小鼠衰老检测

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1、小鼠全体实验记录1,全身拍照衰老治疗正常组正常组衰老治疗组2,全身称重寿命1.对平均寿命(mean lifespan)/最大寿命(maximum lifespan)的影响二、衰老性心脏肥大1心室中部横截面染色，观察截面大小情况，年轻小鼠较小，老年小鼠肥大。Y Y-IPHPO-IP 02心脏重量/胫骨长度（mg/mm），表征肥大状况，数值越大，衰老程度越高。（选择原因: 胫骨长度在小鼠发育成熟后不再有变化，可作为量化对比标准）10Y-HP OHP O-IP如=4)(n=10) (n=5) (n=5) (n=-12) (n=5)uu El Sul) Emu-皂q t 11|邙一MsIJnJ工m h

2、i Li 出说!iSiTrrtiIH.17LT3.左心室（left ventricle， LVs） PAS染色（过碘酸雪夫染色，periodic acid Schiff stain），观察 细胞横截面积大小。（心脏肥大是因为细胞个体变大还是细胞数量变多）尸*14- V 1 *f1 C盘S/ J4严*rv *. - p* * .* Y 2 mos CD45.1 Y 2 mos CD45.2 O 23 CD45 24.心肌细胞（cardiomyocyte， CM）横截面积（crosssectional area， CSA）测定。雌雄分组, 每个动物选5个独立切片，结果根据平均值计算，测量方法：选取

3、一定面积区域，数区域内 细胞数量，计算出心肌细胞横截面积。 o oo Au5 4旷 Em $KSKvMMiBiLKma swuQuoes 岛 sooso2Y-HF(n=G)(n=6J(n=l21 口詁)U 厂 E皂乐_更0一 pegs 820so7.IY浓 *r i o-(n=1p6)5.小鼠心脏部位取材,RT-PCR测量心房利尿钠肽(atrial natriuretic peptide, ANP),脑钠素(brain natriuretic peptide, BNP),肌浆网钙 ATP 酶(sarcoplasmic reticulum calcium ATPase SERCA-2) 的表达量

4、。a.No 5 52.1.Lo. -aAQJlffldjHOHP(n-0)”5052电 2S-OJHO-IPg=5)4.0-1Y-IPYHP O-HPO-IF(n6)(n=6)(n=6)5=5Y HP(n=6)Y-IP(n=fi)Y*IP 一 一 - o o o o4.3.2. 一 Aa-J亘fkjn呈況一 u罢&會帚:壬-&Jnoe 芒曇边.3测定整个海马的基因表达谱，2090个可变表达基因分层聚类。156个最上调和76个最下调的转录物进行基因本体富集分析的网络可视化。WinTnCNS merturallonRe鼻凶 Ivpa 2 immui 址IrYllamrnalMyTiansnlasl

5、cnEnrichment scores ofGO 1rimon DE 呼什甜鼻讪Uprguigfcn O DwnmswiaDgOnmi0 impute?；High朗Q HiQMStGsrtwhci lamins melaJsofcChemicalPMsphorylafion日illogical promises (OerwflxpmsssiQHjRgtJaiiDrn oT bid p饥ess緒HeurDgenfifiisMoiphapsnEsis dopflniiw cstakik proceM 倍Neurc*)GicaiNefrous syslem cteMetepmerMNeorwi dl

6、lferertialioiii 日曲辩邮耐州Prrammed celi basinsystem procsesexprassioin4. RT-PCR评估 Klotho (KI)甲状腺素转运蛋白(transthyretin ，Ttr)、Bdnf意3旻*-L 目ZJ UOfSG 巴&ILIGvAiinoA 衣 j 亠l乍_雷齐Lus-lkjn 妥进 r-境垃5.来自海马裂解物的免疫印迹定量分析，包括CREB/ERK/Akt的磷酸化和总cAMP,组蛋白H3,H4 , H2A。T211 芋呂 n=_*-=5d/-&JT-%.-HJUJ芒屮fi2 2mHuna*-15D5D-曲壬Lr朋一巴转匸H3ln

7、rrIKflHJacetd K13也心恫K5p-JJCtjnH3.?kw1 K9四. 生殖能力1足月妊娠成功的比例/数量（雌性小鼠）3*UEU6.JEk.Ei-nLl JEBqujnN2015105 0(17)P-Q.047*I(V)祐i|0.5-11.5VEH4NF BM-INF14.5-17.5Aga months)2后代存活数量AD料砂(month甲 規吕亠I苟BDHiererdSurvivedII 2自盘呂才 ib “垃 1 2勺jl呂E木刖ib 1 1丁VEH-IHFBN-IM F3.卵巢部位切片，对EGFP表达免疫分析。五. 骨质疏松1.小鼠BMSCs中衰老标记物53BP1和C-H

8、2AX的表达。表达量大表示干细胞衰老。ri Old GMSCs53BP153BP1 + DAPI |j T-H2AX 7-H2AX+DAPI普琳芒tu BurwAc Qi -31 TTID%O%V-H2AX2.左图是小鼠胫骨三维（3D）图像，中间图像是X射线图像，右图像小鼠胫骨样本的3Dmicro-CT 重建图像，计算骨体积分数BV/TVYoung control bone,OU control bone, BVTV= 11 ,B5%Old bone with young BMSCsOld bone with old BMSCs transplant,Bvrrv=30.w%六. 其他1衰老抑制

9、剂加入后21天，测定SA-B-半乳糖苷酶活性，活性降低，表示抗衰老效果好2加入后21天，测定细胞增殖量（与对照组比较），细胞增殖量多，抗衰老效果好3.降低ATM磷酸化水平，以及其下游目标p-CHK2, p-p53,和p21。衰老相关的p16marker也在治疗后下降Scnascnf HDFRrIJuuL 吧一.血匚=- a 左:EtJe_亀也冬冷夏KU-60015* DMSO20002O.QQD血nflHont HDFA7M * 115.000nooo5.000D.lpM C.SiuMU 4812 1ft 20Tliwtd)4流式细胞仪测定线粒体膜电位（与年轻小鼠对照）5. 氧消耗量（OCR）

10、（与年轻小鼠对照）6. 细胞外酸化速率（ECAR）（与年轻小鼠对照）7. 糖酵解/氧化磷酸化ATP的生成量（与年轻小鼠对照）di-mgAn 一 TgFF=- 0M50叫纯 019笔 30 40 50 60 TO BD WJ KJDTlnnfl (frtn)ra-sront200WGlue 込 OUEomycIn2-MQ fl 2040 50 W 7Q 00 9&Ti呢伽町d 幸黒壬吉Yl:IL&-M哲E-亠二口 S-3-倍云国合二ICJfilolln dL E百 HE GnlfdMo0K.U600IQ8. 对活性氧ROS监测，其中DHR123对羟基自由基、过氧化氢染色，MitoSOX对超氧阴离

11、子 染色9. 细胞核形态观察（与年轻小鼠对照）a -SH-aflznQq-.wLJmhAfi-IUalalE10肝、脑组织中单胺氧化酶MAO-B活性，活性越低越年轻。11全血谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活性和心肌脂褐素含量，GSH-Px活性高年轻，心肌脂褐 素含量低年轻。12皮肤中羟脯氨酸Hyp的含量，含量越高越年轻。13.各组织、脏器(皮肤，心肝脾肺肾脑等)中脂质过氧化物MDA (丙二醛)的含量，含量 低年轻，超氧化物歧化酶SOD活性，活性越高越年轻。参考文献：Loffredo F S, Steinhauser M L, Jay S M, et al. Growth Differentia

12、tion Factor 11 is a Circulating Factor that Reverses Age-Related Cardiac HypertrophyJ. Cell, 2013, 153(4):828-39.Bilkeigorzo A, Albayram O, Draffehn A, et al. A chronic low dose of A9 -tetrahydrocannabinol (THC) restores cognitive function in old mice.J. Nature Medicine, 2017.Selesniemi K, Lee H J,

13、Niikura T, et al. Young adult donor bone marrow infusions into female mice postpone age-related reproductive failure and improve offspring survival.J. Aging, 2009, 1(1):49.Shen J, Tsai Y T, Dimarco N M, et al. Transplantation of mesenchymal stem cells from young donors delays aging in miceJ. Scientific Reports, 2011, 1(6045):67.Kang H T, Park J T, Choi K, et al. Chemical screening identifies ATM as a target for alleviating senescenceJ. Nature Chemical Biology, 2017.