《讨论第三小组》PPT课件

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1、酶分离纯化中的注意和酶活、酶比活力、回收率测定组员：彭少杰、王大亨、方言康、姜兰PPT制作人：姜兰演讲者：方言康 分离纯化注意事项测定内容酶活力酶比活力酶活回收率比例表 在酶分离纯化过程中，一个非常重要的问题是保护酶的活性，不使酶在纯化的过程中失活，因此酶提取纯化应注意以下问题：1） pH值2） 温度3） 防止氧化4） 避免重金属污染5） 蛋白酶的污染6） 介质的极性和离子强度选择酶最稳定的pH值，确定合适的缓冲容量的缓冲溶液一般来说0时酶比较稳定，一般在04时操作；但有例外，如丙酮酸羧化酶，在0时不稳定，而在260时稳定多含SH，可加入-巯基乙醇、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等进行保护主要

2、注意溶液的配制，亦可加入EDTA络合去除加入蛋白酶抑制剂如PMSF（苯甲基 磺酰氟）、DFP（二异丙基氟磷酸）或胰蛋白酶抑制剂加入蛋白酶抑制剂如PMSF（苯甲基磺酰氟）、DFP（二异丙基氟磷酸）或胰蛋白酶抑制剂 酶活力（enzyme activity）也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。 酶的定量并非对其蛋白质进行定量，而是对它的催化能力进行定量。So 产物浓度时间 酶的比活力指每毫克酶蛋白所含的酶活力单位数 总蛋白质/mg总酶活力/U比酶活力/(U/mg)回收率/%纯化倍数粗酶液192.60 9576.20 49.74 100.00 1硫酸铵分级层析31.20 3991.20 127.92 41.66 2.60Sephadex G-75层析2.94 2209.60 751.56 23.07 15.10仙人掌SOD的纯化结果