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1、曽药小鼠精子畸形试验指导原则一、槪述(-)定义与目的小鼠持于畸形试验是通过观察精子在药物够响下岀现琦变以评价笛物对生殖细胞的致突变作 用的一种毒理学评价方法.小鼠辂子酹形受基氏控制.具有高度遗传性.许多常染色体及X、Y性染 色体StMEL接或阿接地决定楮子形杰精子的畸形主要是播形态的异常.已知績子的瞄形是决定粘 子形成的基因发生突变的结果.因此形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。小队精子琦 形试絵可检测药物对榊于生成、发育酣形响.冊且对巳知的生追细胞致突变物它商皮敏感性。为了确保小觎榊子畸形试验结果的真实性、可靠性和可追務性，根据新兽药研究的规律.结合 国内兽药毒理学评价的实际情况脇定
2、了本指寻原则。(二)适用范馬本指导原则适用于巷用化孚药D、中爸药、消话剂及词料药物添加剂对哂乳动物推性生樂细輕 的遗传毒性检总“二、试验设计(-)材料与方法1 实验动物SPF级雄性小貼68周龄，体重2535g,数債60只左右2试剂.(1) 致突变阳性对照物可选用环洪醸技4O6Omg/kg d)或甲基磺酸甲fig(MMS) 50mg/ kg-d)或丝裂祥素C (MMC) 1.0-1.5mg/ (kg.d),经口给予所有致突变阳性对照物浸求分析纯以上，含缺不低于98.5%。(2) 其他试刑氯化钠；片析纯：甲專：防折纯*伊分折纯*3 一生遛盐水配制称NCL0.9Cg置烧杯内.加适量裁懾水漕籽.移MO
3、OniL窑応題内.絵匀并用瑟帘水定售.转 穆至试刑瓶内貼标签备用.斗.2怖悟红水港液配制称取巒红2,00g诉疑林内，加适蛊熹馆水涪解，移入UMknL辉農柜内，混匀并用漓饷朮定洋.移 至试剂瓶内薪标签薔用*亍仪器U生咧昼蘆規带滤光片及IdOx樹镜罪I胞计数器（3）拓它实監宝箱用仪罂（二）沽蛍歩骤1 一剂豪为组蛙3平剂童经即If其1/4和1用皿 稠量组；当受试葩物LDso大于50Wm聊書或niL/睫）时. 试验组直剂社设为FOOOmgAg （或EL/kp . 2500mg/kfi （.mlTJig）和ISiOmg/kg （mIAg）廿别 设为中刑ft和低剂系.耐外柱【牛阳性对码组和1个阴性（洛剂）
4、对照组，每令捆运织10只小叭確 泾舍對后離雄至少存活5只动物供采粮制片2受试蓟物落港配制-#從据受试彗牺理化性虧迭応溶剂，轉受试药曲配制贱水溶液或乳化剂，凝悬跟糊伏物碎 必要时肚為増沼刑或助恩刑如吐温-SO*淀粉*灌甲基歼维戟钠悸】*舌刑議组定试药物洛液可采用2倍递抚稀禅法配制-柱庭受试药樹协臥3孙 毡小恆01 心血护讦坨曲:.竺小 7.I：.丘萌匸心【6：金吊口 心纱:汨i I吃一g罚芥丐Mr 制的報度以展各剂蚤纽所帶受试药物溶液体出.再拟定I肚Go刑注组受试药樹初始溶潢需配制的津 积，计畀需暮匆童取更试药詢的罐.用天平剌誓浪琶称取曲:戦受试銅慚盈罐杯内加入适量选定的解刑涪解或科鏗.转入 容
5、量瓶内涅匀并定容，即荻需L/2LD组刑蜃组f高剂1S）所需哝度啊受试虧物请液*分取一卒 供1/2LD卅刑眾组纶欝再向原溶就中加人岡体积的褂刑混匀肩溶液正好是1/斗LD5D剂量组中 刑星纽朋需的浓厦：分取半供1/44搞意组给隣，又加人同体枳的蒂剂，泯匀启晤我正好堤 1用LD和捌量组（低剂I量织所需的餓腐，可供苴捲药用.玄试脸动物釣篁、标记编号和分组试验前AI购遇的小低饲养观察1叵.选择充只犍壌雄性小就进厅个体称車和标记编羽采用完全 陆杭法将孙飙分為5如 霉组10只.4J* 药*払莞试药物要求.采用鳶宵（或注射给药，耐 连绣5止每抚给药先称联小鼠体垂，按小 凰叮7.2皿昨侔樂刑鱼匪取计算冬小和我洽
6、亍的覺试药掬体积，叼注前器吸取爻试蓟物新忙进廿 绘臥生釆样与制片2OJ在第一滾结蓟后盟迁谨行采样、制片r每个剂量艰采拝不小于5只出鼠.揶作竝下“用颈椎脱白法蛀死小就前开腹鉴，少蔑井刑眾冋侧附册.披人務畔二讥生世盐水的平血 中：2） 口眼科剪将附睾誅向曲1刀切（不立辻碎），目吸管吸取其申的生理盐水吹打数次，B 置 STmini堆4层廉箍眾过滤除去组皈碎片，吸取滤液満172曲于載锻片上，挂片，毎只小殿样制片4 张；（4）空吒中推片自然于燥后，用甲醇固定亍lUmin,干爍.（J）舟2跖协红染邑站miiinu用K疑罢洗去杲液.自然除干启境脸&阅片先用低倍捷加璨色逹光片）在片中找到肖景灣淅.将于套脅较少
7、的部垃，再用高倍谨检谨精 于形杰*牺子有头无尾轮廓不淸1、或头部与共弛精子丘薛片篁叠、或明瓏星人为剪碎者均不避 疔计龜.判断坝头、取尾晡形时.翌注意与二条秫于的部分茁督和鉴别，判斷元左堰时要与人为剪 碎烝拆世相鉴别険只小駅涂片哙査H敷正離蒂子200条以上埠个剂邑姐至少檢杏子在 检責计数正常精子时，检査同一好中的硏舉稱于并对它帕班行井类计敎（分元钩、杏凜形、无 定阳、况头、胖头、尾折沓、双足7妾.时形率=畸形秸子数:常科了桂杳数十瞪昭精了徴X100 冬（三）Jfc抿整理与分析1.统计各剂组小鼠的正常精于检连数、琦禺糕子数及各类畸电稿子數记录入下表:组别正常耕于栓 査栽数各类酹形将-产数无钩形无定
8、形胖 头尾折取 头1R.阴性（君剂）.对粥 级*阳性对隙组2,计算各刑量进小鼠的精于酎形率（%）及各类圏形精子百分率（嗥,井计算各剂蚤生小畝帮子晡形率的标准差*梅站果列入下表.计翼公式如下组别戢物遠正常精于检宜敎崎晤袖子数琦形率（坠）差异显吾性初性（奉剂）对腥俎用性对照组xlOO%小象精子畸形率单爽畸母精子数 畸形糟手萨萌册梢于百分率%）组别203各类畸形带子臣分率阴性f辭剂）对照组阳性对照齟晞呢糟子数无钩，毎个剂最组的屮亂精于畴形率分别与阴性1晦祁对韓址的小鼠精子畸形率进行蜒计比药L wueoson 和检验非参散缭舉軼和校验计算各剂就粗粘子骑形率前差异显著性.（四）结果评价皆先無察旺性对黒绡
9、和阴性对睨组削试验结杲.要求阳性对蝮组精乎埼旳率增高应枉质控范 援实验历宜记录）之内.阴性对悪组的琦形躺子率也应在质控范围（一粧为0角州3.斗騎）之内， 并且阳性对照组的咄形精子率与阴性对照组的躅形精子率有显蕎性差异PO（JI）.否则所得结果 不可雉.试验应重蔽忑当试验组加亂的精子畸形率为明性讨照组的2倍戎2倍氐上華螳统计有显著差异.并且有剂 盘反应关系*试验斜杲也館垂旦.可判断试验结卑惰PE性，即受试药品曲猜芋酹形诱变剂.工如果谊验组的给药剂蚩已便动物发生死亡，而糟子骑形仍未见增加则可判定试验结舉関性 五注意琪项h除特别注朋外”试验用水为蒸愴水，试削为分析纯试剂.动物为SPF塞验动物. 九实
10、蠶动物诃养坏境要求达到SPF级3養橙时要注意鉴别人为選成的糟子损恂.特別要注意由于牺F霞禺和交夏所造咸的如爭头* 取头、刚尾及爭尾等畸宠耕子假象丄皓果判宦时.要注逼誹除机坏缺血、变态反应、感染和体溢增高等导致精子畸羽率增高的因 熱 以免造成偃阳性结果。三试望报告为玄正、科学地评价药藏的特叢毎性，对试鉴报皆内容做如下要求:1.试验目的.2,试验时间与地点*玉试验说计看、卿扎、参加肯及电子邮箱*4.受试药辆需注呱兽药客称、生产厂家、规格、生产批号矗用法与用虽.見试验动物的品种与品采*体重、日龄或月龄、健康孤况、检疫情况等. 1B葩总结该药物的试验第果磐价爱试药物刘生殖細腕的致.突变柞用.7,参再文献.氐试验数据：应有详细的试鲨慷始记录.原蜡资料碟存址、联系人、电话* 9一试验氛位（加盖營童】四、阳最小亂正常糊r-及常见畸形稱子粪型模成罔吝娄晞誓秸于白分率曉）香焦形无疋西胖头尾折畳图例说明：1正常精子；2无钩（头顶未见弯形钩九3香蕉形（头部上下粗细;&殊不大.形似香煎人4、5、6无定形:7 胖头（头比正常大约1/21倍.券色较浅九8 尾折叠（仅指伴有头祁琦形者入9 双头：10 双尾
兽药小鼠精子畸形试验指导原则
