人白细胞介素IL2试剂盒说明书

上传人:jin****ng 文档编号:209199737 上传时间:2023-05-12 格式:DOCX 页数:4 大小:36.22KB
收藏 版权申诉 举报 下载
人白细胞介素IL2试剂盒说明书_第1页
第1页 / 共4页
人白细胞介素IL2试剂盒说明书_第2页
第2页 / 共4页
人白细胞介素IL2试剂盒说明书_第3页
第3页 / 共4页
资源描述:

《人白细胞介素IL2试剂盒说明书》由会员分享,可在线阅读,更多相关《人白细胞介素IL2试剂盒说明书(4页珍藏版)》请在装配图网上搜索。

1、人白细胞介素2 (IL-2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书第一部分ELISA简介ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-LinkedlmmunosorbnentAssay的简称。自上世纪70年代初 问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗 原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或

2、抗体,也通过反应而结合在固相载体上 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色 产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的 催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。第二部分ELISA的样本实验准备在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进 行检测的样本,及时储存在4c备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20r备用,有条件的, 最好-70C冻存备用。标本应避免反复冻融。液体类标本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、

3、细胞培养上清等。1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存 过程中如出现沉淀,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟 左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀 形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细

4、 收集上清。5. 培养细胞:检测细胞内的成份时,用PBS ()稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反 复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。6. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍 然保持2-8C的温度。加入一定量的PBS (),或组织蛋白萃取试剂,用手工或匀浆器将标本匀浆化。 离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。7. 标本采集后尽早进行提取,提取按相

5、关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20C保存,但应避免反复冻融 & 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。第三部分ELISA试剂盒的检测目的和实验原理1. 检测目的本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2(IL-2)含量。2. 实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素2(IL-2)水平。用纯化的人白细胞介素2 (IL-2) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2(IL-2),再与HRP标记 的白细胞介素2(IL-2)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗

6、涤后加底物TMB显色。 TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞 介素2(IL-2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(0D值),通过标准曲线计算样品中人 白细胞介素2(IL-2)浓度。第四部分试剂盒组成试剂盒组成48T96T保存说明书1份1份封板膜2 片(48)2 片(96)密封袋1个1个酶标包被板1X481X962-8C保存标准品(2400pg/ml)X1瓶X1瓶2-8C保存标准品稀释液X1瓶X1瓶2-8C保存酶标试剂3mlX 1 瓶6ml X1 瓶2-8C保存样品稀释液3mlX 1 瓶6ml X1 瓶2-8C保存显色剂A液

7、3mlX 1 瓶6ml X1 瓶2-8C保存显色剂B液3mlX 1 瓶6ml X1 瓶2-8C保存终止液3mlX 1 瓶6ml X1 瓶2-8C保存浓缩洗涤液(20 倍)20mlX1 瓶(30 倍)20mlX1 瓶2-8C保存第五部分操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。1200pg/ml5号标准品150 u l的原倍标准品加入150 u l标准品稀释液600pg/ml4号标准品150 ul的5号标准品加入150 u l标准品稀释液300pg/ml3号标准品150 ul的4号标准品加入150 u l标准品稀释液150pg/ml2号标准品1

8、50 ul的3号标准品加入150 u l标准品稀释液75pg/ml1号标准品150 ul的2号标准品加入150 u l标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50卩1,待测样品孔中先加样品稀释液40卩1,然后再加待测样品10ul (样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37C温育30分钟。4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此 重

9、复5次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50ul,空白孔除外。7. 温育:操作同 3。8. 洗涤:操作同 5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50 ul,再加入显色剂B50ul,轻轻震荡混匀,37C避光显色15分钟.10. 终止:每孔加终止液50ul,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(0D值)。测定应在加终止液后15分钟以 内进行。12. 操作程序总结:第六部分计算以标准物的浓度为横坐标,0D值为纵坐标,在坐标 纸上绘出标准曲线,根据样品的0D值由标准曲线查 出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度 与0D值计算出标准曲线的直线回归

10、方程式,将样品 的0D值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释 倍数,即为样品的实际浓度。第七部分注意事项1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板 条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本)D值大于标准品 孔第一孔的0D值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(1倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(XnX5)o5封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6底物请避光保存。7严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9本试剂不同批号组分不得混用。第八部分检测范围40pg/ml-1200pg/ml第九部分保存条件及有效期1.试剂盒保存:-8C2有效期:6 个月

展开阅读全文
温馨提示:
1: 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
2: 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
3.本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
5. 装配图网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

相关资源

更多
正为您匹配相似的精品文档
关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服 - 联系我们

copyright@ 2023-2025  zhuangpeitu.com 装配图网版权所有   联系电话:18123376007

备案号:ICP2024067431-1 川公网安备51140202000466号


本站为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,本站只是中间服务平台,本站所有文档下载所得的收益归上传人(含作者)所有。装配图网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。若文档所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知装配图网,我们立即给予删除!