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1、论 文 答 辩欢 迎 各 位 老 师 指 导 探 讨 抗 癌 活 性 肽 （ ACBP） 对 大 肠 癌 细 胞株 的 凋 亡 和 p53、 bcl-2、 Bcl-xl基 因 表达 的 影 响 ， 进 一 步 完 善 抗 癌 活 性 肽 对 大肠 癌 细 胞 的 抑 制 作 用 机 制 ， 证 实 其 对 大肠 癌 细 胞 有 生 长 抑 制 的 作 用 。 体 外 培 养 大 肠 癌 lovo细 胞分 为 NS、 5-FU、ILP三 组 倒 置 显 微 镜 下 观 察 细 胞 凋 亡RT-PCR方 法 检 测Bcl-2 Bcl-xl基 因 的 表 达得 出 结 论 统 计 学 处 理取 3-
2、4代 的 细 胞作 用 24h 收 集 细 胞 ， 加 入 1ml的 Trizol 室 温 静 置 5min加 入 氯 仿 0.2ml/管 室 温 静 置 5min上 清 液 转 至 新 离 心 管 漩 涡 振 荡 30s后 离 心 弃 上 清 ， 加 入 1ml75%乙 醇 洗 涤室 温 静 置 10min弃 上 清 ， 保 留 沉 淀 溶 解 于 适 量 的 DEPC水 中冰 上 放 置 5min 12000g， 4 ， 离心 5min剧 烈 震 荡 混 匀 一 般 500ml洗 两次 12000g， 4 ，离 心 5min12000g， 4 ，离 心 5min12000g， 4 ，离 心
3、 5min 12000g， 4 ， 离心 3min室 温 晾 干加 入 等 体 积 异丙 醇 ， 上 下 颠 倒 Sx 用 药 前 和 用 药 24h后 （ 倒 置 显 微 镜下 ， 100， x400） 生 理 盐 水 组 5-FU用 药 前 和 用 药 24h后 （ 倒 置显 微 镜 下 ， 100， x400）5-FU组 用 药 前 和 用 药 24h后 （ 倒 置显 微 镜 下 ， 100， x400）抗 癌 活 性 肽 组 细 胞 总 RNA1 琼 脂 糖 电 泳 可 见 清 晰 的 两 条 条 带 ， 分 别 为18S和 28S。 p53 RT-PCR电 泳 图 bcl-2 RT-
4、PCR电 泳 图 Bcl-xl RT-PCR电 泳 图 GAPDH RT-PCR电 泳 图 注 ： *P0.01， *P0.01 VS NS组Sx Sandig BV ,Brand K, Herwig S , et al. p16 and p53 genest ransferred with the help of adenovirus to induce apoptictumor cell death J . Ugeskr Laeger , 1997 , 159 (46) :6825 6830.14.Manne U, Weiss HL, Grizzle WE. Bcl-2 expression isassociated with improved prognosis in patients with distalcolorectal adenocarcinomas. Int J Cancer, 2000, 89:423 430. 谢 谢 ！谢 谢 ！
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