大鼠RatAgouti相关蛋白AGRPA2

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1、本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断大鼠(Ra)Agouti相关蛋白(AGRP)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELS）。往预先包被gout相关蛋白（AG)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、RP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物M显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Aoui相关蛋白（AGR）呈正相关。用酶标仪在50nm波长下测定吸光度(O 值)，计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,30

2、00转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。30转离心30分钟取上清。. 细胞上清液：3000转离心1分钟去除颗粒和聚合物。4 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存:如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-2，避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450m）2. 高精度加样器及枪头:0.5-1uL、-20L、200uL、200-1000u3. 恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象，水浴

3、加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥)保存。3. 浓度为的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释倍，最终结果乘以才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称6孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔8条12孔条无标准品.3L*管0.3mL*6管无样本稀释液6L3无检测抗体-P10mL5mL无20洗涤缓冲液2L15L按说明书进行稀释底物A6mL3L无底物B6mL3mL无终止液6m3mL无封板膜2张张无说明书1份份无自封袋1个个无注：标准品(S0

4、-S)浓度依次为:0、1.5、3、12、2 ngmL试剂的准备 2洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按：20稀释，即1份的20洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液，静置min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350L，浸泡mn，洗板次。操作步骤1. 从室温平衡20mn后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4。2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50L;3. 样本孔先加待测样本1L,再加样本稀释液0;空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HR)标记的检测抗

5、体00L,用封板膜封住反应孔，37水浴锅或恒温箱温育6i。5. 弃去液体,吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物、各50L,37避光孵育15mi。7. 每孔加入终止液，15mn内,在nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线:在xl工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。试剂盒性能1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.90。2. 灵敏度:最低检测浓度小于0. ng/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交

6、叉反应。4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15。5. 贮藏:-8,避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果，由实验者承担,本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。FRESERC US OLY. NO FORUSEINIAGNOTIC PROCEURES gouti RlaedProtein (AGRP) ELIS t instucionIneded ueThis AGRP EI kiis iteded Labortoy forReacue onlyan is ot for

7、usndgnostic orthrpeutc rocedues.Th Stop Soluto chgesthecolrfrom blue toylow adhe inesityof thcor i easred 45 nmusing pectrophtomeern oer tomeare te centrtio of GRP i te ample， ts RP ELISAKtinudes a st of caiation sana. The cabrain stanardsare yed athe sam imea the smples aalo t operato to producesan

8、ad curve ofptica DeityveruAGRP ccentraion. The concenraion o AGR ite smps i then deteried y omparingte .D. o the sals o he stdrd curveSamle oltn and storaSerum -U erum sartor tube and llow sampe cot for 30 minuts eore ctrifgation for 1 inutesat aproimtely 300. move serum and assa immeiatl o aliquota

9、n ste samle t -20 o-.Avoi repet freeze-taw cylsPlasm - Clect plsma TA o hepari an ticgulan. Centrifg samles fr 30 minutes 3000g a 2- witin 0 inutsofcolction.Store sampleat -20or 0. id repatd freee-th ycle.Cel cuure upenats ad oerbiologil fluds - Reve parculates etfugnand asa immediatel o aluot asto

10、same t 2or -80. Aoid eeaed freez-thawyces.Noe: Th mple houleecetifugaedequatel and no hmolysisorgranule ws allowed.Materilsrquiedbutnot spli1. andard irpae rader(45nm)2 Peisin pipttesa Disposabl pipete tips.3. 3 inuatorPreautns1. o ntsubtitt rgents f nekito anther.Stndad, conjuate and mirlas e atceo

11、 otima perfrman. onthe reagnt supplied bmanfaturer.2 Dono re micplate rm he storagbag nil needed.Unused strip sd be stored at 2-8C n thi poh witthe desiccat roded.3. ix allreagents ersin.Remo all k agnts from rrigeaor and llw o ra room temerar (20-C)Maerials suplieNe96 eteriations8 determitionsMires

12、astippat1*8stris12*4stipstad.3l*6us0.3mtubsSamp Dilnt6.0l3.0lHRPCjugate reagn10.0ml5.0ml20Wah lution5ml15mlChomogen oluion A0ml.mlromoenSoluionB6.ml0mStop Soti60l0mCosure plate ebran22Use manul11Sealedbags11Note： Stnard （S0 S) ocetatn wa flody:0，15,6，2，2ng/mlReagt prearation20wah uio：Dlte with Distl

13、led or deioize ater1:20.Asy proceue1 Preae alleagenbeo satng asa rcedure. t is rcmened that allStanadsand mplesb added in ulia to teicolisa Stipplae. Add stndrd：SetStandad lls, estingsmpe wes Adtada 50 totandar well3. Add Sample: Addample 10l the ad SampleDilet 40l tstingsampl well; Blak ell doet an

14、tng.4. Ad 100l HR-conga reagen o ech wll，cve wit n adheive stri and cubatefo60 minute at37C. prate eachwel and ash, retingthe prcss fou tims fo totlof fie whes. Wah byfilling ach well ith Was Solio(400l) using a squirt botle， anfold dspens orautoahr. Coete remoal of iqidat eah stpis essnial togood e

15、rormance. Afterheastash， emoeany remaini Wash oution byrtg or decing. Ine he plat nd bot it agant clean paperoel.6. Add hromogenslinA 0l and chrmgen soluton B 50l to ech well. Gel nd incbae fo 5 minutes at37C. Protectfrom liht.7. Add Stp Solutio to ah el Te olor in well huldhage from ueo yellow. Ifh

16、ecoo i he well is gren or thclor hnge des not apper unfrm, genly ap the ptetonsure througixng Re the Otica Densi (.D.) at 450n usina miotterpate ae ihn 15 minutesCaclatin f rults1. Thistnar eis usedodeterme te aunt n an unknown sample.he sandarcve is generte by ptingthe avrageO. (450nm) bid foreah o

17、f h i stanard conentrionson thevericl (Y） ais esus te cresndng ccentation o te hrizonta (X） axs2. First, alate te ea O.D. value fo ech tndar and amplellO.D. valus, ar sutracted by thea valu f te zrostn bre resultiterption. Contruct te standard ve uingraph pap o stistial softae. 3. o deermine he amou

18、nt n eachsmple, irst locat the .D. vu n the Y-axiandxtnd horionta ine t e stdrd cuve. At the pointof inrscion， draw tillie to the X-xis ad red coreoingconceratio. 4. An vriaton i operato, pipttingand whing tcne, incubto tieor temerature, ndit gcn ause vriaton in reult.Eachusershold obtain their wn s

19、tandadv5. Thesensitivity y his aay s 0ng/ml6. Stanard cureSrae: -8.alty: ix nthsFO RESARCH USE OLY；NOTOR HERAPEUTIOR DAGNOSTIC PPLIATIONS! PLESE RED THROH ENTIRE PRCEDUR BEFRE BEGINIG!内容总结(1)本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断大鼠(Rat)Agoti相关蛋白（AGR)ELIS检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（LIS）(2）颜色的深浅和样品中的Aoti相关蛋白(AGR)呈正相关