《肿瘤分子诊断学》PPT课件

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1、 本 章 主 要 内 容一 、 分 子 诊 断 概 述二 、 肿 瘤 的 分 子 诊 断三 、 分 子 诊 断 在 肿 瘤 研 究 中 的 应 用四 、 分 子 诊 断 发 展 前 景 及 存 在 的 问 题 分 子 诊 断（ molecular diagnosis)概 念 ： 一 种 疾 病 的 发 生 常 伴 有 相 关 基 因 变 化 ， 分 子 诊 断 是 在 分 子 水 平 上 研 究 和 探 索 疾 病 发 生 的 分 子 基 础 的 方 法 。 分 子 诊 断 的 特 点 ：灵 敏 度 高特 异 性 强适 用 范 围 广取 材 一 般 不 受 组 织 或 时 相 限 制 分 子

2、诊 断 目 前 主 要 应 用 于人 类 遗 传 病 的 基 因 诊 断 和 产 前 诊 断肿 瘤感 染 性 疾 病 病 原 体 （ 细 菌 、 病 毒 ）多 基 因 病组 织 器 官 移 植 配 型性 别 鉴 定法 医 学医 学 分 子 生 物 学 基 础 研 究 应 用 肿 瘤 的 分 子 诊 断 与 肿 瘤 相 关 的 基 因n癌 基 因n抑 癌 基 因nDNA错 配 修 复 基 因 癌 基 因 ： 是 存 在 于 致 瘤 病 毒 、 人 和 动 物 细 胞 中 能 导 致 细 胞 恶 性 转 化 ， 促 进 细 胞 生 长 和 增 殖 的 一 类 基 因 。Ras C-MetMyc M

3、dm2Neu Bcl-2 抑 癌 基 因 ： 是 正 常 细 胞 内 存 在 的 能 够 抑 制 细 胞 恶 性 转 化 ， 对 正 常 细 胞 的 增 殖 起 负 性 调 节 作 用 的 基 因 ， 抑 癌 基 因 失 活 后 正 常 细 胞 增 殖 失 控 ， 转 化 形 成 肿 瘤 细 胞 。Rb PTEN APC MCC VHLP53 FHIT WTI DPC4P16 BRCA NF1NF2 nm23P15 DCC HNPCC 肿 瘤 分 子 诊 断 的 基 础 基 因 改 变 n 点 突 变n 基 因 扩 增n 基 因 缺 失 、 易 位 或 重 排n DNA甲 基 化n DNA多

4、态 原 癌 基 因 恶 性 肿 瘤 激 活 方 式 abl 慢 性 粒 细 胞 白 血 病 易 位 bcl2 B细 胞 淋 巴 瘤 易 位 bcl3 慢 性 粒 细 胞 白 血 病 易 位 cerbB 鳞 状 细 胞 癌 、 星 形 细 胞 瘤 扩 增 cerbB2 乳 腺 癌 、 卵 巢 癌 、 胃 癌 扩 增 lym1 B细 胞 淋 巴 瘤 易 位 pml 急 性 前 髓 白 血 病 易 位 myc Burkitt淋 巴 瘤 、 肺 癌 、 乳 腺 癌 、 子 宫 癌 易 位 Lmyc 肺 癌 扩 增 Nmyc 神 经 母 细 胞 瘤 、 视 网 膜 母 细 胞 瘤 扩 增 Hras 膀

5、胱 癌 、 胃 癌 、 鼻 咽 癌 、 宫 颈 癌 、 黑 素 瘤 、 点 突 变 Kras 肠 癌 、 肺 癌 、 胰 腺 癌 、 卵 巢 癌 、 胆 囊 癌 、 甲 状 腺 癌 、 黑 素 瘤 点 突 变 Nras 急 性 粒 细 胞 白 血 病 、 急 性 淋 巴 细 胞 白 血 病 、 点 突 变 生 殖 泌 尿 道 癌 、 甲 状 腺 癌 、 肝 癌 、 黑 素 瘤 ret 甲 状 腺 癌 重 排 Ksam 胃 癌 扩 增 sis 星 形 细 胞 瘤 、 骨 肉 瘤 、 横 纹 肌 肉 瘤 ？ src、 fes 肠 癌 、 急 性 早 幼 粒 细 胞 白 血 病 ？ tal1 急 性

6、 淋 巴 细 胞 白 血 病 易 位 trk 甲 状 腺 癌 重 排 ros 急 性 粒 细 胞 白 血 病 、 急 性 非 淋 巴 细 胞 白 血 病 ？ fms 绒 癌 、 外 阴 癌 、 畸 胎 瘤 扩 增 常 见 原 癌 基 因 的 激 活 方 式 和 人 类 肿 瘤 点 突 变 指 基 因 在 特 定 位 置 发 生 一 个 核 苷 酸的 改 变 ， 使 相 应 蛋 白 质 的 一 个 氨 基 酸 改变 ， 继 而 改 变 了 蛋 白 质 的 空 间 构 型 和 生物 学 功 能 。 点 突 变1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 蛋 苏 谷 酪 赖 亮

7、缬 缬 缬 甘 丙 甘 甘 缬 ATG ACG GAA TAT AAG CTG GTG GTG GTG GGC GCC GGC GGT GTGGTC缬H-ras基 因 的 点 突 变正 常 P21蛋 白细 胞 H-ras基 因EJ/24膀 胱 癌 H-ras基 因肿 瘤 H-ras编 码 的 P21蛋 白 Ras基 因 点 突 变 及 导 致 的 肿 瘤基 因 密 码 子 点 突 变 氨 基 酸 改 变 肿 瘤Hras 12 GGC GTC 甘 氨 酸 缬 氨 酸 膀 胱 癌 、 胃 癌 、 鼻 咽 癌 、 宫 颈 癌 GGC GAC 甘 氨 酸 门 冬 氨 酸 乳 腺 癌 、 肠 癌 61

8、CAG CTG 谷 氨 酰 胺 亮 氨 酸 膀 胱 癌 、 肺 癌 、 黑 素 瘤 CAG CGG 甘 氨 酸 精 氨 酸 肾 癌Kras 12 GGT CGT 甘 氨 酸 精 氨 酸 膀 胱 癌 GGT AGT 甘 氨 酸 丝 氨 酸 胃 腺 癌 、 胆 囊 癌 GGT TGT 甘 氨 酸 半 胱 氨 酸 肺 癌 、 肠 癌 、 慢 性 粒 细 胞 白 血 病 GGT GAT 甘 氨 酸 门 冬 氨 酸 胰 腺 癌 GGT GTT 甘 氨 酸 缬 氨 酸 结 肠 癌 、 卵 巢 癌 13 GGC GAC 甘 氨 酸 门 冬 氨 酸 乳 腺 癌 61 CAA CAT 谷 氨 酰 胺 组 氨 酸

9、 肺 癌 CAA CTA 谷 氨 酰 胺 亮 氨 酸 肺 癌Nras 12 GGT AGT 甘 氨 酸 丝 氨 酸 髓 样 增 生 综 合 征 GGT GTT 甘 氨 酸 缬 氨 酸 急 性 粒 细 胞 白 血 病 GGT GAT 甘 氨 酸 门 冬 氨 酸 急 性 粒 细 胞 白 血 病 、 畸 胎 瘤 13 GGT CGT 甘 氨 酸 精 氨 酸 肺 腺 癌 GGT GTT 甘 氨 酸 缬 氨 酸 急 性 粒 细 胞 白 血 病 GGT GAT 甘 氨 酸 门 冬 氨 酸 急 性 粒 细 胞 白 血 病 61 CAA AAA 谷 氨 酰 胺 赖 氨 酸 神 经 母 细 胞 瘤 、 纤 维

10、肉 瘤 、 黑 素 瘤 CAA CAT 谷 氨 酰 胺 组 氨 酸 横 纹 肌 肉 瘤 CAA CTA 谷 氨 酰 胺 亮 氨 酸 早 幼 粒 细 胞 白 血 病 基 因 扩 增 是 细 胞 原 癌 基 因 在 细 胞 基 因 组 内 拷贝 数 的 增 加 及 其 表 达 水 平 的 增 高 。n 基 因 扩 增 是 由 于 基 因 DNA的 过 度 复 制 所 致 ， 常引 起 细 胞 核 型 改 变 ， 表 现 为 出 现 无 着 丝 点 的 双微 粒 体 (DMs)和 缺 乏 正 常 明 暗 交 替 染 色 带 的 均匀 染 色 区 （ HSRs)。 基 因 扩 增8c-myc HSRD

11、Ms扩 增 原 癌 基 因 的 扩 增 激 活 与 人 类 肿 瘤 扩 增 的原 癌 基 因 肿 瘤cmyc 白 血 病 、 乳 腺 癌 、 胃 癌 、 肺 癌 、 肠 癌 、 神 经 母 细 胞 瘤 、 胶 质 细 胞 瘤Nmyc 神 经 母 细 胞 瘤 、 视 网 膜 母 细 胞 瘤 、 肺 癌Lmyc 肺 癌erbB 胶 质 细 胞 瘤 、 鳞 状 细 胞 癌erbB2 乳 腺 癌 、 唾 液 腺 癌 、 卵 巢 癌int2 乳 腺 癌 、 膀 胱 癌 、 胃 鳞 状 细 胞 癌hst 乳 腺 癌 、 膀 胱 癌 、 胃 癌abl 慢 性 粒 细 胞 白 血 病myb 肠 癌 、 白 血

12、 病ets1 淋 巴 瘤 Hras 膀 胱 癌Kras 肺 癌 、 卵 巢 癌 、 膀 胱 癌Nras 乳 腺 癌 基 因 缺 失 基 因 片 段 的 缺 失 是 另 一 种 主 要 的 基因 变 异 形 式 ， ， 缺 失 的 范 围 差 别 较 大 ，可 以 是 1-2个 碱 基 ， 也 可 以 是 一 个 片 段 或一 个 外 显 子 的 缺 失 。 * 杂 合 型 缺 失 杂 合 型 缺 失 (loss of heterozygosity, LOH) 同 一 患 者 正 常 细 胞 DNA存 在 两 个 等 位 基 因 ， 而 肿瘤 组 织 DNA中 仅 存 在 一 个 等 位 基 因

13、 ， 因 为 肿 瘤 细 胞 单条 染 色 体 中 一 个 等 位 基 因 缺 失 ， 把 这 种 改 变 称 为 杂 合型 缺 失 。 图 1 3p25 LOH电 泳 图Fig 1 LOH at 3p25 by electrophoresis1： 癌 旁 肺 组 织 ； 2 6： NSCLC组 织 。 其 中 3、 4、 6存 在 LOH。1:paracancerous lung tissue;2 6:NSCLC tissues.LOH at 3p25 occur in lane 3,4 and 6. 图 2 3p14 LOH电 泳 图Fig 2 LOH at 3p14 by electro

14、phoresis1： 癌 旁 肺 组 织 ； 2 6： NSCLC组 织 。 3 6存 在 LOH。1:paracancerous lung tissue;2 6:NSCLC tissues.LOH at 3p14 occur in lane 3 6. n正 常 组 织 杂 合 状 态 下 等 位 基 因 有 两 条 电泳 带 ， 当 肿 瘤 组 织 等 位 DNA两 条 带 中 的一 条 较 正 常 等 位 基 因 带 明 显 减 弱 (70 )则 认 定 为 LOH(图 1)。* 杂 合 型 缺 失 用 PCR微 卫 星 多 态 性 分 析 检 测 肝 癌 LOH。图 1 肝 癌 肿 瘤

15、组 织 等 位 基 因 杂 合 性 丢 失 图 例 。方 框 下 方 示 微 卫 星 Marker名 称 ， 上 方 N-癌 旁 正 常肝 组 织 ， T-肿 瘤 组 织 ， 箭 头 示 肿 瘤 组 织 DNA其 中 一 条等 位 基 因 条 带 丢 失 或 明 显 减 弱 ， 即 发 生 LOH。 图 示 1号HCC病 人 在 D10S1220， D10S1223， D10S2327和 D16S539等 位 点 发 生 LOH， 35号 病 例 在 D1S482， D1S165，D16S2624和 D16S413等 位 点 发 生 LOH。 某 一 基 因 在 肿 瘤 细 胞 中 从 染 色

16、 体的 正 常 位 置 转 移 到 其 他 染 色 体 的 某 个位 置 上 称 为 易 位 或 重 排 。基 因 易 位 、 重 排 基 因 易 位 、 重 排n 在 一 些 肿 瘤 中 可 以 见 到 异 常 的 染 色 体 ， 有 的 长些 ， 有 的 短 些 。 通 过 基 因 部 分 定 位 研 究 ， 证 明在 这 些 异 常 的 染 色 体 中 发 生 了 某 些 基 因 的 易 位和 重 排 。n 由 于 基 因 基 因 的 易 位 和 重 排 ， 原 来 无 活 性 的 原癌 基 因 被 移 到 某 些 强 的 启 动 基 因 或 增 强 子 附 近而 被 活 化 ， 以 致

17、 原 癌 基 因 表 达 增 强 ， 导 致 肿 瘤的 发 生 。 基 因 易 位 、 重 排相 互 易 位c-myc IgH8 14 8 14正 常 染 色 体 重 排 染 色 体IgH/c-mycBurkitt淋 巴 瘤 C-myc基 因 的 易位 人 肿 瘤 中 细 胞 癌 基 因 的 易 位细 胞 癌 染 色 体 染 色 体 人 类 肿 瘤 基 因 定 位 易 位N-myc 2p25 t(2;8) Burkitt淋 巴 瘤raf 3p25 t(3;8) 肺 癌 和 肾 癌yes 6 t(6;14) 急 性 淋 巴 细 胞 白 血 病 、 卵 巢 癌myc 8q24 t(8;14),(8

18、;21) 急 性 淋 巴 细 胞 白 血 病 、 Burkitt淋 巴 瘤abl 9q34 t(9;22),(6;9) 慢 性 粒 细 胞 白 血 病 、 急 性 非 淋 巴 细 胞 白 血 病fes 15q25 t(15;17) 慢 性 粒 细 胞 白 血 病sis 22q12 t(9;22),(8;22) 慢 性 粒 细 胞 白 血 病 、 Burkitt淋 巴 瘤 DNA多 态 性 群 体 中 的 不 同 个 体 或 同 一 个 体 的 不同 染 色 体 DNA核 苷 酸 序 列 存 在 许 多 差 异 ，尤 其 是 非 编 码 区 域 ， 大 约 每 几 百 个 碱 基中 就 有 一

19、个 存 在 着 碱 基 取 代 或 碱 基 替 代现 象 ， 但 表 型 并 未 改 变 ， 这 种 现 象 称 为DNA多 态 性 。 实 际 上 是 染 色 体 DNA中 核苷 酸 排 列 顺 序 的 改 变 。 DNA多 态 性nRFLPnVNTRn小 卫 星 DNA多 态n微 卫 星 DNA多 态n单 核 苷 酸 多 态 RFLP 数 量 可 变 的 串 联 重 复 序 列 variable number of tandem repeat, VNTR 人 类 基 因 组 中 含 有 一 些 重 复 序 列 家 族 ， 有些 序 列 分 散 在 基 因 组 中 ， 有 些 是 以 一 系

20、 列 短 的重 复 序 列 排 列 组 成 高 变 区 ， 其 串 联 重 复 序 列 拷贝 数 可 相 差 很 多 ， 约 占 单 倍 体 DNA的 10%， 基本 上 位 于 非 编 码 区 。 重 复 单 位 以 670bp为 多 ，重 复 次 数 约 6100次 ， 称 为 数 量 可 变 的 串 联 重复 序 列 。 RFLP 限 制 性 片 段 长 度 多 态 性 （ restriction fragment length polymorphism） 当 DNA序 列 的 差 异 发 生 在 限 制 性 内 切 酶 识 别 位 点 或 当 DNA片 段 的 插 入 、 缺 失 或

21、重 复 可 使 基 因 组 DNA经 限 制 性 内 切 酶 水 解 后 发 生 片 段 长 度 改 变 。 因 这 些 特 异 基 因 片 段 是 限 制 性 内 切 酶 产 生 的 ， 在 不 同 个 体 间 可 出 现 不 同 长 度 的 限 制 性 片 段 类 型 ， 故 称 为 限 制 性 片 段 长 度 多 态 性 。概 念 小 卫 星 DNA 细 胞 内 基 因 组 含 有 大 量 的碱 基 重 复 序 列 ， 一 般 将670bp的 串 联 重 复 称 为 小 卫星 DNA。 微 卫 星 DNA 将 14bp的 串 联 重 复 序 列 称 为 微卫 星 DNA， 又 称 简 单

22、 重 复 序 列（ simple repeat sequence, SRS)。 微 卫 星 不 稳 定性 microsatelite instability,MI 是 指 简 单 重 复 序 列 的 增 加 或 丢 失 ， 特 别 是在 DNA错 配 修 复 系 统 （ DNA mismatch system, DNAMMR)缺 损 的 肿 瘤 基 因 组 中 常 显示 大 量 的 MI。 微 卫 星 不 稳 定 性 与 肿 瘤微 卫 星 不 稳 定 性MI与 癌 基 因 或 抑 癌 基 因 的 变 化 之 间 无 明 显 关 系 ， 即 癌 基 因 或 抑 癌 基 因 的 突 变 并 不 增

23、 加 微 卫 星 的 不 稳 定 性 。MI与 肿 瘤 的 发 展 有 关 ， MI仅 在 肿 瘤 细 胞 中 发 现 ， 从 未 在 正 常 组 织 中 检 测 到 。在 原 发 与 转 移 性 肿 瘤 中 ， MI均 匀 分 布 于 整 个 肿 瘤 。 在 晚 期胃 癌 的 MI频 率 显 著 高 于 早 期 胃 癌 。 端 粒 酶 与 肿 瘤 的 关 系 及 检 测 端 粒 酶 与 肿 瘤 端 粒 ： 是 位 于 细 胞 染 色 体 末 端 的 一 种 由 220kb串 联 的 短 片 段 重 复 序 列 （ TTAGGG)n及 一 些 结 合 蛋 白 组 成 的 特 殊 结 构 ， 在

24、 染 色 体 定 位 、 复 制 、 保 护 和 控 制 细 胞 生 长 寿 命 等 方 面 具 有 重 要 作 用 ， 并 与 细 胞 凋 亡 、 细 胞 转 化 和 永 生 化 密 切 相 关 。 端 粒 酶 ： 为 由 RNA和 蛋 白 质 组 成 的 一 种 核 糖 核 蛋 白 复 合 物 （ RNP)， 含 有 端 粒 重 复 序 列 的 模 板 ， 即 以 自 身 RNA组 分 为 模 板 ， 复 制 合 成 端 粒 序 列 。 目 前 有 关 端 粒 酶 活 性 表 达 的 研 究 已 覆 盖 了 人 类 大 部 分 的 实 体 瘤 。 基 因 变 异 及 其 检 测 一 、 点

25、 突 变 指 基 因 在 特 定 位 置 发 生 一 个 核 苷酸 的 改 变 ， 使 相 应 蛋 白 质 的 一 个 氨 基酸 改 变 ， 继 而 改 变 了 蛋 白 质 的 空 间 构型 和 生 物 学 功 能 。 点 突 变 的 检 测n 等 位 基 因 特 异 性 寡 核 苷 酸 分 析 法 （ allele-specific oligonucleotide, ASO） ；n 等 位 基 因 特 异 性 扩 增 法 （ allele-specific amplification, ASA） ；n 限 制 性 片 段 长 度 多 态 性 （ restriction fragment le

26、ngth polymorphisim, RFLP） 分 析 ；n DNA测 序 ； n 基 因 芯 片 一 、 已 知 点 突 变 的 检 测 点 突 变 的 检 测 二 、 未 知 点 突 变 的 检 测n 单 链 构 象 多 态 性 （ single-strand conformational polymorphisim, SSCP） 分 析 ；n 杂 合 双 链 分 析 法 （ HA)；n 变 性 梯 度 凝 胶 电 泳 法 （ denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE） ；n 突 变 体 富 集 PCR法 ；n DNA测 序 ； n 基

27、 因 芯 片 二 、 基 因 扩 增 是 细 胞 原 癌 基 因 在 细 胞 基 因 组 内拷 贝 数 的 增 加 及 其 表 达 水 平 的 增 高 。 基 因 扩 增 的 检 测 核 酸 分 子 杂 交n 原 位 杂 交 (in situ hybridization)和 荧 光 原 位 杂 交 (fluorescence in situ hybridization)n DNA杂 交 (Southern blot)n 原 位 PCR (in situ PCR)DNA的 检 测 原 位 杂 交 分 类基 因 探 针 和 靶 核 苷 酸 不 同n DNA-DNA杂 交n DNA-RNA杂 交n

28、RNA-RNA杂 交 探 针 的 标 记 物 是否 能 被 直 接 检 测n 直 接 法n 间 接 法 原位分子杂交技术优点n 特 异 性 强 、 灵 敏 度 高 ， 具 有 组 织 细 胞 化 学 染 色 的 可 见 性n 既 可 用 新 鲜 组 织 ， 又 可 用 石 蜡 包 埋 组 织 作 回 顾 性 研 究n 所 需 样 本 量 少 ， 可 用 活 组 织 细 针 穿 刺 和 细 胞 涂 片n 应 用 范 围 广 ， 可 对 特 定 的 基 因 （ 如 癌 基 因 、 病 毒 基 因 ） DNA、mRNA的 表 达 进 行 定 位 、 定 性 、 定 量 、 组 织 细 胞 分 布 和

29、 杂 交 电镜 的 亚 细 胞 定 位 研 究 基 因 扩 增 的 检 测 核 酸 分 子 杂 交n Northern blot；n RT-PCR；n 基 因 芯 片 等 。 mRNA的 检 测 ： 基 因 扩 增 的 检 测n 免 疫 组 织 化 学 法 （ immunohistochemistry） ；n 联 免 疫 吸 附 实 验 （ enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA） ；n 蛋 白 印 迹 （ Western blot） ；n 流 式 细 胞 仪 测 定 法 （ flow cytometry） ； n 影 像 细 胞 测 试 法 （ im

30、age cytometry） 蛋 白 质 表 达 产 物 的 检 测 ： 三 、 基 因 缺 失 、 易 位 与 重 排 杂 合 型 缺 失 的 检 测nPCR-RFLP法 ;nMI标 记 ； 基 因 缺 失 、 易 位 、 重 排 的 检 测 n 荧 光 原 位 杂 交（ fluorescent in situ hybridization,FISH）n 比 较 基 因 组 杂 交（ comparative genomic hybridization, CGH） 四 、 基 因 甲 基 化 改 变 的 检 测n 限 制 性 酶 切 结 合 电 泳 方 法 ；n UvrABC切 割 试 验 五

31、、 DNA多 态 性 及 其 检 测 DNA多 态 性RFLPMITelomere RFLP nSouthern blot ；nPCR-RFLP检 测 微 卫 星 不 稳 定 性 的 检 测 基 本 方 法 ： 首 先 用 PCR技 术 扩 增 所 需 的 双 核 苷 酸 重 复 序 列 ， 然 后 用 凝 胶 电 泳 分 析 DNA序 列 。 优 点 ： 比 RFLP及 其 他 Southern杂 交 方 法 简 易 快 速 ； 可 对 单 个 细 胞 进 行 检 测 ； 可 对 石 蜡 包 埋 的 组 织 进 行 回 顾 性 研 究 ， 使 检 测 目 的 更 明 确 。 端 粒 酶 活

32、性 的 检 测基 本 方 法TRAP法接 近 闪 烁 分 析 法TRAP-ELISA法原 位 杂 交 法 分 子 诊 断 在 肿 瘤 研 究 中 的 应 用n肿 瘤 的 早 期 诊 断n肿 瘤 的 分 类n肿 瘤 的 个 体 化 和 预 见 性 治 疗n肿 瘤 的 预 后 判 断 及 检 测 肿 瘤 的 早 期 诊 断n胰 腺 癌 ： K-Ras基 因 的 第 12位 编 码 子 突变 检 出 率 达 100%n结 肠 癌 ： PCR-RFLP方 法 检 测 结 肠 癌 患者 粪 便 中 Ras基 因 突 变 率 达 33.3%n高 危 人 群 的 筛 选 和 临 床 检 测 ： 结 肠 癌

33、肿 瘤 易 感 基 因 的 检 测已 明 确 的 肿 瘤 易 感 基 因 及 其 相 关 肿 瘤n Rb1（ 视 网 膜 母 细 胞 瘤 ）n WT1（ 肾 母 细 胞 瘤 ）n P53（ Li-Fraumeni综 合 征 ）n APC（ 家 族 性 腺 瘤 性 息 肉 病 ）n HNPCC（ 遗 传 性 非 息 肉 病 性 结 肠 癌 ）n NF1（ 神 经 纤 维 瘤 病 ）n VHL（ Von Hippel-Lindau综 合 征 ） n PTEN（ Bannayan-Riley-Ruvalcaba综 合 征 和 Cowden综 合 征 ）n BRCA1（ 乳 腺 癌 ） 肿 瘤 的 分

34、 类n 限 制 性 酶 切 片 段 多 态 性 (restriction fragment length polymorphism， RFLP)： 用 于 判 断 淋巴 细 胞 增 生 与 淋 巴 细 胞 性 肿 瘤 及 其 克 隆 起 源n Bcr区 基 因 重 排 ： 可 对 慢 性 粒 细 胞 白 血 病 作 出诊 断 并 可 与 急 性 粒 细 胞 白 血 病 进 行 鉴 别 诊 断n Myc基 因 检 测 ： 通 过 对 N-Myc和 C-Myc的 扩 增和 表 达 检 测 ， 对 鉴 别 神 经 母 细 胞 瘤 和 神 经 上 皮瘤 具 有 应 用 价 值 肿 瘤 的 个 体 化

35、和 预 见 性 治 疗 基 因 的 变 化 和 基 因 间 的 信 号 传 递 与肿 瘤 临 床 治 疗 的 敏 感 性 密 切 关 联 ， 如 能在 分 子 水 平 上 对 肿 瘤 基 因 变 化 提 供 指 标 ，对 肿 瘤 的 个 体 化 和 预 见 性 治 疗 具 有 指 导意 义 。 肿 瘤 的 预 后 判 断n P53基 因 突 变 与 乳 腺 癌 、 肝 癌 、结 肠 癌 等 多 种 肿 瘤 预 后 有 关n Nm23的 状 态 与 肿 瘤 转 移 有 关 肿 瘤 的 预 后 检 测n在 白 血 病 的 临 床 治 疗 缓 解期 的 白 血 病 细 胞 仍 达 1011。n应 用 细 胞 遗 传 学 分 子 诊 断 存 在 的 问 题 1 操 作 复 杂2 结 果 受 多 方 面 因 素 的 影 响 （ 技 术 性 假 阳 性 和 假 阴 性 ）3 费 用 昂 贵4 局 限 于 研 究 领 域 研 究 方 向 探 索 新 途 径 诊 断 技 术 标 准 化 诊 断 指 标 标 准 化 设 置 严 格 的 阴 、 阳 性 对 照 结 果 的 判 定 严 格 遵 守 科 学 的 原 则