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1、细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibu 可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持 分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌 技术操 作。1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。3L 70%乙醇（用无菌蒸馄水配制）5L无菌蒸8留水5L无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入 3L 70%乙醇。盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充 分洗涤。 安好鞘液筒。3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。4、用 70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。5、 在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。6、放上一支
2、装有 70 %乙醇的进样管。7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作） 。9、从Acquire menu选择SortSetup。在Sort Gate菜单中选择步骤7设定的分选门。按液流控制 键 RUN 。10、在 Setup 方框中打叉，点击 Acquisition Control 菜单中 Acquire。11、 跑乙醇直至 2 支收集管注满（每管注满需要9min ），点击 Pause, Abort。12、再重复上述步骤 2次，共需要 1h。13、 断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL无菌蒸馄水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复 操作 直至洗净桶内壁残余乙醇。14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馄水，盖
3、紧盖子。安好鞘液筒。15、在收集管接口处安装 2支新的收集管。16、放上一支装有无菌蒸馄水的进样管。17、点击 Acquisition Control 菜单中 Acquire018、 跑无菌蒸8留水直至2支收集管注满（每管注满需要 9min），点击PausA Abort。19、再重复上述步骤 2次，共需要 1h。20、 断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L无菌PBS盖紧盖子。安好鞘液筒。21、在收集管接口处安装 2支新的收集管。22、放上一支装有无菌 PBS 的进样管。23、点击 Acquisition Control 菜单中 Acquire024、第一支收集管（最左）中收集 15 mL PBS 后
4、取下，使 PBS 由左至右流入下一收集管。 重复操作至 2个管都收集了 15 mL PBS 为止。点击 Pause, Abort。25、在收集管接口处安装 2支新的收集管。若要分选动物细胞，则应用无菌技术，用无 菌 PBS4 %BS础冲液过夜包被50mL锥型管，将包被好的锥型管安置于收集接口。26、按下述分选步骤分选样本二、分选细胞1、分选前应先做预实验，优化流式细胞仪的测定条件，建立分选门，具体操作步骤见 Cellquest 操作步骤说明。根据目标细胞的含量，调整流速和样品浓度，使目标细胞 通过样品室的浓 度为 100-300个/秒，最好在 200左右。2、进入CellQuest,从Aqui
5、re菜单连机。3、打开CellQuest中存储的获取窗口，打开优化后存储的仪器设置条件。4、进样针处放上样本管。5、可以先收集一个数据资料，将此数据与用分选后的样本收集的数据比较，以确定分 选样本 的纯度。6、从 Acquire menu 选择 Sort Setup。7、 依据样本中目的细胞的百分比及实验目的决定分选模式：在Sort Gate中选择分选用 的 门，如选择No Gate （所有细胞）将只进行获取不分选；在Sort Count-中选择0进行连续分 选；在 Sort Mode 中选择 Single Cell Recovery、Exclusion 的某种模式； 在 Aborted Ce
6、ll 中选 择不显示排除细胞数。点 O K。8、点击液流控制键 RUN。9、点击获取控制窗口 Aquire。分选结束时点击Pause, Abort。10、取下样本管，换上1mL蒸8留水。点击获取控制窗口Standby。11、取下收集锥型管。离心浓缩（300gx5min），用培养液重悬，按实验所需条件 进行培养。三、上样后的清洗分选结束后，为保证分选系统管路无腐蚀、无结晶、不堵塞、不染菌 ，必须进行管 路的消 毒与清洁，方法如下。且一旦开始进行分选实验后，每周必须开机对分选管路用无菌蒸馄水按照第一部分介绍的方法进行一次充分的冲洗 。1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。3L 70%乙醇（用无菌蒸馄
7、水配制）5L无菌蒸8留水2、在干净的鞘液筒中加入 3L 70%乙醇。盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充 分洗涤。 安好鞘液筒。3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。4、用 70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。6、放上一支装有 70 %乙醇的进样管。7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作） 。8、从Acquire menu选择SortSetup。在Sort Gate菜单中选择步骤7设定的分选门。按液流控制键 RUN。在 Setup 方框中打叉，点击 Acquisition Control 菜单中 Acqui
8、re 。跑乙醇直至 2 支收集管注满（每管注满需要9min ），点击 Pause, Abort。再重复上述步骤2次，共需要lh。断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL无菌蒸馄水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直 至洗净桶内壁残余乙醇。在鞘液筒中加入3L无菌蒸馄水，盖紧盖子。安好鞘液筒。在收集管接口处安装 2支新的收集管。 放上一支装有无菌蒸馄水的进样管。点击 Acquisition Control 菜单中 Acquire。跑无菌蒸8留水直至2支收集管注满（每管注满需要 9min），点击Paus Abort再重复上述步骤2次，共需要lho在鞘液筒中加入3L PBS （即鞘液），盖紧盖子。安好鞘液筒。 放上一支装有PBS的进样管。恢复过滤器的连接。9、10111213141516171819202122、执行每日关机程序。
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
