促进消化功能评价方法及修订说明

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1、附件 9：促进消化功能评价方法（征求意见稿）保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定Items, Principles and Result Assessment1 试验项目动物实验1.1.1 体重、体重增重、摄食量和食物利用率1.1.2 小肠运动实验1.1.3 消化酶测定人体试食试验1. 2.1 临床症状观察1. 2.2 胃/肠运动实验2 试验原则动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目。在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。3 结果判定动物实验：动物体重、体重增重、摄食量、食物利用率，小肠运动实验和消化 酶测定三方面中任二方面实验结果阳性，可判定该受试样品有助于促

2、进消化功 能动物实验结果阳性。人体试食试验：临床症状积分结果和胃/肠运动实验结果阳性，可判定该受试样 品有助于促进消化功能人体试食试验结果阳性。 动物实验和人体试食试验均为阳性结果，可判断受试样品具有有助于促进消化 功能的作用。促进消化功能检验方法Method for the Assessment of FacilitatingDigestion Function1 动物实验实验原理 胃肠道是营养物质的摄取、消化与吸收的器官，对食物的消化作用主要是 依靠其运动、消化酶的分泌来完成的。如果某一保健食品能对这一环节或几环 节有调节作用，那它就有可能有促进消化功能的作用。实验项目 促进消化功能动物实

3、验包括大鼠体重、体重增重、摄食量和食物利用率实 验；小肠运动实验；消化酶的测定等三部分。实验动物根据实验项目可选用单一性别成年小鼠或大鼠。小鼠18g22g,每组10只 15只，大鼠120g150g，每组8只12只。剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的 10倍（小鼠）或5 倍（大鼠）为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组和模 型对照组。受试样品给予时间30d （小肠运动实验受试样品给予时间7d15d）, 必要时可延长至 45d。实验内容1.5.1 体重、体重增重、摄食量和食物利用率 选用同一性别的大鼠。实验开始时动物体重的差异应不超过平均体

4、重的10。分不同剂量实验组和阴性对照组，经口给予受试样品，每周测 2 次体重 和食物摄入量。实验结束时计算体重、体重增重、摄食量和食物利用率。1.5.2 小肠运动实验 选用同一性别的小鼠，分不同剂量实验组、空白对照组和模型对照组，模型对照组用复方地芬诺酯或洛哌丁胺造模。可用墨汁或炭末加阿拉伯树胶作为 指示剂。经口给予受试样品。实验结束前禁食不禁水20h，于测定当天各实验 组和空白及模型对照组再给予一次受试样品或蒸馏水， 30min 后各实验组和模 型对照组给予复方地芬诺酯 5mg/kgbw 6mg/kgbw 或洛哌丁胺 5mg/kgbw 6mg/kgbw（依据复方地芬诺酯或洛哌丁胺的实用剂量取

5、用，用研钵研碎呈粉 末后按实验所需浓度配制，注意要待溶质完全溶解、充分摇匀后使用。 ），空 白对照组给予蒸馏水,30min后各组再给予指示剂（精确称取阿拉伯树胶100g， 加水800ml,煮沸至溶液透明，称取活性碳粉100g加至上述溶液中煮沸三次, 待溶液凉后定容到1000ml，于冰箱中4匕保存，用前摇匀），25min后断颈处 死动物,计算墨汁推进率。按下式计算墨汁推进率：墨汁推进率（） =墨汁推进长度（cm） /小肠总长度（cm） X100%。1.5.3 消化酶的测定 选用同一性别的大鼠。分不同剂量实验组和阴性对照组，实验开始时动物 体重的差异应不超过平均体重的 10。经口给予受试样品。实验

6、结束前各组动 物禁食不禁水24h，釆用乙醚麻醉大鼠幽门结扎法收集一定时间内排出的胃液， 测定单位时间内胃液量。取胃液1mL放入50mL的三角烧瓶中，加入L盐酸溶液 15mL摇匀，放入新鲜制作的蛋白管两根。塞好瓶口，在37C恒温箱中孵育24h， 取出蛋白管，用尺测量蛋白管两端透明部分的长度（mm），以四端之值求其平 均值。计算胃蛋白酶活性和胃蛋白酶排出量。胃蛋白酶活性单位（u/mL）=四端蛋白管透明部分长度均值2X16 胃蛋白酶排出量（u/h）=胃蛋白酶活性X每h胃液量数据处理和结果判定 计量资料可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值，结论：各组均数间差异无

7、显着性；F值M PW,用 多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不 齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据 进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统 计。食物利用率和墨汁推进率资料需进行数据转换，x=Sin-i訂，式中P为食 物利用率和墨汁推进率，用小数表示，然后再进行方差分析。1.6.1 体重、体重增重、摄食量和食物利用率实验组与阴性对照组比较，体重、体重增重、摄食量三项指标中任一指标 增加，经统计处理差异有显着性，且食物利用率与阴性对照组比较不明显降低， 可判定该实验结果阳性。1.6.2 小肠运动实验 在

8、模型成立的前提下，实验组与模型对照组比较，墨汁推进率增加，经统计处理差异有显着性，可判定该实验结果阳性。1.6.3 消化酶的测定 实验组与阴性对照组比较，胃液量、胃蛋白酶活性，胃蛋白酶排出量三项指标中任一指标增加，经统计处理差异有显着性，可判定该实验结果阳性。结果判定 动物体重、体重增重、摄食量、食物利用率，小肠运动实验和消化酶测定三方 面中任二方面实验结果阳性，可判定该受试样品有助于促进消化功能动物实验结果阳性。2. 人体试食试验受试者纳入标准 选择功能性消化不良，伴有长期胃肠不适，主诉食欲不振，早饱、气多，胃 肠胀满等18 至65岁的自愿受试者。受试者排除标准：2.2.1 急性腹泻者。2.

9、2.2 严重器质性病变引起的消化不良者。2.2.3 体质虚弱无法接受试验者。2.2.4 合并有心血管、肝、肾和造血系统等严重全身性疾病患者。2.2.5 短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。2.2.6 未按要求服用受试样品，无法判断试食结果者。试验设计及分组要求 采用自身和组间两种对照设计。按受试者的消化症状轻重随机分为试食组 和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、病程等，进行均衡 性检验，以保证组间的可比性。每组受试者有效例数不少于 50 例。受试样品的剂量和使用方法 试食组按推荐服用方法、服用量服用受试产品，对照组用安慰剂或空白对 照，也可用具有同样作用的阳性

10、物。受试样品给予时间30d,必要时可延长至 45d。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。观察指标2.5.1 安全性指标2.5.1.1 一般状况 包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等2.5.1.2 血、尿便常规检查2.5.1.3 肝、肾功能检查2514胸透、心电图、腹部B超检查（在试验开始前检查一次）2.5.2 功效性指标：2521 临床症状观察：准确记录受试者试验前后的临床症状，按下表给予量化 评分，比较试验前后症状积分的变化。2522 胃肠运动试验：所有受试者在试验前、试验结束时均进行胃肠运动 检查，推荐用钡条透视法（在进食的条件下检查）。数据处理和结果判定 试验数据为计量资料，可用 t

11、 检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对 t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分 布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数轻（1 分）中 （2 分）重 （ 3 分）食欲食欲较食欲差食欲很腹痛差差 频繁发持续时经常发间短，作，引作，引不需服发两胁发两胁腹胀-药不适疼痛腹胀有腹胀较1腹胀频时发作频繁， 在较长 时间内 不缓解繁暧气间有发饮食不较频繁泛酸作，偶适即泛发作，据进行t检验;若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t检验或秩和检验;但变异系数太大（如 CV50表）的资临料应床用秩症和检状验。积分2.6.1结果烧心有暧 气、泛 酸

12、、烧 心酸、烧 心引起 两胁不 适泛酸、 烧心可 有两胁 疼痛失眠 疲乏偶有发 作饮食不 适即发 作较频繁 发作食前 自身 食后 空白临床症状 判定2611试 后试食组 比较及试 试食组与 对照组组间比较， 临床症状积分明显减少，经统计处理差异有显着性，可判定该指标阳 性。（适用于选用空白对照组）2612 试食前后试食组自身比较临床症状积分明显减少，经统计处理差异有显 着性，且试食后试食组与阳性对照组组间比较，临床症状积分无明显增加，可 判定该指标阳性。（适用于选用阳性对照组）262 胃肠运动试验结果判定试食前后试食组自身比较及试食后试食组与对照组组间比较，胃肠运动试验指标明显改善，且钡条排出

13、率大于等于 30%为有效，经统计处理差异有显 着性，可判断该指标阳性。263 人体试食试验结果判定临床症状积分结果和胃/肠运动实验结果阳性，可判定该受试样品有助于促进消 化功能人体试食试验结果阳性。人体试食原始记录格式、动物试验原始记录格式有助于促进消化功能保健食品人体试食观察表产品名称 编号姓名 性别 年龄 职业 民族住址或电话既往史家族史胃镜检查结果：诱因： 情志不畅 饮食不节 劳累 受寒吸烟史： 年支/日饮酒史： 年 两/日发病时间 病程年工作性质: 脑力轻体力重体力症状变化分；无症状0分 体格检查项目试食 前试食 后项目试食 前试食 后发育营养状况脊柱四肢项目结果项目结果项目结果EKG

14、B超胸透化验检查项目试食 前试食后项目试食前试食后HGB g/LCREumol/LRBC*1012/LBUN mmol /LWBC*109/LTC mmol/LALT u/LTG mmol/LAST u/LTP G/LGLUmmol/LALB G/L胃动力检查项目试食前试食后胃肠运动试 验钡条试验报告：试食前诊 断： 有效 无效试食后疗效判断不良反应观 察 者：年 月 日有助于促进消化功能保健食品动物试验原始记录格式1剂量设计：推荐量/人日( /kgBW)样品前处理及配制：墨汁配制：准确称取阿拉伯树胶 100g， 加去离子水800ml,煮沸至溶液透明，称取 活性炭50g加入上述溶液混匀，煮沸3

15、次, 冷却至室温加去离子水定容至1000ml o于 4C冰箱中存放，用前摇匀。ml 复方地芬诺酯悬液配制： 取复方地芬诺片 20 片片)，用乳钵 研磨后，加去离子水至100ml,临用前配 制。1.3 L 盐酸：取 12N 浓盐酸加去离子水至 300mlo2 操作步骤:小肠运动实验：动物检疫年 月 日-年 月 未见异常，可用于试 验于年 月 日选健康小鼠只，雌性，随机分为5组，每10、组 。分别按推荐日摄入量（BW）即 、倍即、I=Jl=l/kgBW为三个剂量组。以为溶剂，按 ml/10gBW经口灌胃。阴性对 照组按ml/10gBW经口灌胃给予溶剂。 模型对照组按ml/10gBW经口灌胃给予溶剂

16、。各组每天灌胃一次，连续 天。于 月日，隔夜禁食16h,不限水可日进行检测小肠运动实验。小 肠 运 动 实 验 以 复 方 地 芬 诺 酯 （5mg/kgBW）按 10mL/kgBW 对剂量组及 模型对照组动物经口灌胃。阴性对照组给 予等量去离子水经口灌胃。 30min 后，各 剂量组动物按 10mL/kgBW 经口给予以含 不同剂量受试物的墨汁，对照组动物给予 墨汁，按 10mL/kgBW 经口灌胃。 25min 后处死，剖腹测量小肠全长及墨汁前沿与 幽门的距离，按下式计算墨汁推进率。墨汁推进率=墨汁推总长度為）x 100%测定： 体重、体重增长、摄食量、食物利用率： 动物检疫 年 月日-年

17、月 日，未见异常，可用于试验。日选健康雄性大鼠只，按体重随机分为_组,每组只。动物单笼饲养。分别按推荐日摄入量(/kgBW) 、5、倍，即/kgBW为三个剂量组。以为溶剂,按 ml/100gBW经口灌胃。阴性对照 组按ml/100gBW经口灌胃给予溶剂。各组每天灌胃一次，连续do每w称体重次,记录进食量。水。日，隔夜禁食24h,不限日各组动物测定胃液量和4消化酶的测定： 受试动物逐只用戊巴比妥钠(50mg/kgBW)麻醉，固定于解剖台，无菌 条件下，于腹腔做一小切口，小心找到胃 幽门结扎，常规缝合。动物继续禁食，不 禁水。 h 后，打开腹腔，结扎喷门，取III出全胃f试管取出全部胃液，计算单位

18、 时间内胃液分泌量，取胃液1 ml放入带盖 平皿中，加入L盐酸溶液15ml，摇匀，放 入新鲜制作蛋白管2 支,封盖，置37C温 箱孵育24h，取出蛋白管，测量透明部分 长度(mm)，求四端均值。测定胃蛋白酶活 性。 蛋白管制作方法采用麦特(Mett)的毛细管法，将内径 1-2mm 粗细均匀的毛细血管截成 10cm ,洗 净烤干。取适量蛋清充分打匀后，用纱布过滤，将上述毛细血管利用虹吸作用，灌满蛋 清(管内应无气泡混入)。放置于85C热蒸汽 使蛋白凝固。待冷却后，取出石蜡将蛋白管 两端封固，贮冰箱中备用。I=Jl=l单位时间胃液量计算：单位时间胃液量(ml/h)=胃液总量/h消化酶计算：胃蛋白酶

19、活性单位(/ml)=四端蛋白 管透明带长度均值2*16胃蛋白酶排出量(/h)=胃蛋白酶活性 *单位时间胃液量统计：数据采用SPSS_ for windows软件进行方差分析。sin小肠运动实验测定数据经转换，并经方差齐性检验再进行方差分析。 若变量转换后仍未达到正态或方差齐的 目的，改用秩和检验进行统计。食物利用率及胃蛋白酶测定试验动物一般 情况原始记录日期丨温度丨湿度丨中毒体征、死亡情况III（以下空白）检测者： 复核者：年 月 日 年 月食物利用率胃蛋白酶以下空白）年月检测者： 复核者 年月日日胃液和胃蛋白酶含量测定记录编号对照组低剂量组中剂量组高剂量组h 胃 液 (m1)蛋白消 化(mm

20、)胃 液 ( m l)蛋白消 化(mm)F 胃 液( ml)蛋白消 化(mm)F 胃 液( ml)蛋白消 化(mm)第i端第2沖 端第3沖 端第4AtU 端第 i 沖端第2沖 端第3沖 端第4沖 端第 i 沖端第2端第3沖 端第4沖 端第 i 沖端第2端第3沖 端第4沖 端12345678910以下空白)年月检测者： 复核者 年月日日墨汁推进率记录单位：cm编号 阴性对照组型对照组植物油组 低剂量组 中剂量组 高剂量组 模墨汁推进 小肠总长小肠总长墨汁推进 小肠总长 墨汁推进 小肠总长 墨汁推进 小肠总长 墨汁推进 小肠总长 墨汁推进12345678910（以下空白）检测者：复核者：年月日年月

21、体重增长记录单位：g编号 第三周初始重第一周第二周12345678910（以下空白）检测者：年月日日复核者：年月促进消化功能评价方法修订说明一、承担单位北京市疾病预防控制中心为本项目的牵头单位。本单位是国家标准“食品安 全性毒理学评价程序和方法”修订版、化妆品卫生规范-2007 年版等多项国家标 准和技术规范的起草单位之一，是保健食品功能检验单位，在保健食品功能学 方法应用、国家标准、规范的起草和方法的验证方面积累了较丰富的经验。因 此在保健食品功能检验方法的制定中有很好的基础和经验。二、主要工作过程本项目于 2009 年 11 月启动。由北京市疾病预防控制中心卫生毒理所牵头 成立项目协作组，

22、中国中医科学院西苑医院、卫生部北京医院和天津市疾病预 防控制中心三家为本项目的协作单位。2010 年1 月到3月进行了广泛的意见征 询及文献调研工作，于2010 年 3月召开了“关于促消化人体试食修订工作方案 研讨”课题协作组第一次工作会议，对“有助于促消化人体试食检验方法修订” 原则和具体指标作了充分的讨论，制定了工作计划和修订方案，协作单位进行 了明确分工，形成了“有助于促消化功能检验方法”人体试食试验方案初稿。 会后又分别征求了相关专家意见，对初稿再次进行了修改。2010年5 月召开了 第二次研讨会，确定了试食样品，细化试验方案，对试食人群的筛选、提高试 食人群依从性等具体质量控制方案进

23、行了讨论，形成了“有助于促消化功能检 验方法”人体试食试验方案和统一的原始记录表格。中国中医科学院西苑医院、 卫生部北京医院和天津市疾病预防控制中心三家协作单位按照统一要求于 2010 年5月2011年6月进行“有助于促消化功能检验方法”人体试食试验方法验 证，并进行数据统计，最终形成了有助于促消化功能检验方法（征求意见稿）。三、编制原则1合法性原则：修订工作符合国家相关法律法规并遵循相关管理部门的政 策要求。2. 科学性原则：修订工作遵循科学性的原则，广泛征求相关领域专家的意见并进行文献调研，各项技术指标应具有科学依据并经科学验证。3. 先进性原则：注意国内管理部门发布的新管理措施，兼顾了技

24、术发展的 前瞻性。4. 实用性原则：从保护公众身体健康的角度出发，充分考虑国情，兼顾我 国保健食品功能检测机构的水平，对内容进行客观量化和具体明确化，尽量提 高可操作性。5协调性原则：尽可能与本规范的其他部分一致，注意合理性与有效性、 通俗性和规范性之间的关系。四、确定相关技术内容及新旧规范的对比本部分的主要内容涉及有助于促消化功能检验人体试食试验的基本原则、 方法和要求，适用于检测保健食品的有助于促消化功能检验。新规范的本部分内容包括受试者纳入标准、受试者排除标准、试验设计及 分组要求、受试物的剂量和使用方法、观察指标、功效判定标准、数据处理和 统计分析、结果判定。与原检验方法比较，在受试者

25、纳入标准、受试者排除标 准、观察指标及结果判定四方面进行了修改。对试食试验原始记录及报告所需 要的基本信息也作了要求。与原检验方法相比，试验内容更详尽，更具有可操作性，语言编写及描述更科学。具体修改部分见下表。亠 现方法号序 号内容名称“促进消 化功能”动物Z5每组现方法内容nr号有助于促 进消化功 能实小动物鼠 每组2S5只理由更科 学更科 学2样间时受时殆 昌Mi时一墨 制孚给4实曲華畐書雾SHOR 制薯間間545更科学，与便功 能”一 致431.5 .215.31.5.2钟小时、分钟小肠运动实15 .215.315.2min原方法：叱-动选小肠运实验与“通便 功能”做一更 学 更 学 与

26、通 便功 能”一 致，更一口 m以|=直匡用蜃OSIESF逝禁及组颐瓯皿嚣士一 ;wl:xc 屋可 ：c、/ 丿-IJ* 7JWJJ/O方W实验食小给ohit推进长度 （cm ）墨汁推进率=X100%小肠总长度（cm）丁2人体试食试|活1 于冰箱, 断物处后 算墨汁推 墨汁推进 率（） = 墨汁推进 长度（cm） /小肠总 长度（cm）X100%o新方删除本段根据不同 受试样品适 应人群的区 别，促进消化 功能人体试 食试验建立 两套试食试 验方案，即针 对适应人群 主要为儿童 的儿童方案 和适应人群 主要为成人 的成人方案。儿童方案取消2.2受试者纳入受试者纳保留 成人 方案保 儿童、 青少

27、 年等 脆弱 人群保标准入标准-儿童T选择功能增加年青少性消化不良，龄范围。年等伴有长期胃改为“选脆弱肠不适,主诉择功能性人群食欲不振，早消化不良，更具饱、气多，胃伴有长期体肠胀满，呕胃肠不适，吐，不明原因主诉食欲慢性腹泻或不振，早大便秘结等饱、气多，自愿受试者。胃肠胀满， 等18至65 岁的自愿 受试者。”2.2表临床症表临床症更科0.6状积分状积分学“腹痛”判“腹痛”判定标准定标准改中（2分）：为：疼痛时间较中（2长，每日超分）：经常2.2.64h,尚能忍受表临床症 状积分第三行症 状名称暧 气”判断标 准： 分）： 作； 分）：轻（1 间有发中（2 经常发作，引起两胁 不适；重（3 分）

28、：频繁发 作，引及两胁 疼痛第四行症 状名称“泛 酸”判断标 准：轻（1 分）：偶有吐 酸；中（2发作，引发 两胁不适表临床 症状积分 合并后 症状名称 改为“暧 气、泛酸、 烧心”合并 后判定标 准改为：轻（1 分）：间有 发作，偶有 泛酸、烧心中（2 分）：饮食 不适即泛 酸、烧心引 起两胁不 适2分）：饮食不 适即吐酸;重（3分）：频 繁吐酸_重_（3 分）较频 繁发作，泛 酸、烧心引 及两胁疼 痛.6表临床症 状积分“腹胀”的 判断标准分）：腹胀 有时发作中（2 分）：腹胀 较频繁，在 较长时间 内不缓解重 （3 分）：较频 繁发作，泛 酸、烧心可 有两胁疼 痛13.6表临床症 状积分

29、删除该症状更科学罰，滝M* 准社跖隔 述歯(一 )“粛血 S号(2 )“器 专卸溺步)” i 鵜峯45.6.1试食前后试 食组自身比 较及试食后 试食组与对 照组组间比 较，临床症 状积分明显 减少，经统计 处理差异有 显著性,可判 定该指标阳 性。状2612试 食前后试 食组自身 比较临床 症状积分 明显减少， 经统计处 理差异有 显著性，且 试食后试 食组与阳操作结果判定 针对改善儿 童消化功能 的，食欲、进 食量、偏食改 善结果阳性, 体重和血红 蛋白二项指 标中一项指 标结果阳性, 可判定该受 试样品具有2.6.3性对照组 组间比较, 临床症状 积分无明 显增加,可 判定该指 标阳性。（适用于 选用阳性 对照组）人体试食 试验结果判定症定。儿童、 青少 年等 脆弱 人群； 更合 理促进消化功 能。针对改善成 人消化功能 的，临床症状 明显改善，胃 /肠运动实验 结果阳性，可 判定该受试 样品具有促 进消化功能 的作用。