甲状腺激素受体提取方法
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1、耶防章型丁屋;uiiuoi才凍ZU () *sadVia3%Z0-0+uisdAj丄$00 :朝岳翌乃耿喙力山巾翌乃耿YE出3(尝雷(乙) 裁輙SH辭解殳(!)-I8ns: xbh 刖丄SX08- 1刖丄科题确UIIUOE 6000ZU :碍聽6JW【縫S) -8 鈴草加:byq?*(WS8Hd 9upA|6-su丄 hlSOO +(fflKW-)lia l/IW【+ ZD6|aI IaIIUS+DX hii/0 :朝岳型伸爲型伸爲屋BY叫 L裁宴嘿 ZD6|aI IaIIUS + 9S0Djns IaISZO :朝岳翌嘿豊:乙嘿豊 9 裁一嘿 001-X uo】!丄 丁0 + Z|36|aI
2、 hlius + 9S0Djns IaISZO :朝岳型俘皐:I 皐 旱PT殳 uiiusi7 600008 : 3屋 PZ|36|a| hliug+ssoDjns hi8l :则ZD6|a| hliug+ssoDjns H07 :邛喬ZD6|a| h|ius+9S0Djns hl乙乙:丑I昌 丑曲:朝岳翌探冒盍惜重 T 旱PT殳 uiiuoi 600Z : 3屋 7ZD6|a| hliug + ssoDjns IaISZO :朝岳翌滦E6 HOffi I(4) .PBS清洗残留消化液(5) .所得沉淀用预冷的STME重悬STME 组成:每升中包括:0.32mol Surcose+20mmol
3、 Tris-HCI ( PH7.8 ) +1mmol MgCl +5mmol EDTA(6) .在Teflon玻璃匀浆器中回击敲打5次,每次1min(7) . 离心 1000g 10min 弃上清(8) . 洗涤沉淀:洗涤1: STM+0.5% Triton X-100 洗2次洗涤 2: STM 洗两次STM 是不含 EDTA 的 STME获得比较纯净的核制剂2.细胞核可溶性T3受体(1) .取上述核制剂,用STM重悬(2) .取少量用HE染色,根据染色结果,如无明显伊红颜色,说明细胞核分离较好(3) .另取少量低渗透溶核,测定OD 280nm和OD26O nm若。简 2.0,说明核较纯净,无核外胞浆物污染280/260(4) .其余STM悬液离心,弃上清(5) . 收集沉淀,加入 1.5mLKMTKMT组成:每升溶液包含:0.4 mol KCI+20mmol Tris-HCI ( PH7.8 ) +1mmol MgCl +5mmol DTT(6) . 缓慢磁力搅拌 45 min(7) . 离心 10000g 20min 取上清获得可溶性TRs , -80X保存
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