细菌的检查与防治原则ppt课件

《细菌的检查与防治原则ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细菌的检查与防治原则ppt课件（86页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、第 七 章 感 染 病 病 原 学 诊 断 与 预 防教 学 目 的 :掌 握 标 本 采 集 的 原 则 、 标本 的 处 理 方 法 及 常 用 实 验 诊 断 技 术 。 细 菌 真 菌 病 毒 感 染 病 如 何 诊 断 ？ 标 本 的 采 集 和 送 检 六 原 则 遵 守 无 菌 操 作选 择 不 同 采 集 时 机 和 标 本 种 类尽 早 采 集在 抗 生 素 应 用 前 采 集正 确 的 保 存 和 运 送直 接 关 系 到 检 测 的 准 确 性作 好 标 记 ,化 验 单 核 对 常 见 的 临 床 标 本 1） 血 液 标 本 ： 正 常 人 的 血 液 是 无 菌 的

2、 。 采 集 血 液 标 本 主 要 用 于 病 原 体 培养 、 核 酸 检 测 及 血 清 中 抗 原 抗 体 检 测 。 2） 呼 吸 道 标 本 ： 上 呼 吸 道 有 正 常 菌 群 的 存 在 ， 进 行 普 通 培 养 无 特 别 意 义 ，仅 在 疑 似 化 脓 性 扁 桃 体 炎 、 白 喉 、 百 日 咳 患 者 及 脑 膜 炎 奈 瑟 菌 带 菌 者 的检 查 时 ， 采 集 咽 拭 子 、 鼻 咽 拭 子 或 化 脓 部 位 的 分 泌 物 ， 下 呼 吸 道 正 常 情况 下 无 菌 或 仅 有 少 量 细 菌 侵 入 ， 但 很 快 被 清 除 。 怀 疑 有 支

3、气 管 炎 、 肺 炎及 结 核 病 的 患 者 需 采 集 下 呼 吸 道 标 本 ， 包 括 痰 液 、 支 气 管 灌 洗 液 和 气 管镜 毛 刷 等 。 采 集 下 呼 吸 道 标 本 应 防 止 上 呼 吸 道 正 常 菌 群 的 污 染 。 3） 尿 液 标 本 ： 正 常 人 尿 液 是 无 菌 的 。 但 在 前 尿 道 有 正 常 菌 群 和 过 路 菌 存在 （ 大 肠 埃 希 菌 、 葡 萄 球 菌 ） ， 而 后 者 又 是 常 见 尿 路 感 染 的 病 原 菌 。 因此 正 确 的 采 集 尿 液 ， 避 免 其 他 菌 群 的 污 染 是 尿 液 细 菌 检 验

4、 正 确 与 否 的 关键 。 一 些 抗 菌 药 物 和 代 谢 产 物 通 过 尿 液 排 泄 ， 因 此 尿 液 标 本 必 须 在 使 用抗 菌 药 物 之 前 采 集 。 女 性 月 经 期 不 易 采 集 标 本 。 常 用 的 尿 液 细 菌 培 养 标 本 包 括 中 段 尿 、 肾 盂 尿 、 膀 胱 穿 刺 尿 及 晨 尿 。 常 见 的 临 床 标 本 4） 脑 脊 液 标 本 ： 正 常 人 脑 脊 液 是 无 菌 的 ， 从 脑 脊 液 中 检 出 细 菌 均 应 作 为病 原 菌 看 待 。 5） 粪 便 标 本 ： 肠 道 内 有 种 类 和 数 量 很 多 的

5、正 常 菌 群 ， 因 此 粪 便 标 本 中 包含 有 大 量 的 正 常 菌 群 ， 通 常 需 用 选 择 培 养 基 分 离 致 病 菌 ， 此 外 菌 群 失 调和 菌 交 替 症 也 可 引 起 腹 泻 ， 因 此 对 正 常 菌 群 的 种 类 和 比 例 的 检 查 是 不 可或 缺 的 。 6） 生 殖 道 标 本 ： 正 常 的 内 生 殖 器 官 是 无 菌 的 ， 但 外 生 殖 器 可 有 正 常 菌 群的 存 在 ， 在 菌 群 失 调 时 也 可 发 生 真 菌 性 阴 道 炎 、 细 菌 性 阴 道 炎 或 尿 道 炎等 疾 病 。 解 剖 结 构 的 不 同

6、男 性 和 女 性 生 殖 道 采 集 的 标 本 有 ： 男 性 尿 道 、 生 殖 道 分 泌 物 ， 前 列 腺 液 标 本 阴 道 后 穹 窿 分 泌 物 及 经 阴 道 后 穹 窿 穿 刺 盆 腔 脓 液 外 阴 分 泌 物 采 用 双 套 管 的 方 式 插 入 子 宫 腔 吸 取 分 泌 物 7） 脓 液 、 胸 腹 水 及 分 泌 物 等 其 他 标 本 。 致 病 菌 的 分 离 鉴 定 药 物 敏 感 试 验涂 片 检 查 -染 色 和 不 染 色 -分 离 培 养生 化 试 验血 清 学 鉴 定动 物 试 验 明确诊断 初 步 诊 断分 子 生 物 学 技 术病 原 菌

7、抗 原 检 测 EIA、 协 同 凝 集 试 验 、 IF、 CIE等 涂 片 检 查 不 染 色 标 本 的 形 态 检 查 ： 观 察 细 菌 的 动 力 及 运 动 等 活 体 状 况 。 常 用 的 方法 有 悬 滴 法 、 压 滴 法 ， 该 法 不 能 看 清 细 菌 的 形 态 结 构 特 征 。 染 色 标 本 的 形 态 检 查 ： 1） 染 色 的 原 理 和 染 料 2） 常 用 染 料 ： 酸 性 、 碱 性 、 复 合 、 单 纯 染 料 等 3） 染 色 方 法 ： 单 染 法 、 复 染 法 （ 革 兰 染 色 、 抗 酸 染 色 ） 、 特 殊 染 色 致 病

8、菌 的 分 离 鉴 定 药 物 敏 感 试 验涂 片 检 查 -染 色 和 不 染 色 -分 离 培 养生 化 试 验血 清 学 鉴 定动 物 试 验 明确诊断 初 步 诊 断分 子 生 物 学 技 术病 原 菌 抗 原 检 测 EIA、 协 同 凝 集 试 验 、 IF、 CIE等 细 菌 的 接 种 与 分 离 培 养 为 了 能 鉴 定 和 研 究 细 菌 ， 需 要 对 细 菌 进 行 分 离 培 养 。 大 多 数 细 菌 可 用 人工 方 法 培 养 ， 根 据 不 同 细 菌 给 予 适 宜 的 培 养 条 件 ， 遵 守 实 验 操 作 的 要 求可 以 对 细 菌 进 行 分

9、 离 培 养 。 1） 无 菌 技 术 ： 细 菌 广 泛 存 在 于 自 然 界 中 ， 如 果 环 境 或 工 作 人 员 的 皮 肤 、黏 膜 中 的 细 菌 混 入 检 验 标 本 或 污 染 实 验 材 料 ， 将 严 重 影 响 检 验 结 果 的 正确 性 。 另 外 ， 临 床 标 本 都 是 具 有 感 染 性 的 含 有 病 原 体 的 传 染 源 ， 如 处 理不 当 ， 容 易 引 起 实 验 室 感 染 和 医 院 感 染 ， 甚 至 严 重 的 传 染 病 大 流 行 ， 因此 在 细 菌 学 检 验 时 必 须 随 时 防 止 标 本 污 染 和 病 原 菌 扩

10、散 的 操 作 ， 即 无 菌技 术 或 无 菌 操 作 。 2） 接 种 工 具 和 场 所 ： 接 种 针 和 接 种 环 是 细 菌 学 实 验 室 必 需 的 工 具 接种 罩 、 无 菌 工 作 台 、 无 菌 室 、 生 物 安 全 柜 是 为 了 达 到 无 菌 技 术 要 求 而 建立 的 细 菌 接 种 场 所 。 培 养 基培 养 基 （ culture medium） 供 细 菌 生 长 用 的 ， 由 人 工 方法 将 多 种 营 养 物 质 根 据 细 菌 的 需 要 组 合 成 的 混 合 营 养 基质 。 常 用 培 养 基 种 类（ culture medium

11、）特 殊 培 养 基 基 础 培 养 基营 养 培 养 基 选 择 培 养 基鉴 别 培 养 基 培 养 基 的 制 备 过 程 称 量 溶 解 调 PH 过 滤 分 装 灭 菌 质 量 检 验 保 存 细 菌 的 分 离 接 种 法 平 板 划 线 接 种 （ 使 标 本 中 混 在 的 多 种细 菌 在 培 养 基 表 面 分 散 生 长 ， 形 成 各自 菌 落 。 便 于 根 据 菌 落 特 征 ， 挑 取 单个 菌 落 进 行 纯 培 养 ） 细 菌 的 分 离 接 种 法 平 板 划 线 接 种 细 菌 的 分 离 接 种 法 平 板 划 线 接 种 第 二 次划 线 区第 三 次

12、划 线 区待 分 离 标本 涂 布 点 第 一 次 划 线 区平 板 划 线 接 种 细 菌 的 分 离 接 种 法 斜 面 接 种 （ 用 于 已 获 得 的 单 个 菌 落 的 移 种 、 纯 种 培养 细 菌 和 保 存 菌 种 及 观 察 细 菌 的 某 些 特 性 ） 细 菌 的 分 离 接 种 法 液 体 接 种 法 （ 用 于 增 菌 培 养 ） 细 菌 的 分 离 接 种 法 穿 刺 接 种 法 :此 法 主 要 用 于 半 固 体 培 养基 、 明 胶 及 双 糖 管 的 接 种 。 用 接 种 针取 细 菌 少 许 ， 从 半 固 体 培 养 基 中 央 ，平 行 于 管

13、壁 垂 直 刺 入 ， 接 近 管 底 但 不可 接 触 管 底 ， 然 后 接 种 针 沿 原 路 退 出 细 菌 的 分 离 接 种 法 测 定 牛 乳 、 饮 水 和 尿 液 等 标 本 细菌 数 时 常 用 此 方 法 。 常 用 于 纸 片 法 药物 敏 感 性 测 定 ，也 可 用 于 被 检 标本 中 的 细 菌 计 数 。 细 菌 的 培 养 方 法 1） 普 通 培 养 法 ： 是 指 需 氧 菌 或 兼 性 厌 氧 菌 等 在 普 通 大 气 环 境 下 的 培 养 条 件 ， 又 称 需 氧 培养 法 。 将 已 接 种 过 的 培 养 基 ,置 35 培 养 箱 内 1

14、8-24小 时 , 即 可 于 培 养 基 上 生 长 .少 数 生 长 缓慢 的 细 菌 ,需 培 养 3-7天 直 至 一 个 月 才 能 生 长 .为 使 培 养 箱 内 保 持 一 定 湿 度 ,可 在 其 内 放 置 一 杯水 .培 养 时 间 较 长 的 培 养 基 ,接 种 后 应 将 试 管 口 塞 棉 塞 后 用 石 腊 凡 士 林 封 固 ,以 防 培 养 基 干 裂 .2） 二 氧 化 碳 培 养 法 ： 某 些 细 菌 ,如 布 氏 杆 菌 和 脑 膜 炎 奈 瑟 菌 等 需 要 在 含 有 10%二 氧 化 碳 的空 气 中 才 能 生 长 ,尤 其 是 初 代 分

15、离 培 养 要 求 更 为 严 格 .将 已 接 种 的 培 养 基 置 于 二 氧 化 碳 环 境中 进 行 培 养 的 方 法 即 二 氧 化 碳 培 养 法 ,常 用 方 法 有 以 下 几 种 : (1) 二 氧 化 碳 培 养 箱 可 将 已 接 种 的 培 养 基 直 接 放 入 箱 内 孵 育 ,即 可 获 得 二 氧 化 碳 环 境 . (2) 烛 缸 法 将 已 接 种 的 培 养 基 ,置 于 容 量 为 2 000ml的 磨 口 标 本 缸 或 干 燥 器 内 .缸 盖 或 缸口 处 均 需 涂 以 凡 士 林 ,然 后 点 燃 蜡 烛 直 立 置 入 缸 中 ,密 封

16、缸 盖 .待 燃 自 行 熄 灭 时 ,容 器 内 约 含 5-10%的 CO2 容 器 置 37 培 养 . (3) 重 碳 酸 钠 -盐 酸 法 每 升 容 积 的 容 器 内 ,重 碳 酸 钠 与 盐 酸 按 0.4g与 3.5ml的 比 例 ,分 别 将两 种 药 各 置 一 器 皿 内 (如 平 皿 内 ),连 同 器 皿 置 于 标 本 缸 或 干 燥 器 内 ,盖 严 后 使 容 器 倾 斜 ,两 种 药 品 接 触 后 即 可 产 生 二 氧 化 碳 . 细 菌 的 培 养 方 法 3） 厌 氧 培 养 法 目 前 常 用 的 厌 氧 培 养 方 法 有 厌 氧 罐 法 ,气

17、袋 法 及 厌 氧 箱 三 种 . (1) 厌 氧 罐 法 是 目 前 应 用 较 广 泛 的 一 种 方 法 ,共 分 为 以 下 几 种 . 抽 气 换 气 法 :该 法 适 用 于 一 般 实 验 室 ,其 特 点 是 较 经 济 并 可 迅 速 建 立 厌 氧 环 境 .标 本 接 种 后 ,将 平 板 放入 厌 氧 罐 ,拧 紧 盖 子 ,用 真 空 泵 抽 出 罐 中 空 气 ,使 压 力 真 空 表 至 -79.98KPa,停 止 抽 气 ,充 入 高 纯 氮 气 使 压 力真 空 表 指 针 回 0位 ,连 续 反 复 3次 ,最 后 在 罐 内 -79.98KPa的 情 况

18、下 ,充 入 70%的 N2 ,20%H2 ,10%CO2 (有 人改 用 20%CO2 及 80%H2 ,亦 可 获 得 好 结 果 ).罐 中 需 放 入 冷 催 化 剂 钯 粒 ,可 催 化 罐 中 残 余 的 O2 和 H2 化 合成 水 .同 时 罐 中 应 放 有 美 蓝 指 示 管 ,美 蓝 在 有 氧 的 环 境 下 呈 蓝 色 ,无 氧 时 为 红 色 .临 用 前 首 先 将 美 蓝 煮 沸 使变 成 无 色 ,放 入 罐 中 先 呈 浅 蓝 色 ,待 罐 中 无 氧 环 境 形 成 ,美 蓝 即 可 持 续 无 色 . 气 体 发 生 袋 法 :气 体 发 生 袋 系 由

19、 锡 箔 密 封 包 装 ,其 中 含 有 两 种 药 片 ,一 种 为 含 枸 椽 酸 和 重 碳 酸 氢 钠 的 药片 ,另 一 种 是 含 有 硼 氢 化 钠 的 药 片 .前 者 遇 水 放 出 二 氧 化 碳 ,后 者 可 释 放 氢 .使 用 时 在 袋 的 右 上 角 剪 一 小 口 ,灌 进 10ml蒸 馏 水 ,立 即 放 入 含 有 钯 粒 ,指 示 剂 及 平 板 培 养 基 的 厌 氧 罐 中 ,拧 紧 盖 子 经 2-3分 钟 后 ,可 感 到 盖 子 微 热 并 有 少 量 水 蒸 气 出 现 .密 封 后 1小 时 左 右 罐 中 的 O2 的 含 量 可 低 于

20、 6.2pH4.4（ ） （ +） （ 指 示 剂 红 色 ）（ 指 示 剂 黄 色 ） M - 甲 基 红 （ methyl red） 实 验葡 萄 糖 丙 酮 酸 乙 酰 甲 基 甲 醇 甲 基 红 -葡 萄 糖 丙 酮 酸 甲 基 红 +- + 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 碳 水 化 合 物 的 代 谢 试 验 五 、 V-P试 验 【 原 理 】 某 些 细 菌 在 葡 萄 糖 蛋 白 胨 水 培 养 基 中 能 分 解 葡 萄 糖产 生 丙 酮 酸 ， 丙 酮 酸 进 一 步 脱 羧 成 乙 酰 甲 基 甲 醇 ，后 者 在 强 碱 环 境 下 ， 被 空 气 中 的

21、 氧 氧 化 为 二 乙 酰 ，二 乙 酰 与 培 养 基 中 的 精 氨 酸 所 含 的 胍 基 发 生 反 应 ，生 成 红 色 化 合 物 ， 称 V P（ +） 反 应 。 与 甲 基 红 试 验 一 起 使 用 ， 甲 基 红 试 验 阳 性 ， 则 V-P试 验 阴 性 。 反 之 也 如 此 。 VP试 验 葡 萄 糖丙 酮 酸乙 酰 甲 基 甲 醇二 乙 酰红 色 OH-+含 胍 基化 合 物（ ） （ +） VP试 验葡 萄 糖 丙 酮 酸 乙 酰 甲 基 甲 醇 二 乙 酰 红 色 化 合 物 + 胍 基 化 合 物葡 萄 糖 丙 酮 酸 乙 酰 甲 基 甲 醇 - - +

22、 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 蛋 白 质 和 氨 基 酸 的 代 谢 试 验 ： 不 同 细 菌 分 解 蛋 白 质 能 力 不 同 ，可 用 于 鉴 别 细 菌 。 一 、 苯 丙 氨 酸 脱 氨 酶 试 验 【 原 理 】 细 菌 具 有 苯 丙 氨 酸 脱 氨 酶 ， 能 将 培 养 基 中 的 苯 丙 氨酸 脱 氨 变 成 苯 丙 酮 酸 ， 加 入 三 氯 化 铁 试 剂 与 苯 丙 酮酸 螯 合 后 变 为 绿 色 。 主 要 用 于 鉴 定 变 形 杆 菌 属 、 摩 根 菌 属 、 普 罗 威 登 菌属 细 菌 ， 均 为 强 阳 性 ， 肠 杆 菌 科 其 他

23、 细 菌 均 为 阴 性 。 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测蛋 白 质 和 氨 基 酸 的 代 谢 试 验二 、 氨 基 酸 脱 羧 酶 试 验 【 原 理 】 氨 基 酸 脱 羧 酶 试 验 原 理 ： 具 有 氨 基 酸 脱 羧 酶 的 细 菌 ， 能 分 解 氨 基 酸 使 其脱 羧 生 成 胺 （ 赖 氨 酸 尸 胺 ， 鸟 氨 酸 腐 胺 ， 精 氨 酸 精 胺 ） 和 二 氧 化碳 ， 使 培 养 基 变 碱 。 使 指 示 剂 显 示 出 来 。 最 常 测 定 的 氨 基 酸 有 三 种 ： 赖氨 酸 、 鸟 氨 酸 、 精 氨 酸 。 结 果 ： 对 照 管 应

24、呈 黄 色 ， 测 定 管 呈 紫 色 （ 指 示 剂 为 溴 甲 酚 紫 ）为 阳 性 ， 若 测 定 管 呈 黄 色 为 阴 性 。 若 对 照 管 呈 现 紫 色 则 试 验无 意 义 ， 不 能 作 出 判 断 。 （ 对 照 管 只 有 葡 萄 糖 没 有 氨 基 酸 ） 。 应 用 ： 主 要 用 于 肠 杆 菌 科 细 菌 的 鉴 定 。 如 沙 门 菌 属 中 除 伤 寒和 鸡 沙 门 菌 外 ， 其 余 沙 门 菌 的 赖 氨 酸 和 鸟 氨 酸 脱 羧 酶 均 为 阳性 。 志 贺 菌 属 除 宋 内 和 鲍 氏 志 贺 菌 外 ， 其 他 志 贺 菌 均 为 阴 性 。阴

25、 性 阳 性 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 蛋 白 质 和 氨 基 酸 的 代 谢 试 验 三 、 精 氨 酸 双 水 解 酶 试 验 【 原 理 】 原 理 ： 精 氨 酸 经 两 次 水 解 ， 先 生 成 瓜 氨 酸 和 氨 ， 瓜 氨 酸 又在 瓜 氨 酸 酶 的 作 用 下 ， 形 成 鸟 氨 酸 、 氨 及 二 氧 化 碳 。 鸟 氨 酸又 在 鸟 氨 酸 酶 的 作 用 下 生 成 腐 氨 和 二 氧 化 碳 ， 酸 碱 指 示 剂 转为 碱 性 指 示 为 阳 性 。 精 氨 酸 可 通 过 双 水 解 和 脱 羧 酶 两 个 途 径 进 行 分 解 ， 两 个

26、途 径可 单 独 进 行 或 同 时 进 行 。 如 培 养 基 的 PH指 示 剂 急 剧 变 碱 ，可 能 是 双 水 解 途 径 ， 如 PH变 化 弱 而 慢 ， 且 不 形 成 氨 ， 可 能是 以 脱 羧 酶 途 径 分 解 的 ， 但 仅 从 培 养 基 PH变 化 来 确 定 何 种途 径 并 不 可 靠 ， 如 欲 鉴 别 应 作 气 相 色 谱 分 析 。 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 蛋 白 质 和 氨 基 酸 的 代 谢 试 验 四 、 尿 素 酶 试 验原 理 ： 具 有 尿 素 酶 的 细 菌 能 分 解 尿 素 产 生 氨 ， 使 培养 基 呈 碱

27、性 ， 酚 红 指 示 剂 变 为 红 色 。 变 形 杆 菌 、 摩 根 、 雷 氏 普 罗 维 登 、 克 雷 伯 为 阳 性 （ ） （ +） 尿 素氨培 养 基 变 碱 性红色 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 蛋 白 质 和 氨 基 酸 的 代 谢 试 验 五 、 吲 哚 试 验原 理 ： 有 些 细 菌 具 有 色 氨 酸 酶 ， 能 分 解 蛋 白 胨 中 的色 氨 酸 产 生 吲 哚 。 吲 哚 本 身 无 色 ， 不 能 直 接 观 察 结果 ， 但 可 与 吲 哚 试 剂 中 的 对 位 二 甲 氨 基 苯 甲 醛 形 成红 色 的 玫 瑰 吲 哚 ， 而 呈 现

28、 红 色 被 肉 眼 识 别 。 肠 杆 菌 科 细 菌 的 鉴 定 ； 大 肠 杆 菌 、 产 酸 克 雷 伯 为 阳性 吲 哚 试 验（ ） （ +） 色 氨 酸吲 哚 （ 靛 基 质 ）玫 瑰 吲 哚 （ 红 色 ）+二 甲 基 氨基 苯 甲 醛 吲 哚 （ indol） 试 验色 氨 酸 吲 哚 玫 瑰 吲 哚 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 蛋 白 质 和 氨 基 酸 的 代 谢 试 验 六 、 硫 化 氢 试 验原 理 ： 有 些 细 菌 可 分 解 培 养 基 中 含 硫 氨 基 酸 或 含 硫化 合 物 ， 而 产 生 硫 化 氢 气 体 ， 硫 化 氢 遇 铅 盐

29、 或 低 铁盐 可 生 成 黑 色 沉 淀 物 。 沙 门 菌 属 、 爱 德 华 菌 属 、 亚 利 桑 那 菌 属 、 枸 橼 酸 杆菌 属 、 变 形 杆 菌 属 、 腐 败 假 单 胞 菌 为 阳 性 硫 化 氢 试 验（ ） （ +） 含 硫 氨 基 酸硫 化 氢黑 色 硫 化 物+铁 离 子 或铅 离 子 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 蛋 白 质 和 氨 基 酸 的 代 谢 试 验 七 、 明 胶 液 化 试 验 【 原 理 】 某 些 细 菌 具 有 明 胶 酶 ， 能 分 解 明 胶 为 多 肽 ， 多 肽 进一 步 分 解 为 氨 基 酸 ， 使 明 胶 失 去

30、 凝 固 力 。 沙 雷 菌 、 普 通 变 形 杆 菌 、 奇 异 变 形 杆 菌 、 阴 沟 肠 杆菌 等 可 液 化 明 胶 ， 肠 杆 菌 科 其 他 细 菌 很 少 液 化 明 胶 。 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 碳 源 和 氮 源 利 用 试 验 一 、 枸 橼 酸 盐 利 用 试 验 【 原 理 】 细 菌 能 利 用 铵 盐 和 枸 橼 酸 盐 作 为 唯 一 氮 源 和 碳 源 时 ， 则 可 在枸 橼 酸 盐 培 养 基 上 生 长 ， 并 分 解 枸 橼 酸 盐 为 碳 酸 盐 ， 使 培 养基 变 为 碱 性 ， 指 示 剂 （ 溴 麝 香 草 酚 蓝

31、） 由 绿 色 变 为 深 蓝 色 者为 枸 橼 酸 盐 （ 柠 檬 酸 盐 ） 利 用 试 验 阳 性 ， 若 细 菌 不 能 利 用 枸橼 酸 盐 作 为 碳 源 时 ， 则 细 菌 不 能 生 长 ， 培 养 基 不 变 颜 色 （ 仍为 绿 色 ） ， 为 橼 酸 盐 利 用 试 验 阴 性 。 用 于 肠 杆 菌 科 的 鉴 定 ： 克 雷 伯 菌 属 、 沙 门 菌 属 常 为 阳 性 C -枸 橼 酸 盐 利 用 （ citrate utilization） 试 验利 用 枸 橼 酸 盐 生 长 +不 能 利 用 - - + IMViC试 验 大 肠 埃 希 菌 + + - -

32、产 气 杆 菌 - - + + 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 呼 吸 酶 类 试 验 一 、 氧 化 酶 试 验 【 原 理 】 原 理 ： 氧 化 酶 （ 细 胞 色 素 氧 化 酶 ） 是 细 胞 色 素 呼 吸 酶 系 统 的 最 终 呼 吸 酶 。 具 有 氧 化 酶 的 细菌 ， 首 先 使 细 胞 色 素 C氧 化 ， 再 由 氧 化 型 细 胞 色 素 C使 对 苯 二 胺 氧 化 ， 生 成 有 色 的 醌 类 化 合物 。 试 剂 ： 1 盐 酸 四 甲 基 对 苯 二 胺 或 1 盐 酸 二 甲 基 对 苯 二 胺 。 方 法 ： 常 用 方 法 有 三 种

33、； 1） 菌 落 法 ： 直 接 滴 加 试 剂 于 被 检 菌 菌 落 上 。 2） 滤 纸 法 ： 取 洁 净 滤 纸 一 小 块 ， 沾 取 菌 少 许 ， 然 后 加 试 剂 。 3） 试 剂 纸 片 法 ： 将 滤 纸 片 浸 泡 于 试 剂 中 制 成 试 剂 纸 片 ， 取 菌 涂 于 试 剂 纸 上 。 结 果 ： 细 菌 在 与 试 剂 接 触 10秒 内 呈 深 紫 色 ， 为 阳 性 。 为 保 证 结 果 的 准 确 性 ， 分 别 以 铜 绿 假单 胞 菌 和 大 肠 埃 希 菌 作 为 阳 性 和 阴 性 对 照 。 应 用 ： 主 要 用 于 肠 杆 菌 科 细

34、菌 与 假 单 胞 菌 的 鉴 别 ， 前 者 为 阴 性 ， 后 者 为 阳 性 。 奈 瑟 菌 属 、莫 拉 菌 属 细 菌 也 呈 阳 性 反 应 。 注 意 事 项 ：1） 试 验 时 应 避 免 接 触 含 铁 物 质 ， 以 免 出 现 假 阳 性 。2） 试 剂 在 空 气 中 易 于 氧 化 ， 故 应 经 常 更 换 新 试 剂 。 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 呼 吸 酶 类 试 验 二 、 过 氧 化 氢 酶 试 验 【 原 理 】 有 些 细 菌 具 有 过 氧 化 氢 酶 ， 能 分 解 过 氧 化 氢 ， 释 放 出 初 生 态氧 ， 生 成 氧 分

35、子 而 出 现 气 泡 。 用 于 革 兰 阳 性 球 菌 的 鉴 别 ， 葡 萄 球 菌 和 微 球 菌 为 阳 性 ， 链 球菌 和 肠 球 菌 为 阴 性 ， 肠 球 菌 多 假 阳 性 。 注 意 事 项 ： 1） 做 触 酶 试 验 不 宜 用 血 琼 脂 平 板 上 的 菌 落 ， 因 红 细 胞 内 含有 触 酶 ， 会 出 现 假 阳 性 反 应 。 2)做 此 实 验 一 定 要 用 阳 性 及 阴 性 菌 株 做 对 照 。 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 呼 吸 酶 类 试 验 三 、 硝 酸 盐 还 原 试 验 （ 1） 原 理 ： 硝 酸 盐 还 原 反

36、应 包 括 两 个 过 程 ： 一 是 在 合 成 过 程 中 ， 硝 酸 盐 还 原 为 亚 硝 酸 盐和 氨 ， 再 由 氨 转 化 为 氨 基 酸 和 细 胞 内 其 他 含 氮 化 合 物 ； 二 是 在 分 解 代 谢 过 程 中 ， 硝 酸 盐 或亚 硝 酸 盐 代 替 氧 作 为 呼 吸 酶 系 统 中 的 终 末 受 氢 体 。 能 使 硝 酸 盐 还 原 的 细 菌 从 硝 酸 盐 中 获 得氧 而 形 成 亚 硝 酸 盐 和 其 他 还 原 性 产 物 。 但 硝 酸 盐 还 原 的 过 程 因 细 菌 不 同 而 异 ， 有 的 细 菌 仅使 硝 酸 盐 还 原 为 亚

37、硝 酸 盐 ， 如 大 肠 埃 希 菌 ； 有 的 细 菌 则 可 使 其 还 原 为 亚 硝 酸 盐 和 离 子 态 的铵 ； 有 的 细 菌 能 使 硝 酸 盐 或 亚 硝 酸 盐 还 原 为 氮 ， 如 假 单 胞 菌 等 。 硝 酸 盐 还 原 试 验 系 测 定 还原 过 程 中 所 产 生 的 亚 硝 酸 。 （ 2） 培 养 基 ： 硝 酸 盐 培 养 基 。 （ 3） 试 剂 ： 甲 液 （ 对 氨 基 苯 磺 酸 0.8g+5mol/L醋 酸 lOOml； 乙 液 （ -奈 胺 0.5g + 5mol/L醋酸 lOOml） 。 （ 4） 方 法 ： 被 检 菌 接 种 于 硝

38、 酸 盐 培 养 基 中 ， 于 35 培 养 l 4d.将 甲 、 乙 液 等 量 混 合 后 （ 约 0.1m1） 加 入 培 养 基 内 ， 立 即 观 察 结 果 。 （ 5） 结 果 ： 出 现 红 色 为 阳 性 。 若 加 入 试 剂 后 无 颜 色 反 应 ， 可 能 是 ： 硝 酸 盐 没 有 被 还 原 ，试 验 阴 性 ； 硝 酸 盐 被 还 原 为 氨 和 氮 等 其 他 产 物 而 导 致 假 阴 性 结 果 ， 这 时 应 在 试 管 内 加 入少 许 锌 粉 ， 如 出 现 红 色 则 表 明 试 验 确 实 为 阴 性 。 若 仍 不 产 生 红 色 ， 表 示

39、 试 验 为 假 阴 性 。 若 要 检 查 是 否 有 氮 气 产 生 ， 可 在 培 养 基 管 内 加 一 小 倒 管 ， 如 有 气 泡 产 生 ， 表 示 有 氮 气 生 成 。 （ 6） 应 用 ： 本 试 验 在 细 菌 鉴 定 中 广 泛 应 用 。 肠 杆 菌 科 细 菌 均 能 还 原 硝 酸 盐 为 亚 硝 酸 盐 ；铜 绿 假 单 胞 菌 、 嗜 麦 芽 窄 食 单 胞 菌 等 假 单 胞 菌 可 产 生 氮 气 ； 有 些 厌 氧 菌 如 韦 荣 球 菌 等 试 验也 为 阳 性 阳 性 阴 性 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 DNA酶 试 验 【 原 理

40、 】 DNA酶 可 使 DNA长 链 水 解 成 几 个 单 核 苷 酸 ， 组 成 寡 核 苷 酸 链 。DNA长 链 可 被 酸 沉 淀 ， 而 水 解 后 形 成 的 寡 核 苷 酸 则 溶 于 酸 ，故 于 DNA琼 脂 平 板 上 加 入 盐 酸 后 ， 可 在 菌 落 周 围 形 成 透 明 环 。金 黄 色 葡 萄 球 菌 、 沙 雷 氏 菌 、 变 形 杆 菌 阳 性 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 抑 菌 试 验 1 Optochin敏 感 试 验 (1)原 理 ： Optochin(奥 普 托 欣 )是 盐 酸 乙 基 氢 化 羟 基 奎 宁 的 商 品 名 。

41、 对 肺炎 链 球 菌 有 特 异 抑 制 作 用 ， 其 作 用 机 制 可 能 是 干 扰 叶 酸 生 物 合 成 作 用 ，而 对 其 它 链 球 菌 则 无 此 作 用 。(2)方 法 ： 用 棉 拭 子 将 待 检 菌 的 肉 汤 培 养 物 均 匀 涂 布 于 血 琼 脂 平 板 上 ， 贴上 一 张 含 5g奥 普 托 欣 纸 片 ， 置 烛 缸 或 二 氧 化 碳 孵 箱 ， 35 孵 育 1824h，观 察 结 果 。 (3)结 果 ： 抑 菌 圈 直 径 大 于 14mm为 敏 感 ， 小 于 或 等 于 14mm为 阴 性 。(4)应 用 ： 主 要 用 于 肺 炎 链

42、球 菌 （ 敏 感 ） 与 其 它 链 球 菌 （ 耐 药 ） 的 鉴 别 。 2 杆 菌 肽 敏 感 试 验 (1)原 理 ： A群 链 球 菌 对 杆 菌 肽 几 乎 是 100%敏 感 ， 而 其 它 群链 球 菌 对 杆 菌 肽 通 常 耐 药 。 故 此 试 验 可 对 链 球 菌 进 行 鉴 别 。(2)方 法 ： 用 棉 拭 子 将 待 检 菌 的 肉 汤 培 养 物 均 匀 涂 布 于 血 琼 脂平 板 上 ， 稍 干 后 贴 一 张 含 0.04U的 杆 菌 肽 纸 片 ， 置 35 孵 育1824h， 观 察 结 果 。(3) 结 果 ： 抑 菌 圈 直 径 大 于 10m

43、m为 敏 感 ， 小 于 10mm为 耐 药 。(4)应 用 ： 主 要 用 于 A群 与 非 A群 链 球 菌 的 鉴 别 。 从 临 床 分 离的 菌 株 中 有 5%15%非 A群 链 球 菌 也 对 杆 菌 肽 敏 感 ， 如 6%的 B群 链 球 菌 、 7.5%的 C群 链 球 菌 和 G群 链 球 菌 等 。 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 抑 菌 试 验 3 O/129试 验(1)原 理 ： O/129（ 2， 4二 氨 基 -6， 7-二 异 丙 基 喋 啶 ） 能 抑 制 弧 菌 属 、 发 光 杆 菌 属 和 邻 单 胞 菌 属 细 菌 生长 ， 而 气 单

44、胞 菌 属 和 假 单 胞 菌 属 细 菌 则 耐 药 。(2)方 法 ： 用 棉 拭 子 将 待 检 菌 菌 悬 液 均 匀 涂 布 于 碱 性 琼 脂 平 板 上 ， 将 10g/片 及 150g/片 的 O/129诊 断 纸片 贴 于 平 板 上 ， 置 35 孵 育 1824h， 观 察 结 果 。(3)结 果 ： 出 现 抑 菌 圈 者 表 示 敏 感 ， 无 抑 菌 圈 者 为 耐 药 。 (4)应 用 ： 主 要 用 于 弧 菌 属 、 邻 单 胞 菌 属 与 气 单 胞 菌 属 的 鉴 别 ， 弧 菌 属 和 邻 单 胞 菌 属 菌 为 敏 感 ， 气 单 胞菌 属 菌 为 耐

45、 药 。 其 它 菌 属 有 发 光 杆 菌 属 为 敏 感 ， 假 单 胞 菌 属 为 耐 药 。 4、 新 生 霉 素 敏 感 试 验 原 理 ： 表 皮 葡 萄 球 菌 对 新 生 霉 素 敏 感 ； 腐 生 葡 萄 球 菌 对 新 生 霉 素 耐 药 培 养 基 ： MH琼 脂 方 法 ： 同 纸 片 法 药 敏 5ug/片 结 果 ： 抑 菌 环 直 径 16mm敏 感 ； 16mm耐 药 意 义 ： 区 别 表 皮 葡 萄 球 菌 与 腐 生 葡 萄 球 菌 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测其 他 试 验 1、 凝 固 酶 试 验 ： 【 原 理 】 致 病 性 葡 萄

46、球 菌 可 产 生 两 种 凝 固 酶 。 一 种 是 结 合 凝 固酶 ， 结 合 在 细 胞 壁 上 ， 使 血 浆 中 的 纤 维 蛋 白 原 变 成 纤 维 蛋 白 而 附 着 于 细 菌 表 面 ，使 细 菌 发 生 凝 集 ： 可 用 玻 片 法 测 出 。 另 一 种 是 分 泌 至 菌 体 外 的 游 离 凝 固 酶 。 作 用类 似 凝 血 酶 原 物 质 ， 可 被 血 浆 中 的 协 同 因 子 激 活 变 为 凝 血 酶 样 物 质 ， 而 使 纤 维 蛋白 原 变 成 纤 维 蛋 白 ， 从 而 使 血 浆 凝 固 ， 可 用 试 管 法 测 出 。 致 病 性 葡

47、萄 球 菌 ； 金 黄 色 葡 萄 球 菌 多 阳 性 细 菌 的 生 理 生 化 特 征 检 测 其 他 试 验 3、 CAMP试 验 ： 【 原 理 】 B群 链 球 菌 能 产 生 CAMP因 子 ， 可 促 进 葡 萄 球 菌 的 B-溶 血 素 溶 解 红 细 胞 的 活 性 ， 因 此 在 两 菌 （ B群 链 球 菌 和 葡 萄 球 菌 ） 的 交 界 处 溶 血力 增 加 ， 出 现 矢 形 （ 半 月 形 ） 的 溶 血 区 。 在 链 球 菌 中 ， 只 有 B群 链 球 菌 CAMP试验 阳 性 ， 故 可 作 为 特 异 性 鉴 定 。 【 方 法 】 ： 在 羊 血

48、或 马 血 琼 脂 平 板 上 ， 先 以 -溶 血 的 金 黄 色 葡 萄 球 菌 划 一 横 线接 种 。 再 将 待 检 菌 与 前 一 划 线 作 垂 直 接 种 ， 两 者 应 相 距 1cm， 于 35 孵 育 1824h， 观 察 结 果 。 每 次 试 验 应 做 阴 阳 性 对 照 。 金葡 B 链 4、 胆 汁 溶 菌 试 验 ： 【 原 理 】 胆 汁 或 胆 盐 可 溶 解 肺 炎 链 球 菌 ， 可 能 是 由于 胆 汁 降 低 细 胞 膜 表 面 的 张 力 ， 使 细 胞 膜 破 损 或 使 菌 体 裂 解 ； 或 者 是 由于 胆 汁 加 速 了 肺 炎 链 球

49、 菌 本 身 自 溶 过 程 ， 促 使 细 菌 发 生 自 溶 。 主 要 用 于肺 炎 链 球 菌 与 甲 型 链 球 菌 的 鉴 别 ， 前 者 阳 性 ， 后 者 阴 性 。 方 法 1） 平 板 法 ： 取 10 去 氧 胆 酸 钠 溶 液 一 接 种 环 ， 滴 加 于 被 测 菌 的 菌落 上 ， 置 35 30min后 观 察 结 果 。 2） 试 管 法 ： 被 检 菌 培 养 物 2支 ， 各 0.9ml， 分 别 加 入 l0 去 氧 胆 酸 钠溶 液 和 生 理 盐 水 （ 对 照 管 ） 0.1ml， 摇 匀 后 置 35 水 浴 10 30min， 观 察结 果 结

50、 果 ： 平 板 法 以 “ 菌 落 消 失 ” 判 为 阳 性 ； 试 管 法 以 加 胆 盐 的 培 养 物 变 透明 ， 而 对 照 管 仍 “ 混 浊 ” 判 为 阳 性 。 应 用 ： 主 要 用 于 肺 炎 链 球 菌 与 甲 型 链 球 菌 的 鉴 别 ， 前 者 阳 性 ， 后 者 阴 性 。 毒 素 测 定 1、 内 毒 素 的 检 测 对 注 射 液 和 生 物 制 品 采 用 家 兔 发 热 法 ， 即 将 可 疑 标 本 注 射 进 家 兔 的 静 脉 中 ， 观 察有 无 发 热 反 应 ； 对 临 床 标 本 采 用 鲎 试 验 。 鲎 系 海 边 栖 生 的 一

51、种 大 型 节 肢 动 物 ,属蜘 蛛 纲 。 其 多 功 能 血 细 胞 (变 形 细 胞 )的 溶 解 物 中 含 有 凝 固 酶 原 和 凝 固 蛋 白 原 ， 在极 微 量 内 毒 素 (0.0005vg/ml)存 在 时 ， 可 激 活 凝 固 酶 原 使 凝 固 蛋 白 成 凝 胶 状 态 。本 试 验 即 利 用 此 原 理 测 定 血 液 或 其 他 样 品 中 的 微 量 内 毒 素 。 毒 素 测 定 1、 外 毒 素 的 检 测 1） 生 物 学 检 测 ： 选 用 敏 感 动 物 ， 根 据 可 疑 毒 素 的 作 用 特 点 进 行 接 种 。 2） 免 疫 学 测

52、定 ： 双 向 琼 脂 扩 散 、 琼 脂 扩 散 法 、 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 、 反 向血 凝 等 。 3） 毒 素 编 码 基 因 的 测 定 ： 可 用 探 针 杂 交 、 PCR等 测 定 一 些 外 毒 素 的 编码 基 因 。 抗 原 测 定 1、 凝 集 试 验 1） 玻 片 法 凝 集 试 验 ： 2） 胶 乳 凝 集 法 ： 3） 协 同 凝 集 试 验 ： 4） 反 向 间 接 血 凝 试 验 2、 荚 膜 肿 胀 试 验 ： 有 荚 膜 的 肺 炎 球 菌 ， 当 与相 应 的 抗 血 清 反 应 时 荚 膜 将 明 显 增 宽 。 3、 免 疫 荧 光 技

53、术 1） 直 接 法 2） 间 接 法 4、 其 他 方 法 ： 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 、 放 射 免 疫 、发 光 免 疫 测 定 等 2021-5-12 66免 疫 荧 光 技 术 2021-5-12 67酶 联 免 疫 吸 附 测 定 基 因 检 测 通 过 基 因 型 对 微 生 物 进 行 鉴 定 的 方 法 日 渐 得 到 人 们 的 认 可 。 与 传 统 的 表 现 型 方 法检 测 相 比 ， 基 因 鉴 定 更 具 有 特 异 性 ， 并 且 使 不 同 生 命 体 之 间 的 差 异 更 加 量 化 、 标准 化 。 常 用 技 术 有 核 酸 杂 交 、 核

54、酸 扩 增 和 生 物 芯 片 。1、 细 菌 种 属 的 鉴 定 常 采 用 DNAG+Cmol 含 量 测 定 、 全 细 胞 DNA-DNA杂 交 和 16SrRNA同 源 性 分 析等 技 术 。 其 中 16SrRNA具 有 高 度 保 守 性 ， 适 合 用 于 细 菌 的 分 类 和 鉴 定 。 2、 细 菌 种 属 特 异 基 因 某 些 基 因 为 细 菌 种 特 有 或 属 共 有 ， 通 过 对 这 些 基 因 的 检 测 可 以 鉴 定 细 菌 的 种 或 属 。 血 清 学 检 测 当 细 菌 通 过 各 种 途 径 感 染 免 疫 功 能 正 常 的 机 体 时 ，

55、 机 体 免 疫 系 统 经 过 免 疫 应 答 产 生 抗 体 和致 敏 淋 巴 细 胞 及 细 胞 因 子 。 用 免 疫 学 方 法 可 以 测 定 这 些 抗 体 的 滴 度 ， 用 于 感 染 的 辅 助 诊 断 。 （ 一 ） 特 异 性 抗 体 测 定 1、 直 接 凝 集 试 验 2、 胶 乳 凝 集 试 验 （ 二 ） 非 特 异 性 凝 集 素 的 测 定 1、 冷 凝 集 试 验 由 肺 炎 支 原 体 感 染 引 起 的 原 发 性 非 典 型 性 肺 炎 患 者 的 血 清 中 常 含 有 较 高 的 寒 冷 红 细 胞 凝 集素 ， 简 称 冷 凝 集 素 ， 它

56、能 与 患 者 自 身 红 细 胞 或 “ O”型 人 红 细 胞 于 4 条 件 下 发 生 凝 集 ， 在37 时 又 呈 可 逆 性 完 全 散 开 。 2、 异 嗜 性 凝 集 试 验 传 染 性 单 核 细 胞 增 多 症 患 者 血 清 中 常 可 出 现 一 种 能 凝 集 异 种 动 物 （ 如 绵 羊 ） 红 细 胞 的 抗 体 ，称 为 嗜 异 性 抗 体 ， 这 种 异 嗜 性 凝 集 反 应 称 为 【 血 清 的 异 嗜 性 凝 集 反 应 】 3、 费 梅 毒 螺 旋 体 血 清 试 验 4、 外 斐 试 验 致 病 菌 的 检 验 程 序标 本直 接 涂 片 染

57、色 镜 检 分 离 培 养 与 鉴 定 病 原 菌 抗 体 检 测 其 它 检 测形 态 、 结 构 、染 色 性涂 片镜 检 菌 落特 征 生 化鉴 定 药 敏试 验血 清 学鉴 定 直 接 凝 集 反 应协 同 凝 集免 疫 荧 光对 流 免 疫 电 泳 酶 免 疫 测 定免 疫 印 迹 细 菌 代 谢 产 物（ 气 相 色 谱 ）细 菌 核 酸（ PCR）噬 菌 体 分 离细 菌 素 测 定分 子 生 物 学 技 术动 物试 验 细 菌 的 鉴 定 1、 传 统 表 型 鉴 定 法 通 过 平 板 上 分 离 获 得 的 单 个 菌 落 ， 观 察 菌 落 特 点 、 染 色 观 察 形

58、 态 、 生 理 生 化特 征 、 血 清 凝 集 试 验 和 抗 生 素 的 抗 菌 谱 等 表 型 特 征 ， 根 据 细 菌 双 歧 索 引 表 或 表 格法 将 细 菌 鉴 定 到 种 的 水 平 。2、 细 菌 表 型 数 值 鉴 定 在 细 菌 的 鉴 定 过 程 中 有 许 多 生 理 生 化 特 征 需 要 观 察 ， 随 着 生 化 反 应 管 的 微 型化 、 生 化 反 应 结 果 计 算 机 化 ， 形 成 了 细 菌 表 型 数 值 鉴 定 系 统 ， 通 过 编 码 技 术 将 生化 反 应 的 符 号 模 式 转 换 成 数 学 模 式 ， 同 时 将 标 准 菌

59、 株 的 生 化 反 应 也 转 换 为 数 学 模式 ， 给 每 种 细 菌 的 反 应 模 式 赋 以 一 组 数 码 ， 编 成 数 码 检 索 本 。 通 过 对 未 知 菌 生 化反 应 结 果 转 录 成 数 字 编 码 ， 查 阅 数 据 库 或 数 码 检 索 本 ， 将 数 字 编 码 转 换 成 细 菌 名 。不 同 的 鉴 定 系 统 有 不 同 的 生 化 反 应 ， 需 要 建 立 不 同 的 反 应 鉴 定 系 统 。 数 字 编 码 鉴 定 【 具 体 内 容 】 ： 是 将 鉴 别 细 菌 的 各 种 生 化 反 应 微 量 化 与 综 合 系 列 化 ，将 各

60、 种 生 化 反 应 培 养 基 分 装 在 微 量 板 或 微 量 管 内 ， 组成 系 列 试 剂 ； 操 作 时 ， 把 持 检 细 菌 纯 培 养 物 接 种 于 每个 微 量 孔 或 微 量 管 内 ， 经 一 定 温 度 和 时 间 培 养 后 ， 再加 入 指 示 剂 或 直 接 根 据 顔 色 变 化 得 出 生 化 反 应 结 果 ，将 结 果 进 行 编 码 。 号 码 编 出 后 ， 输 入 电 脑 或 通 过 编 码本 ， 找 出 与 该 号 码 相 对 应 的 细 菌 名 称 ， 便 可 作 出 初 步鉴 定 。 2021-5-12 73 3、 细 菌 细 胞 构 成

61、 物 质 的 分 析 细 菌 细 胞 的 构 成 成 分 中 有 许 多 成 分 比 较 固 定 ， 如 脂 肪 酸 、 单 糖 、酶 等 。 可 以 用 不 同 的 技 术 方 法 进 行 分 析 ， 得 到 细 菌 的 鉴 定 。 菌 群 分 析 正 常 情 况 下 肠 道 菌 群 在 体 内 与 外 部 环 境 保 持 着 动 态 平 衡 ， 并 对 人 体 健 康 起 着 重 要 作 用 。 如果 这 种 平 衡 在 某 些 情 况 下 被 打 破 ， 便 形 成 肠 道 菌 群 失 调 （ ID） ， 其 表 现 为 肠 道 菌 群 在 种 类 、数 量 、 比 例 、 定 位 和

62、生 物 学 特 性 上 的 改 变 。 菌 群 分 析 是 肠 道 菌 群 失 调 的 主 要 检 查 方 法 ， 定性 分 析 以 直 接 涂 片 法 为 主 ， 定 量 检 查 以 需 氧 菌 和 厌 氧 菌 培 养 为 主 。 1、 直 接 涂 片 通 过 显 微 镜 观 察 革 兰 染 色 粪 便 涂 片 的 菌 群 像 ， 估 计 细 菌 总 数 、 球 菌 与 杆 菌 的 比 例 ， 革 兰 阳性 菌 与 阴 性 菌 的 比 例 及 有 无 特 殊 形 态 的 细 菌 增 多 。 2、 培 养 法 是 通 过 接 种 一 定 重 量 新 鲜 粪 便 于 各 种 不 同 的 培 养

63、基 上 ， 对 生 长 出 来 的 菌 落 进 行 菌 种 鉴 定 及计 数 ， 对 肠 道 菌 群 各 菌 种 进 行 定 量 培 养 。 将 每 种 细 菌 的 数 量 与 参 考 值 进 行 比 较 ， 或 计 算 双 歧 杆 菌 /肠 杆 菌 （ B/E） 值 ， 即 可 评 估 肠 道 菌 群 的 状 况 。 B/E 1， 表 示 肠 道 菌 群 组 成 正 常 。B/E 1， 表 示 肠 道 菌 群 失 调 ， 此 值 越 低 ， 提 示 菌 群 失 调 越 严 重 。 预 防 感 染 病 的 预 防 措 施 分 为 ： 1） 疫 情 未 出 现 时 的 预 防 措 施 ； 2）

64、疫 情 出 现 后 的 防 疫 措 施 ； 3） 治 疗 性 预 防 措 施 一 、 预 防 性 措 施 （ 疫 情 未 出 现 之 前 的 经 常 性 预 防 工 作 ） （ 一 ） 环 境 控 制 ： 维 护 生 态 平 衡 ， 改 善 饮 用 水 条 件 ， 实 行 饮 水 消 毒 ； 搞好 粪 便 、 污 水 排 放 和 垃 圾 无 害 化 处 理 工 作 ； 建 立 健 全 医 院 及 致 病 性 微 生物 实 验 室 的 规 章 制 度 ， 防 止 致 病 性 微 生 物 扩 散 和 院 内 感 染 ； 贯 彻 食 品卫 生 法 及 消 毒 、 杀 虫 、 灭 鼠 工 作 。 （

65、二 ） 预 防 接 种 ： 将 生 物 制 品 接 种 到 人 体 内 ， 使 机 体 产 生 对 感 染 性 疾 病的 特 异 性 免 疫 力 ， 提 高 人 群 免 疫 水 平 ， 预 防 感 染 性 疾 病 的 发 生 与 流 行 。 1、 预 防 接 种 的 种 类 是 指 以 免 疫 原 物 质 接 种 人 体 ， 使 人 体 产 生 特 异 性 免 疫 ， 免 疫 原物 质 包 括 处 理 过 的 病 原 体 或 提 取 的 病 原 体 成 分 及 类 毒 素作 用 ： 特 异 性 预 防1） 人 工 自 动 免 疫 artificial active immunity主 要 生

66、物 制 品 ：死 疫 苗 ： 将 免 疫 原 性 强 的 活 菌 株 灭 活 制 成 ， 或 提 取 菌 体 成 分 制 成多 糖 体 菌 苗 。 优 点 ： 勿 需 减 毒 ， 生 产 过 程 简 单 ， 含 防 腐 剂 ， 易 于 保存 ； 缺 点 ： 免 疫 效 果 较 差 ， 接 种 量 大 。活 疫 苗 ： 由 免 疫 原 性 强 而 毒 力 弱 的 活 菌 株 制 成 。 优 点 ： 能 在 体 内增 殖 ， 刺 激 机 体 时 间 长 ， 接 种 量 小 ， 接 种 次 数 少 。 缺 点 ： 易 污 染 ，需 冷 藏 保 存 。类 毒 素亚 单 位 疫 苗DNA重 组 疫 苗核 酸 疫 苗 治 疗 性 疫 苗 免 疫 血 清 ： 用 毒 素 免 疫 动 物 取 得 的 含 特 异 性抗 体 的 血 清 ， 主 要 用 于 治 疗 ， 也 可 紧 急 预 防 。2） 人 工 被 动 免 疫 artificial passive immunity 以 含 抗 体 的 血 清 或 制 剂 接 种 人 体 ， 使 人 体 获 得 现成 的 抗 体 而 受 到 保 护 。 获 得