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1、血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推荐方:法测定1. 实验原理使用多克隆抗体抑制CK的CK-M同工酶活性后，按照德国临床化学学会 (DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)推荐的连续监测法检测余下的肌酸激酶活 力。CK-MB由CK-M和CK-B亚单位组成。抗CK-M抗体完全抑制了 CK-MM (肌 酸激酶的主要活性部分)和CK-MB中的CK-M亚单位的活性。再检测CK的活 力为余下的CK-B的活力，相当于一半CK-MB活力。所以将结果乘以2，为CK-MB 的活力。ADP +磷酸肌酸 CK肌酸+ ATP2.ATP + 葡萄糖葡萄糖-6-磷酸+NADP +标本：己糖激酶(HK),ADP +葡萄糖-6-
2、磷酸(G6P-DH)磷酸葡萄糖酸+NADPH+H16 X 64ml 试剂 26 X 16ml )100mmol/L30mmol/L20mmol/L20mmol/L10mmol/L2mmol/L2mmol/L2mmol/L5mmol/L2.1病人准备：无特殊。2.2类型：血清，肝素或EDTA血浆。3.标本存放：稳定性：-20 C保存稳定4周(避光保存)。活性损失：28C 保存24小时或1822 C保存1小时至少损失10%。4. 标本运输：常温条件下保存运输。5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。6. 实验材料6.1试剂 利德曼CK测定试剂盒(试剂6.1.1试剂组成试剂1 ( R1 ) +试剂2 (
3、 R2 )：咪唑缓冲液pH6.7磷酸肌酸葡萄糖N-乙酰半胱氨酸(NAC )乙酸镁EDTA-Na2ADPNADPAMP二腺苷-5-磷酸10 p mol/L6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6P-DH ）N 1500U/L已糖激酶（HK ）N 2500U/L抑制人CK-MM的人抗体N 2000U/L6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28 C,若无污染，可稳定至失 效期。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液 体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L ）为防腐剂。不可入口
4、！避免接 触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校 准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪8. 操作步骤8.1项目基本参数：参见AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见AU680生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控）做为未 知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是 否在
5、控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法：使用 A/min均值乘以计算因子得到CK-MB活力。计算因子 见下表：A A/min X因子=CK活力U/L计算因子（37 C ）： 340nm8254334nm841412. 参考值范围1: 0-24U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室 经验，每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义1,2肌酸激酶主要由存在于肌肉中的同工酶（CK-M ）和存在于脑中的同工酶 （CK-B ）组成。在血清中CK形式为CK-MM，CK-MB，CK-BB和巨酶等的二聚物。 在检测心肌损伤时CK-MB特异性很高。因此，
6、CK-MB常用于心肌梗死的诊断 和监视。14. 操作性能14.1 线性范围 1000U/L。14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU680批内精密 度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS的规则。批内精密度n=20x(U/L)s(U/L)CV(%)批间精密度n=20x(U/L)s(U/L)CV(%)样品130.70.431.40样品131.50.270.85样品282.60.500.61样品293.30.490.53样品31941.000.52样品31871.060.5714.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x
7、),同时对75个 样品进行CK-MB活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下： y=0.97x+3.78( U/L )； r=0.998。14.4灵敏度：本试剂的检测限为2U/L。14.5病人结果可报告范围：2-1000U/L。15. 超出范围结果处理：本法对CK-Mb活力的线性上限为1000U/L，当测定 值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液稀释，重新测定。16. 病危报警值的处理：无。17. 方法局限性17.1本法对CK-Mb活力的线性上限为1000U/L，当测定值超过上限时，应将 样品用9g/L氯化钠溶液稀释，重新测定。17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度 1704 口
8、mol/L，胆红素浓度 684 口 mol/L，血红蛋白 2.00g/L，甘油三酯浓度22.6mmol/L 时没有观察到 干扰。18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19. 参考文献1. Stein W. Creatine kinase (total activity), creatine kinaseisoenzymes and variants. In: Thomas L ed. Clinical laboratory diagnostics. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.71-80.2. Moss
9、 DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In: Burtis CA, AshwoodER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721.3. Wurzburg U, Hennrich N, Orth HD, Lang H. Quantitative determination of creatine kinase isoenzyme catalytic concentration i
10、n serum using immunological methods. J Clin Chem Clin Biochem 1977;15:131-7.4. Recommendations of the German Society for Clinical Chemistry. Standardization of methods for the estimation of enzyme activities in biological fluids: Standard method for the determination of creatine kinase activity. J Clin Chem Clin Biochem 1977;15:255-60.20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处 置管理规定执行。
血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推荐方法测定
