《外泌体提取方法比较》由会员分享，可在线阅读，更多相关《外泌体提取方法比较（2页珍藏版）》请在装配图网上搜索。
1、外泌体（Exosome）发现于1986年，是一种直径约30100nm的双层膜囊泡状结构 小体，可由机体多种细胞如免疫细胞、干细胞、心血管细胞、网织红细胞、血小板、 神经细胞和肿瘤细胞等主动分泌产生，广泛分布于外周血、尿液、唾液、乳汁、腹 水、羊水等体液中。外泌体携带大量特异性的蛋白质（如细胞因子、生长因子）以与功能性的mRNAs、 miRNAs等生物活性物质，在体参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗肿瘤免疫等 生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关。由于外泌体的特殊结构和功能，使 得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可 以作为治疗手段，未来有可能作为药物
2、的天然载体用于临床治疗。外泌体的分离纯化一直是科研工作者关注的问题，获得高纯度的外泌体对后续的研究 至关重要。据了解，目前人们多采用超速离心、免疫磁珠、超滤、沉淀或试剂盒等方 法实现外泌体的提取分离：1、超速离心法（差速离心）超离法是最常用的外泌体纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行（如下图）， 可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单，获得的囊泡数量较多而广受欢 迎，但过程比较费时，且回收率不稳定（可能与转子类型有关），纯度也受到质疑； 此外，重复离心操作还有可能对囊泡造成损害，从而降低其质量。Qjllun& fiupe-nalantnuid3DD x g. 10 rrtm产 I 曲
3、i nijipr-TnMnnlg, IOnrin10.300X y, minMilcl =cl debris制=号瓯5Cie瞬 t Ggnflprminijrlinii prgHzms WRfiti In PBS | 1 OO.OCC k g. 7c mri pell Bl 二rlfliDE2、密度梯度离心在超速离心力作用下，使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层，是一种区带分 离法。通过密度梯度离心，样品中的外泌体将在1.13-1.19g/ml的密度围富集。此法 获得的外泌体纯度较高，但步骤繁琐，耗时。3、超滤离心4由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体，大于一般蛋白质，利用不同截留相对
4、 分子质量（MWC0）的超滤膜对样品进行选择性分离，便可获得外泌体。超滤离心法简单 高效，且不影响外泌体的生物活性，是提取细胞外泌体的一种新方法。4、磁珠免疫法 外泌体表面有其特异性标记物（如CD63、CD9蛋白）商，用包被抗标记物抗体的磁珠与 外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作 简便、不影响外泌体形态完整等优点，但是效率低，外泌体生物活性易受pH和盐浓度 影响，不利于下游实验，难以广泛普与。5、PEG-base 沉淀法聚乙二醇（PEG）可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀，早先应用于从血清等样本中 收集病毒，现在也被用来沉淀外泌体，其原理可能与竞争性结合
5、游离水分子有关。利 用PEG沉淀外泌体存在不少问题：比如纯度和回收率低，杂蛋白较多（假阳性），颗 粒大小不均一，产生难以去除的聚合物，机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外 泌体等，因此发表文章时易受质疑。6、试剂盒提取近几年来，市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒，有的是通过特殊设计的过 滤器过滤掉杂质成分，有的则采用空间排阻色谱法（SEC）进行分离纯化，也有的则利用 化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。这些试剂盒不需要特殊设备，随着产品不断更新换 代，提取效率和纯化效果逐渐提高，因而逐渐取代超速离心法并推广开来。有些试剂 盒操作简便，不用超速离心，同时可获得高纯度和高回收率的外泌体 如1
6、01bio开 发的系列试剂盒，可分别针对尿液、血液、细胞上清液等多种样品进行提取67，并可 进一步从外泌体中获得想要的蛋白质或者RNA分子，方便快速，因而受到大多数人的 欢迎，并发表了不少高质量的文章！然而，市场上各类产品纯化效果良莠不齐，目前仍没有绝对的方法或试剂盒能满足所 有要求，从各类样品中分离到理想的外泌体。参考文献：1 卢婉，人强，王伶.外泌体的研究进展J.生命的化学，2013, 04期(04).2 Taixue An et al. Exosomes serve as tumour markers for personalized diagnostics owing to their
7、 important role in cancer metastasisJ. Journal of Extracellular Vesicles 2015， 4: 27522.- dx.doi.org/10.3402/jev.v4.27522.3 Richard J. Lobb et al. Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasmaJ. Journal of Extracellular Vesicles 2015， 4: 27031.- dx.doi.org/10.340
8、2/jev.v4.27031.4 胡国文，青，牛鑫等.旋转超滤：一种提取细胞外泌体的新方法J.第二军医大学 学报， 2014， 35(6): 598-602.5 Zhang et al. Exosomes in cancer: small particle， big playerJ. Journal of Hematology & Oncology， 2015， 8:83. doi:10.1186/s13045-015-0181-x.6 Korbelik M et al. Ceramide and Sphingosine-1-Phosphate/Sphingosine act as Photo
9、dynamic Therapy-Elicited Damage-Associated Molecular Patterns: Release from Cells and Impact on Tumor-Associated Macrophages. Janal Bioanal Tech. S1:009. doi: 10.4172/2155-9872.S1-009.7 Chen L., Chen R., Brigstock D. MicroRNA profiling of circulatin g exosomes during experimental liver fibrosis.Hepatology. AASLD abst ract, 2014 Oct. (Presidential Honored Distinct Abstract).
外泌体提取方法比较
