动 ， 以 便 在 接 种 时 易 拔出 ， 并 将 试 管 放 在 试 管 架 上 ， 放 在 接 种 台 的 右 前方 ； D、 将 菌 种 和 斜 面 培 养 基 的 两 支 试 管 ， 用 大 拇 指 和其 他 四 指 握 在 左 手 中 ， 使 中 指 位 于 两 试 管 之 间 的 部分 ， 斜 向 上 ， 并 使 他 们 呈 水 平 位 置 ， 也 可 将 试 管 横放 在 左 手 掌 中 央 ， 用 四 个 手 指 托 住 试 管 ， 大 拇 指 压在 试 管 上 ， 斜 面

7、向 上 ；E、 右 手 拿 接 种 环 ， 在 火 焰 上 将 环 的 部 分 烧 红 灭 菌 ，环 以 上 凡 在 接 种 可 能 进 入 试 管 内 的 部 分 ， 均 应 通 过火 焰 灼 烧 。 （ 见 图 4） 图 4 接 种 环 灭 菌 以 下 操 作 ， 需 要 使 管 口 靠 近 火 旁F、 用 右 手 小 指 、 无 名 指 和 手 掌 拔 掉 棉 塞 ；G、 以 火 焰 灼 烧 管 口 ， 灼 烧 时 应 不 断 转 动 试 管 口 ，使 试 管 口 沾 染 的 少 量 菌 得 以 烧 死 ；H、 将 烧 过 的 接 种 环 伸 入 菌 种 试 管 内 ， 先 将 环 接

8、触没 有 长 菌 的 培 养 基 部 分 ， 使 其 冷 却 ， 以 免 烧 死 被 接种 的 菌 体 ， 然 后 轻 轻 接 触 菌 体 ， 取 出 少 许 ， 慢 慢 将接 种 环 抽 出 试 管 （ 图 5） ， 注 意 尽 量 不 要 使 环 的 部分 碰 钉 子 到 管 壁 ， 取 出 后 不 可 使 环 通 过 火 焰 ； 图 5 从 一 个 试 管 移 种 到 另 一 试 管 I、 迅 速 将 接 种 环 在 火 焰 旁 伸 进 另 一 试 管 ， 在 斜 面培 养 基 上 从 底 部 划 线 到 顶 部 ， 但 不 要 把 培 养 基 划 破 ，也 不 要 使 菌 种 沾 染

9、管 壁 ；J、 取 出 接 种 环 ， 灼 烧 试 管 口 ， 并 在 火 焰 旁 将 棉 塞塞 上 ， 不 要 用 试 管 去 迎 棉 塞 ， 以 免 试 管 在 运 到 时 灌入 不 洁 的 空 气 ，K、 将 接 种 环 在 火 焰 上 再 灼 烧 灭 菌 ， 放 回 原 出 后 ，再 腾 出 手 来 将 棉 塞 塞 紧 ， 将 新 接 种 的 斜 面 试 管 放 在试 管 架 上 ；L、 接 种 后 的 斜 面 培 养 基 ， 放 在 恒 温 箱 内 培 养 。 斜 面 接 种 示 意 图 A、 加 热 融 化 培 养 基 将 三 角 瓶 瓶 口 包 扎 绳 解 开 ， 轻 轻 旋 动

10、 棉 塞 ， 然 后 将 瓶 子放 入 微 波 炉 中 加 热 ， 选 取 高 火 力 ， 加 热 1min后 取 出 晃 动 ，反 复 加 热 直 至 培 养 基 完 全 溶 解 。B、 倒 平 板 右 手 持 盛 培 养 基 的 三 角 瓶 置 火 焰 旁 边 ， 用 左 手 将 瓶 塞 轻轻 地 拨 出 ， 瓶 口 保 持 对 着 火 焰 ； 然 后 左 手 拿 培 养 皿 并 将 皿盖 在 火 焰 附 近 打 开 一 缝 ， 迅 速 倒 人 培 养 基 约 15ml， 加 盖 后轻 轻 摇 动 培 养 皿 ， 使 培 养 基 均 匀 分 布 在 培 养 皿 底 部 ， 然 后平 置 于

11、 桌 面 上 ， 待 凝 后 即 为 平 板 。 2） 、 平 板 接 种 技 术 接 种 方 法 ： A 右 手 持 接 种 环 ， 经 火 焰 灭 菌 ， 待 凉 后 ， 挑 取 培 养 物 少许 。 左 手 斜 持 琼 脂 平 板 ， 皿 盖 留 在 桌 上 ， 于 火 焰 近 处 将菌 涂 于 琼 脂 平 板 上 端 ， 来 回 划 线 ， 涂 成 薄 膜 （ 约 占 平 板总 表 面 积 的 1/10） ， 划 线 时 接 种 环 与 平 板 表 面 成3040角 ， 轻 轻 接 触 ， 以 腕 力 在 平 板 表 面 行 轻 快 地 滑移 动 作 ， 接 种 环 不 应 划 破 培

12、 养 基 表 面 。 B、 烧 灼 接 种 环 ， 杀 灭 环 上 残 留 细 菌 ， 待 冷 （ 是 否 冷 却 ，可 先 在 培 养 基 边 缘 处 试 触 ， 若 琼 脂 溶 化 ， 表 示 未 凉 ， 稍等 再 试 ） ， 从 薄 膜 处 取 菌 作 连 续 平 行 划 线 ， 约 占 平 板 表面 1/5左 右 ， 再 次 烧 灼 接 种 环 ， 等 三 次 平 行 划 线 以同 样 方 法 作 第 四 次 ， 第 五 次 划 线 ， 将 平 板 表 面 划 完 。 C、 划 线 完 毕 ， 盖 上 平 皿 盖 ， 底 面 向 上 ， 用 标 签 或 腊 笔注 明 菌 名 检 验 号

13、 码 ， 接 种 者 信 息 等 ， 置 37 孵 育 培 养 24小 时 后 观 察 结 果 。 划 线 接 种目 的 ： 使 混 合 的 细 菌 呈 单 个 分 散 生 长 ， 形 成 单 个 菌 落 ， 以 便获 得 纯 菌 、 活 菌 计 数 。方 法 ： 分 区 划 线 法 ： 适 用 于 含 菌 量 较 多 的 标 本 连 续 划 线 法 ： 适 用 于 含 菌 量 较 少 的 标 本 划 线 接 种 分 区 划 线 法 第 一 区 划 线灭 菌 接 种 环第 二 区 划 线灭 菌 接 种 环第 三 区 划 线灭 菌 接 种 环 划 线 接 种 连 续 划 线 法 划 线 接 种