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1、实验三 丹皮酚小肠吸收实验【目的要求】1. 掌握大鼠在体肠管回流的基本操作和方法。2. 通过丹皮酚小肠吸收实验，测定丹皮酚在大鼠小肠的吸收速度常数（K）,半衰期（t/2） 以及每小时吸收率。【实验材料】（一）仪器与材料1. 超声清洗器；2. 微量输液器（蠕动泵）；3. 752 型紫外可见分光光度计；4. 恒温水浴锅；5. 万分之一分析天平；6.其他:搪瓷盘;移液管（50 mL, 1 mL各一个）;移液枪（1.0 mLx2）；容量瓶（10 mLx20）； 烧杯（50 mLxl）；离心管（2 mLx12）； 一次性注射器（50 mLxl，2.5 mLxl）；手术器械（大 鼠手术板，手术刀，手术刀片
2、，手术剪，眼科剪，镊子）；棉线；纱布等。（二）试剂1. 20%乌拉坦（200 mg/mL），腹腔注射麻醉剂量1 g/kg（10 mL/kg）；2. Krebs-Ringer磷酸缓冲液：每1000 mL内含7.8 g氯化钠，0.35 g氯化钾，0.37 g氯化 钙，1.37 g碳酸氢钠，0.22 g磷酸二氢钠，0.22 g氯化镁，1.4 g葡萄糖；3. 其他:酚红；生理盐水；蒸馏水。（三）药品及动物药品:丹皮酚原料药；丹皮酚微囊；动物:雄性大鼠 200 250 g， 1 只。【实验原理】根据质量作用定律，反应速度与反应浓度间的比例常数称为速率常数。一级过程的速率 常数单位以1/时间表示，而速度为
3、单位时间内量的变化值，如，X表示体内药物量，以一段 时间内At药物变化量AX求得速度厶X/At为平均速度，准确反映在某一段时间上的瞬时速度采用微积分表示即 dX/dt。 dX 一 KX dt a吸收过程属于一级吸收过程，与体内药物量一次方成正比，其中“”表示体内药物量随 时间增长而减少。dXK dt X aIn X Kt + In A Kt + In Xt 0 时X Xaa0 0.693t1/2 KaKlg x = 2303t+lg X oKa=-2303xsloPedX/dt 为吸收速度；X 为吸收部位药物量；X0为t=0时吸收部位药物量；t1/2 为半衰期；Ka表观一级吸收速率常数。酚红的
4、标准曲线绘制：精密称取酚红20 mg，置100 mL容量瓶中，加Krebs-Ringer磷 酸缓冲液溶解并稀释至刻度，制成200卩g/mL储备液。吸取上述溶液0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5和 3.0 mL置于100 mL的容量瓶中，用0.2 mol/L的NaOH定容至100 mL，即浓度分别为1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0和6.0 yg/mL。以0.2 mol/L NaOH溶液为空白，558 nm测定吸收度，以吸收度A 与酚红浓度C（卩g/mL）进行线性回归。丹皮酚标准曲线的绘制：精密称取丹皮酚10 mg置100 mL容量瓶中，以K-R缓冲液定 容至100 mL
5、,制成100卩g/mL储备液。吸取0.2, 0.4, 0.6, 0.8和1.0 mL的储备液于10 mL容 量瓶中加K-R缓冲液定至刻度，即浓度分别为2.0, 4.0, 6.0, 8.0和10卩g/mL；以K-R缓冲液 为空白，274 nm测定吸收度，以吸收度A与丹皮酚浓度C（卩g/mL）进行线性回归。实验方法】（一）酚红液配制（20 yg/mL）称取酚红 20 mg 后，加入少量蒸馏水混悬，加入少量碳酸氢钠并微热使溶解（必要时滴 加数滴1NNaOH液），得甲液。另将Krebs-Ringer缓冲液的其它成分用蒸馏水溶解，得乙 液。将甲液缓缓加入乙液中，添加适量蒸馏水至1000 mL,即得。（二
6、）供试液配制称取丹皮酚10 mg，加入含酚红20聘/mL的酚红液50 mL, 37 C水浴并超声使溶解。 称取丹皮酚制剂（含丹皮酚10 mg）充分研磨，加入含酚红20 gg/mL的酚红液50 mL, 37 C水浴并超声使溶解。（三）实验步骤1. 大鼠麻醉：取禁食12 h（自由饮水）200 250 g的雄性大鼠，按1 g/kg乌拉坦（20%）溶 液作腹腔注射麻醉（翻正反射消失），并背位固定于手术台板上。2. 小肠两端插管：沿腹部正中线（腹白线）切开腹部（约4 cm）,在距离胃幽门15 cm 和25 cm处各插入细玻璃管并用线扎紧，缝合切口（不缝合，上覆以浸有生理盐水的纱布）。3. 洗涤肠管：用3
7、7 C生理盐水缓缓注入肠管，洗去肠管内容物，充分洗净后送入空气 使洗涤液尽量流尽。4作成回路：吸取供试液50 mL,从空肠上部进入肠管流经空肠后再流入贮液瓶中， 按下图所示作成回路。开动微量输液器记录开始回流时间。5.以5 mL/min流速循环10 min,记为0时，之后改为2.5 mL/min的流速循环并记时。 分别于循环 0，10，20，30，40，50，60，80，100，120 min 取样 2.0 mL 经 0.45 gm 的微孔 滤膜过滤（1.0 mL用于酚红含量测定，1.0 mL用于丹皮酚含量测定），同时补加酚红液（含酚 红 20 gg/mL）2.0 mL。（四）样品定量与测定1
8、. 酚红定量：样品1.0 mL置于10 mL容量瓶中加0.2 mol/L NaOH溶液至刻度，以0.2 mol/L NaOH溶液为空白，558 nm测定吸光度。测出样品的吸光度A,以标准曲线算出各样 品对应的浓度。2. 丹皮酚定量：将1.0 mL样品用紫外分光光度计在波长274 nm处，以Krebs-Ringer 缓冲液为对照品，测出样品的吸收度A,带入标准曲线，计算出样品相应浓度。【实验结果】编号取样时 丹皮酚酚红 循环液现存药循环液吸收药剩余量lg剩余间(min)吸收值浓度吸收值浓度体积量(g)中药量量(g) ( g) 量初浓度0011022033044055066078081009120
9、(1) 通过标准曲线计算丹皮酚浓度；(2) 通过标准曲线计算酚红浓度；(3) 根据“lg剩余量-时间”作曲线图，得出吸收趋势；(4) 根据“lg剩余量-时间”作图，得一直线。从直线斜率求出吸收速度常数(Ka)，半衰期 (tQ 等；(5) 每小时吸收率()=(0时间剩余量-90分钟剩余量)/ 0时间剩余量xl00%； 注：各时间供试液体积计算(酚红)：0 minVo=-(V 初xC 初)/a。15 minVi=(Vo-2) C+2C 酚/q30 minV2=(V1-2) c1+2c 酚/C245 minV3=(V2-2) C2+2C 酚/C3 1. 现存药量=该时间的丹皮酚药浓x该时间循环液体积；2. 各时间循环药量=现存药量一该时丹皮酚药浓x2；3. 小肠吸收量=上个时间循环液药量该时现存药量；4. 剩余药量=上个时间剩余药量该时吸收药量；5. 0 时循环药量=0 时剩余药量。文档可能无法思考全面，请浏览后下载，另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如 !
实验三--丹皮酚小肠吸收实验
