常用电泳技术和电泳方法简介课件

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1、常用电泳技术和电泳方法简介济宁市中医院设备科科室业务学习一、常用电泳技术和电泳方法（一）根据工作原理的不同：可分为移（一）根据工作原理的不同：可分为移界电泳、区带电泳、等速电泳、等电界电泳、区带电泳、等速电泳、等电聚焦电泳、免疫电泳等。聚焦电泳、免疫电泳等。（二）根据有无固体支持物可分为：自（二）根据有无固体支持物可分为：自由电泳和支持物电泳由电泳和支持物电泳 一、常用电泳技术分类（三）根据支持载体的位置或形状可分成：（三）根据支持载体的位置或形状可分成：水平电泳、垂直电泳、板状电泳、柱状水平电泳、垂直电泳、板状电泳、柱状电泳、电泳、U U型管电泳、倒型管电泳、倒V V字形电泳、毛细字形电泳、

2、毛细管电泳等。管电泳等。（一）根据支持物的特点又可分为：（一）根据支持物的特点又可分为：无阻滞支持物电泳。无阻滞支持物电泳。高密度的凝胶高密度的凝胶电泳。电泳。一、常用电泳技术分类（二）根据电源控制的不同，一般可分为以下（二）根据电源控制的不同，一般可分为以下3 3类：类：1.1.恒压电泳恒压电泳;2.;2.恒流电泳恒流电泳;3.;3.恒功恒功率电泳率电泳 。（一）根据自动化程度的不同，可分为半自动（一）根据自动化程度的不同，可分为半自动和全自动型。和全自动型。一、常用电泳技术分类（七）根据其功能的不同，可分为制备型、分（七）根据其功能的不同，可分为制备型、分析型、转移型、浓缩型等。析型、转移

3、型、浓缩型等。（八）根据用法的类型可分为：双向电泳、交（八）根据用法的类型可分为：双向电泳、交叉电泳、连续纸电泳、电泳层析相结合技叉电泳、连续纸电泳、电泳层析相结合技术等。术等。（九）根据不同的使用目的可分为：核酸电泳、（九）根据不同的使用目的可分为：核酸电泳、血清蛋白电泳、制备电泳、血清蛋白电泳、制备电泳、DNA测序电泳等。测序电泳等。二、电泳方法简介（一）纸电泳（一）纸电泳（一）纸电泳（一）纸电泳 指用滤纸作为支持载体的电泳方指用滤纸作为支持载体的电泳方指用滤纸作为支持载体的电泳方指用滤纸作为支持载体的电泳方法。是最早使用的区带电泳。将滤纸条水平地法。是最早使用的区带电泳。将滤纸条水平地法

4、。是最早使用的区带电泳。将滤纸条水平地法。是最早使用的区带电泳。将滤纸条水平地架设在两个装有缓冲溶液的容器之间，样品点架设在两个装有缓冲溶液的容器之间，样品点架设在两个装有缓冲溶液的容器之间，样品点架设在两个装有缓冲溶液的容器之间，样品点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后，再盖于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后，再盖于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后，再盖于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后，再盖上绝缘密封罩，即可由电泳电源输入直流电压上绝缘密封罩，即可由电泳电源输入直流电压上绝缘密封罩，即可由电泳电源输入直流电压上绝缘密封罩，即可由电泳电源输入直流电压（100V100V1000V1000V）进

5、行电泳。）进行电泳。）进行电泳。）进行电泳。二、电泳方法简介（二）醋酸纤维素薄膜电泳（二）醋酸纤维素薄膜电泳（二）醋酸纤维素薄膜电泳（二）醋酸纤维素薄膜电泳 电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳的特点是分离速度快、此电泳的特点是分离速度快、此电泳的特点是分离速度快、此电泳的特点是分离速度快、电泳时间短、样品电泳时间短、样品电泳时间短

6、、样品电泳时间短、样品 用量少。因此特别用量少。因此特别用量少。因此特别用量少。因此特别 适合于病理情况下适合于病理情况下适合于病理情况下适合于病理情况下 微量异常蛋白的检测。微量异常蛋白的检测。微量异常蛋白的检测。微量异常蛋白的检测。二、电泳方法简介（三）凝胶电泳（三）凝胶电泳 由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式，被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行，以的方式，被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行，以的方式，被称为凝胶电泳

7、。普通的凝胶电泳在板上进行，以的方式，被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行，以凝胶作为介质（多孔性，类似分子筛的作用）。电泳中常用凝胶作为介质（多孔性，类似分子筛的作用）。电泳中常用凝胶作为介质（多孔性，类似分子筛的作用）。电泳中常用凝胶作为介质（多孔性，类似分子筛的作用）。电泳中常用的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。它具有机械强度好、弹性大、它具有机械强度好、弹性大、它具有机械强度好、弹性大、它具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗透明、化学稳定性高、

8、无电渗透明、化学稳定性高、无电渗透明、化学稳定性高、无电渗 作用、设备简单、样品量小作用、设备简单、样品量小作用、设备简单、样品量小作用、设备简单、样品量小 (1(1(1(1100g100g100g100g）、分辨率高等优点。、分辨率高等优点。、分辨率高等优点。、分辨率高等优点。二、电泳方法简介（一）等电聚焦电泳（一）等电聚焦电泳 1 等电聚焦电泳过程等电聚焦电泳过程 一种利用有一种利用有pH值值梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。将等电点不同的蛋白质混合物电泳技术。将等电点不同的蛋白质混合物加入有加入有pH值梯度的凝胶介质中，在电场内值梯度的凝胶

9、介质中，在电场内经过一段时间后，各组分将分别聚焦在各经过一段时间后，各组分将分别聚焦在各自等电点相应的自等电点相应的pH值位置上，最后，样品值位置上，最后，样品的各组分在各自的等电点聚焦成一条清晰的各组分在各自的等电点聚焦成一条清晰而稳定的窄带。而稳定的窄带。二、电泳方法简介2 2 2 2等电聚焦电泳的特点等电聚焦电泳的特点等电聚焦电泳的特点等电聚焦电泳的特点 使用两性载体电解质，在电极之间形使用两性载体电解质，在电极之间形使用两性载体电解质，在电极之间形使用两性载体电解质，在电极之间形成稳定、连续、线性的成稳定、连续、线性的成稳定、连续、线性的成稳定、连续、线性的pHpHpHpH梯度；梯度；

10、梯度；梯度；由于由于由于由于“聚聚聚聚焦效应焦效应焦效应焦效应”，即使很小的样品也能获得清晰、，即使很小的样品也能获得清晰、，即使很小的样品也能获得清晰、，即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面；鲜明的区带界面；鲜明的区带界面；鲜明的区带界面；电泳速度快电泳速度快电泳速度快电泳速度快;分辨率分辨率分辨率分辨率高高高高;加入样品的位置可任意选择；加入样品的位置可任意选择；加入样品的位置可任意选择；加入样品的位置可任意选择；可用可用可用可用于测定蛋白质类物质的等电点于测定蛋白质类物质的等电点于测定蛋白质类物质的等电点于测定蛋白质类物质的等电点;适用于中、适用于中、适用于中、适用于中、大分子量（

11、如蛋白质、肽类、同工酶等）生大分子量（如蛋白质、肽类、同工酶等）生大分子量（如蛋白质、肽类、同工酶等）生大分子量（如蛋白质、肽类、同工酶等）生物组分的分离分析。物组分的分离分析。物组分的分离分析。物组分的分离分析。二、电泳方法简介（二二二二）等等等等速速速速电电电电泳泳泳泳 采采采采用用用用两两两两种种种种不不不不同同同同浓浓浓浓度度度度的的的的电电电电解解解解质质质质组组组组成成成成，一一一一种种种种为为为为前前前前导导导导电电电电解解解解质质质质，充充充充满满满满整整整整个个个个毛毛毛毛细细细细管管管管柱柱柱柱；另另另另一一一一种种种种为为为为尾尾尾尾随随随随电电电电解解解解质质质质，置置

12、置置于于于于一一一一端端端端的的的的电电电电泳泳泳泳槽槽槽槽中中中中。前前前前导导导导电电电电解解解解质质质质的的的的迁迁迁迁移移移移率率率率高高高高于于于于任任任任何何何何样样样样品品品品组组组组分分分分，后后后后者者者者则则则则低低低低于于于于任任任任何何何何样样样样品品品品组组组组分分分分，被被被被分分分分离离离离的的的的组组组组分分分分按按按按其其其其不不不不同同同同的的的的迁迁迁迁移移移移率率率率夹夹夹夹在在在在中中中中间间间间，在在在在强强强强电电电电场场场场的的的的作作作作用用用用下下下下，各各各各被被被被分分分分离离离离组组组组分分分分在在在在前前前前导导导导电电电电解解解解质

13、质质质与与与与尾尾尾尾随随随随电解电解电解电解 质之间的空隙中移动，质之间的空隙中移动，质之间的空隙中移动，质之间的空隙中移动，实现分离。实现分离。实现分离。实现分离。二、电泳方法简介（一）双向凝胶电泳（二维电泳）（一）双向凝胶电泳（二维电泳）第第一一向向采采用用等等电电聚聚焦焦 根根据据复复杂杂的的蛋蛋白白质质成成分分中中各各个个蛋蛋白白质质的的PIPI的的不不同，将蛋白质进行分离。同，将蛋白质进行分离。第第二二向向采采用用了了十十二二烷烷基基硫硫酸酸钠钠一一聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶电电泳泳 （SDS-PAGESDS-PAGE）就就是是按按蛋蛋白白质质分分子子量量的的大大小小使使其其在在

14、垂垂直直方方向向进进行行分分离离。其其结结果果不不再再是是条条带带状状，而是呈现为斑点状而是呈现为斑点状。二、电泳方法简介胶性 PH9中电加解入质了溶双液 PH3加上电场后建立稳定PH梯度蛋白质溶液加入，建立电场染色后，蛋白质因PI值不同，沿PH梯度分离开第一向等电聚焦等电聚焦PI逐渐降低等电聚焦胶放在SDS聚丙烯酰胺凝胶上 第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分子量逐渐降低 06-07 双向凝胶电泳示意图双向凝胶电泳示意图PI 逐渐降低二、电泳方法简介（七）免疫电泳（七）免疫电泳（七）免疫电泳（七）免疫电泳 免免免免疫疫疫疫电电电电泳泳泳泳是是是是琼琼琼琼脂脂脂脂平平平平板板板板电电电电泳泳泳泳和

15、和和和双双双双相相相相免免免免疫疫疫疫扩扩扩扩散散散散两两两两种种种种方方方方法法法法的的的的结结结结合合合合。将将将将抗抗抗抗原原原原样样样样品品品品在在在在琼琼琼琼脂脂脂脂平平平平板板板板上上上上先先先先进进进进行行行行电电电电泳泳泳泳，使使使使其其其其中中中中的的的的各各各各种种种种成成成成分分分分因因因因电电电电泳泳泳泳迁迁迁迁移移移移率率率率的的的的不不不不同同同同而而而而彼彼彼彼此此此此分分分分开开开开，然然然然后后后后加加加加入入入入抗抗抗抗体体体体做做做做双双双双相相相相免免免免疫疫疫疫扩扩扩扩散散散散，把把把把已已已已分分分分离离离离的的的的各各各各抗抗抗抗原原原原成成成成分

16、分分分与与与与抗抗抗抗体体体体在在在在琼琼琼琼脂脂脂脂中中中中扩扩扩扩散散散散而而而而相相相相遇遇遇遇，在在在在二二二二者者者者比比比比例例例例适适适适当当当当的的的的地地地地方，形成肉眼可见的沉淀弧。方，形成肉眼可见的沉淀弧。方，形成肉眼可见的沉淀弧。方，形成肉眼可见的沉淀弧。三、常用电泳设备的基本结构（一）电泳电源（一）电泳电源（一）电泳电源（一）电泳电源（二）电泳槽（二）电泳槽（二）电泳槽（二）电泳槽（三）附加装置（三）附加装置（三）附加装置（三）附加装置四、电泳仪的主要技术指标 1 输出电压 8 连续工作时间 2 输出电流 9 保护措施 3 输出功率 10 显示方式 4 电压稳定度 11 定时方式 5 电流稳定度 12 电源电压 6 功率稳定度 13 电源频率 7 输出组数 14 功耗