血细胞分析的质量管理

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1、血 细 胞 分 析 的 质 量 管 理北京协和医院检验科张时民2011-6-11 石 家 庄 主 要 内 容l 血 细 胞 分 析 仪 的 工 作 原 理 和 进 展l 检 测 系 统 的 配 套l 仪 器 的 评 价l 仪 器 的 校 准l 室 内 质 量 控 制 应 用l 室 内 仪 器 比 对 分 析l 参 考 值 、 筛 检 规 则 的 确 立 和 验 证l 检 验 后 程 序 一 、 血 细 胞 分 析 仪 工 作 原 理 和 进 展阻 抗 法 、 光 学 法 、 多 参 数 分 析 法 阻 抗 法 、 光 学 法 、 多 参 数 分 析 法 For wor d s mal l a

2、ngl e Eo NeNe+Eo Ly Mo+Ba Mo Ba Forward large angleOrthogonal angle Orthogonal angle For wor d s mal l a ngl e For wor d s mal l a ngl e 血 常 规 检 验 技 术 进 展简 单 划 分 为 四 个 阶 段l 1 耳 垂 采 血 ( 末 梢 血 ) ,人 工 计 数 时 代l 2 手 指 采 血 ( 末 梢 血 ) , 半 自 动 血 球 仪 时 代l 3 静 脉 采 血 , 全 自 动 血 细 胞 分 析 仪 时 代l 4 静 脉 采 血 , 全 自 动 血

3、 细 胞 分 析 仪 流 水 线 时 代 血 常 规 检 验 技 术 进 展l 传 统 的 检 验 技 术 ( 计 数 板 +显 微 镜 ) 初 步 的 进 展 : 血 球 计 数 仪 时 代 三 分 类 法 代 表 性 仪 器l MEK 6318 l MEK 6108 l MEK 6400 现 代 的 血 细 胞 分 析 仪 血 细 胞 分 析 仪 流 水 线 直 方 图 和 散 点 图 白 细 胞 五 分 类 原 理l 物 理 学 方 法l 物 理 学 +化 学 染 色 法l 物 理 学 +荧 光 染 色 法日 本 光 电 Nihon Kohden (Celltac E&F)型 号 血 细

4、 胞 分析 仪 在 白 细 胞 分 类 上 采 用 非 染 色 半 导 体 激 光 法 ( 3角 度 )技 术 分 析 法 。 l 共 同 点激 光 技 术鞘 流 技 术l 红 细 胞 和 血 小 板 计 数 一 般采 用 阻 抗 法 。 ( 某 些 仪 器兼 有 光 学 法 检 测 原 理 ) l 血 红 蛋 白 采 用 比 色 法 五 分 类 法 血 细 胞 分 析 仪 原 理 流 式 细 胞 技 术E & F 流 动 池 流 式 细 胞 技 术E & F 样 本 流 动 流 式 细 胞 技 术E & F 鞘 流 技 术(在 样 本 周 围 ) 流 式 细 胞 技 术E & F由 于 流

5、动 的 液 体 是 分层 的 , 所 以 样 本 和 鞘流 液 是 不 混 合 的 。 E & F流 式 细 胞 技 术 激 光 单 元 流 式 细 胞 技 术E & F当 单 个 的 细 胞 经 过激 光 束 的 时 候 , 产生 了 散 射 光 。 流 式 细 胞 技 术E & F前 方 小 角 散 射 光 (FS) 流 式 细 胞 技 术E & F前 方 大 角 散 射 光 (FL) 流 式 细 胞 技 术E& F 侧 角 度 散 射 光 (SD) Celltac E &F 设 计 理 念 Y-轴 : 前 方 小 角 度 散 射 光 强 度1st X-轴 : 前 方 小 角 度 散 射

6、光 强 度2 st X-轴 : 直 角 度 散 射 光 强 度 Celltac Design Priority散 射 图 包 含 3维 立 体 信 息 二 、 检 测 系 统 的 配 套1. 什 么 是 检 测 系 统 ?l 完 成 一 个 检 测 项 目 所 涉 及 到 的 仪 器 、 试 剂 、校 准 品 、 操 作 程 序 、 质 量 控 制 、 保 养 计 划的 组 合 , 称 为 检 测 系 统 。 若 是 手 工 操 作 ,则 还 需 包 括 具 体 操 作 人 员 。l 为 了 保 证 达 到 质 量 要 求 , 提 高 检 测 效 率 ,将 真 空 标 本 采 集 管 、 配

7、套 离 心 机 等 也 纳 入检 测 系 统 。 l 冯 仁 丰 主 编 , 临 床 检 验 质 量 管 理 技 术 基 础 , 上 海 科 学 技 术 文 献 出 版 社 , 第 一 版 , 2003年7月 2. 何 为 血 细 胞 分 析 检 测 系 统 ?l 半 自 动 或 全 自 动 分 析 仪 器 , 用 于 对 全 血 中血 细 胞 、 血 红 蛋 白 和 相 关 的 参 数 进 行 定 量分 析 和 计 算 的 仪 器 。l 中 华 医 学 会 检 验 分 会 血 液 学 /体 液 学 专 业学 组 对 血 液 分 析 仪 检 测 系 统 也 有 明 确 的 定义 , 即 指 使

8、 用 配 套 试 剂 , 用 配 套 校 准 物 定期 进 行 仪 器 校 准 , 规 范 地 开 展 室 内 质 量 控制 , 参 加 室 间 质 量 评 价 成 绩 优 良 , 人 员 经过 培 训 。 3. 检 测 系 统 重 要 内 涵l 检 测 系 统 中 的 测 定 原 理 、 试 剂 、 仪 器 、 校准 品 和 质 控 品 是 最 重 要 的 条 件 , 对 其 中 任何 一 个 进 行 更 改 和 替 换 , 都 可 以 认 为 是 检测 系 统 的 不 一 致 。l 不 同 的 检 测 系 统 可 以 得 到 不 同 的 结 果 , 不配 套 的 检 测 系 统 也 会 对

9、 检 测 结 果 带 来 明 显的 影 响 。 各 仪 器 生 产 厂 家 都 应 该 建 立 的 标准 检 测 系 统 以 确 保 检 测 质 量 。 4. 何 为 配 套 检 测 系 统 ?l 由 设 备 生 产 厂 商 自 己 按 照 所 设 计 和 生 产 的仪 器 的 原 理 、 功 能 和 特 性 , 为 其 配 套 研 制生 产 的 全 套 试 剂 、 校 准 品 和 质 控 品 。l 设 备 生 产 厂 商 委 托 专 门 生 产 试 剂 、 校 准 品 、质 控 品 厂 商 , 为 特 定 品 牌 型 号 仪 器 生 产 的相 关 产 品 。 该 产 品 所 有 特 点 符

10、合 仪 器 测 定原 理 要 求 , 参 考 值 和 范 围 均 使 用 特 定 型 号的 仪 器 测 定 后 得 到 。 三 、 仪 器 的 性 能 评 价l 新 的 仪 器 在 投 入 使 用 前 均 应 进 行 系 统 评 价 ,仪 器 进 行 较 大 的 修 理 ( 更 换 重 要 零 部 件 后 )也 应 进 行 性 能 重 新 评 价 。l 一 般 认 为 从 保 证 检 验 质 量 考 虑 , 实 验 室 在 使用 检 测 系 统 前 , 必 须 在 实 验 室 的 具 体 条 件 下 ,用 实 验 方 法 证 实 检 测 系 统 的 基 本 性 能 后 , 才可 以 将 检 测

11、 系 统 用 于 常 规 工 作 。 仪 器 性 能 评 价 的 基 本 内 容 有 :l 稀 释 效 应 : 稀 释 度 与 变 量 之 间 的 线 性 范 围 越 宽 越 好 。稀 释 度 应 覆 盖 生 理 和 常 见 病 理 范 围 。l 精 密 度 : 应 包 括 批 内 和 批 间 精 密 度 和 总 精 密 度 , 应包 括 高 、 中 、 低 三 个 浓 度 , 覆 盖 正 常 与 病 理 范 围 。l 携 带 污 染 率 : 对 高 值 和 低 值 标 本 的 携 带 污 染 进 行 评价 , 保 证 交 叉 测 量 时 的 准 确 性 。l 准 确 性 : 测 定 值 与

12、真 值 的 一 致 性 。 真 值 应 采 用 决 定性 方 法 或 参 考 方 法 获 得 。l 白 细 胞 分 类 的 性 能 评 价 : 显 微 镜 分 类 法 , 200cells/片 , 2人 分 片 。 ( 国 标 文 件 WS/T 246) 四 检 测 系 统 的 校 准血 细 胞 分 析 仪 校 准 原 则l 新 购 入 仪 器 安 装 之 后 , 投 入 临 床 应 用 之 前 。l 仪 器 较 大 的 维 修 之 后 , 更 换 关 键 的 部 件 , 有 可能 对 检 测 结 果 造 成 显 著 影 响 。l 室 内 质 量 控 制 显 示 检 测 系 统 的 检 测 结

13、 果 有 漂 移时l 临 床 常 规 实 验 室 需 制 定 定 期 校 准 规 范 程 序 , 例如 每 半 年 一 次 ? l 美 国 NCCLS于 1999年 发 布 了 H38-P文 件 : “ 血 液 自 动 分 析 仪 的 校 准 和 质量 控 制 建 议 ” 血 细 胞 分 析 检 测 系 统 的 校 准l血 细 胞 分 析 仪 校 准 前 准 备(1)仪 器 通 道 及 测 试 室 用 清 洁剂 处 理 30min后 冲 洗 干 净(2)测 定 配 套 试 剂 的 本 底 , 应在 允 许 范 围 内(3)测 定 12分 新 鲜 血 标 本 ,其 重 复 性 在 原 仪 器 的

14、 性 能 要求 之 内 。 (4)如 果 校 准 程 序 不 熟 悉 , 可请 厂 商 工 程 师 协 助 校 准 校 准 方 法l 使 用 仪 器 配 套 的 试 剂 和 校 准 品 进 行 校 准l 使 用 定 值 新 鲜 血 进 行 校 准 ( 由 具 有 ISO 17025 资 质 的 校 准 实 验 室 提 供 样 本 ) 1. 使 用 配 套 校 准 物 校 准l 校 准 物 的 准 备 (1)将 校 准 物 从 冰 箱 ( 2 8 ) 取 出 , 在 室 温( 18 25 ) 条 件 下 放 置 15min, 使 其 复 温至 室 温 状 态 。 (2)检 查 校 准 物 是 在

15、 有 效 期 内 (3)轻 轻 地 将 校 准 物 反 复 颠 倒 混 匀 , 并 置 于 两手 掌 间 慢 慢 搓 动 , 使 校 准 物 充 分 混 匀 。 校 准 做 法l (1) 如 果 仪 器 有特 定 的 校 准 程序 , 可 按 照 程序 自 动 运 行 和校 准 。 也 可 人工 校 准 和 计 算 ,将 校 准 品 在 需校 准 仪 器 上 续测 定 11次 , 取第 211次 结 果计 算 出 X+s (2)计 算 出 均 值 ( X) 与 校 准品 定 值 的 绝 对 值 差 值 和 相对 差 值 ( 偏 差 ) , 与 下 表进 行 比 较 。 校 准 判 断 和 处

16、理 原 则l 各 参 数 均 值 与 定 值 的 差 异 全 部 等 于 或 小于 表 中 的 第 一 列 数 值 , 校 准 合 格 , 仪 器不 需 进 行 调 整 , 记 录 检 测 数 据 即 可 。l 若 各 参 数 均 值 与 定 值 的 差 异 大 于 表 中 的第 二 例 数 值 时 , 校 准 失 败 , 不 能 达 到校 准 要 求 。 需 请 厂 家 维 修 人 员 核 查 原因 并 进 行 处 理 。 如 系 仪 器 硬 件 或 软 件 问题 , 应 进 行 检 修 , 检 修 后 重 新 校 准 。 校 准 判 断 和 处 理 原 则l 若 各 参 数 均 值 与 校

17、 准 物 定 值 的 差 异 在表 中 第 一 列 与 第 二 列 数 值 之 间 时 , 可以 执 行 校 准 程 序 , 重 新 计 算 和 调 整 校准 系 数 , 调 整 方 法 可 按 仪 器 说 明 书 的要 求 进 行 。l 校 准 后 宜 将 校 准 物 再 重 新 测 定 11次 ,取 211次 的 均 值 与 定 值 比 较 , 各 参 数如 等 于 或 小 于 第 一 列 数 值 , 证 明 校 准合 格 , 否 则 需 重 新 校 准 。 此 步 骤 属 于校 准 后 验 证 。 MEK7222血 细 胞 计 数 仪 校 准 实 例 MEK7222校 准 实 例lSte

18、p1: 首先 选 择 一 份新 鲜 血 标 本 ,测 定 11次 ,仪 2-11次 测定 结 果 为 准 ,审 查 仪 器 本身 的 精 密 度 。l 全 部 合 格 MEK 7222测 定 精 密 度 标 准 用 配 套 校 准 物 做 首 次 测 定lStep2:应 用 配套 的 校 准 物 在仪 器 上 测 定 11次 , 选 择 2-11次 的 结 果 列 表 ,统 计 分 析 。 校准 物 测 定 的 精密 度 很 好 , 除RBC外 , 均 在一 列 范 围 内 。 计 算 均 值 和 校 准 物 靶 值 间 的 偏 差lStep3:计 算 平 均 值 和 校 准 物 靶 值 之

19、间 的 偏差 , 得 到 下 面 的 结 果l 计 算 新 的 校 准 系 数 , 输 入 仪 器 内 。 验 证 校 准 结 果 , 再 次 测 定 校 准 物lStep4:再 次测 定 校 准 物11次 , 重 新统 计 结 果 ,将 测 定 均 值和 校 准 物 定值 重 新 计 算偏 差 。 校 准 后 的 结 果l 校 准 后 重 新 计 算 的 偏 差 。l 下 面 为 校 准 前 的 偏 差l 结 论 : 校 准 合 格 五 、 室 内 质 量 控 制 应 用 医 疗 机 构 临 床 实 验 室 管 理 办 法 中 相 关 规 定l 血 细 胞 分 析 仪 必 须 进 行 日 常

20、 的 室 内 质 控 测 定 。 ISO 15189中 的 相 关 要 求 我 们 实 验 室 中 LIS系 统 中 的 质 控 图 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10+3S+2S+1S均 值-1S-2S-3S 在 控 什么是在控还是失控? 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10+3S+2S+1S均 值-1S-2S-3S 在 控控 制 结 果 落 在 2s线 上 就 认 为 失 控 , 这 是 错 误 的 理 解 。 凡 未 超 出 2s, 即 使 在线 上 都 不 属 有 问 题 , 不 必 作 任 何 处 理 , 更 不 是 失 控 。 Westgard多 规 则 的 误 差 检

21、索 程 序 有Q C数 据 没 有没 有 没 有 没 有 没 有 没 有有有 有 有 有S21 S31 S22 SR4 S14 X10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10+3S+2S+1S均 值-1S-2S-3S 13S失 控 规 则 示 意 图 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10+3S+2S+1S均 值-1S-2S-3S 22S失 控 规 则 示 意 图 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10+3S+2S+1S均 值-1S-2S-3S R4S失 控 规 则 示 意 图 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10+3S+2S+1S均 值-1S-2S-3S 41S失 控 规 则 示

22、意 图 ( 警 告 规 则 ) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10+3S+2S+1S均 值-1S-2S-3S X10 X10 失 控 规 则失 控 规 则 ( 警 告 规 则 ) 质 控 靶 值 和 范 围 的 设 定l 直 接 使 用 厂 商 的 定 值 及 允 许 范 围 作 为 控 制 图上 的 均 值 和 标 准 差 ( 需 经 过 验 证 ) 。l 每 个 实 验 室 必 须 自 己 通 过 测 定 , 累 积 控 制 值来 计 算 自 己 的 均 值 和 标 准 差 , 用 于 自 己 的 控制 图 上 。l 严 格 讲 各 实 验 室 的 检 测 方 法 ( 检 测 系 统

23、 ) 一定 不 同 于 厂 商 定 值 的 检 测 方 法 。 厂 商 提 供 的允 许 范 围 是 他 们 的 “ 保 险 ” 范 围 , 不 是 应 控制 范 围 , 一 般 都 很 大 。 它 只 是 告 诉 用 户 , 您的 测 定 值 在 此 范 围 内 , 说 明 控 制 品 没 问 题 ,不 说 明 其 它 。 血 常 规 质 控 品 定 值 做 法l 在 你 实 验 室 条 件 下 ( 环 境 、 温 度 、 电 压 、试 剂 配 套 ) 等 情 况 下 进 行 定 值l 选 择 一 份 质 控 品 , 每 日 测 定 3次 , 连 续 3天l 第 4天 测 定 一 次 后 ,

24、 共 10个 数 据 , 统 计 平均 值 和 标 准 差 , 设 定 该 批 次 质 控 品 的X 2s范 围l 应 在 上 一 批 次 质 控 品 用 完 至 少 3天 前 开 始进 行 新 一 批 号 质 控 品 的 测 定 。l 保 持 相 应 定 值 过 程 的 原 始 记 录 。 我 们 实 验 室 中 LIS系 统 中 的 质 控 图 六 、 室 内 仪 器 比 对 分 析 美 国 临 床 实 验 室 修 正 改 进 法 案 (CLIA)血 液 学 CLIA88规 则 做 法 -新 鲜 血 比 对 实 验l 同 一 实 验 室 使 用 多 台 不 同 厂 商 和 型 号 的 血液

25、 分 析 仪 时 , 需 要 定 期 进 行 对 比 实 验 。l 在 每 台 仪 器 均 已 经 过 校 准 , 均 进 行 日 常 质控 并 在 控 的 情 况 下 , 用 新 鲜 血 做 对 比 实 验 ,也 是 保 证 同 一 实 验 室 结 果 一 致 性 的 必 要 手段 。l 也 是 作 为 新 鲜 血 校 准 或 质 控 的 一 种 方 式l 应 该 以 一 台 仪 器 作 为 标 准 , 其 他 仪 器 与 这台 仪 器 进 行 比 对 。 l 实 验 室 有 为 保 持 本 室 所 有 不 同 型 号 的 血 细 胞分 析 仪 具 有 对 同 一 份 患 者 标 本 检 测

26、 结 果 基 本相 同 的 责 任 。l 除 了 进 行 定 期 的 血 细 胞 分 析 仪 校 准 , 日 常 质控 外 , 还 应 定 期 采 用 不 同 浓 度 的 新 鲜 患 者 血标 本 , 在 不 同 的 检 测 系 统 上 进 行 测 定 。l 至 少 应 该 有 一 台 仪 器 作 为 规 范 的 检 测 系 统 ,以 其 作 为 标 准 , 和 被 评 价 的 其 他 检 测 系 统 进行 比 对 实 验 。 我 室 某 次 比 对 实 验 的 实 例 w判 断 标 准 : 应 选 择 1/2 CLIA88规 则 比 对 结 果 l 判 断 标 准 :应 选 择 1/2 CL

27、IA88规则 仪 器 经 过 重 新 清 洗 后 再 次 测 定 l 公 式 : 偏 差 ( 偏 倚 ) %=( 对 比 仪 器 参 比 仪器 ) /参 比 仪 器 100 标 准 : 二 分 之 一 的 CLIA88规 则 七 、 参 考 值 、 筛 检 规 则 的 确 立 和 验 证 筛 检 规 则 的 确 立 五 分 类 法 血 细 胞 分 析 仪l 具 有 白 细 胞 五 分 类 功 能 的 血 细 胞 分 析 仪 应 用越 来 越 广 泛 , 其 测 定 原 理 各 异 , 特 别 是 在 白细 胞 分 类 上 的 原 理 完 全 不 同 。 但 是 各 类 型 血细 胞 分 析 仪

28、 都 有 不 足 , 不 能 彻 底 解 决 血 细 胞形 态 学 检 查 问 题 , 均 有 缺 陷 和 局 限 性 。l 通 过 观 察 仪 器 测 定 数 据 、 直 方 图 、 散 点 图 、临 床 诊 断 等 , 对 结 果 的 真 实 性 提 出 质 疑 , 并根 据 相 关 的 复 检 规 则 进 行 血 涂 片 复 检 , 或 者采 用 其 他 方 法 复 查 , 找 到 问 题 , 解 决 问 题 ,给 临 床 医 生 和 患 者 回 报 真 实 的 结 果 。 l 国 际 血 液 学 复 检 专 家 组 在 2005年 经 过 大 量实 验 数 据 提 出 了 自 动 血

29、细 胞 计 数 和 白 细胞 分 类 计 数 的 复 检 规 则 ( 简 称 复 检 规 则 )4 41条 给 我 们 提 供 了 很 好 的 借 鉴 , 是 对 血细 胞 自 动 分 析 仪 测 定 结 果 报 告 规 则 的 良 好的 补 充 。l 参 照 复 检 规 则 的 制 定 原 则 , 各 个 医 院 均 应评 价 自 己 仪 器 的 性 能 , 根 据 医 院 的 特 点 ,制 定 自 己 医 院 的 筛 检 规 则 。 复 检 规 则 的 制 定 我 院 制 定 的 血 细 胞分 析 仪 筛 检 规 则l 筛 检 规则 的 应用 , 更加 保 证结 果 的准 确 可靠 。 C

30、omplexity Granularity Granularity 八 典 型 病 例 分 析单 核Mo 嗜 中 性 单 核Mo淋 巴淋 巴 嗜 酸 嗜 碱 Fig.4 Scattergram and data analysis result with peripheral blood smear: Eosinophilia sample ( ) Blast 0.0 Promy 0.0 Myelo 0.0 Meta 0.0 Stab 4.5 ( ) Seg 37.5 NE 41.3 Lymph 33.0 LY 31.7 Mono 4.0 MO 9.0 Eosino 19.5 EO 17.8 B

31、aso 1.5 BA 0.2 A-Ly 0.0 Celltac F Eosinophilia 視 算 法 Celltac FLeukocytes 4.6 109/L Flags Eye countGranul ari ty Granul ari ty 嗜 酸 细 胞 增 多 症 E & F 大 量 未 成 熟 粒 细 胞 Complexity Granularity Granularity Complexity Granularity Granularity Leukocytes19.5 103/ LFig.7 Scattergram and data analysis result with

32、 peripheral blood smear: abnormal sample including Immature Granulocytes: Blasts, Promyelocytes ,Myelocytes and Metamyelocytes. ( ) Blast 5.0 Promy 5.0 Myelo 12.0 Meta 14.0 Stab 24.0 ( ) Seg 12.0 NE 54.4 Lymph 20.0 LY 22.8 Mono 3.0 MO 11.8 Eosino 3.0 EO 2.4 Baso 2.0 BA 8.6 A-Ly 0.0Celltac F BlastsIm

33、mature GranulocyteLeft Shift LeukocytosisLymphocytosisMonocytosisBasophilia 視 算 法 Celltac FLeukocytes 19.5 109/L Flags Eye count Granul ari ty Granul ari ty E & F AML Complexity Granularity Granularity Complexity Granularity Granularity Fig.8 Scattergram and data analysis result with peripheral bloo

34、d smear: abnormal sample (Acute Myeloblastic Leukemia) ( ) Blast 95.5 Promy 2.0 Myelo 0.5 Meta 0.5 Stab 0.0 ( ) Seg 1.0 NE 4.0 Lymph 0.5 LY 27.0 Mono 0.0 MO 67.8 Eosino 0.0 EO 0.1 Baso 0.0 BA 1.1 A-Ly 0.0 Celltac F BlastsImmature GranulocyteLeft Shift LeukocytosisLymphocytosisMonocytosisBasophilia 視

35、 算 法 Celltac FLeukocytes 254.0 109/L Flags Eye count Granul ari ty Granul ari ty 九 、 检 验 后 程 序l 仔 细 核 对 患 者 资 料 、 编 号 等 内 容l 核 对 患 者 的 历 史 记 录 , 有 明 显 不 符 时 需 复查 。l 相 关 的 备 注l 与 临 床 联 系 沟 通l 及 时 正 确 发 送 检 验 结 果l 标 本 的 保 存 和 处 理 例 1: 正 常 情 况 下 , 审 核 报 告 例 2: 异 常 报 告 的 ,也 可 签 发 例 3. 错 误 标 本 的 识 别l 如 抽 错 血 谢 谢 !欢 迎 访 问 : 张 时 民 搜 狐 博 客http:/

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