应用分支DNA技术及SqRT-PCR方法检测结直肠癌患者腹腔冲洗液中游离癌细胞(完整版)实用资料

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1、应用分支DNA技术及SqRT_PCR方法检测结直肠癌患者腹腔冲洗液中游离癌细胞（完整版）实用资料(可以直接使用，可编辑 完整版实用资料，欢迎下载）【文章编号】1007-9424(202102-0165-05论著应用分支DNA技术及SqR T2PCR方法检测结直肠癌患者腹腔冲洗液中游离癌细胞王浩斌1,王崇树1,张才全2,谢贤雍3【摘要】目的探讨分支DNA(b2DNA及半定量R T2PCR(SqR T2PCR在结直肠癌术中腹腔冲洗液中游离癌细胞检测中的应用。方法分别采用基于b2DNA信号放大的基因表达定量检测技术及SqR T2PCR方法检测48例结直肠癌患者术中腹腔冲洗液中CEA mRNA的表达,

2、同时行腹腔冲洗液细胞学检查(peritoneal lavage cytolo2 gy,PL C,收集12例结直肠良性病变患者的腹腔冲洗液为阴性对照,GA PD H mRNA为内参对照。结果b2DNA技术和SqRT2PCR方法检测游离癌细胞的阳性率(43.8%,31.3%较PL C的检出率(4.2%高(P0.01。结直肠癌患者腹腔冲洗液中CEA mRNA的相对表达量均与肿瘤分化程度、浆膜侵犯程度和Dukes分期有关(P0.05。结论b2DNA技术和SqR T2PCR方法检测游离癌细胞各有优缺点;腹腔内游离癌细胞的存在与结直肠癌临床病理因素有关。【关键词】结直肠肿瘤;肿瘤微转移;分支DNA;半定量

3、反转录2聚合酶链反应;癌胚抗原【中图分类号】R735.34;R73237【文献标识码】ADetecting Free C ancer C ells in Peritoneal C avity of Colorectal C ancer P atients by B ranched2Chain DNA and SqRT2PCR W A N G H ao2bin1,W A N G C hong2shu1,Z HA N G C ai2quan2,X I E X ian2yong3. 1.T he Fi rst Department of General S urgery,T he A f f ili

4、ated Hos pital of N orth S ichuan Medical College,N anchong637000,S ichuan Province, China; 2.T he T hi rd Department of General S urgery,T he Fi rst A f f iliated Hos pital,Chongqing Universit y ofMedical Sciences,Chongqing400016,China; 3.De partment of Pat hology,T he A f f iliated Hos pital of N

5、orth S ichuan Medical College,N anchong637000,S ichuan Province,China【Abstract】ObjectiveTo evaluate branched2chain DNA(b2DNAsignal amplification and semi2quantitative (SqR T2PCR in detection of f ree cancer cells in peritoneal flushing fluid of colorectal cancer patients during surger2 y.MethodsThe

6、CEA mRNA in peritoneal flushing fluid in48cases of colorectal cancer were detected by b2DNA and SqRT2PCR.Peritoneal flushing fluid cytology(PL Cwas conformed simultaneously to detect the f ree cancer cells.The peritoneal flushing fluid of12cases with colorectal benign disease were taken as negative

7、control,G APDH mRNA as internal control.R esultsIn colorectal cancer patients,positive rate of f ree cancer cells by b2DNA and SqR T2PCR(43.8%,31.3%was higher than that by PL C(4.2%.The relative quantitative expressions of CEA mRNA were related to the Dukes staging,depth invasion and differentiation

8、 degree(P0.05.ConclusionBoth b2DNA and SqR T2PCR technologies have ad2 vantages and disadvantages to detect f ree cancer cells in peritoneal flushing fluid,which are related to clinicopatho2 logical factors.【K ey w ords】Colorectal cancer;Tumor micrometastasis;Branched2chain DNA;semi2quantitative rea

9、l time2 polymerase chain reaction;Carcinoembryonic antigen【Found ation item】Application Basic Research Program of Sichuan Science and Technology Agency(No.04J Y029202123【基金项目】四川省科技厅应用基础研究项目(项目编号:04J Y029202123【作者单位】1.川北医学院附属医院普外一科(四川南充637000;2.重庆医科大学附属第一医院普外三科(重庆400016;3.川北医学院附属医院病理科(四川南充637000【作者简介

10、】王浩斌(1983年-,男,山西省太原市人,硕士研究生,住院医师,主要从事胃肠道肿瘤的基础与临床研究,E2mail:haohao2021. studentsina 。结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,临床上约有50%患者根治术后出现肿瘤复发和转移,其中腹腔内种植占20%1,而腹腔内的游离癌细胞(free cancer cells,FCC则是发生腹腔种植转移的先决条件。因此,早期清除脱落于腹腔的FCC是防止腹腔内复发、转移的关键。寻找特异、敏感的检测FCC 的方法具有重要临床意义,本研究选用癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA为肿瘤标志物,采用基于分支DNA(b2DNA

11、信号放大的基因表达定量检测技术和半定量R T2PCR(SqR T2PCR方法间接检测结直肠癌患者腹腔冲洗液中的FCC,并比较2种方法的优缺点。1资料和方法1.1临床资料收集川北医学院附属医院2021年12月至2021年4月期间48例结直肠癌手术患者的腹水或腹腔冲洗液,其中男30例,女18例,年龄32 78岁,平均55岁。病理类型:管状腺癌36例,乳头状腺癌2例,印戒细胞癌2例,黏液腺癌8例。管状腺癌癌细胞分化程度:高分化20例,中分化10例,低分化6例。Dukes分期:A期7例,B期14例, C期20例,D期7例。淋巴转移27例,远处转移7例,肉眼腹膜播散3例。所有患者病灶均位于腹膜返折以上。

12、收集同期12例经手术治疗结直肠良性肿瘤患者腹腔冲洗液作为阴性对照,其中结直肠息肉4例,管状腺瘤3例,绒毛状腺瘤5例。上述患者的诊断均经病理学证实。人结肠癌细胞株SW480(引自美国,由重庆医科大学病理学教研室常规培养为阳性对照,管家基因GA PD H为内参对照2,3。1.2腹水及腹腔冲洗液的收集和保存手术均用电刀开腹,剖腹后注意保护皮肤,用腹壁切口保护器防止皮肤切口的上皮细胞及渗血进入腹腔,进腹后用大块纱布遮盖小肠,有腹水者即从盆腔抽取腹水。若无腹水,则向腹腔内注入温生理盐水200ml冲洗肿瘤所在局部腹腔,并轻微搅动, 24min后抽出,腹水及腹腔冲洗液均需离心、PBS 液洗涤。将离心标本分为

13、3份:第1份做细胞涂片,H E染色后行细胞学检查;第2份加入去RNA 酶缓冲液,-80存放,待作b2DNA基因定量检测;第3份立刻用Trizol法提取RNA,经凝胶电泳检测RNA的完整性后放入-80冰箱保存以备R T2PCR检测。1.3细胞学检查(PLC将送检的冲洗液或腹水进行离心(2800g 5min后,取离心沉淀物涂片,H E染色,镜检,由2位经验丰富的病理学专家阅片,发现癌细胞即为阳性。1.4b2D NA技术检测CEA mRNA表达使用Quanti Gene2.0样本处理试剂盒(美国Panomics公司中的特定裂解液将样本裂解后使总RNA释放出来,步骤按照试剂盒说明进行。将总RNA分别加

14、入96孔板的每个孔中,每孔加10l,捕获板的每个孔中加入50l稀释的CEA和GA PD H mRNA探针试剂(美国Panomics公司设计并合成,将96孔板放入恒温箱中使RNA和探针进行过夜杂交(1620h从而捕获mRNA,温度须控制在(551。捕获的mRNA与b2DNA进行杂交可使信号放大400倍,然后加入化学发光底物,在多功能酶标仪(美国Bio2Tek公司下检测发光信号。根据Quanti Gene2.0试剂说明,首先计算出最低检出量(limit of detection,LOD,LOD=背景控制孔的化学发光信号平均值(AV G RL U back2 ground-3背景控制孔化学发光信号的

15、标准差(3SD background。通过多功能酶标仪检测目的基因测试孔的信号检出值,若高于LOD则为表达阳性,低于LOD则为表达阴性。以GA PD H mRNA的标准化平均相对光单位值(AV G RL U作为校正基数,即目的基因mRNA的相对表达量= (AV G RL U目的基因mRNA-AV G RL U back2 ground/(AV G RL U看家基因-AV G RL U back2 ground。1.5SqRT2PCR检测CEA mRNA表达将提取的总RNA进行逆转录,按照逆转录试剂盒说明(美国Promega公司进行,反应条件: 3010min,5530min,995min,15

16、个循环。提取细胞cDNA进行PCR扩增:引物由上海生工生物工程技术服务设计并合成,CEA 上游引物:52TCT GGAACT TCTCC T GGTC TC2 TCA GCT GG23,下游引物:52T GTA GC T GT T G2 CAAA T GCT T TAA GGAA GAA GC23,扩增产物长度为131bp。内参照GA PD H上游引物:52 CCCA TCACCA TC T TCCA GG23,下游引物52 CA TCACGCCACA GT T TCCC23,扩增产物长度为379bp。扩增条件:9410min,9430s,5630s,7230s,40个循环;72延伸2min,

17、冷却至4。取5l扩增产物在2%琼脂糖凝胶电泳45min,经凝胶成像系统(美国Bio2Rad公司分析DNA条带的密度,通过比较样品间目的基因与内参基因的PCR产物密度比值来评价不同样品的基因表达差异,CEA mRNA相对表达量=CEA mRNA 吸光度值/GA PD H mRNA吸光度值。1.6统计学处理采用SPSS16.0统计学软件,定量表达结果用均数标准差( xs表示,组间比较计量资料采用t 检验,计数资料采用2检验。检验水准=0.05。2结果2.1SqRT2PCR检测结果在紫外线灯下,CEA mRNA扩增呈阳性者可见长度为131bp的条带,无此条带者为阴性。对照组中检出1例CEA mRNA

18、阳性表达,其余均为阴性表达,见图1。2.2细胞学检查、b2D NA技术及SqRT2PCR检测方法的比较结果b2DNA技术及SqR T2PCR方法检测结直肠癌患者腹腔FCC的检出阳性率43.8%(21/48, 31.3%(15/48均高于PLC法4.2%(2/48,差异有统计学意义(P0.05,但应用b2DNA技术多检出6例阳性患者 。图1SqR T2PCR检测CEA mRNA在标本中的表达情况。M: Marker;A:结肠癌细胞株SW480(阳性对照;B、C、D:结直肠癌腹腔冲洗液,其中B、C呈阳性;E、F、G:结直肠良性病变腹腔冲洗液(阴性对照,其中E、F呈阴性;H:空白对照Fig.1The

19、 result s of CEA mRNA expressions detected by SqR T2PCR.M:Marker;A:Colon cancer cell line SW480(positive control;B,C and D:Peritoneal flushing fluid of colorectal cancer, where B,C positive;E,F and G:Peritoneal flushing fluid of benign colorectal disease(negative control,where E and F negative;H: Bl

20、ank control2.3b2D NA技术和SqRT2PCR检测结果与临床病理因素的关系采用b2DNA技术及SqR T2PCR方法定量检测结直肠癌患者腹腔中癌细胞CEA mRNA的相对表达量与腺癌分化程度、浆膜侵犯和Dukes分期有关(P 0.05,见表1。表1b2D NA技术及SqRT2PCR方法检测CEA mRNA表达结果与临床病理因素的关系T able1The relationship bet w een the expressions of CEA mRNA detected by b2D NA and SqRT2PCR and clinicop athological factor

21、s临床病理因素Clinicopat hological factorb2DNA阳性数(例Positive case(case相对值( xsRelative value( xst值t valueP值P valueSqR T2PCR阳性数(例Positive case(case相对值( xsRelative value( xst值t valueP值P value性别(Gender男(Male140.7180.109100.5610.068女(Female70.7780.03750.6000.029年龄(岁 Age(year605140.7260.10690.5800.064腺癌分化程度Differ

22、entiation degreeof adenocarcinoma高分化Well differentiated20.5230.01410.5150.0003.5340.012 3.5240.035中低分化Moderately or poorlydifferentiated60.7570.08940.7100.059浆膜侵犯Serosal invasion有(Yes180.7580.075140.5830.0523.5890.002 2.4360.030无(No30.5610.05410.4530.000Dukes分期Dukes stagingA+B50.5640.05220.4890.0519

23、.8860.000 2.5520.024C+D160.7800.040130.5870.0513讨论结直肠癌术后复发、转移与否直接影响着患者5年生存率,识别游离在腹腔冲洗液中的微量癌细胞,其目的在于判断患者术后复发、转移的危险性,从而有针对性地对患者进行辅助治疗4,提高5年生存率。虽然,通过常规的细胞学检查在腹腔冲洗液中发现癌细胞预示着患者术后较低的生存率5,6,这已成为一个金标准,但由于PL C易受腹腔内间皮细胞的干扰,敏感性低、漏诊率高,一些PL C 检测阴性的患者术后仍出现腹膜播散。本研究中PL C的阳性检出率仅为4.2%(2/48,因此,我们认为在临床工作中不能单独采用此法。本研究中采

24、用b2DNA技术及SqR T2PCR方法均是通过测定患者腹水或腹腔冲洗液中最为公认的消化道恶性肿瘤标志物CEA mRNA的表达来检测腹腔FCC的存在7,8。由于腹腔内存在大量RNA酶,结直肠癌细胞溶解破坏所释放的CEA mRNA立即被降解,因此所检测到的腹腔冲洗液中CEA mRNA可视为来自腹腔内播散的存活癌细胞,这些存活癌细胞具备种植转移的能力。而细胞学仅能反映细胞的形态,无法反映癌细胞的存活状态,更无法反映癌细胞的内部特征9。本研究中采用b2DNA技术和SqR T2PCR方法不仅可灵敏检测腹腔内的微量FCC,其阳性检出率远高于PL C,而且能用相对定量反映不同样本癌细胞数量的差异。SqR

25、T2PCR方法有如下优点10:若选择适当的靶RNA,则敏感性和特异性均较高;能反映标本的整体情况,而细胞学和免疫组化仅能反映标本的局部情况。其缺点11是:SqR T2PCR反应受多个因素影响,如硫酸镁的浓度、引物退火的温度、扩增的循环数等,对技术要求高,且相对定量是在PCR反应的终点检测产物凝胶电泳条带密度,不能正确反映扩增前的实际比值,故该法准确性有限,只能用于粗略比较样品间的基因表达水平。我们分析假阳性产生的可能原因:CEA在白细胞中有非特异性表达12,13,本研究中采用2种方法在阴性对照组中均检出1例CEA mRNA表达阳性,考虑可能为此原因;标本采集时上皮细胞的污染;PCR扩增条件的不

26、当;非特异性细胞低水平的非法转录。假阴性产生的原因可能为RNA易被腹腔内广泛存在的RNA酶降解。因此,SqR T2PCR在检测肿瘤微转移存在一定的局限性。基于b2DNA信号放大的基因表达定量检测技术可克服SqR T2PCR方法的种种不确定因素,无需抽提纯化RNA,无需逆转录,无需PCR扩增,对样本量下限无要求,灵敏度高(每孔有50个拷贝数即可得到阳性结果,只需将样本用特定裂解液裂解后,经探针杂交和信号放大(可放大400倍即可迅速得到精确的定量结果14217。本研究中采用b2DNA技术检测48例结直肠癌患者腹腔冲洗液中CEA mRNA的表达阳性率为43.8%(21/48, SqR T2PCR的表

27、达阳性率为31.3(15/48,比SqR T2PCR多检出6例。但b2DNA技术检测费用较高,有待进一步改进。综上所述,基于b2DNA信号放大的基因定量检测技术和SqR T2PCR方法检测腹腔冲洗液中CEA mRNA的表达来间接检测结直肠癌患者腹腔内的FCC是可行的,且2种方法各有优缺点,但b2 DNA技术较SqR T2PCR操作更为简单,且影响因素少,其相对定量结果更为可靠、精确。但本研究为小样本量研究,今后还需扩大样本量来更进一步证实其研究结果。4参考文献1Akasu T,Sugihara K.Solitary peritoneal metastasis from co2lon carci

28、nomaJ.Surgery,1998;124(5:9382940.2Suzuki T,Higgins P J,Crawford DR.Control selection for RNAquantitationJ.Biotechniques,2000;29(2:3322337.3Barber RD,Harmer DW,Coleman RA,et al.GA PD H as ahousekeeping gene:analysis of GA PD H mRNA expression ina panel of72human tissuesJ.Physiol Genomics,2005;21(3:38

29、92395.4李立.结直肠癌外科应用技术的规范与创新(十五J.中国普外基础与临床杂志,2021;15(3:2152217.5Yamamoto S,Akasu T,Fujita S,et al.Long2term prognos2tic value of conventional peritoneal cytology after curative re2section for colorectal carcinomaJ.Jpn J Clin Oncol,2003;33(1:33237.6Noura S,Ohue M,Seki Y,et al.Long2term prognostic val2u

30、e of conventional peritoneal lavage cytology in patient s un2dergoing curative colorectal cancer resectionJ.Dis ColonRectum,2021;52(7:131221320.7Japink D,Leers MP,Sosef MN,et al.CEA in activatedmacrophages.New diagnostic possibilities for tumor markersin early colorectal cancerJ.Anticancer Res,2021;

31、29(8:324523251.8Prochot sky A,Okolicany R,Sekac J,et al.Diagnosis andmanagement of local and locoregional recurrence of colorectalcarcinomaJ.Bratisl Lek Listy,2021;110(9:5692573.9Katoh H,Yamashita K,Sato T,et al.Prognostic signifi2cance of peritoneal tumour cells identified at surgery for colo2recta

32、l cancerJ.Br J Surg,2021;96(7:7692777. 10肖梅,周宁新,高丽杰,等.半定量检测胆管癌组织中人fxyd6基因的表达J.中国普外基础与临床杂志,2021;15(2:83287.11Freeman WM,Walker S J,Vrana KE.Quantitative R T2PCR:pitfalls and potentialJ.Biotechniques,1999;26(1:1122122.12Nakanishi H,K odera Y,Yamamura Y,et al.Rapid quanti2tative detection of carcinoemb

33、ryonic antigen2expressing freetumor cells in t he peritoneal cavity of gastric2cancer patient swit h real2time R T2PCR on t he lightcyclerJ.Int J Cancer,2000;89(5:4112417.13骆成玉,赵丹宁,李世拥,等.大肠癌患者腹腔微量游离癌细胞的研究J.中华外科杂志,2001;39(6:4332436. 14Canales,RD,L uo Y,Willey J C,et al.Evaluation of DNAmicroarray res

34、ult s wit h quantitative gene expression plat2formsJ.Nat Biotechnol,2006;24(9:111521122. 15Knudsen BS,Allen AN,Mclerran DF,et al.Evalluation ofbranched2chain DNA assay for measurement of RNA in for2malin2foxed tissuresJ.J Mol Diaqn,2021;10(2:1692176.16Berrodin TJ,J elinsky SA,Graciani N,et al.Novel

35、proges2terone receptor modulators wit h gene selective and context2dependent partial agonismJ.Biochem Pharmacol,2021;77(2:2042215.17Lee AC,Dai Z,Chen B,et al.Electrochemical branched2DNA assay for polymerase chain reaction2free detection andquantification of oncogenes in messenger RNAJ.AnalChem,2021

36、;80(24:940229410.(2021207224收稿,2021210220修回(本文编辑孟文建【文章编号】1007-9424(202102-0169-01病例报告恶性腹膜间皮瘤合并十二指肠淤积症1例报道赵红雲1,张霞1,谢微波2,曾令海3【中图分类号】R656.6;R730.262【文献标识码】E患者,男,74岁,因“腹胀半个月、加重伴呕吐4d”入院。入院前半个月无明显诱因出现中上腹胀痛,4d前中上腹胀痛加重伴呕吐,呕吐后腹痛缓解。查体:中上及右下腹有轻压痛,右下腹扪及大小约2cm2cm质硬包块。CA72412.02 U/ml,血及尿淀粉酶、肝功能、CEA、A FP和CA1929均正常

37、,腹部X线平片未见异常;胃肠钡餐示十二指肠水平段压迹,考虑十二指肠淤积症可能;全腹CT检查示少许腹水及小肠粘连改变,肠系膜上动脉与腹主动脉夹角变小致肠系膜上动脉压迫综合征,十二指肠淤积。遂拟行手术解除压迫,术中见量约100ml腹水,壁层腹膜、大网膜、肠系膜及浆膜有较多质硬颗粒状白色结节,挛缩成团;多段小肠间被瘤结节侵犯致狭窄,肠系膜上动脉与腹主动脉的夹角明显变小,病理及免疫组化确诊为恶性间皮瘤(上皮型。讨论致本例漏诊的原因:临床表现不特异。恶性腹膜间皮瘤起病隐匿,常见症状有腹痛、腹胀、腹水、腹部包块,部分患者伴有消瘦、纳差、恶心、呕吐。除腹水外,十二指【作者单位】1.重庆医科大学附属第二医院消

38、化内科(重庆400010;2.重庆医科大学附属第二医院放射科(重庆400010;3.重庆医科大学附属第二医院普外科(重庆400010【作者简介】赵红雲(1984年-,男,四川省安岳县人,本科,住院医师,主要从事腹部超声诊断与治疗,E2mail:zhaohongyunchina yahoo 。肠淤积症亦可出现上述临床表现。影像学征象不特异。本例患者胃肠道造影及腹部CT等影像学征象均提示十二指肠淤积可能,而未进一步追踪其根本原因,此为本例恶性腹膜间皮瘤漏诊的主要因素。经验教训总结:当遇及有腹痛、腹水及腹部包块者,除需鉴别原发性腹腔脏器肿瘤、转移性腹膜癌及结核性腹膜炎外,尚需考虑腹膜间皮瘤可能。血清

39、学证据:该患者CA1929、CEA及A FP均正常,但未查CA125。有报道约25%的恶性腹膜间皮瘤患者CA125升高。因此,男性患者如CA125升高需警惕恶性腹膜间皮瘤可能。影像学证据:腹部超声、胃肠造影、CT检查等影像学表现特异性不强,可行影像多平面重建或薄层重建以提高恶性腹膜间皮瘤的诊断率。其确诊有赖腹水脱落细胞检查、超声引导穿刺活检、腹腔镜及剖腹探查取组织活检。该患者因腹水量少,故未行腹水脱落细胞检查。CT阅片提示十二指肠淤积时忽略了对腹膜改变的观察,术后回顾分析CT片时已提示腹膜及肠系膜广泛增厚和结节样改变,因此为影像学的漏诊。今后如影像学提示十二指肠淤积,应注意可能造成十二指肠淤积

40、的疾病的相互鉴别,包括腹膜间皮瘤。恶性腹膜间皮瘤预后差,治疗后易复发。但早期诊断并予腹腔减瘤术及腹腔内温热灌注化疗可延长恶性腹膜间皮瘤患者的生存时间。因此早期诊治该病对改善预后有重要临床意义。(2021212215收稿,201 1212修回(本文编辑李缨来灾酞本刊特祷中国组织丁程研究与临床康复第誊第期出版。让昨天告诉今天：干细胞多能性研究的学术与技术进展中国组织工程研究与临床康复）杂志社学术部，辽宁省沈阳市关键词：干细胞；移植；骨髓干细胞；胚胎干细胞：文章导读：年，俄罗斯移植学与人工器官科研所专家发现骨髓干细胞更适于治疗皮肤烧伤。俄罗斯移植学与人工器官科研所专家在实验中将只烧伤的老鼠平均分成组

41、，给第一组的烧伤面移植自体骨髓干细胞，给第二组的烧伤面移植异体骨髓干细胞，给第三纽移植老鼠胚胎成纤维细胞。作为对比，第四组烧伤老鼠不作任何移植。个月后，第一组老鼠的烧伤皮肤恢复得最好，第二组稍微差些，第三组的老鼠烧伤皮肤恢复程度只有第一组的五分之一，而不作任何移植的第四组老鼠却基本没有任何恢复。研究人员通过进一步研究认为，骨髓干细胞治疗皮肤烧伤的效果较好是因为骨髓干细胞的分化程度比胚胎细胞的分化程度低，被移植的骨髓干细胞能够更多地产生加速组织再生过程的酶和酞等物质。此外，与胚胎细胞相比，骨髓干细胞能够更快地增殖以达到适合移植的数量。因此俄专家认为，对烧伤老鼠施行的各种皮肤再生移植方法中，移植骨

42、髓千细胞的治疗效果最佳。年，意大利米兰医院的神经学家采用静脉注射干细胞使之到达大脑。意大利米兰医院的神经学家和他的同事想知道成体神经干细胞是否能够迁移到大脑的多个受损部位？为此，他们将这些细胞导入遭受自体免疫疾病一一脑脊髓炎的小鼠中，该病与人类的多发性硬化极为相似。研究人员发现，无论是导入血液中还是导入脊髓液中，干细胞都能找到通往受损部位的路，到达受损部位后，千细胞分化为更为专化的少突细胞，重建髓磷鞘。导入天后，治疗小鼠就能重新行走了。“用这种运送系统不仅可以靶向集中的损伤部位，还可以靶向分散的部位，这一理念非常有用。”威斯康辛大学的神经科学家说。“这就是我所认为的真正有价值的信息。”这一研究

43、成果发表在年月日的自然上。，万方数据学术嚣：于细匏多能槛柜关研究的学本技术进震尼年，北京大学第一医院眼科与北京大学医学部干细胞中心完成首例以骨髓问充质细胞羊膜片移植治疗严重眼表面化学烧伤。北京大学第一医院眼科与北京大学医学部干细胞中心通力合作，为一例岁的严重眼表面化学烧伤的男性患者，进行了国内首例培养骨髓问充质细胞羊膜片移植手术。北京大学第一医院眼科主任晏晓明教授查阅了大量文献，并与北京大学医学部干细胞中心取得联系，双方通过反复研究，决定取患者的骨髓，分离出间充质干细胞，定向分化，于羊膜表面培养一层上皮细胞，然后移植到眼球表面。既解决干细胞的来源问题，又可避免排异反应。术中彻底剥除粘连增生的组

44、织，做穹隆成形，通过移植长满一层细胞的羊膜片进行眼表重建。移植片成活，右眼视力提高到。年，本三菱化学生命科学研究所的科学家首次将动物胚胎干细胞转化为精子细胞。本三菱化学生命科学研究所的科研人员，目前首次将动物胚胎千细胞转化为精子细胞。在实验中，他们将鼠的胚胎干细胞与能产生骨形态发生蛋白的蛋白质细胞放在一起培养，其中骨形态发生蛋白在胚胎正常发育过程中对精子细胞的形成能起到促进作用。结果发现，培养出的胚胎干细胞，在植入其他鼠的睾丸后能够发育成精子。该研究发表在年月美国科学院院刊上。人类胚胎干细胞评述：此项研究有望拓宽胚胎干细胞的应用领域，对研究精子早期发育机制也有帮助。年，麻省理工学院的生物医学科

45、学家诱导胚胎干细胞形成器官。麻省理工学院的生物医学工程师、织，软骨和肝细胞。接下来，研究小组将设计的“组织脚手架”植入免疫系统失灵小鼠的皮肤下，两周后，研究小组发现，血管充满组织，连接到小鼠的脉管系统。组织继续产生人的神经、软骨和肝脏细胞蛋白。其问，“脚手架”自身缓漫地降解。研究小组将有关结果发表在美国科学院院刊（）的网络版匕。称，这是创造人体移植组织研究中一次至为重要的突破。和他们的同事利用生物可降解的聚合体，制作出一个含有微米大小的核孔海绵状三维脚手架”，并添加进不同的生长激素，然后将干细胞“播种”到里边。几天之内，干细胞开始分裂和分化。研究人员在对应添加激素的地方分别检测到神经组：万方数

46、据 万方数据 万方数据 神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状作者:崔志远, 王志杰作者单位:青岛大学医学院附属医院脊柱外科,山东青岛,266003刊名:齐鲁医学杂志英文刊名:MEDICAL JOURNAL OF QILU年,卷(期:2021,26(2参考文献(10条1.李剑锋;闫金玉神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状期刊论文-中国组织工程研究与临床康复 2021(142.REYNOLDS B A;TETZLAFF W WEISS S A muhipotent EGF-responsive striatal embryonic progenitor cell produces neurons

47、and astrocytes 1992(113.MASLOV A Y;BARONET A;PLUNKETT R J Neural stem cell detection,characterization,and age related changes in the subventricular zone of mice外文期刊 2004(074.魏雁;陈刚神经干细胞工程化的研究进展期刊论文-中国组织工程研究与临床康复 2021(065.张在金;董艳;卢亦成大鼠胎脑不同部位神经干细胞比较性培养的研究期刊论文-中华神经外科疾病研究杂志2021(046.CUMMINGS B J;UCHIDA N;T

48、AMAKI S J Human neural stem ceils differentiate and promote locomotor recovery in spinal cord-injured mice 2005(397.唐少锋;汤逊;蔡景霞人胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定研究期刊论文-中国脊柱脊髓杂志 2003(098.吴家华;罗焕敏神经干细胞与神经营养因子期刊论文-中国老年学杂志 2021(159.BARTLETT P F;BROOKER G J;FAUX C H Regulation of neural stem cell differentiation in the fore

49、brain 外文期刊 1998(0510.SETOGUCHI T;NAKASHIMA K;TAKIZAWA T Treatment of spinal cord injury by transplantation of fetal neural precursor cells engineered to express BMP inhibitor外文期刊 2004(1本文读者也读过(10条1.陈良.刘阳.CHEN Liang.LIU Yang骨髓基质干细胞移植对大鼠脊髓损伤区NGF与BDNF表达的影响期刊论文-四川医学2021,32(32.李晋.万虹神经干细胞移植治疗脊髓损伤期刊论文-中国康复

50、理论与实践2004,10(13.曹志勇.刘涵.单君君.朱孟慧.王俊明.陈昊.程言博.樊红彬.董瑞国.耿德勤.Cao Zhi-yong.Liu Han.Shan Jun-jun.Zhu Meng-hui.Wang Jun-ming.Chen Hao.Cheng Yan-bo.Fan Hong-bin.Dong Rui-guo.Geng De-qin自体骨髓间充质源神经干细胞移植应用于中枢神经系统疾病7例期刊论文-中国组织工程研究与临床康复2021,15(14.刘宁.扈佃磊.徐韬.于圣会.盛伟斌.Liu Ning.Hu Dian-lei.Xu Tao.Yu Sheng-hui.Sheng Wei-

51、bin神经干细胞移植治疗脊髓损伤期刊论文-中国组织工程研究与临床康复2021,15(105.丁继固.Ding JG脊髓源神经干细胞转基因治疗脊髓损伤期刊论文-中国组织工程研究与临床康复2007,11(76.陈炜.何丽娜.李昂.梁楠.CHEN Wei.HE Li-na.LI Ang.LIANG Nan嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤运动功能恢复影响的系统评价期刊论文-中国循证医学杂志2021,10(107.李国良.牛庆飞.金家峰.LI Guo-liang.NIU Qing-fei.JIN Jia-feng骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后再修复作用的研究期刊论文-中国医师杂志2021,12(78.徐

52、晓东.田树光.田坤.Xu Xiaoguang.TianShuguang.Tian Kun急性脊髓损伤的药物治疗研究进展期刊论文-现代中西医结合杂志2021,19(239.刘威.张绍昆.闫明.刘理迪.LIU Wei.ZHANG Shao-kun.YAN Ming.LIU Li-di诱导多潜能干细胞治疗脊髓损伤的研究现状与进展期刊论文-中国骨伤2021,24(710.石瑞成.冯士军.王志刚.Shi Rui-cheng.Feng Shi-jun.Wang Zhi-gang高压氧联合神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤期刊论文-中国组织工程研究与临床康复2021,15(19中国普外基础与临床杂志2021年9

53、月第18卷第9期 ChinJBasesClinGeneralSurg,Vol.18,No.9,Sep.2021 931文章编号 1007-9424(2021)09-0931-05移植工程胰腺癌干细胞的研究进展王晓辉,李非*摘要 目的 总结有关胰腺癌干细胞的研究进展并明确今后的研究方向。方法 收集国内、外近年来有关胰腺癌干细胞的文献并进行综述。结果 胰腺癌恶性程度高,早期诊断困难,缺乏有效治疗手段。近年来的研究发现,胰腺癌中存在异质性细胞,这些细胞具有干细胞的性质,该细胞亚群在胰腺癌的发生、增殖、转移和耐药中发挥重要作用,通常利用细胞表面的特异标志物来鉴别胰腺癌干细胞。另外,研究还发现,胰腺癌干

54、细胞内的一些维持自我更新和转移的信号通道表达异常。结论 针对干细胞的治疗是可行的,深入了解胰腺癌干细胞的生物学行为将为胰腺癌的诊断和治疗提供新的策略和手段。关键词 胰腺癌;干细胞;标志物;转移;化疗耐药 中图分类号 R735.9 文献标志码 ARecentProgressonPancreaticCancerStemCells WANGXiao-hui*,LIFei*.*DepartmentofGeneralSurgery,XuanwuHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100053,ChinaCorrespondingAuthor:LIFei,E-

55、mail:feili36ccmu.edu Abstract Objective Toreviewtherecentadvancesinthepancreaticcancerstemcellsfieldandidentifytheresearchtrendinfuture.Methods Currentliteraturesonpancreaticcancerstemcellswerecollectedandreviewed.Results Pancreaticcancerwasahighlylethaldiseaseandwasusuallydiagnosedatalatestage,forw

56、hichtherewerefeweffectivetherapies.E-mergingevidencehadsuggestedthatpancreaticcancercellsproposedaheterogeneousorganization.Asubpopulationofstemcel-llikecellssustainstumorgrowth,propagation,metastasis,andresistancetostandardchemotherapy.Cancerstemcellswereidentifiedbasedontheirexpressionofdifferents

57、etsofcellsurfacemarkersandfunctionalcharacteristics.Someimportantsignalingpathwayswhichmaintainsel-frenewalandmetastasiswereupregulatedinpancreaticcancerstemcells.Conclusions Currentfindingsclearlysuggestthatspecificeliminationofcancerstemcellsispossibleandtherapeuticallyrelevant.Anim-provedundersta

58、ndingofthebiologicalbehaviorofsuchcellsmayleadtothedevelopmentofnoveldiagnosisandtreatmentreg-imensforpancreaticcancer.Keywords Pancreaticcancer;Stemcell;Marker;Metastasis;Chemoresistance1997年,Bonnet等1首次在急性髓系白血病患者骨髓分离中证实肿瘤干细胞(cancerstemcell,CSC)的存在。2003年,A-lHajj等2在实体瘤的研究中发现,人类乳腺癌组织中也存在CSC。随后Singh等3在

59、髓母细胞瘤等中枢神经系统肿瘤中也证实CSC的存在。此后越来越多的研究者进入该研究领域,目前CSC研究已经成为医学领域的研究热点之一。胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤,其发病率在全世界和我国都呈逐年上升趋势。2021年的最新数据显示,胰腺癌已成为美国第10大常见恶性肿瘤,在恶性肿瘤患者的死因中位列第4位4。由于胰腺癌恶性程度高,容易转移,对化疗药物敏感性低,耐药性强,预后极差,因此,探索新的治疗方向具有重要意义。Li等5于2007年首次报道了胰-8腺癌CSC的分离和鉴定,之后又有多篇相关研究6发表。随着胰腺癌CSC实验研究的不断深入,使这一领域的许多问题逐步得到解释。1 胰腺癌CSC的表面标志物L

60、i等5于2007年首次报道了胰腺癌CSC的存在,发现一些胰腺癌细胞具有自我更新、多向分化和致瘤性强的特点,检测到这些细胞表达CD44、CD24和上皮细胞特异性抗原(epithelialspecificantigen,ESA),虽然CD44+CD24+ESA+细胞只占所有癌细胞的0.2%0.8%,但其致瘤能力极强,仅注射100个该细胞,成瘤率就高达50%,而CD44-CD24-ESA-细胞只有注射104个以上才能成瘤,且成瘤率仅为8.3%;同时他们观察了CD44+CD24+ESA+细胞在NOD/SCID小鼠尾部注射后的成瘤情况,连续观察4周,发现注射5000个CD44+CD24+ESA+细胞的成

61、瘤率为2/3,而CD44-CD24-ESA-细胞均未成瘤,由此可见,CD44+CD24+ESA+细胞在皮下移植或原位接种模型中均表现出很强的致瘤性;此外,CD44+CD24+ESA+细胞具有自我更新的能力,分离出来的CSC形成的种植瘤在NOD/SCID小鼠上传两代后,其肿瘤组织中CD44+CD24+ESA+细胞的比来腺癌组织相似;CD44+作者单位 *首都医科大学宣武医院普外科(北京100053) 通讯作者 李非,E-mail:feili36ccmu.edu 作者简介 王晓辉(1978年-),男,山东省青州市人,博士,主治医师,主要从事胰腺癌的基础和临床研究,E-mail:xiaohuiwang78gm932 中国普外基础与临床杂志2021年9月第18卷第9期 ChinJBasesClinGeneralSurg,Vol.18,No.9,Sep.2021ESA+细胞形成的肿瘤的组织学特性与人原发性胰腺癌具有高度的相似性,其胰腺癌细胞分化标志物S100P和Stra