实验五(原虫1)阿米巴、利什曼原虫贾第虫、隐孢子虫

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1、 实实 验验 五五 (原虫(原虫1 1)阿米巴、利什曼原虫阿米巴、利什曼原虫 贾第虫、隐孢子虫贾第虫、隐孢子虫 掌握掌握:溶组织阿米巴滋养体和包囊的形态特征;溶组织阿米巴滋养体和包囊的形态特征;利什曼原虫无鞭毛体;利什曼原虫无鞭毛体;隐孢子虫卵囊;隐孢子虫卵囊;贾第虫滋养体的镜下形态特征;贾第虫滋养体的镜下形态特征;各种常见原虫实验诊断方法。各种常见原虫实验诊断方法。熟悉熟悉:利什曼前鞭毛体形态;利什曼前鞭毛体形态;阿米巴和贾第虫的包囊碘液涂片染阿米巴和贾第虫的包囊碘液涂片染色的方法。色的方法。实验实验目的和要求目的和要求示教内容(显微镜下):示教内容(显微镜下):(a)(a)利什曼前鞭毛体和

2、无鞭毛体;利什曼前鞭毛体和无鞭毛体;(b)(b)蓝氏贾第虫滋养体和包囊蓝氏贾第虫滋养体和包囊 ;(c)(c)隐孢子虫卵囊;隐孢子虫卵囊;观察内容:观察内容:溶组织阿米巴滋养体和包囊;贾第虫滋养溶组织阿米巴滋养体和包囊;贾第虫滋养体和包囊(铁苏木术染色);利什曼无鞭毛体和前鞭体和包囊(铁苏木术染色);利什曼无鞭毛体和前鞭毛体(吉氏染色);隐孢子虫卵囊(改良抗酸染色)。毛体(吉氏染色);隐孢子虫卵囊(改良抗酸染色)。操作内容:操作内容:介绍淋巴结或者骨髓穿刺检查无鞭毛体介绍淋巴结或者骨髓穿刺检查无鞭毛体 碘液涂片染色检查溶组织阿米巴的碘液涂片染色检查溶组织阿米巴的包包囊;囊;电教:电教:溶组织内阿

3、米巴溶组织内阿米巴作业:作业:1、绘蓝第虫滋养体、溶组织阿米巴滋养体和包绘蓝第虫滋养体、溶组织阿米巴滋养体和包囊、黑热病原虫前鞭毛体。囊、黑热病原虫前鞭毛体。2、溶组织阿米巴检查中注意事项?溶组织阿米巴检查中注意事项?实验内容实验内容溶组织内阿米巴溶组织内阿米巴(Eatamoeba histolytica)又称痢疾阿米巴,寄生于结肠和其又称痢疾阿米巴,寄生于结肠和其他组织内,引起阿米巴病。其生活他组织内,引起阿米巴病。其生活史中具有滋养体和包囊两种形态。史中具有滋养体和包囊两种形态。1 1、滋养体:、滋养体:形态变化大,大小为形态变化大,大小为10-60m10-60m,具有侵袭性具有侵袭性。活

4、体时伸出伪足作活泼的变形运动活体时伸出伪足作活泼的变形运动-阿米巴动阿米巴动。滋养体内外质分明,外质薄而透明,内质呈颗滋养体内外质分明,外质薄而透明,内质呈颗粒状,可见被吞噬的红细胞和食物泡,具一粒状,可见被吞噬的红细胞和食物泡,具一个圆形的泡状核。胞核直径个圆形的泡状核。胞核直径4-7m4-7m,核膜薄,核膜薄,其内缘有单层排列、大小一致的核周染色质其内缘有单层排列、大小一致的核周染色质粒,核仁细小,居中,核仁与核膜之间隐约粒,核仁细小,居中,核仁与核膜之间隐约可见网状的核纤丝。可见网状的核纤丝。一、形态一、形态滋养体滋养体 包囊包囊 滋养体(铁苏木素染色)滋养体(铁苏木素染色)包囊包囊呈无

5、色透明的圆球体,直径呈无色透明的圆球体,直径10-16m10-16m,胞质胞质内可呈棒状的糖原泡和拟染色体(营养储存结内可呈棒状的糖原泡和拟染色体(营养储存结构)。囊壁厚,囊内有泡状细胞核,四核包囊构)。囊壁厚,囊内有泡状细胞核,四核包囊为成熟包囊(感染期)。为成熟包囊(感染期)。碘染:碘染:呈棕黄色球形小体,可见核及核仁,胞质呈棕黄色球形小体,可见核及核仁,胞质内可见棕色的糖原泡及透明的拟染色体。内可见棕色的糖原泡及透明的拟染色体。铁苏木素染色:铁苏木素染色:包囊呈黑蓝色,核结构清晰。包囊呈黑蓝色,核结构清晰。2 2、包囊:、包囊:溶组织阿米巴包囊溶组织阿米巴包囊 400.Enlarged

6、400.Enlarged 1000.Enlarged二、实验诊断二、实验诊断病原学检查:病原学检查:稀便:稀便:急性期稀便或脓血便中查滋养体,采用急性期稀便或脓血便中查滋养体,采用生理盐水涂片法(注意事项:保温、防止尿生理盐水涂片法(注意事项:保温、防止尿液污染、及时送检)液污染、及时送检)成形粪便:成形粪便:碘液染色检查包囊碘液染色检查包囊脓肿穿刺液涂片查滋养体脓肿穿刺液涂片查滋养体免疫诊断:免疫诊断:杜氏利什曼原虫杜氏利什曼原虫(LeishmaniaLeishmania)利什曼原虫的生活史有前鞭毛体和无鞭毛体利什曼原虫的生活史有前鞭毛体和无鞭毛体2 2个时期,前者寄生于昆虫(个时期,前者寄

7、生于昆虫(白蛉白蛉)消化道内;)消化道内;后者寄生于脊椎动物(如人、犬)单核吞噬细后者寄生于脊椎动物(如人、犬)单核吞噬细胞内。胞内。一、形态一、形态 又称又称利杜体利杜体,椭圆形或圆形,常见于,椭圆形或圆形,常见于MM。染色后,核较大,圆形,呈紫红色或红色,胞质蓝色。染色后,核较大,圆形,呈紫红色或红色,胞质蓝色。内含有一个细小杆状的动基体,位于核旁。内含有一个细小杆状的动基体,位于核旁。动基体之前有一个点状基体动基体之前有一个点状基体,由此发出一条根丝体由此发出一条根丝体。1 1、无鞭毛体、无鞭毛体v寄生于白蛉消化道内,寄生于白蛉消化道内,成熟虫体呈梭形成熟虫体呈梭形.v核位于中部,动基体

8、核位于中部,动基体在虫体前端,基体在在虫体前端,基体在动基体之前动基体之前.v由基体发出由基体发出1 1根鞭毛根鞭毛游离于体外,鞭毛摆游离于体外,鞭毛摆动活泼动活泼.1 1、前鞭毛体、前鞭毛体培养基中的前鞭毛体常聚集培养基中的前鞭毛体常聚集呈簇,排列呈菊花状。呈簇,排列呈菊花状。1 1、病原诊断:、病原诊断:常用方法常用方法(1 1)穿刺涂片检查:骨髓穿刺原虫检出率为)穿刺涂片检查:骨髓穿刺原虫检出率为808090%90%,(2 2)培养法:将穿刺物接种于)培养法:将穿刺物接种于NNNNNN培养基,置培养基,置222225250 0C C温箱内,温箱内,1 1周后查见运动活泼的前鞭毛体周后查见

9、运动活泼的前鞭毛体则可确诊。则可确诊。(3 3)动物接种法,将穿刺物接种于敏感动物,)动物接种法,将穿刺物接种于敏感动物,1-1-2 2月后取其肝、脾作涂片,染色镜检。月后取其肝、脾作涂片,染色镜检。(4 4)皮肤组织检查法:)皮肤组织检查法:二、实验诊断二、实验诊断 2 2、免疫诊断:、免疫诊断:用于个例辅助诊断或流行病用于个例辅助诊断或流行病学调查。学调查。(1 1)血清抗体检测:)血清抗体检测:(2 2)循环抗原检测。循环抗原检测。3 3、DNADNA诊断:诊断:PCRPCR和分子杂交。和分子杂交。简称简称贾第虫贾第虫,寄生于人体,寄生于人体小肠小肠,引起以腹泻和消化不良为主要症状引起以

10、腹泻和消化不良为主要症状的贾第虫病,分布于世界各地,儿的贾第虫病,分布于世界各地,儿童和旅游者患病率较高,故有童和旅游者患病率较高,故有旅游旅游者腹泻者腹泻之称。之称。蓝氏贾第鞭毛虫蓝氏贾第鞭毛虫一、形态一、形态1 1、滋养体:滋养体:形似纵切的半个梨形,形似纵切的半个梨形,前端钝圆,后端渐变尖前端钝圆,后端渐变尖细,大小为细,大小为9 921m21m5 51515 m m,两侧对称,背两侧对称,背面隆起,腹面扁平。面隆起,腹面扁平。腹面的前部向内凹陷腹面的前部向内凹陷而成吸盘,滋养体借此而成吸盘,滋养体借此吸附于肠粘膜上。吸附于肠粘膜上。经铁苏木素染色经铁苏木素染色后,后,可见吸盘背侧胞质内

11、有可见吸盘背侧胞质内有2 2个圆形泡状核。两核个圆形泡状核。两核之间之间2 2条纵贯虫体的轴条纵贯虫体的轴柱,其前端有基体,为柱,其前端有基体,为鞭毛发源处,其中部有鞭毛发源处,其中部有1 1对半月形的中体。对半月形的中体。虫体有虫体有4 4对鞭毛,对鞭毛,按伸出部位分别称为前按伸出部位分别称为前鞭毛,后鞭毛,腹鞭毛鞭毛,后鞭毛,腹鞭毛和尾鞭毛。和尾鞭毛。铁苏木素染色铁苏木素染色 1000.Enlarged铁苏木素染色铁苏木素染色瑞氏染色瑞氏染色2 2、包囊:、包囊:包囊椭圆形,囊壁较厚,大包囊椭圆形,囊壁较厚,大小为小为8-148-14 m m7 71010 m m。碘液染色碘液染色后呈虫体

12、黄绿色或后呈虫体黄绿色或灰蓝色,囊壁与虫体之间有明灰蓝色,囊壁与虫体之间有明显空隙,核多偏于一端,数目显空隙,核多偏于一端,数目2-42-4个,囊内可见轴柱,鞭毛。个,囊内可见轴柱,鞭毛。铁苏木素染色铁苏木素染色后,虫体呈蓝后,虫体呈蓝黑色,囊壁透明,囊内结构清黑色,囊壁透明,囊内结构清晰可辨。晰可辨。1 1、病原学诊断:、病原学诊断:(1 1)粪便检查,为本病首选检查方法)粪便检查,为本病首选检查方法对腹泻者,用对腹泻者,用NSNS直接涂片法查活动的滋养体;对成形粪直接涂片法查活动的滋养体;对成形粪便,用碘液染色法查包囊。包囊形成有间歇,故检查便,用碘液染色法查包囊。包囊形成有间歇,故检查时

13、应隔日时应隔日1 1次并连续次并连续3 3次以上送检为宜。次以上送检为宜。(2 2)十二指肠液或胆汁检查:)十二指肠液或胆汁检查:(3 3)小肠活组织检查,利用纤维胃镜取小肠粘膜组织)小肠活组织检查,利用纤维胃镜取小肠粘膜组织进行压片或切片染色检查滋养体。进行压片或切片染色检查滋养体。二、诊断二、诊断2 2、免疫诊断:、免疫诊断:3 3、DNADNA诊断:诊断:隐孢子虫隐孢子虫隐孢子虫卵囊隐孢子虫卵囊抗酸染色抗酸染色作作 业业绘图:绘图:溶组织阿米巴滋养体和包囊、溶组织阿米巴滋养体和包囊、杜氏利什曼原虫前鞭毛体、杜氏利什曼原虫前鞭毛体、蓝氏贾第鞭毛虫滋养体。蓝氏贾第鞭毛虫滋养体。思考题:思考题:溶组织阿米巴检查中的注意溶组织阿米巴检查中的注意事项?事项?

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