医学微生物实验二新

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1、(新)医学微生物学（实验二）主讲人：岳启安 实验内容 一 、 细 菌 的 分 布 二 、 消 毒 与 灭 菌 三 、 细 菌 的 遗 传 变 异 四 、 细 菌 的 生 化 反 应 五 、 球 菌 一 、 细 菌 的 分 布 1.空 气 2.手 指 （ 自 做 ） 3. 齿 垢 涂 片 （ 自 做 ） 4. 泥 土 （ 示 教 ） 1.To examine bacteria in air of laboratory10min 37 24hcover To observe the result 2.To examine bacteria on finger Press as fingerprin

2、tbeforesterilization aftersterilizationA Your sign 3.齿 垢 涂 片NS Step of Gram stain Purple(G +)Red(G - )Smear crystal violet Lugols iodine 95% ethyl alcohol safranin + wash washwash 1min 2min 3 0 seconds wash Blot dry with bibulous paper the oil-immersion objective (fixed) 1min 齿 垢 涂 片 二 、 消 毒 与 灭 菌 1

3、.紫 外 线 杀 菌 试 验 2.药 敏 试 验 抑 菌 圈 抗 生 素 滤 纸 片3.化 学 消 毒 剂 的 杀 菌 试 验 （ 自 做 ） 三、细菌的遗传变异 细 菌 的 变 异 现 象 1.HO变 异 2.L型 变 异 3.耐 药 性 变 异 变 形 杆 菌 迁 徙 生 长 现 象1.HO变 异 形 态 结 构 变 异 青 霉 素 、 溶 菌 酶正 常 形 态 细 菌 L型 变 异 抗 体 或 补 体 (部 分 或 完 全 失 去 胞 壁 )葡 萄 球 菌 葡 萄 球 菌 L型2.L型 变 异 3. 耐 药 性 变 异 四、细菌的生化反应根 据 细 菌 含 有 不 相 同 的 酶 系 统

4、 ， 可 分 解 不同 的 营 养 物 质 ， 用 生 化 方 法 来 鉴 定 细 菌 ,称 细 菌 的 生 化 反 应 1、 细 菌 的 分 解 代 谢 （ 1） 糖 发 酵 试 验 (Fermentation of sugars) 细 菌 分 解 糖 时 ， 则 产 酸 ， 使 指 示 剂变 为 黄 色 ( “ ” )； 有 些 细 菌 在 分解 糖 产 酸 的 同 时 还 产 生 气 体 ， 在 管中 有 气 泡 出 现 ( )； 如 细 菌 不 分解 该 糖 时 ， 指 示 剂 不 变 色 ()。 五 糖 生 化 反 应 ：葡 萄 糖 、 乳 糖 、 麦 芽 糖 、 甘 露 醇 、 蔗

5、 糖（ 指 示 剂 -溴 甲 酚 紫 ）（ 对 应 发 酵 管 颜 色 ： 红 、 黄 、 蓝 、 白 、 黑 ）大 肠 杆 菌 ： 伤 寒 杆 菌 ： 伤 寒 杆 菌 大 肠 杆 菌 （ 2） 吲 哚 试 验 有 些 细 菌 如 大 肠 杆 菌 等 能 分 解 蛋 白 胨水 中 的 色 氨 酸 生 成 吲 哚 （ 靛 基 质 ） ， 与试 剂 中 的 对 二 甲 基 氨 基 苯 甲 醛 相 互 作 用 ，形 成 玫 瑰 红 色 化 合 物 ， 为 吲 哚 试 验 阳 性 。 五、球 菌 1.球 菌 形 态 观 察 2.球 菌 培 养 物 观 察 3.血 浆 凝 固 酶 试 验 4.抗 O试

6、验 Staphylococcus(G ram stain)1.球 菌 形 态 观 察 Streptococcus （ Gram stain） pneumococcus Meningococcus 淋球菌（gonococcus） 金 黄 色 葡 萄 球 菌 菌 落2.球 菌 培 养 物 观 察 乙 型 溶 血 性 链 球 菌 菌 落 3.血浆凝固酶试验 血 浆 凝 固 酶 能 使 含 有 枸 橼 酸 钠 或 肝 素 抗凝 剂 的 人 或 兔 血 浆 发 生 凝 固 的 酶 类 物 质 。 凝 固 酶 有 两 种 ： 一 种 是 分 泌 至 菌 体 外 的蛋 白 质 称 为 游 离 凝 固 酶 ；

7、 另 一 种 结 合 于菌 体 表 面 并 不 释 放 的 凝 固 酶 ， 称 结 合 凝固 酶 或 凝 聚 因 子 。 凝 固 酶 游离 凝 固 酶结合 凝 固 酶 协 同 因子 凝血酶样物质 血 浆 凝 固 （ 试 管 法 ）（纤维蛋白原受体） 血浆纤维蛋白原 + 细 菌 凝 聚（ 玻 片 法 ） （ 1） 试 管 法 取 两 支 灭 菌 小 试 管 ， 每 管 加 入 1： 4稀 释的 兔 血 浆 0.5ml， 用 灭 菌 接 种 环 沾 取 金 黄 色葡 萄 球 菌 培 养 物 ， 在 一 小 试 管 内 壁 研 磨 使成 均 匀 的 混 悬 液 ； 另 一 试 管 用 表 皮 葡 萄

8、 球菌 做 为 对 照 。 将 两 试 管 放 在 37 水 浴 箱 或温 箱 中 2 4h 观 察 结 果 。 观 察 结 果 时 使 试管 倾 斜 ， 凡 血 浆 呈 现 胶 胨 样 凝 集 者 即 为 阳性 ， 仍 呈 液 状 者 为 阴 性 。 沾 菌 的 接 种 环 在 此 处管 内 壁 上 轻 轻 研 磨 （ 2） 玻 片 法 在 载 玻 片 上 各 滴 兔 血 浆 、 盐 水 一 滴 ，取 金 黄 色 葡 萄 球 菌 、 表 皮 葡 萄 球 菌 平板 培 养 物 加 入 其 中 混 匀 ， 立 即 观 察 结果 。 有 明 显 小 凝 块 出 现 为 阳 性 ， 无 此现 象 者

9、 时 为 阴 性 。 此 法 较 简 便 ， 但 不如 试 管 法 锐 敏 、 准 确 。 Procedures:Rabbit plasma NSS.aureus S. epiderm idis After mixing 4.抗 O 试 验 原 理 ： 乙 型 溶 血 性 链 球 菌 产 生 溶 血 毒 素 “ O” （ SLO ） ， 具 有 很 强 的 抗 原 性 ， 可 刺 激 机 体 产 生 抗体 ， 于 感 染 后 2 3周 至 病 愈 后 数 月 到 一 年 可 检 出SLO抗 体 ， 风 湿 热 病 人 血 清 中 SLO抗 体 显 著 升 高 ，一 般 其 效 价 在 1： 4

10、00以 上 。 因 此 ， 测 定 SLO抗 体 含量 ， 可 了 解 近 期 内 有 无 链 球 菌 感 染 的 病 史 ， 作 为 风湿 病 辅 助 诊 断 的 指 标 。 SLO胶 乳 试 剂 测 定 抗 O试 验 （ 反 应 板 法 ） 血 清 中 ASLO的 测 定 可 用 于 链 球 菌 感 染 的诊 断 ， ASLO高 滴 度 的 病 人 血 清 被 适 量 的SLO中 和 后 还 有 多 余 的 ASLO， 这 些 多 余 的抗 体 即 与 SLO胶 乳 试 剂 反 应 ， 出 现 清 晰 、 均匀 的 凝 集 颗 粒 。 SLO胶 乳 试 剂 是 根 据 免 疫 学原 理 将

11、 羟 化 聚 苯 乙 烯 胶 乳 与 SLO共 价 交 联 作为 抗 原 ， 用 于 测 定 受 链 球 菌 感 染 病 人 血 清 中的 ASLO。 2. Soluble streptolysin O， shake up 1 3 minute; 3. Soluble streptolysin O combine with latex beads ， shake up 5 8 minute Negative control Positive control 1. Patient Serum Negative control Positive control Patient Serum ASO test: ASO titer 1: 400 units, help to diagnose rheumatic fever.Uniformity turbidity White granule agglutination + -. 实验报告一 、 球 菌 形 态 绘 图 （ 葡 萄 球 菌 、 链 球 菌 、 脑 膜 炎 双 球 菌 、 肺 炎 双 球 菌 ）二 、 记 录 并 分 析 血 浆 凝 固 酶 试 验 结 果三 、 记 录 并 分 析 抗 “ O”试 验 结 果