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1、Jason WangTechnical Account Manager, Qualicon China 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 1.根据标本的种类，按照公布标准的方法，进行标本的预处理。2.使用EHEC增菌液增菌6小时。3.对增菌液提取核酸，进行PCR检测，包括毒力基因（stx1、stx2）。或可使用DuPont PCR Reagent Kit (D14128299)直接加入增菌液进行荧光定量PCR检测。4.对PCR检测stx1, stx2 基因阳性的标本，进行eae、ehx、aatA
2、、aggR、aap毒力基因和O104和H4的抗原特异性基因检测。同时进行大肠杆菌的分离培养鉴定，对单个菌落进行生化、血清型鉴定。 27 28 1、stx1slt-1-a CAGTTAATGTGGTGGCGAAGG 348bpslt-1-b CACCAGACAATGTAACCGCTG针对Shiga toxin 1 subunit A2、stx2slt-2-a ATCCTATTCCCGGGAGTTTACG589bpslt-2-b GCGTCATCGTATACACAGGAGC针对Shiga toxin 2 subunit A 29 3、eaeAeaeA-a ATTACCATCCACACAGACGGT
3、 397bpeaeA-b ACAGCGTGGTTGGATCAACCT4、ehxAMFS-1F ACGATGTGGTTTATTCTGGA 167bp/369bpMFS-1R CTTCACGTCACCATACATATMFS-1Fb CCAGGAGAAGAAGTTAGAG 30 5、aatA aatA-F: 5- tgaaatgcttagtgagag-3 510bp aatA-R: 5-gatacccagactagcact-36、aggR aggR-F：5-GTATGAAATTAAAACAA ACATCG-3 800bp aggR-R: 5-GTTTATTGGCTTTTAAAATAG TC-3 7、aap aap-F：5-ATGAAAAAAATTAA GTTTGTTATCTT-3 356bp aap-R：5-TTATTTAACCCATTCG GTTAGAGC-3 31 wzy-1 agttcattagatcgaggtt 450bpwzy-2 ctccttgcaaatgtgcaa 32 33 将Forward Primer和Reverse Primer混合后用试剂盒提供的PCR buffer稀释至终浓度0.1-0.5uM，取25ul 取PCR buffer裂解后的增菌液25uL 总反应体系50uL，直接加入带有PCR药片的反应管中。 34
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