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1、实验一 薄层色谱法分离鉴定食品中的黄酮类化合物一 实验目的 通过卡玛薄层色谱仪分析食品中黄酮类化合物的实验，了解薄层色谱分离方法的原理及 薄层色谱仪的大致结构；掌握使用薄层色谱仪的及其相关软件的方法。二 实验原理 将黄酮类粗提物采用半自动上样法，借助于混合物中的组分，在互不相容的组分件进行 吸附或分配，以达到分离的目的。三 仪器与药品瑞士卡玛(CAMAG, Switzerland)薄层色谱仪构造如下图所示(本实验室薄层色谱仪 包含除6 之外的所有部件)。色谱展开流动相为：氯仿:甲醇=9:1。抿告4T一_f*四 实验方法及操作步骤1. 薄层板使用前先活化,如有特殊要求,还应预洗。活化方法：将硅胶
2、板移入烘箱，缓慢升温至105-110C恒温活化半小时，取出放入干燥 器中备用。2. 点样点样是平面色谱中最重要的步骤，点样过程中产生的误差无法通过色谱展开和计算来校 正。本设备采用喷雾点样，条带状等多种方式点样。其中条带状点样适合中药分析。条带状点样的优势中国药典薄层图谱集对点样的要求从左到右两个一组分别为手动点状点样、喷霧点状点样、手动条带状点样、喷鬓式条带状点样 一般采用条带状点样，带宽810mm (TLC), 58mm(HPTLC),高度不超过 1mm点状点样，直径一般不大于3mm (TLC)。 釆用接触式时尽量不要损伤薄层板定量点样，提高样品色谱和对照药材色谱可比性点样时应注意选择适宜
3、的溶剂。样品的溶解度、 溶液粘度等均会对点样质畳产生影响。n-hexane toluene methanol n-hexane toluene methanol . 一 _ 一3. 展开展开式薄层色谱中受影响因素最多的步骤，展开剂的选择、不同展开方式、温度、展开 距离对成分分离的影响。其中展开湿度的影响值得重视且较难控制。饱和&预平衡对色谱展开影响湿度对Rf值的影响展开时间 22 min17 min13 minJR开钢：二氯乙烷-甲図-异丙审-氨水(50:10: 10:2)本实验室使用的为全自动展开系统。L1ir=三无与伦t可进行I平面色谱展开 用标准化前展 层析缸中进行 全自动全自动展开系统
4、ADC24. 色谱后衍生化 本实验室使用的薄层色谱仪器带热激发反应，可短时间内将展开板进行烘干5. 图谱记录和评价该系统优点：曝光时间自动侦测、曝光时间课手动调节、专业图像增强图像校正、专 业图像增强空白板背景扣除。五软件设定导入双击软件f设定参数f新建1.点样器2展开器3.观察器1. 点样器设置：进入 Linomat 5 General 界面 *调整 Sequence.defaults 进入 Sequence 界面（调整 Number of tracks、Band length、点样位置x, y轴、样点间隔、点样量、点样顺序等等）2. 展开器设置：新建进入界面设定参数（预饱和时间、预饱和液所需体积、展开剂体积、展开距离、吹干体积）开始提示加预报和液加预饱和液过程中加展开剂展开完毕，待吹干、 取出、放入观察室3. 观察设置：新建选择所需要用观察光，如“254nm, 360nm, R，T，RT等 一点击将要观察所需的光照条件一点击开始拍照-f拍照完成。六 作业和思考题1. 展开剂的选择条件。2. 整理该仪器使用过程中的注意事项。
薄层色谱法分离鉴定食品中的黄酮类化合物
